本發(fā)明屬于生物技術(shù)中組織切片處理技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種激光捕獲纖維切割技術(shù)中未染色腦組織切片的處理方法。

背景技術(shù)：

激光捕獲纖維切割技術(shù)(Laser Capture Microdissection，LCM)是一種自動樣品制備技術(shù)，允許在顯微鏡下從混合樣品中分離出特定的細胞。LCM技術(shù)可根據(jù)應用需要，從腦組織樣本中分離出各個腦區(qū)(或核)。但是首先要將腦組織樣品切成5-7μm的切片，然后再設定激光捕獲的區(qū)域，由于切片很薄很難清晰的辨認腦區(qū)(或核)的邊界。所以清晰的辨認腦區(qū)(或核)邊界是測定特定蛋白和RNA含量精確程度的關(guān)鍵。如果采用HE(中文名)染色可以清晰地辨認不同的腦區(qū)(或核)，但是HE染色卻將腦組織中的蛋白破壞，RNA降解，不能獲得具有活性的組織樣品。如果將組織切片的厚度增加，例如20-40μm，盡管能清楚辨認各個腦區(qū)(或核)，但是卻不能用LCM的方法捕獲樣品。

目前，激光捕獲纖維切割技術(shù)對腦組織切片的處理方法基本為Zeiss公司提供的實驗方法，該方法包括的實驗步驟包括：(1)將5-7μm的腦組織切片貼在無RNA酶處理過的貼膜載玻片上，(2)浸入到無RNA酶的水中5-6次，以移除OCT包埋劑，(3)按順序快速地浸入4℃，濃度分別為70％、95％、100％的乙醇中各2次，每次1分鐘，(4)空氣中干燥10分鐘，樣品在-20℃儲存。如圖1所示，經(jīng)該方法處理后的腦組織切片雖然具有活性，但不能夠清晰地辨認不同的腦區(qū)或核的邊界，因此不能完整的將腦區(qū)或核取出，不能準確測定腦區(qū)或核蛋白和mRNA的表達。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，能清晰的辨認腦區(qū)或核的邊界，以精確的獲得該腦區(qū)或核，具體的是一種激光捕獲纖維切割技術(shù)中未染色腦組織切片的處理方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采取以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種激光捕獲纖維切割技術(shù)中未染色腦組織切片的處理方法，該方法包括步驟如下：

(1)將5-7μm的腦組織切片貼在無RNA酶處理過的貼膜的載玻片上；

(2)將貼有腦組織切片的載玻片立即浸入到70％，溫度在4℃的乙醇中，5分鐘；

(3)將上述處理后的腦組織切片浸入到無RNA酶的水中5-6次，以移除OCT包埋劑；

(4)將上述移除OCT包埋劑后的腦組織切片按順序快速地浸入4℃，濃度分別為70％、95％、100％的乙醇中各2次，每次1分鐘；

(5)將上述處理后的腦組織切片在常溫下浸入二甲苯，10分鐘，以增強組織切片的折光系數(shù)；

(6)將上述處理后的腦組織切片在空氣中干燥10分鐘，樣品在-20℃儲存。

而且，所述步驟(2)中的浸入是在切片機中處理。

本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是：

1、通過本發(fā)明方法的處理，使腦區(qū)纖維的密度明顯比周圍組織暗，腦組織切片經(jīng)過處理后能清晰的看見腦區(qū)或核，清晰的辨認腦區(qū)或核的邊界，從而準確的取出完整的腦區(qū)或核。

2、本發(fā)明方法實驗結(jié)果穩(wěn)定，重復性強，過程易于實現(xiàn)。

3、本發(fā)明方法在清晰辨認腦區(qū)的同時并沒有降低樣品的生物活性。

附圖說明

圖1是Zebra Finch腦的切片用目前Zeiss實驗方法處理后的圖片；

圖2是Zebra Finch腦的切片用本發(fā)明方法處理后的圖片。

具體實施方式

以下對本發(fā)明實施做進一步詳述，以下實施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。

一種激光捕獲纖維切割技術(shù)中未染色腦組織切片的處理方法，該方法包括步驟如下：

(1)將5-7μm的腦組織切片貼在無RNA酶處理過的貼膜的載玻片上；

(2)將貼有腦組織切片的載玻片立即浸入到70％，溫度在4℃的乙醇中，5分鐘；

其中，浸入是在切片機中處理，該步驟具有固定組織切片的作用；

(3)將上述處理后的腦組織切片浸入到無RNA酶的水中5-6次，以移除OCT包埋劑；

(4)將上述移除OCT包埋劑后的腦組織切片按順序快速地浸入4℃，濃度分別為70％、95％、100％的乙醇中各2次，每次1分鐘；

(5)將上述處理后的腦組織切片在常溫下浸入二甲苯，10分鐘，該步驟具有透明作用，以增強組織切片的折光系數(shù)。

6)將上述處理后的腦組織切片在空氣中干燥10分鐘，樣品在-20℃儲存。

實驗結(jié)果請參見附圖2，兩種方法處理后Zebra Finch腦的Area X區(qū)D1mRNA的含量沒有差異。

實驗結(jié)論：本發(fā)明的實驗方法腦組織切片經(jīng)過處理后腦區(qū)(核)，能清晰的看見腦區(qū)(核)。而且樣品的生物活性沒有受到影響。