一種利用lc-q-tof結(jié)合統(tǒng)計分析鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒?br> 【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用LC-Q-TOF結(jié)合統(tǒng)計分析鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒?。步驟為待測樣品中加入甲酸溶液后沸水浴，再冷卻，過濾膜進(jìn)行過濾得到處理后的待測樣品；處理后的待測樣品用液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜儀采集待測樣品質(zhì)譜信息，進(jìn)行特征化合物提取；將獲得的待測樣品的特征化合物信息調(diào)入燕窩真?zhèn)舞b別模型中進(jìn)行預(yù)測。當(dāng)準(zhǔn)確率在80％及以上時判定為正品燕窩，否則為偽品燕窩。本發(fā)明因此還建立了一個燕窩真?zhèn)舞b定模型，在鑒定時，只需一個真?zhèn)舞b定模型即可，使檢測更加簡單易操作。
【專利說明】-種利用LC-Q-TOF結(jié)合統(tǒng)計分析鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒?br>
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及燕窩鑒別領(lǐng)域，尤其涉及一種利用LC-Q-TOF結(jié)合統(tǒng)計分析鑒別燕窩 真?zhèn)蔚姆椒ā?br>
【背景技術(shù)】
[0002] 燕窩具有豐富的營養(yǎng)及藥用價值，性平，味甘，補肺養(yǎng)陰，可緩解咳嗽、咳血等癥 狀，是一種與鹿茸、人參等齊名的中藥補品。目前，燕窩真?zhèn)舞b定的方法主要包括經(jīng)驗鑒別 法（從選、看、摸、聞、浸泡、燉和燒各個角度判定樣品品質(zhì)）、顯微鑒定法、光譜法（分光光度 法和紅外光譜法）、色譜法（氣相色譜法和液相色譜法，）、酶聯(lián)免疫法等。這些方法都是通 過測定燕窩中氨基酸的組成或唾液酸含量進(jìn)行判定，其鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性偏低，迫切需要 一種全面的綜合真?zhèn)舞b定模型，使得結(jié)果更加可靠。
[0003] 飛行時間質(zhì)譜（Time of Flight-Mass Spectrometry, T0F-MS)是動能相同而質(zhì)荷 比不同的離子在恒定電場中運動，經(jīng)過恒定距離所需時間不同，實現(xiàn)對物質(zhì)成分或結(jié)構(gòu)進(jìn) 行測定的一種質(zhì)譜分析方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種正確率高，操作簡單，快速的鑒別燕窩的方法。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒ǎ涮卣髟谟?，包括如下?驟，
[0006] 待測樣品處理：待測樣品中加入甲酸溶液后沸水浴，再冷卻，過濾膜進(jìn)行過濾得到 處理后的待測樣品；
[0007] 待測樣品特征化合物提?。禾幚砗蟮拇郎y樣品用液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜 儀采集待測樣品質(zhì)譜信息，進(jìn)行特征化合物提取；
[0008] 結(jié)果調(diào)取與預(yù)測：將獲得的待測樣品的特征化合物信息調(diào)入燕窩真?zhèn)舞b別模型 中進(jìn)行預(yù)測。當(dāng)準(zhǔn)確率在80%及以上時判定為正品燕窩，否則為偽品燕窩。
[0009] 所述待測樣品處理為，稱取IOOmg置于250mL三角瓶中，加入1體積％的甲酸溶 液，沸水浴30min，冷卻，過0. 22 ii m濾膜。
[0010] 所述待測樣品特征化合物提取為：將處理后的待測樣品置于液相色譜-四級桿飛 行時間質(zhì)譜儀進(jìn)樣瓶中，上樣；得到待測樣品一級質(zhì)譜信息；對一級質(zhì)譜信息進(jìn)行特征化 合物提取；
