一組鑒別阿膠及其制品中驢源性成分的多肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一組鑒別阿膠及其制品中驢源性成分的多肽，以及使用所述多肽通過質譜法鑒定阿膠及其制品中驢源性成分的方法，所述的多肽組中的多肽具有特定的序列結構及特定m/z值(包括特定的母離子和一對子離子)，其序列如SEQ ID NO.1～35所示，所述肽段及其m/z為驢源阿膠特有，在牛源阿膠中未見存在。
【專利說明】
一組鑒別阿膠及其制品中驢源性成分的多肽
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術領域，具體而言，涉及一組鑒別阿膠及其制品中驢源性成分 的多肽及其使用方法。
【背景技術】
[0002] 阿膠為馬科動物驢的皮，經(jīng)煎煮、濃縮制成的固體膠，原產(chǎn)自山東省東阿縣，至今 已有近三千年歷史。阿膠是傳統(tǒng)的滋補上品、補血圣藥，味甘平，入肺、肝、腎經(jīng)，具有補血止 血、滋陰潤燥等功效，藥食兩用，長期服用可補血養(yǎng)血、美白養(yǎng)顏、抗衰老、抗疲勞、提高免疫 力，適用人群廣泛。李時珍著《本草綱目》載："阿膠《本經(jīng)》上品。弘景曰：'出東阿，故名阿 膠'"。阿膠是中藥材中典型的最講究"地道性"的藥材，道地阿膠必汲取東阿之水，得傳承人 之奇秘技藝煉制而成。道地阿膠表面平整，無油氣孔，質硬而脆，斷面光亮細膩，碎片對光照 視呈棕色半透明狀，李時珍贊其〃黃透如琥珀色，光黑如璧漆"。
[0003] 早在1996年就曾曝光過假阿膠事件。時隔多年之后，阿膠造假不僅沒有得到遏制， 而且越演越烈。這些不法企業(yè)利用牛皮、馬皮下腳料等劣質材料冒充驢皮制作偽劣阿膠，并 以次充好向市場銷售。
[0004] 導致阿膠造假事件屢禁不止的一部分原因是缺少鑒定的技術支持，動物皮經(jīng)過熬 制溶解之后，破壞了本身的特性，很難鑒別出動物皮的來源。目前國家也沒有有效鑒別阿膠 成分的方法，只能靠從生產(chǎn)源頭進行控制，以上情況導致了許多不法企業(yè)鉆空子。
[0005] 迫切需要一種高效準確鑒定阿膠及其制品真?zhèn)蔚姆椒?。隨著代謝組學技術的發(fā) 展，利用肽組學直接鑒定動物源成分成為可能。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明對阿膠和牛皮膠中的多肽進行了研究，建立了從多肽水平對阿膠及其制品 中驢源性成分進行鑒別的技術，填補了國內外阿膠及其制品鑒別的空白。
[0007] 本發(fā)明首先涉及一組用于單獨或組合檢測阿膠及其制品中驢源性成分的多肽，所 述的阿膠制品包括但不限于阿膠糕、阿膠膏、阿膠漿、阿膠口服液、阿膠糖、阿膠補血顆粒， 所述的多妝的序列為：
[0008] SEQ ID NO.1：DGTSGHPGPIGPPGPR；
[0009] SEQ ID N0.2：GPPGESGAAGPAGPIGSR；
[0010] SEQ ID N0.3：PGEAGPPGPPGPAGEK；
[0011] SEQ ID N0.4：GPPGPMGPPGIAGPPGESGR；
[0012] SEQ ID N0.5：GPNGEPGSTGPAGPPGIR；
[0013] SEQ ID NO.6：DGTLGHPGPIGPPGPR；
[0014] SEQ ID N0.7：GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER；
[0015] SEQ ID N0.8：TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK；
[0016] SEQ ID N0.9：PGPTGLEGPPGER；
[0017] SEQ ID N0.10：GPAGPTGPVGK；
[0018] SEQ ID N0.11：GPSGPAGKDHR；
[0019] SEQ ID N0.12：GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR；
[0020] SEQ ID NO.13：GEAGPAGPAGPIGPVGAR；
[0021] SEQ ID N0.14：GIPGPAGAAGATGAR；
[0022] SEQ ID NO.15：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；
[0023] SEQ ID NO.16：GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR；
[0024] SEQ ID NO.17：GEPGPVGSVGPVGAVGPR；
