一種檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法，該方法包括以下步驟：制作布基微流控芯片；將化學(xué)發(fā)光底液滴加到芯片檢測(cè)區(qū)，然后在2～8℃下避光晾干儲(chǔ)存；在芯片進(jìn)樣區(qū)滴加樣品溶液，若樣品中含有H2O2，則化學(xué)發(fā)光反應(yīng)被觸發(fā)，經(jīng)CCD數(shù)字成像設(shè)備采集獲得發(fā)光圖像，并通過(guò)Matlab和Image J軟件對(duì)圖像進(jìn)行處理。本發(fā)明方法的化學(xué)發(fā)光體系具有穩(wěn)定性好、檢測(cè)靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，能直接或者間接測(cè)定過(guò)氧化氫，這在環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全檢測(cè)、生物化學(xué)、臨床疾病診斷等領(lǐng)域有極其重要的研究意義。
【專利說(shuō)明】一種檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微流控分析領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法。

【背景技術(shù)】
[0002]過(guò)氧化氫是生物體系中的一種重要物質(zhì)，它嚴(yán)重影響細(xì)胞新陳代謝，在許多酶促反應(yīng)、蛋白積聚和抗原-抗體識(shí)別過(guò)程中也伴隨著過(guò)氧化氫的產(chǎn)生和消耗。食品加工過(guò)程中，經(jīng)常有一些不法商家用廉價(jià)的工業(yè)過(guò)氧化氫殺菌和漂白食品，使賣相變得更好，但人體攝入工業(yè)過(guò)氧化氫會(huì)導(dǎo)致多方面的危害，會(huì)使人體抵抗力下降，誘發(fā)基因突變，引起腸胃、心肺等部位多種疾病的發(fā)生。目前，國(guó)家已明令禁止在食品加工中使用工業(yè)過(guò)氧化氫。因此，采用化學(xué)發(fā)光體系定量測(cè)定過(guò)氧化氫，在環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全檢測(cè)、生物化學(xué)、臨床疾病診斷等領(lǐng)域有極其重要的研究意義。
[0003]1990年，Manz和Widmer等人首次提出微流控全分析系統(tǒng)(Miniaturized TotalAnalysia Systems, μ TAS)概念以來(lái),基于微流控芯片的生化分析技術(shù)得到了非?？焖俚陌l(fā)展，已從理論層次開(kāi)始真正走向?qū)嶋H應(yīng)用層面。
[0004]與傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室生化分析技術(shù)相比，微流控芯片技術(shù)具備一些明顯的優(yōu)勢(shì):裝置體積小、分析效率高、樣品和試劑消耗量少，尤其適合家庭或者現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。微流控芯片是μ TAS的核心，其研究主要包括芯片的材料選擇、加工方法、表面修飾，功能集成等。
[0005]當(dāng)前，全球經(jīng)濟(jì)發(fā)展嚴(yán)重不平衡，微流控芯片的價(jià)格直接成為其能否被廣泛接受應(yīng)用的關(guān)鍵。因此，為了降低芯片成本，尋找一種廉價(jià)芯片加工材料已成為從事微流控芯片科研工作者的主要研究?jī)?nèi)容之一。目前，微流控芯片的加工材料主要有硅片、石英、玻璃、陶瓷以及塑料等。但是，基于這些材料的芯片造價(jià)普遍高、加工工藝復(fù)雜，因此它們廣泛應(yīng)用仍然受到一定程度的限制。
[0006]基于棉纖維的親水性，2009年，Shen研究組提出以廉價(jià)棉線作為襯底材料來(lái)加工微流控裝置(ACS Appl.Mater.1nterfaces, 2010, 2,1 - 6)。
[0007]采用疏水線和親水線，Bhandari等人通過(guò)紡織編織技術(shù)來(lái)構(gòu)建具有一定疏水、親水圖案的布基微流控免疫分析芯片(Lab on a Chip，2011，11，2493-2499)。
[0008]采用類似的編織技術(shù)，Breedveld研究小組將親水棉線和疏水棉線編織在一起以構(gòu)建兩性分子微流體控制的布基裝置(ACS Appl.Mater.1ntrefaces，2011，3，3796-3803)。