[0011] 所述液相色譜條件為，3. OX lOOmm, I. 8 u m 的ZORBZX Eclipse Pluse C18色譜柱； 35°C柱溫；2 ill進(jìn)樣量；流動相中A相為5mmol乙酸銨的水相，B相為含5mmol乙酸銨的甲 醇；0. 4ml/min 流速；
[0012] 所述四級桿飛行時間質(zhì)譜的條件為，負(fù)離子全掃描模式；毛細(xì)管電壓3500V ;干燥 氣溫度30(TC ;干燥氣流速10L/min ;霧化氣壓力35psig ;鞘氣溫度350°C ;鞘氣流速12L/ min ;碎裂電壓130V ;錐孔電壓65V ;倍增電壓750V ;質(zhì)量掃描范圍m/z 50-1700 ;采集速 率I. 5spectra/s ;參比離子m/z 121. 985587和m/z 1033. 988109 ;進(jìn)樣后直接進(jìn)行質(zhì)譜采 集；
[0013] 所述特征化合物提取的參數(shù)設(shè)置為，選上-H，+CH3COO,化合物價態(tài)選擇小于等于2 價。
[0014] 所述燕窩真?zhèn)舞b別模型是由如下方法建立的：
[0015] 參與模型建立的標(biāo)準(zhǔn)集樣品處理；標(biāo)準(zhǔn)集樣品中加入甲酸溶液后沸水浴，再冷卻， 過濾膜進(jìn)行過濾得到處理后的標(biāo)準(zhǔn)集樣品；
[0016] 標(biāo)準(zhǔn)集樣品特征化合物提?。簩⑻幚砗蟮臉?biāo)準(zhǔn)集樣品置于液相色譜-四級桿飛 行時間質(zhì)譜儀進(jìn)樣瓶中，上樣，得到標(biāo)準(zhǔn)集樣品一級質(zhì)譜信息；對一級質(zhì)譜信息進(jìn)行特征 化合物提取，獲得7504個化合物；將采集的標(biāo)準(zhǔn)集樣品一級質(zhì)譜信息導(dǎo)入Mass Profiler Peof essional軟件中，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法對7504個化合物進(jìn)行篩選，篩選后共得到69個化合 物,對這69個化合物進(jìn)行主成分分析；
[0017] 燕窩真?zhèn)舞b別模型建立：以偏最小二乘法建立燕窩真?zhèn)舞b別模型；
[0018]所述液相色譜條件為，3. OX 100mm，I. 8 u m 的ZORBZX Eclipse Pluse C18色譜柱； 35°C柱溫；2 ill進(jìn)樣量；流動相中A相為5mmol乙酸銨的水相，B相為含5mmol乙酸銨的甲 醇；0. 4ml/min 流速；
[0019] 所述四級桿飛行時間質(zhì)譜的條件為，負(fù)離子全掃描模式；毛細(xì)管電壓3500V ;干 燥氣溫度300°C;干燥氣流速10L/min ;霧化氣壓力35psig ;鞘氣溫度350°C;鞘氣流速12L/ min;碎裂電壓130V;錐孔電壓65V;倍增電壓750V;質(zhì)量掃描范圍m/z 50-1700 ;采集速 率I. 5spectra/s;參比離子m/z 121. 985587和m/z 1033. 988109;進(jìn)樣后直接進(jìn)行質(zhì)譜采 集；
[0020] 所述特征化合物提取的參數(shù)設(shè)置為，選上-H，+CH3COO,化合物價態(tài)選擇小于等于2 價；
[0021 ] 所述69個化合物篩選條件為出現(xiàn)頻率為100 %，變異系數(shù)小于等于25 %，豐度大 于等于lOOOcounts (質(zhì)譜豐度值的強度）進(jìn)行過濾。
[0022] 所述參與模型建立的標(biāo)準(zhǔn)集樣品為選自不同地區(qū)的毛燕窩、血燕窩和白燕窩；優(yōu) 選的，所述標(biāo)準(zhǔn)集樣品為正品馬來西亞毛燕窩4個，正品印度尼西亞毛燕窩7個，不明產(chǎn)地 的正品毛燕窩3個，不同商家的正品血燕窩7個，不同商家的正品白燕窩5個，和燕窩摻假 樣品，炸肉皮、白木耳和淀粉的混合物，白木耳、炸肉皮、明膠、膠原蛋白、脫水馬鈴薯粉、豌 豆淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉和或馬鈴薯淀粉共12個燕窩偽品。
[0023] 所述結(jié)果調(diào)取和預(yù)測是將獲得的待測樣品的特征化合物信息調(diào)入燕窩真?zhèn)舞b別 模型中，軟件自動預(yù)測結(jié)果：當(dāng)準(zhǔn)確率在80%及以上時判定為正品燕窩，否則為偽品燕窩。