[0025] SEQ ID NO.18：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；
[0026] SEQ ID NO.19：GPAGPNGIPGEK；
[0027] SEQ ID N0.20：GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR；
[0028] SEQ ID NO.21：GEPGPTGLPGPPGER；
[0029] SEQ ID N0.22：GETGPSGPAGPTGAR；
[0030] SEQ ID N0.23：SGDRGEAGPAGPAGPIGPVGAR；
[0031] SEQ ID NO.24：IGAPGIIGIPGSR；
[0032] SEQ ID N0.25：GLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR；
[0033] SEQ ID NO.26：VGPPGPSGNAGPPGPPGPVGK；
[0034] SEQ ID NO.27：SGQPGTVGPAGVR；
[0035] SEQ ID N0.28：GDGGPPGVTGFPGAAGR；
[0036] SEQ ID N0.29：GSPGGPGAAGFPGAR；
[0037] SEQ ID NO.30：EGSPGAEGSPGR；
[0038] SEQ ID NO.31：GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR；
[0039] SEQ ID N0.32：GEPGSTGPAGPPGIR；
[0040] SEQ ID N0.33：GPPGESGAAGPAGPIGSR；
[0041] SEQ ID N0.34：AGPPGPPGPVGK；
[0042] SEQ ID N0.35:TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK。
[0043] 其m/z分別為：
[0044] 肽段1:519.6;
[0045] 肽段 2:517.6;
[0046] 肽段 3:731.8;
[0047] 肽段4:595.6;
[0048] 肽段 5:825.9;
[0049] 肽段 6:514.3;
[0050] 肽段7:940.8;
[0051] 肽段8:602.0;
[0052] 肽段9:640.3;
[0053] 肽段 10:469.3;
[0054] 肽段11:539.8;
[0055] 肽段 12:715.7;
[0056] 肽段 13:765.9;
[0057] 肽段 14:620.3;
[0058] 肽段 15:893.0;
[0059] 肽段 16:1073.1;
[0060] 肽段 17:802.9;
[0061] 肽段 18:601.0;
[0062] 肽段 19:555.8;
[0063] 肽段 20:914.4;
[0064] 肽段 21:733.3;
[0065] 肽段 22:656.3;
[0066] 肽段 23:649.3;
[0067] 肽段 24:620.4;
[0068] 肽段 25:961.8;
[0069] 肽段 26:614.6;
[0070] 肽段 27:591.8;
[0071] 肽段 28:751.4;
[0072] 肽段 29:652.3;
[0073] 肽段 30:566.7;
[0074] 肽段 31:868.9;
[0075] 肽段 32:691.3;
[0076] 肽段 33:775.9;
[0077] 肽段 34:531.8;
[0078] 肽段 35:902.4。
[0079] 35條多肽對應的母離子、子離子見下表1，
[0080]表1驢源性多肽序列及其對應的母離子、子離子


[0084] 本發(fā)明所涉及前處理方法包括如下步驟：
[0085] (1)對待測樣本進行質譜前處理，獲得待測多肽濾液：
[0086] (2)通過質譜法檢測待測樣本的多肽成分，分析樣本中的動物皮來源成分。
[0087]所述的質譜前處理步驟如下：
[0088] (1)將待測樣品均質成粉末狀態(tài)，稱取〇. Ig~〇. 5g阿膠樣品或1.0-2.Og阿膠制品， 加入I %NH4HC〇3溶液，超聲處理10~30min使樣品完全溶解，定容至50mL;
[0089] (2)溶液過 0·22μπι 濾膜；
[0090] (3)取10~20yLTrypsin 酶溶液（1μg/μL 的Trypsin 酶溶液）加入到 IOOyL ~200yL 上 述濾液中，37°C酶解16-18小時，待上機檢測。
[0091] 本發(fā)明還涉及兩種檢測阿膠及其制品的質譜方法，所述的質譜法檢測為，