[0009]最近，Nilghaz等人提出一種臘轉(zhuǎn)印技術(shù)來(lái)加工布基微流控分析芯片(Lab on aChip, 2012，12，209-218)。
[0010]棉材料屬于有機(jī)纖維，是現(xiàn)實(shí)生活中最常見(jiàn)的服裝加工底料、植物栽種提取、處理工藝過(guò)程簡(jiǎn)單快速、適合大批量生產(chǎn)，比傳統(tǒng)的玻璃、硅微流控芯片性價(jià)比高。因此，基于棉布材料的微流控芯片在分析化學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域也許會(huì)表現(xiàn)出極大的應(yīng)用潛力。
[0011]到目前為止，幾乎所有的線基或者布基微流控裝置都采用比色檢測(cè)方法，極少數(shù)也采用了電化學(xué)或者顏色變化長(zhǎng)度等檢測(cè)方法。然而，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)和布基微流控技術(shù)相結(jié)合的傳感方法還沒(méi)有報(bào)道過(guò)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法，該方法將化學(xué)發(fā)光與布基微流控技術(shù)相結(jié)合，開(kāi)發(fā)出了一種成本低廉、實(shí)用性廣的布基微流控化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)肉制品中H2O2的檢測(cè)。
[0013]本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0014]一種檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法，包括以下步驟:
[0015](I)制作布基微流控芯片
[0016]設(shè)計(jì)進(jìn)樣區(qū)、檢測(cè)區(qū)和微流控通道的圖案，然后制成含有該圖案的網(wǎng)紗網(wǎng)板；將布片置于網(wǎng)紗網(wǎng)板下方，并在網(wǎng)紗網(wǎng)板上涂蠟；將布與網(wǎng)紗網(wǎng)板一起加熱5-10秒(帶有布的一面朝向熱源)；將布從網(wǎng)紗網(wǎng)板上取下并冷卻至室溫，得到布基微流控芯片；
[0017]所述的設(shè)計(jì)圖案是用軟件Adobe Illustrate CS5設(shè)計(jì)；
[0018]所采用的布片是燈芯絨全棉布，這種布料親水性能較好，無(wú)需親水性預(yù)處理便可直接用于芯片加工；
[0019](2)化學(xué)發(fā)光底液預(yù)先固定于芯片檢測(cè)區(qū)
[0020]將魯米諾(Lum1l)溶液、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)溶液、對(duì)碘苯酚(PIP)溶液按體積比1:1:1混合，得到化學(xué)發(fā)光底液；在檢測(cè)前，將化學(xué)發(fā)光底液滴加到芯片檢測(cè)區(qū)，然后在2?8°C下避光晾干儲(chǔ)存；
[0021]所述魯米諾溶液的濃度優(yōu)選3X10_3mOl/L，辣根過(guò)氧化物酶溶液的濃度優(yōu)選0.8mg/mL ；
[0022]所采用的化學(xué)發(fā)光底液能在_20°C下較長(zhǎng)時(shí)間保存完好，并可直接使用，這一定程度上解決了傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光底液由A液和B液組成并分開(kāi)保存的缺點(diǎn)。此外，采用的化學(xué)發(fā)光底液容易配制、操作簡(jiǎn)單。
[0023](3)進(jìn)樣檢測(cè)
[0024]將樣品碾碎，用pH值為10的TE緩沖液侵泡lOmin，靜置后所得上清液為樣品溶液；在芯片進(jìn)樣區(qū)滴加樣品溶液，若樣品中含有H2O2,則化學(xué)發(fā)光反應(yīng)被觸發(fā)，經(jīng)CCD數(shù)字成像設(shè)備采集獲得發(fā)光圖像，并通過(guò)Matlab和Image J軟件對(duì)圖像進(jìn)行處理；本發(fā)明的布基微流控化學(xué)發(fā)光成像傳感裝置的組成示意圖如圖1所示；
[0025]所述的CXD數(shù)字成像設(shè)備是廣州市明美科技有限公司產(chǎn)品，型號(hào)為MC15。