[0024] 本發(fā)明還保護(hù)所述鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒ㄓ糜谘喔C真?zhèn)舞b別的用途。
[0025] 本發(fā)明還提供一種燕窩真?zhèn)舞b別模型，其特征在于，由如下方法制備得到，
[0026] 參與模型建立的標(biāo)準(zhǔn)集樣品處理；標(biāo)準(zhǔn)集樣品中加入甲酸溶液后沸水浴，再冷卻， 過濾膜進(jìn)行過濾得到處理后的正品燕窩；
[0027] 標(biāo)準(zhǔn)集樣品特征化合物提?。簩⑻幚砗蟮臉?biāo)準(zhǔn)集樣品置于液相色譜-四級桿飛行 時間質(zhì)譜儀進(jìn)樣瓶中，上樣，得到標(biāo)準(zhǔn)集樣品一級質(zhì)譜信息；對一級質(zhì)譜信息進(jìn)行特征化合 物提取，獲得7504個化合物；將采集的正品燕窩一級質(zhì)譜信息導(dǎo)入MPP軟件中，結(jié)合統(tǒng)計學(xué) 方法對7504個化合物進(jìn)行篩選，篩選后共得到69個化合物，對這69個化合物進(jìn)行主成分 分析；
[0028] 燕窩真?zhèn)舞b別模型建立：以偏最小二乘法建立標(biāo)準(zhǔn)集樣品模型即為燕窩真?zhèn)舞b別 模型；
[0029] 所述液相色譜條件為，3. OX 100mm，I. 8 U m 的 ZORBZX Eclipse Pluse C18 色譜 柱；35°C柱溫；2 ill進(jìn)樣量；流動相中A相為5mmol乙酸銨的水相，B相為含5mmol乙酸銨 的甲醇；〇. 4ml/min流速；
[0030] 所述四級桿飛行時間質(zhì)譜的條件為，負(fù)離子全掃描模式；毛細(xì)管電壓3500V ;干燥 氣溫度30(TC ;干燥氣流速10L/min ;霧化氣壓力35psig ;鞘氣溫度350°C ;鞘氣流速12L/ min ;碎裂電壓130V ;錐孔電壓65V ;倍增電壓750V ;質(zhì)量掃描范圍m/z 50-1700 ;采集速 率I. 5spectra/s ;參比離子m/z 121. 985587和m/z 1033. 988109 ;進(jìn)樣后直接進(jìn)行質(zhì)譜采 集；
[0031] 所述特征化合物提取的參數(shù)設(shè)置為，選上-H，+CH3COO,化合物價態(tài)選擇小于等于2 價；
[0032] 所述69個化合物篩選條件為出現(xiàn)頻率為100 %，變異系數(shù)小于等于25 %，豐度大 于等于lOOOcounts進(jìn)行過濾。
[0033] 所述標(biāo)準(zhǔn)集樣品為選自不同地區(qū)的毛燕窩、血燕窩和白燕窩；優(yōu)選的，所述正品燕 窩為正品馬來西亞毛燕窩4個，正品印度尼西亞毛燕窩7個，不明產(chǎn)地的正品毛燕窩3個， 不同商家的正品血燕窩7個，不同商家的正品白燕窩5個和燕窩摻假樣品，炸肉皮、白木耳 和淀粉的混合物，白木耳、炸肉皮、明膠、膠原蛋白、脫水馬鈴薯粉、豌豆淀粉、木薯淀粉、玉 米淀粉和或馬鈴薯淀粉共12個燕窩偽品。
[0034] 所述燕窩真?zhèn)舞b別模型用于鑒別燕窩真?zhèn)蔚挠猛尽?br> [0035] Mass Profiler Professional (MPP)軟件為安捷倫公司開發(fā)的一款代謝物組學(xué)分 析軟件，是液相色譜四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜儀自帶的軟件。可以進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析、化合物 鑒定、代謝通路分析。本發(fā)明利用統(tǒng)計學(xué)分析功能，對樣品組之間進(jìn)行差異性分析。MPP軟 件是一個強大的化學(xué)計量學(xué)平臺，旨在開發(fā)利用大量的質(zhì)譜數(shù)據(jù)信息，并可用于任何基于 質(zhì)譜的差異分析，以確定兩個或更多樣品組和變量之間的關(guān)系。
[0036] 將液相色譜四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜采集的信息，結(jié)合MPP統(tǒng)計學(xué)方法對特征物 質(zhì)進(jìn)行篩選，進(jìn)行主成分分析，以偏最小二乘法建立預(yù)測模型。不僅操作簡單，鑒別快速，而 且，其建立的模型結(jié)合四種主要成分進(jìn)行綜合判斷，其準(zhǔn)確度大大提高。使用LC-Q-Tof對 燕窩進(jìn)行真?zhèn)舞b定具有可行性，建立預(yù)測模型的方法為燕窩真?zhèn)舞b定提供了一種思路。