[0092] 采用AB SCIEXTri:pleTOF?5600質譜檢測，
[0093] 流動相A: 0.05~0.2 %甲酸-乙腈溶液，流動相B: 0.05~0.2 %甲酸-水，
[0094] 流速:0· 1~0.5mL/min，
[0095] TOF掃描范圍：100-3000Da，
[0096] 正離子反應模式，GSl: 35，GS2:45，Curtain Gas: 35，ISVF: 5500，TEM: 500，DP: 100， CE：10〇
[0097] 采用AB SCIEX三重四級桿質譜檢測，
[0098] 流動相A: 0.05~0.2%甲酸-乙腈，流動相B: 0.05~0.2%甲酸-水，
[0099] 流速:0· 1~0.5mL/min，
[0100] 電噴霧離子源，正離子反應模式，檢測方式:MRM，噴霧電壓：5500V，離子傳輸管溫 度:475°C;鞘氣壓力:40;輔助氣壓力:6。
[0101]所述的分析樣本中的驢源性成分為，將待測樣品的質譜結果對比SEQ ID NO. 1~ 35的各條特異性多肽的質譜譜圖，出現(xiàn)SEQ ID NO. 1~35的各條特異性多肽的質譜檢測譜 圖時，即可判斷該組織樣本存在驢源性成分。
【附圖說明】
[0102] 圖 1，DGTSGHPGPIGPPGPR 色譜圖
[0103] 圖 2，GPPGESGAAGPAGPIGSR 色譜圖
[0104] 圖 3，PGEAGPPGPPGPAGEK 色譜圖
[0105] 圖 4，GPPGPMGPPGIAGPPGESGR色譜圖
[0106] 圖 5，GPNGEPGSTGPAGPPGIR 色譜圖
[0107] 圖6，DGTLGHPGPIGPPGPR 色譜圖
[0108] 圖 7，GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER 色譜圖
[0109] 圖 8，TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK色譜圖
[0110] 圖9，PGPTGLEGPPGER 色譜圖
[0111] 圖 10，GPAGPTGPVGK 色譜圖
[0112] 圖 11，GPSGPAGKDHR 色譜圖
[0113] 圖 12，GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR 色譜圖
[0114] 圖 13，GEAGPAGPAGPIGPVGAR 色譜圖
[0115] 圖 14，GIPGPAGAAGATGAR 色譜圖
[0116] 圖 15，GPPGPVGPPGIAGPPGESGR 色譜圖
[0117] 圖 16，GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR 色譜圖
[0118] 圖 17，GEPGPVGSVGPVGAVGPR 色譜圖
[0119] 圖 18，GPPGPVGPPGIAGPPGESGR色譜圖
[0120] 圖 19，GPAGPNGIPGEK 色譜圖
[0121] 圖 20，GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR 色譜圖
[0122] 圖 21，GEPGPTGLPGPPGER 色譜圖
[0123] 圖 22，GETGPSGPAGPTGAR 色譜圖
[0124] 圖 23，SGDRGEAGPAGPAGPIGPVGAR 色譜圖
[0125] 圖 24，IGAPGIIGIPGSR 色譜圖
[0126] 圖 25，GLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR 色譜圖
[0127] 圖 26，VGPPGPSGNAGPPGPPGPVGK 色譜圖
[0128] 圖 27，SGQPGTVGPAGVR 色譜圖
[0129] 圖 28，GDGGPPGVTGFPGAAGR 色譜圖
[0130] 圖 29，GSPGGPGAAGFPGAR 色譜圖
[0131] 圖 30，EGSPGAEGSPGR 色譜圖
[0132] 圖 31，GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR 色譜圖
[0133] 圖 32，GEPGSTGPAGPPGIR 色譜圖
[0134] 圖 33，GPPGESGAAGPAGPIGSR 色譜圖
[0135] 圖 34，AGPPGPPGPVGK 色譜圖
[0136] 圖 35，TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK 色譜圖