[0026]本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果:
[0027]1、本發(fā)明方法與傳統(tǒng)的、廣泛使用的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光相比，無(wú)需采用任何價(jià)格昂貴的注射泵來(lái)驅(qū)動(dòng)液體流動(dòng)。本方法僅通過(guò)布材料的線中和線間纖維空隙的毛細(xì)力來(lái)驅(qū)動(dòng)液體流動(dòng)。
[0028]2、本發(fā)明方法所使用的布材料不僅價(jià)格低廉，而且親水性好，因此無(wú)需親水預(yù)處理便可直接進(jìn)行芯片加工，從而進(jìn)行樣品分析。
[0029]3、本發(fā)明方法所需芯片加工不需要復(fù)雜的大型設(shè)備，僅需要布材料、蠟筆、網(wǎng)板以及加熱板。布材料和蠟都很廉價(jià)，蠟是一般文具店都能購(gòu)買到的蠟筆。
[0030]4、本發(fā)明方法中，可直接使用化學(xué)發(fā)光底液預(yù)處理布基微流控芯片的檢測(cè)區(qū)，這樣的芯片可批量?jī)?chǔ)存，顯著提高樣品分析效率。
[0031]5、本發(fā)明的方法中，樣品從進(jìn)樣區(qū)經(jīng)布通道流到檢測(cè)區(qū)的時(shí)間約3s，化學(xué)發(fā)光被觸發(fā)后整個(gè)反應(yīng)過(guò)程持續(xù)約25s，因此完成樣品成像傳感分析僅需30s左右，因此從進(jìn)樣到檢測(cè)的分析速度極快。本發(fā)明方法適用于食品中殘留H2O2的定量分析。
[0032]6、本發(fā)明所描述的方法操作流程簡(jiǎn)單，不需要專業(yè)人員操作。
[0033]7、本發(fā)明的方法減少了對(duì)環(huán)境的污染，樣品分析完成后布芯片可通過(guò)燃燒的方法處理掉。
[0034]8、本發(fā)明方法的化學(xué)發(fā)光體系具有穩(wěn)定性好、檢測(cè)靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，能直接或者間接測(cè)定過(guò)氧化氫，這在環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全檢測(cè)、生物化學(xué)、臨床疾病診斷等領(lǐng)域有極其重要的研究意義。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1是本發(fā)明的布基微流控化學(xué)發(fā)光成像傳感裝置的組成示意圖。
[0036]圖2是布基微流控芯片親水區(qū)域的圖案。
[0037]圖3是布基微流控芯片的實(shí)物圖。
[0038]圖4是布基微流控芯片的通道尺寸與吸液特性的測(cè)試結(jié)果圖。
[0039]圖5是樣品溶液pH值與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系圖。
[0040]圖6是Lum1l濃度與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系圖。
[0041]圖7是HRP濃度與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系圖。
[0042]圖8是純H2O2樣品中H2O2濃度與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系圖。
[0043]圖9是雞爪樣品中H2O2濃度與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系圖。

【具體實(shí)施方式】
[0044]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0045]實(shí)施例
[0046]—種檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法，包括以下步驟:
[0047](I)制作布基微流控芯片
[0048]a)化學(xué)發(fā)光芯片圖案設(shè)計(jì)
[0049]芯片圖案采用進(jìn)樣區(qū)(4_X4mm)和檢測(cè)區(qū)(直徑8_)分開(kāi)，并通過(guò)微通道(寬度:3mm、4mm、5mm ;長(zhǎng)度:5mm、10mm、15mm)連接(如圖2所示)。這樣的化學(xué)發(fā)光芯片圖案設(shè)計(jì)的優(yōu)勢(shì)包括:(I)利用布纖維的毛細(xì)力驅(qū)動(dòng)流體流動(dòng)來(lái)實(shí)現(xiàn)流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光；(2)進(jìn)樣區(qū)和檢測(cè)區(qū)分開(kāi)，一方面便于檢測(cè)區(qū)處理，另一方面便于進(jìn)樣，能實(shí)現(xiàn)無(wú)污染自動(dòng)進(jìn)樣；