[0037] 本發(fā)明中的結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法對7504個化合物進(jìn)行篩選，篩選后共得到69個化合 物，對這69個化合物進(jìn)行主成分分析；其中的統(tǒng)計學(xué)方法和篩選條件完全不同。統(tǒng)計分析 是基于篩選后的化合物進(jìn)行的，首先對化合物按照設(shè)定的參數(shù)進(jìn)行篩選，對符合條件的化 合物進(jìn)行統(tǒng)計分析，本研究中的統(tǒng)計分析主要包括主成分分析和偏最小二乘法建立的真?zhèn)?鑒定模型。在主成分分析和建立模型中沒有參數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)，均為軟件根據(jù)化合物信息進(jìn)行的 自動處理。偏最小二乘法是一種常見的算法，本模型建立的理論依據(jù)是此算法。
[0038] 本發(fā)明的目的在于提供一種用液相色譜四極桿飛行時間質(zhì)譜（LC-Q-TOF)結(jié)合統(tǒng) 計分析建立的燕窩真?zhèn)舞b別模型，該方法具有鑒別正確率高，操作簡單，鑒別快速等特點。 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種燕窩鑒別方法，其特征在于，基于液相色譜四級桿飛行時 間串聯(lián)質(zhì)譜采集的信息，結(jié)合MPP統(tǒng)計學(xué)方法對特征物質(zhì)進(jìn)行篩選，進(jìn)行主成分分析，以偏 最小二乘法建立預(yù)測模型。
[0039] 本發(fā)明的技術(shù)方案
[0040] 一種用LC-Q-TOF結(jié)合統(tǒng)計分析建立的燕窩真?zhèn)舞b別模型，具體包括如下步驟：
[0041] (1)、燕窩真?zhèn)舞b別模型的建立，包括以下步驟：
[0042] ①、收集不同產(chǎn)地，真假明確的燕窩樣品作為燕窩真?zhèn)舞b別模型的標(biāo)準(zhǔn)采集集。
[0043] ②、每一標(biāo)準(zhǔn)樣品研磨成粉末，將粉末狀樣品加入提取劑，沸水浴30min，冷卻，過 0. 22 iim濾膜,置于進(jìn)樣瓶中，待上機。
[0044] ③、用液相色譜四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜采集標(biāo)準(zhǔn)品一級質(zhì)譜信息，進(jìn)行特征化 合物提取。
[0045] ④、將③采集的質(zhì)譜信息導(dǎo)入MPP軟件中，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法對特征物質(zhì)進(jìn)行篩選， 進(jìn)行主成分分析，以偏最小二乘法建立預(yù)測模型。
[0046] (2)、將待測燕窩樣品研磨成粉末，將粉末狀樣品加入提取劑，沸水浴30min，冷卻， 過0. 22 iim濾膜,置于進(jìn)樣瓶中，待上機。
[0047] (3)、用液相色譜四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜采集標(biāo)準(zhǔn)品一級質(zhì)譜信息，進(jìn)行特征化 合物提取。采用與標(biāo)準(zhǔn)品信息采集、化合物提取完全一致的技術(shù)參數(shù)。
[0048] (4)、將步驟（3)獲得的待測樣品的化合物信息調(diào)入利用步驟（1)建立的燕窩真 偽鑒別模型中，預(yù)測得到樣品是否為正品燕窩。
[0049] 本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)集樣品模型不限標(biāo)準(zhǔn)集樣品的種類，可以是一種，也可以是多種。為 增加信息的全面性，提高真?zhèn)舞b定模型的可靠性，本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)集樣品模型包括了不同地 區(qū)的毛燕窩、血燕窩和白燕窩。本發(fā)明的實施例在建立真?zhèn)舞b定模型時選用26個樣品，其 中包括正品馬來西亞毛燕窩4個，正品印度尼西亞毛燕窩7個，不明產(chǎn)地的正品毛燕窩3 個，不同商家的正品血燕窩7個，不同商家的正品白燕窩5個和燕窩摻假樣品，炸肉皮、白木 耳和淀粉的混合物，白木耳、炸肉皮、明膠、膠原蛋白、脫水馬鈴薯粉、豌豆淀粉、木薯淀粉、 玉米淀粉和或馬鈴薯淀粉共12個燕窩偽品。