[0137] 圖36,在純品牛阿膠膠原中檢測SEQ ID NO. 1~35所示多肽的色譜特征圖 圖37,驢源性阿膠對照品檢測結果色譜圖 圖38,樣品2檢測結果色譜圖 圖39,樣品3檢測結果色譜圖
【具體實施方式】
[0138] 實施例1，篩選驢阿膠膠原特異性多肽
[0139] 通過質譜分析純品驢膠原樣本和牛膠原樣本，利用ProteinPilot軟件對質譜結果 進行檢索比對分析，從而確定最優(yōu)選的驢膠原專屬多肽序列。
[0140] 首先，對選取的純品膠原樣本進行質譜分析，步驟包括：
[0141] (一)樣本前處理步驟：
[0142] (1)稱取0.1 g~0.5g均質成粉末狀態(tài)的純品樣品，加入1 %NH4HCO3溶液，超聲處理 10~30min使樣品完全溶解，定容至50mL;
[0143] (2)溶液過 0·22μπι 濾膜；
[0144] (3)取 10 ~20yLTrypsin 酶溶液（1μg/μL 的 Trypsin 酶溶液）加入到 IOOyL ~200yL 上 述濾液中，37°C酶解16-18小時，待上機檢測。
[0145] (二)上機檢測，
[0146] (1)采用AB SCIEXTripleT〇F?5600質譜檢測方法如下，
[0147] 流動相A: 0.05~0.2 %甲酸-乙腈溶液，流動相B: 0.05~0.2 %甲酸-水，
[0148] 流速:0· 1~0.5mL/min，
[0149] TOF掃描范圍：100-3000Da，
[0150] 正離子反應模式，GSl:35，GS2:45，Curtain Gas:35，ISVF:5500，TEM:500，DP: 100,CE：10〇
[0151] (2)采用AB SCIEX三重四級桿質譜檢測方法如下，
[0152] 流動相A: 0.05~0.2 %甲酸-乙腈，流動相B: 0.05~0.2 %甲酸-水，
[0153] 流速:0· 1~0.5mL/min，
[0154] 電噴霧離子源，正離子反應模式，檢測方式:MRM，噴霧電壓：5500V，離子傳輸管溫 度:475°C;鞘氣壓力:40;輔助氣壓力:6。
[0155] 其次，依據(jù)純品膠原樣本的質譜結果，利用ProteinPilot軟件對質譜結果進行檢 索比對分析，篩選得到在驢膠原中確實存在的專屬多肽組，組中的各條多肽序列信息如下：
[0156] SEQ ID NO.I：DGTSGHPGPIGPPGPR；
[0157] SEQ ID N0.2：GPPGESGAAGPAGPIGSR；
[0158] SEQ ID NO.3：PGEAGPPGPPGPAGEK；
[0159] SEQ ID N0.4：GPPGPMGPPGIAGPPGESGR；
[0160] SEQ ID N0.5：GPNGEPGSTGPAGPPGIR；
[0161] SEQ ID NO.6：DGTLGHPGPIGPPGPR；
[0162] SEQ ID N0.7：GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER；
[0163] SEQ ID N0.8：TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK；
[0164] SEQ ID NO.9：PGPTGLEGPPGER；
[0165] SEQ ID NO. 10：GPAGPTGPVGK；
[0166] SEQ ID N0.11：GPSGPAGKDHR；
[0167] SEQ ID NO.12：GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR；
[0168] SEQ ID NO.13：GEAGPAGPAGPIGPVGAR；
[0169] SEQ ID NO.14：GIPGPAGAAGATGAR；
[0170] SEQ ID N0.15：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；
[0171] SEQ ID N0.16：GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR；
[0172] SEQ ID NO.17：GEPGPVGSVGPVGAVGPR；
[0173] SEQ ID NO.18：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；
[0174] SEQ ID NO.19：GPAGPNGIPGEK；
[0175] SEQ ID N0.20：GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR；
[0176] SEQ ID NO.21：GEPGPTGLPGPPGER；