(3)利用溶液從進(jìn)樣區(qū)流到檢測(cè)區(qū)的時(shí)間間隔來(lái)靈活地實(shí)現(xiàn)布基微流控化學(xué)發(fā)光CCD圖像米集。
[0050]b)布基微流控芯片的制作過(guò)程
[0051]1、采用Adobe Illustrate CS5軟件設(shè)計(jì)如圖2所示的圖案,基于這些圖案制作出相對(duì)應(yīng)的300目網(wǎng)紗網(wǎng)板；
[0052]2、將一個(gè)網(wǎng)板壓在合適尺寸的全棉燈芯絨布上(兩者緊貼)，用綠色蠟筆在網(wǎng)板上涂蠟，并用平滑碾磨勺均勻用力碾磨；
[0053]3、將附著有棉布的網(wǎng)板置于加熱板加熱(85°C加熱5s)，帶棉布的一面朝向加熱板；
[0054]4、加熱完成后，從網(wǎng)板上取下布，室溫冷卻，制成的布基微流控芯片包括親水區(qū)域(進(jìn)樣區(qū)、微通道以及檢測(cè)區(qū))和疏水區(qū)域(如圖3所示)。
[0055]c)不同通道尺寸的布基微流控芯片吸液性能測(cè)試
[0056]在上述不同尺寸微通道的芯片進(jìn)樣區(qū)滴加30 μ I胭脂紅溶液，通過(guò)電子秒表記錄胭脂紅溶液從進(jìn)樣區(qū)出口流到檢測(cè)區(qū)入口所需要的時(shí)間，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次做統(tǒng)計(jì)，其測(cè)試結(jié)果如圖4所示。微通道長(zhǎng)度一定時(shí)，通道越寬，溶液流過(guò)它所需要的時(shí)間就越短；寬度一定時(shí)，通道越短，溶液流過(guò)它所需要的時(shí)間也就越短。
[0057]基于試劑消耗量以及手動(dòng)操作CCD采集圖像所需的時(shí)間，本發(fā)明方法優(yōu)選通道長(zhǎng)度為1mm,寬度為3mm的布芯片作生化檢測(cè)。
[0058](2)化學(xué)發(fā)光底液預(yù)先固定于芯片檢測(cè)區(qū)
[0059]將一定濃度的Lum1l、HRP、PIP按體積比1:1:1混合，將5 μ I配制好的化學(xué)發(fā)光底液直接用移液槍均勻滴加到布芯片上的圓形檢測(cè)區(qū)，然后2-8°C避光晾干儲(chǔ)存。
[0060]檢測(cè)區(qū)預(yù)固定化學(xué)發(fā)光底液的布基微流控芯片可直接用于樣品檢測(cè)，大大降低了分析時(shí)間，顯著提高了分析效率。
[0061](3)對(duì)影響布基微流控化學(xué)發(fā)光的若干重要因素(樣品pH值、化學(xué)發(fā)光底液濃度)的優(yōu)選
[0062]a)優(yōu)選樣品溶液pH值
[0063]1、化學(xué)發(fā)光底液成分:Lum1l 濃度為 3X 10_3mol/L，PIP 濃度為 4X 10_4mol/L，HRP濃度為0.8mg/mL,三者以體積比1:1:1混合。
[0064]2、設(shè)置若干實(shí)驗(yàn)組:用 TE 緩沖液(pH值為 8.0,8.5,9.0,9.5,10.0,10.5,11.0)來(lái)稀釋30% H2O2，使其濃度成為5X10_3mol/L，然后取25 μ I加入芯片進(jìn)樣區(qū)。
[0065]3、關(guān)閉暗箱門，操作(XD相機(jī)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光圖像采集，通過(guò)Matlab、Image J、Origin軟件對(duì)采集的圖像進(jìn)行分析，測(cè)試結(jié)果如圖5所示。
[0066]從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出:當(dāng)緩沖液pH值為10,布基微流控化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度最大，pH值超過(guò)10時(shí)，發(fā)光強(qiáng)度隨PH值增大而下降。
[0067]b)優(yōu)選底液中Lum1l濃度