[0050] 本發(fā)明的 申請人:進(jìn)行了大量實驗，在預(yù)試驗中對產(chǎn)地差異、血燕窩與毛、白燕窩的 差異進(jìn)行了差異性分析，結(jié)果表明燕窩模型無明顯性差異，因此標(biāo)準(zhǔn)集樣品的模型不受產(chǎn) 地和品種的影響，只需一個真?zhèn)舞b定模型即可，同時使檢測更加簡單易操作。
[0051] 本發(fā)明的有益效果
[0052] 本發(fā)明應(yīng)用LC-Q-TOF提供一種燕窩真?zhèn)舞b別模型，該方法結(jié)合統(tǒng)計分析，具有鑒 別正確率高，操作簡單，鑒別快速等特點，為燕窩真?zhèn)舞b定提供新的思路。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0053] 圖1為正品燕窩的總離子流圖；
[0054] 圖2為正品燕窩的特征化合物分布圖；
[0055] 圖3為正品燕窩經(jīng)篩選后的特征化合物分布圖；
[0056] 圖4為正品燕窩的主成分分析圖；
[0057] 圖5為正品燕窩的貢獻(xiàn)率累計趨勢；
[0058] 圖6為偏最小二乘法計算后的正品燕窩的三維聚類圖；
[0059] 圖7為燕窩地區(qū)差異分析中的主成分分析圖；
[0060] 圖8為燕窩類別差異分析中主成分分析圖。

【具體實施方式】
[0061] 下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終 相同或類似的標(biāo)號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附 圖描述的實施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。實施例 中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明 書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0062] 實施例1 :標(biāo)準(zhǔn)集樣品|旲型的建立及待測樣品的鑒定
[0063] 材料與試劑：
[0064] 蒸餾水，甲酸（分析純），試驗樣品：正品燕窩（分別選自北馬區(qū)、東海岸、東馬區(qū)、 中南馬區(qū)、SUMATRA LAMPUNG、SUMATRA、SULAWEST、KALIMANTAN等不同產(chǎn)地）均由廈門出入 境檢驗檢疫局赴東南亞現(xiàn)場采集；摻假燕窩均由廈門出入境檢驗檢疫局提供；淀粉、白木 耳、炸肉皮在市面購得。
[0065] 儀器：
[0066] Agilent 1290-6540液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜儀，配有Dual AJS ESI源（美 國Agilent公司）；電子天平（精確到0? OOOlg);數(shù)據(jù)分析軟件為MassHunter Workstation Version B. 06. 00 和 Mass Profiler Professional Version 12. 5 (美國 Agilent 公司）。
[0067] 樣品：正品燕窩；待測樣品（樣品I、2、3均為正品燕窩，樣品4為白木耳，樣品5為 炸肉皮，10 %摻假燕窩，30 %摻假燕窩，50 %摻假燕窩，80 %摻假燕窩）
[0068] 具體包括如下步驟：
[0069] (1)、燕窩真?zhèn)舞b別模型的建立，包括以下步驟：
[0070] ①、標(biāo)準(zhǔn)集樣品處理：收集不同產(chǎn)地，真假明確的正品燕窩樣品（正品馬來西亞毛 燕窩4個，正品印度尼西亞毛燕窩7個，不明產(chǎn)地的正品毛燕窩3個，不同商家的正品血燕 窩7個，不同商家的正品白燕窩5個）和燕窩偽品（偽品燕窩和常見的燕窩摻假樣品，白木 耳、炸肉皮、木薯淀粉、明膠、膠原蛋白、脫水馬鈴薯粉）作為燕窩真?zhèn)舞b別模型的標(biāo)準(zhǔn)采集 品。具體為：