[0177] SEQ ID N0.22：GETGPSGPAGPTGAR；
[0178] SEQ ID N0.23：SGDRGEAGPAGPAGPIGPVGAR；
[0179] SEQ ID NO.24：IGAPGIIGIPGSR；
[0180] SEQ ID N0.25：GLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR；
[0181] SEQ ID N0.26：VGPPGPSGNAGPPGPPGPVGK；
[0182] SEQ ID NO.27：SGQPGTVGPAGVR；
[0183] SEQ ID N0.28：GDGGPPGVTGFPGAAGR；
[0184] SEQ ID N0.29：GSPGGPGAAGFPGAR；
[0185] SEQ ID NO.30：EGSPGAEGSPGR；
[0186] SEQ ID NO.31：GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR；
[0187] SEQ ID N0.32：GEPGSTGPAGPPGIR；
[0188] SEQ ID N0.33：GPPGESGAAGPAGPIGSR；
[0189] SEQ ID NO.34：AGPPGPPGPVGK；
[0190] SEQ ID N0.35:TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK。
[0191] 上述35條多肽的質譜譜圖和m/z的數(shù)值如下：
[0192] 圖1是多肽06了36即6?16??6?1?在驢膠原中的色譜圖，其111/2為519.6。
[0193] 圖2是多肽GPPGESGAAGPAGPIGSR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為517.6。
[0194] 圖3是多肽PGEAGPPGPPGPAGEK在驢膠原中的色譜圖，其m/z為731.8。
[0195] 圖4是多肽GPPGPMGPPGIAGPPGESGR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為595.6。
[0196] 圖5是多肽GPNGEPGSTGPAGPPGIR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為825.9。
[0197] 圖6是多肽061'1^即6?16??6?1?在驢膠原中的色譜圖，其111/2為514.3。
[0198] 圖7是多肽GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER在驢膠原中的色譜圖，其m/z為 940.8〇
[0199] 圖8是多肽TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK在驢膠原中的色譜圖，其m/z為602.0。
[0200] 圖9是多肽PGPTGLEGPPGER在驢膠原中的色譜圖，其m/z為640.3。
[0201] 圖10是多肽6?六6?了6?￥61(在驢膠原中的色譜圖，其111/2為469.3。
[0202] 圖11是多肽6?36?六61(0冊在驢膠原中的色譜圖，其111/2為539.8。
[0203] 圖12是多肽61?6￥六65?^?6?16146??6六1?在驢膠原中的色譜圖，其111/2為715.7。
[0204] 圖13是多肽GEAGPAGPAGPIGPVGAR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為765.9。
[0205] 圖14是多肽61?6?464464了6六1?在驢膠原中的色譜圖，其111/2為620.3。
[0206] 圖15是多肽GPPGPVGPPGIAGPPGESGR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為893.0。
[0207] 圖16是多肽GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為1073.1。
[0208] 圖17是多肽GEPGPVGSVGPVGAVGPR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為802.9。
[0209] 圖18是多肽GPPGPVGPPGIAGPPGESGR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為601.0。
[0210] 圖l9是多肽GPAGPNGIPGEK在驢膠原中的色譜圖，其m/z為555.8。