[0068]1、設(shè)置若干實(shí)驗(yàn)組:化學(xué)發(fā)光底液中Lum1l的濃度設(shè)置為幾個(gè)不同值(1.5X l(T3mol/L、2X l(T3mol/L、2.5 X l(T3mol/L、3 X l(T3mol/L、3.5X l(T3mol/L、4X l(T3mol/L)，PIP 濃度為 4X l(T4mol/L，HRP 濃度為 0.8mg/mL，三者以體積比 1:1:1 混合。
[0069]2、用TE緩沖液(pH 10.0)配制H2O2濃度為5 X 10_3mol/L，然后取其25 μ I加入芯片進(jìn)樣區(qū)。
[0070]3、關(guān)閉暗箱門，操作(XD相機(jī)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光圖像采集，通過(guò)Matlab、Image J、Origin軟件對(duì)采集的圖像進(jìn)行分析，測(cè)試結(jié)果如圖6所示。
[0071]從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出:Lum1l濃度為3X 10_3mol/L時(shí)布基微流控化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度最大，其濃度超過(guò)3X l(T3mol/L時(shí)，隨著濃度增大,發(fā)光強(qiáng)度反而減小。
[0072]c)優(yōu)選底液中HRP濃度
[0073]1、設(shè)置若干實(shí)驗(yàn)組:化學(xué)發(fā)光底液中HRP濃度設(shè)置為幾個(gè)不同值(0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL、l.0mg/mL), Lum1l 濃度為 3 X 10 3mol/L, PIP 濃度為4X10_4mOl/L，三者以體積比1:1:1混合。
[0074]2、用TE緩沖液(pH 10.0)配制H2O2濃度為5 X 10_3mol/L，然后取其25 μ I加入芯片進(jìn)樣區(qū)。
[0075]3、關(guān)閉暗箱門，操作(XD相機(jī)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光圖像采集，通過(guò)Matlab、Image J、Origin軟件對(duì)采集的圖像進(jìn)行分析，測(cè)試結(jié)果如圖7所示。
[0076]從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出:在一定范圍內(nèi)，隨著酶濃度增加，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度幾乎成線性增加；當(dāng)其濃度超過(guò)0.8mg/mL，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度趨于穩(wěn)定?？紤]到酶用量很大程度影響著檢測(cè)成本，本發(fā)明方法底液中酶濃度優(yōu)選為0.8mg/mL。
[0077]綜合(a)，(b)及(C)優(yōu)選過(guò)程，本發(fā)明方法中優(yōu)選的反應(yīng)試劑濃度為=Lum1l濃度為3X 10_3mol/L，HRP濃度為0.8mg/mL，三者以體積比1:1:1混合，_20°C避光保存。另夕卜，用pH 10.0的TE緩沖液稀釋配制H2O2溶液。
[0078](4)布基微流控芯片定量檢測(cè)純H2O2樣品和3% (V/V)H2O2浸泡過(guò)的雞爪樣品
[0079]a)純H2O2樣品檢測(cè)
[0080]1、用 pH 10.0TE 緩沖液將 30% H2O2 稀釋成不同濃度(0.5mmol/L、lmmol/L、2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、5mmol/L),以此作為待測(cè)樣品。
[0081]2、取不同濃度的25 μ L待測(cè)樣品添加到芯片的進(jìn)樣區(qū)中。
[0082]3、關(guān)閉暗箱門，操作CXD相機(jī)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光圖像采集，通過(guò)Matlab、Image J、Origin軟件對(duì)采集的圖像進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)圖8。
[0083]根據(jù)圖8所示H2O2的校正曲線和未加樣品時(shí)的空白值加上其相對(duì)偏差三倍作為發(fā)光強(qiáng)度值，算出本發(fā)明方法對(duì)過(guò)氧化氫的檢測(cè)限為0.46mmol/L。