[0071] 正品馬來西亞毛燕窩（Malaysia)4個：樣本1 :北馬區(qū)毛燕窩，代表州濱城州；樣 本2:東海岸毛燕窩，代表州吉蘭丹；樣本3:中南馬區(qū)毛燕窩，代表州柔佛；樣本4:東馬區(qū) 毛燕窩，代表州沙撈越；
[0072] 正品印度尼西亞毛燕窩（Indonesia) 7個：樣本1 :毛燕窩，代表州SULAWESI ;樣本 2 :毛燕窩，代表州SUMATRA ;
[0073] 樣本3 :毛燕窩，代表州KALIMANTAN ;樣本4 :毛燕窩，ORANGE ;樣本5 :毛燕窩， KUNING SEKALI ;樣本 6 :毛燕窩，KUNING ;樣本 7 :毛燕窩，PUTIH ;
[0074] 不明產(chǎn)地的正品毛燕窩（pilose) 3個：樣本1 :毛燕窩，羅春燕屋；樣本2 :毛燕窩， 富麗華燕屋；樣本3 :毛燕窩，送檢樣品；
[0075] 不同商家的正品血燕窩（red) 7個：樣本1:血燕盞，余仁生；樣本2:血燕盞，樓上； 樣本3 :燕之屋官燕盞；樣本4, 5, 6, 7:血燕窩，送檢樣品；
[0076] 不同商家的正品白燕窩（white)5個：樣本1 :白燕窩，燕之屋天然燕窩；樣本2 :白 燕窩，燕之屋燕窩王；樣本3、4、5 :白燕窩，送檢樣品；
[0077] 燕窩偽品（fake):樣本1:假燕窩1，燕之屋提供；樣本2:假燕窩2,燕之屋提供；
[0078] 樣本3:炸肉皮、白木耳、淀粉混合物；樣本4 :炸肉皮；樣本5 :白木耳；
[0079] 樣本6 :明膠；樣本7 :膠原蛋白；樣本8:脫水馬鈴薯粉；樣本9:豌豆淀粉；
[0080] 樣本10 :木薯淀粉；樣本11 :玉米淀粉；樣本12 :馬鈴薯顆粒粉。
[0081] ②、每一標(biāo)準(zhǔn)樣品研磨成粉末后等量稱取，稱取共IOOmg置于250mL三角瓶中，力口 入1 %的甲酸溶液，沸水浴30min，冷卻，過0. 22 m濾膜，置于進(jìn)樣瓶中，待上機。所述粉末 狀樣品為粒徑< lnm。
[0082] ③、用液相色譜四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)采集品一級質(zhì)譜信息，見附圖1，附 圖1質(zhì)譜信息為所有標(biāo)準(zhǔn)采集品的混合樣品的總離子流圖?？傠x子流圖是反應(yīng)過程中所涉 及到的所有離子的流程圖，從圖1可以看出正品燕窩的質(zhì)譜信息。對采集質(zhì)譜信息進(jìn)行特 征化合物提取，提取獲得7504個化合物，見附圖2。圖2中的每條線代表一種提取到的特征 化合物，每條線的位置代表每種化合物在真?zhèn)蝺山M之間的分布信息。
[0083] 所述特征化合物提取的參數(shù)設(shè)置為，選上-H，+CH3COO.流動相中含有乙酸銨，已酸 根離子則有可能加入到目標(biāo)物中。對于化合物價態(tài)選擇小于等于2價。
[0084] 所述液相色譜條件為，色譜柱：Z0RBZX Eclipse Pluse C18(3. OXIOOmm，1.8iim);柱溫：35°C ;進(jìn)樣量：2ii流動相：A相為水相（含5mmol乙酸 銨），B相為甲醇（含5mmol乙酸銨）；流速：0.4ml/min;流動相階梯洗脫程序見附表1。
[0085] 表1流動相階梯洗脫程序表
[0086]

【權(quán)利要求】
1. 一種鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于，包括如下步驟， 待測樣品處理：待測樣品中加入甲酸溶液后沸水浴，再冷卻，過濾膜進(jìn)行過濾得到處理 后的待測樣品； 待測樣品特征化合物提取：處理后的待測樣品用液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜儀采 集待測樣品質(zhì)譜信息，進(jìn)行特征化合物提??； 結(jié)果調(diào)取與預(yù)測：將獲得的待測樣品的特征化合物信息調(diào)入燕窩真?zhèn)舞b別模型中進(jìn)行 預(yù)測。
2. 權(quán)利要求1所述鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于，所述待測樣品處理為，稱取 lOOmg置于250mL三角瓶中，加入1體積％的甲酸溶液，沸水浴30min，冷卻，過0. 22 y m濾 膜。
