本發(fā)明涉及生物檢測，特別涉及一種基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法。

背景技術：

1、對相關生物標志物的系統(tǒng)檢測和監(jiān)測，為疾病的發(fā)生、發(fā)展和治療過程提供了必要的診斷基礎。在現(xiàn)有檢測生物標志物的方法中，免疫分析是最常用的方法之一，已被廣泛用于臨床檢測中。免疫分析是基于抗原抗體的高專一性作用，結(jié)合了諸如放射性標記、酶催化、熒光、化學發(fā)光等的檢測方法。

2、數(shù)字酶聯(lián)免疫吸附法(digital?elisa)可以通過讀取單個蛋白質(zhì)分子的信號來實現(xiàn)絕對計數(shù)，因而具有超高的靈敏度，從而引起廣泛關注。但是，天然酶存在成本高、操作穩(wěn)定性低、催化活性對環(huán)境條件的敏感性等固有缺點，因而限制了其在商業(yè)免疫分析中的應用。

3、尋找可替代天然酶的物質(zhì)，克服天然酶的固有缺點，成為本領域技術人員亟需解決的問題。

技術實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術中存在的問題和不足，本發(fā)明提供一種基于納米材料的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，通過將使用納米顆粒替換天然酶，從而解決了天然酶存在的成本高、穩(wěn)定性低、對環(huán)境條件要求高的缺點，降低了免疫分析的成本，提高了免疫分析方法的穩(wěn)定性，且能在更廣泛的環(huán)境條件下使用。

2、具體地，本發(fā)明提供一種基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，所述基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法包括：

3、標記，將納米顆粒加入含有待測復合物的第一混合溶液，在第一預設溫度下孵育，得到第二混合溶液；

4、信號放大，在所述第二混合溶液中加入標記物和h2o2，在第二預設溫度下孵育，得到待檢溶液；所述標記物對所述待測復合物進行標記；

5、計數(shù)分析，對所述待檢溶液進行檢測，根據(jù)所述待檢溶液的檢測結(jié)果繪制標準曲線，計算待測復合物中所述待測物質(zhì)的含量。

6、可選地，所述待測復合物的制備包括：

7、獲取第一結(jié)合體包被的載體粒子；

8、在所述第一結(jié)合體包被的載體粒子中加入待測物質(zhì)，在第三預設溫度下孵育，得到待測物質(zhì)包被的載體粒子；

9、在所述待測物質(zhì)包被的載體粒子中，加入第二結(jié)合體，在第四預設溫度下孵育，得到待測復合物。

10、可選地，所述載體粒子的粒徑為3～4.5um。

11、可選地，在所述的信號放大步驟中，所述標記物為熒光酪胺偶聯(lián)試劑。

12、可選地，所述的在所述混合溶液中加入標記物和h2o2包括：

13、在所述混合溶液中依次加入生物素化酪胺、鏈霉親和素化熒光材料和h2o2。

14、可選地，所述的在所述混合溶液中加入標記物和h2o2包括：

15、在所述混合溶液中依次加入酪胺、帶羧基的熒光材料和h2o2。

16、可選地，所述納米顆粒為普魯士藍粒子、四氧化三鐵、氧化銅、金納米顆粒、石墨烯等具有的納米材料中的一種或多種。

17、可選地，所述第一預設溫度為25～37℃；

18、所述第二預設溫度為4～60℃；

19、所述第三預設溫度為25～37℃；

20、所述第四預設溫度為25～37℃。

21、可選地，所述待測物質(zhì)是抗體、小分子化合物、核酸、囊泡、細菌、病毒、多肽、抗原或半抗原中的一種；

22、所述第一結(jié)合體是抗體、受體蛋白、互補核酸或適配體中的一種；

23、所述第二結(jié)合體是抗體、受體蛋白、互補核酸或適配體中的一種。

24、在本發(fā)明中，基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法中通過納米顆粒對待測復合物進行標記，酪胺和熒光材料與納米顆粒結(jié)合，對待測復合物信號進行放大，最終測得待測物質(zhì)。在本發(fā)明中，使用納米顆粒代替天然酶，克服了天然酶成本高、穩(wěn)定性低、對環(huán)境條件要求高的缺點，降低了免疫分析的成本，提高了免疫分析方法的穩(wěn)定性，且能適用于更廣泛的溫度范圍和酸堿度范圍。

25、根據(jù)下文結(jié)合附圖對本發(fā)明具體實施例的詳細描述，本領域技術人員將會更加明了本發(fā)明的上述以及其他目的、優(yōu)點和特征。

技術特征：

1.一種基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，包括：

2.根據(jù)權利要求1所述的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述待測復合物的制備包括：

3.根據(jù)權利要求2所述的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述載體粒子的粒徑為3～4.5um。

4.根據(jù)權利要求1或2所述的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，在所述信號放大步驟中，所述標記物為熒光酪胺偶聯(lián)試劑。

5.根據(jù)權利要求1或2所述的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述的在所述混合溶液中加入標記物和h2o2包括：

6.根據(jù)權利要求1或2所述的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述的在所述混合溶液中加入標記物和h2o2包括：

7.根據(jù)權利要求1所述的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述納米顆粒為普魯士藍粒子、四氧化三鐵、氧化銅、金納米顆粒、石墨烯等具有的納米材料中的一種或多種。

8.根據(jù)權利要求2所述的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，

9.根據(jù)權利要求2所述的基于納米材料的低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，

技術總結(jié)
本發(fā)明涉及生物檢測領域，特別涉及一種低豐度待測物質(zhì)的檢測方法。本發(fā)明提供了一種低豐度待測物質(zhì)的檢測方法，包括待測復合物的標記、信號放大和計數(shù)分析。通過納米顆粒對待測復合物進行標記，酪胺和熒光材料與納米顆粒結(jié)合，對待測復合物信號進行放大，最終測得待測物質(zhì)。在本發(fā)明中，使用納米顆粒代替天然酶，克服了天然酶成本高、穩(wěn)定性低、對環(huán)境條件要求高的缺點，降低了免疫分析的成本，提高了免疫分析方法的穩(wěn)定性，且能適用于更廣泛的溫度范圍和酸堿度范圍。

技術研發(fā)人員：顧寧,張璐斯,王杰銳,金晶,王西龍
受保護的技術使用者：南京仁邁生物科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/10