[0084]結(jié)合圖4芯片吸液性能測(cè)試結(jié)果可知:當(dāng)使用的布芯片通道長(zhǎng)為1mm,寬為3mm時(shí)，樣品從進(jìn)樣區(qū)經(jīng)布通道流到檢測(cè)區(qū)的時(shí)間約3s，化學(xué)發(fā)光被觸發(fā)后整個(gè)反應(yīng)過(guò)程持續(xù)約25s，因此完成樣品成像傳感分析僅需30s左右，具有較高的分析速度。
[0085]從圖8可以看出，本發(fā)明的方法可以實(shí)現(xiàn)H2O2定量檢測(cè)，且具有較好的線性。
[0086]b)3% (V/V)H2O2浸泡過(guò)的模擬雞爪樣品檢測(cè)
[0087]1、未經(jīng)任何處理的新鮮雞爪采用超純水清洗晾干,然后取其少量并用3% H2O2來(lái)侵泡，記錄侵泡時(shí)間(本發(fā)明中取侵泡時(shí)間分別為6、12、18、24、30、32h)。
[0088]2、取侵泡不同時(shí)間的雞爪，清水沖洗數(shù)秒，稱取5g樣品攪碎。
[0089]3、用50mL pH值為10的TE緩沖液侵泡攪碎過(guò)的樣品lOmin，浸泡過(guò)程中保持充分震蕩。靜置一段時(shí)間后，直接取其上層清液作為待測(cè)溶液，并取其25 μ L加入到進(jìn)樣區(qū)。
[0090]4、關(guān)閉暗箱門，操作(XD相機(jī)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光圖像采集，通過(guò)Matlab、Image J、Origin軟件對(duì)采集的圖像進(jìn)行分析，結(jié)果如圖9所示。
[0091]圖9根據(jù)侵泡不同時(shí)間模擬樣品的發(fā)光強(qiáng)度值，并結(jié)合圖8的H2O2的校正曲線可以估算出不同侵泡時(shí)間樣品中對(duì)應(yīng)H2O2的濃度。本實(shí)施例發(fā)現(xiàn)侵泡超過(guò)24h后，隨著侵泡時(shí)間增加，發(fā)光強(qiáng)度趨于不變，說(shuō)明樣品中H2O2含量趨于飽和。
[0092]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法，其特征在于包括以下步驟: (1)制作布基微流控芯片 設(shè)計(jì)進(jìn)樣區(qū)、檢測(cè)區(qū)和微流控通道的圖案，然后制成含有該圖案的網(wǎng)紗網(wǎng)板；將布片置于網(wǎng)紗網(wǎng)板下方，并在網(wǎng)紗網(wǎng)板上涂蠟；將布與網(wǎng)紗網(wǎng)板一起加熱5-10秒；將布從網(wǎng)紗網(wǎng)板上取下并冷卻至室溫，得到布基微流控芯片； 所采用的布片是燈芯絨全棉布； (2)化學(xué)發(fā)光底液預(yù)先固定于芯片檢測(cè)區(qū) 將魯米諾溶液、辣根過(guò)氧化物酶溶液、對(duì)碘苯酚溶液按體積比1:1:1混合，得到化學(xué)發(fā)光底液；在檢測(cè)前，將化學(xué)發(fā)光底液滴加到芯片檢測(cè)區(qū)，然后在2?8°C下避光晾干儲(chǔ)存；所述魯米諾溶液的濃度為3X 10_3mOl/L，辣根過(guò)氧化物酶溶液的濃度為0.8mg/mL ； (3)進(jìn)樣檢測(cè) 將樣品碾碎，用PH值為10的TE緩沖液侵泡lOmin，靜置后所得上清液為樣品溶液；在芯片進(jìn)樣區(qū)滴加樣品溶液，若樣品中含有H2O2，則化學(xué)發(fā)光反應(yīng)被觸發(fā)，經(jīng)CCD數(shù)字成像設(shè)備采集獲得發(fā)光圖像，并通過(guò)Matlab和Image J軟件對(duì)圖像進(jìn)行處理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)過(guò)氧化氫的底物預(yù)固定布基微流控化學(xué)發(fā)光方法，其特征在于:所述的設(shè)計(jì)圖案是用軟件Adobe Illustrate CS5設(shè)計(jì)。
【文檔編號(hào)】G01N21/76GK104359898SQ201410719841
【公開(kāi)日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年12月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月1日
【發(fā)明者】章春筍, 管文榮 申請(qǐng)人:華南師范大學(xué)