3. 權(quán)利要求1所述鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于，所述待測樣品特征化合物提取 為：將處理后的待測樣品置于液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜儀進(jìn)樣瓶中，上樣；得到待測 樣品一級質(zhì)譜信息；對一級質(zhì)譜信息進(jìn)行特征化合物提??； 所述液相色譜條件為，3. 0X100mm，l. 8iim 的 ZORBZX Eclipse Pluse C18 色譜柱；35°C 柱溫；2 yl進(jìn)樣量；流動相中A相為5mmol乙酸銨的水相，B相為含5mmol乙酸銨的甲醇； 0? 4ml/min 流速； 所述四級桿飛行時間質(zhì)譜的條件為，負(fù)離子全掃描模式；毛細(xì)管電壓3500V ;干燥氣 溫度300°C ;干燥氣流速10L/min ;霧化氣壓力35psig ;鞘氣溫度350°C ;鞘氣流速12L/ min ;碎裂電壓130V ;錐孔電壓65V ;倍增電壓750V ;質(zhì)量掃描范圍m/z 50-1700 ;采集速 率1. 5spectra/s ;參比離子m/z 121. 985587和m/z 1033. 988109 ;進(jìn)樣后直接進(jìn)行質(zhì)譜采 集； 所述特征化合物提取的參數(shù)設(shè)置為，選上-H，+CH3C00,化合物價態(tài)選擇小于等于2價； 任選的，所述結(jié)果調(diào)取與預(yù)測步驟中，當(dāng)準(zhǔn)確率在80%及以上時判定為正品燕窩，否則 為偽品燕窩。
4. 權(quán)利要求1所述鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于，所述燕窩真?zhèn)舞b別模型是由如 下方法建立的： 參與模型建立的標(biāo)準(zhǔn)集樣品處理；標(biāo)準(zhǔn)集樣品中加入甲酸溶液后沸水浴，再冷卻，過濾 膜進(jìn)行過濾得到處理后的標(biāo)準(zhǔn)集樣品； 標(biāo)準(zhǔn)集樣品特征化合物提?。簩⑻幚砗蟮臉?biāo)準(zhǔn)集樣品置于液相色譜-四級桿飛行 時間質(zhì)譜儀進(jìn)樣瓶中，上樣，得到標(biāo)準(zhǔn)集樣品一級質(zhì)譜信息；對一級質(zhì)譜信息進(jìn)行特征化 合物提取，獲得7504個化合物；將采集的標(biāo)準(zhǔn)集樣品一級質(zhì)譜信息導(dǎo)入Mass Profiler Peofessional軟件中，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法對7504個化合物進(jìn)行篩選，篩選后共得到69個化合 物，對這69個化合物進(jìn)行主成分分析； 燕窩真?zhèn)舞b別模型建立：以偏最小二乘法建立燕窩真?zhèn)舞b別模型； 所述液相色譜條件為，3.0\100臟，1.811111的201?2乂￡(311口86?11186(：18色譜柱；351： 柱溫；2 進(jìn)樣量；流動相中A相為5mmol乙酸銨的水相，B相為含5mmol乙酸銨的甲醇； 0? 4ml/min 流速； 所述四級桿飛行時間質(zhì)譜的條件為，負(fù)離子全掃描模式；毛細(xì)管電壓3500V ;干燥氣 溫度300°C ;干燥氣流速10L/min ;霧化氣壓力35psig ;鞘氣溫度350°C ;鞘氣流速12L/ min ;碎裂電壓130V ;錐孔電壓65V ;倍增電壓750V ;質(zhì)量掃描范圍m/z 50-1700 ;采集速 率1.58口6(^四/8;參比離子111/2 121.985587和111/2 1033.988109;進(jìn)樣后直接進(jìn)行質(zhì)譜采 集； 所述特征化合物提取的參數(shù)設(shè)置為，選上-H，+CH3COO,化合物價態(tài)選擇小于等于2價； 所述69個化合物篩選條件為出現(xiàn)頻率為100 %，變異系數(shù)小于等于25 %，豐度大于等 于1000 counts進(jìn)行過濾。
5. 權(quán)利要求4所述鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒?，其特征在于，所述?biāo)準(zhǔn)集樣品為選自不同地 區(qū)的毛燕窩、血燕窩和白燕窩；優(yōu)選的，所述標(biāo)準(zhǔn)集樣品為正品馬來西亞毛燕窩4個，正品 印度尼西亞毛燕窩7個，不明產(chǎn)地的正品毛燕窩3個，不同商家的正品血燕窩7個，不同商 家的正品白燕窩5個和燕窩摻假樣品，炸肉皮、白木耳和淀粉的混合物，白木耳、炸肉皮、明 膠、膠原蛋白、脫水馬鈴薯粉、豌豆淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉和或馬鈴薯淀粉。
6. 權(quán)利要求1所述鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒ǎ涮卣髟谟?，所述結(jié)果調(diào)取和預(yù)測是將獲得 的待測樣品的特征化合物信息調(diào)入燕窩真?zhèn)舞b別模型中，軟件自動預(yù)測結(jié)果：當(dāng)準(zhǔn)確率在 80%及以上時判定為正品燕窩，否則為偽品燕窩。
7. 權(quán)利要求1-6的任一鑒別燕窩真?zhèn)蔚姆椒ㄓ糜谘喔C真?zhèn)舞b別的用途。
8. -種燕窩真?zhèn)舞b別模型，其特征在于，由如下方法制備得到， 參與模型建立的標(biāo)準(zhǔn)集樣品處理；標(biāo)準(zhǔn)集樣品中加入甲酸溶液后沸水浴，再冷卻，過濾 膜進(jìn)行過濾得到處理后的正品燕窩； 標(biāo)準(zhǔn)集樣品燕窩特征化合物提取：將處理后的標(biāo)準(zhǔn)集樣品置于液相色譜-四級桿飛行 時間質(zhì)譜儀進(jìn)樣瓶中，上樣，得到標(biāo)準(zhǔn)集樣品一級質(zhì)譜信息；對一級質(zhì)譜信息進(jìn)行特征化合 物提取，獲得7504個化合物；將采集的標(biāo)準(zhǔn)集樣品質(zhì)譜信息導(dǎo)入MPP軟件中，結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方 法對7504個化合物進(jìn)行篩選，篩選后共得到69個化合物，對這69個化合物進(jìn)行主成分分 析； 燕窩真?zhèn)舞b別模型建立：以偏最小二乘法建立燕窩真?zhèn)舞b別模型； 所述液相色譜條件為，3.0\100臟，1.811111的201?2乂￡(311口86?11186(：18色譜柱；351： 柱溫；2 進(jìn)樣量；流動相中A相為5mmol乙酸銨的水相，B相為含5mmol乙酸銨的甲醇； 0? 4ml/min 流速； 所述四級桿飛行時間質(zhì)譜的條件為，負(fù)離子全掃描模式；毛細(xì)管電壓3500V ;干燥氣溫 度300°C ;干燥氣流速10L/min ;霧化氣壓力35psig ;鞘氣溫度350°C ;鞘氣流速12L/min ; 碎裂電壓130V ;錐孔電壓65V ;倍增電壓750V ;質(zhì)量掃描范圍m/z 50-1700 ;采集速率1. 5 spectra/s;參比離子m/z 121. 985587和m/z 1033. 988109;進(jìn)樣后直接進(jìn)行質(zhì)譜采集； 所述特征化合物提取的參數(shù)設(shè)置為，選上-H，+CH3C00,化合物價態(tài)選擇小于等于2價； 所述69個化合物篩選條件為出現(xiàn)頻率為100%，變異系數(shù)小于等于25%，豐度大于等 于1000 counts進(jìn)行過濾。
9. 權(quán)利要求8所述燕窩真?zhèn)舞b別模型，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)集樣品為選自不同地區(qū) 的毛燕窩、血燕窩、白燕窩和偽品燕窩；優(yōu)選的，所述標(biāo)準(zhǔn)集樣品為正品馬來西亞毛燕窩4 個，正品印度尼西亞毛燕窩7個，不明產(chǎn)地的正品毛燕窩3個，不同商家的正品血燕窩7個， 不同商家的正品白燕窩5個和燕窩摻假樣品，炸肉皮、白木耳和淀粉的混合物，白木耳、炸 肉皮、明膠、膠原蛋白、脫水馬鈴薯粉、豌豆淀粉、木薯淀粉、玉米淀粉和或馬鈴薯淀粉。
10.權(quán)利要求8或9任一所述的燕窩真?zhèn)舞b別模型用于鑒別燕窩真?zhèn)蔚挠猛尽?br> 【文檔編號】G01N30/88GK104360004SQ201410766745
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月12日
【發(fā)明者】徐敦明, 于?；? 張縉, 陳達(dá)捷, 周昱, 黃志強 申請人:徐敦明