[0211] 圖20是多肽GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為 914.4。
[0212] 圖21是多肽GEPGPTGLPGPPGER在驢膠原中的色譜圖，其m/z為733.3。
[0213] 圖22是多肽GETGPSGPAGPTGAR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為656.3。
[0214] 圖23是多肽5601^^46?46?46?16?￥6六1?在驢膠原中的色譜圖，其111/2為649.3。
[0215] 圖24是多肽《^?61161?631?在驢膠原中的色譜圖，其111/2為620.4。
[0216] 圖25是多肽GLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為 961.8。
[0217] 圖26是多肽￥6??6?56熟6??6??6?￥61(在驢膠原中的色譜圖，其111/2為614.6。 [0 218]圖27是多肽56〇?6^^^^^1?在驢膠原中的色譜圖，其111/2為591.8。
[0219] 圖28是多肽GDGGPPGVTGFPGAAGR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為751 · 4。
[0220] 圖29是多肽65?66?6446??6六1?在驢膠原中的色譜圖，其111/2為652.3。
[0221] 圖30是多肽EGSPGAEGSPGR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為566.7。
[0222] 圖31是多肽GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為868.9。
[0223] 圖32是多肽GEPGSTGPAGPPGIR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為691.3。
[0224] 圖33是多肽GPPGESGAAGPAGPIGSR在驢膠原中的色譜圖，其m/z為775.9。
[0225] 圖34是多肽AGPPGPPGPVGK在驢膠原中的色譜圖，其m/z為531.8。
[0226] 圖35是多肽了6??6?56156??6??64六61(在驢膠原中的色譜圖，其111/2為902.4。
[0227] 最后，用相同的方法處理并檢測牛膠原樣本，質譜檢測結果進行匹配，結果顯示， SEQ ID NO. 1~35所示的各條多肽樣本，在牛膠原中不存在。
[0228] 圖36是在牛膠原中檢測上述多肽SEQ ID NO. 1~35的色譜特征圖，可見譜圖中未 檢出SEQ ID NO. 1~35所述的色譜峰。
[0229] 實施例2,檢測不特定阿膠樣本，判斷是否含有驢膠原成分
[0230] 對某市公安局送檢的動物皮熬制的阿膠及其制品樣本及市售阿膠產(chǎn)品進行質譜 分析，確定是否含有驢膠原成分。
[0231]對待測樣品的處理和檢測方法同實施例1中的處理和檢測方法 [0232]步驟(一)樣本前處理步驟：
[0233] (1)將待測樣品均質成粉末狀態(tài)，稱取0.1的阿膠樣品或稱取2.Og阿膠制品，加入 1%順4110) 3溶液，超聲處理1〇-3〇1^11使樣品完全溶解，定容至5〇1^;
[0234] (2)溶液過 0·22μπι 濾膜；
[0235] (3)取IOyLTrypsin酶溶液（1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到IOOyL上述濾液中，37 °C酶解16-18小時，待上機檢測。
[0236] 步驟(二)上機檢測，
[0237] 采用AB SCIEXT「i|)leTOF?5600質譜檢測，
[0238] 流動相A: 0.1 %甲酸-乙腈，流動相B: 0.1 %甲酸-水，
[0239] 流速:0.25mL/min，
[0240] TOF掃描范圍：350-1500Da，
[0241 ]正離子反應模式，GSl: 35，GS2:45，Curtain Gas: 35，ISVF: 5500，TEM: 500，DP: 100， CE：10〇
[0242] 采用AB SCIEX三重四級桿質譜檢測，
[0243] 流動相A: 0.1 %甲酸-乙腈，流動相B: 0.1 %甲酸-水，
[0244] 流速：0.3mL/min，
[0245] 電噴霧離子源，正離子反應模式，檢測方式:MRM，噴霧電壓：5500V，離子傳輸管溫 度:475°C;鞘氣壓力:40;輔助氣壓力:6。
[0246] 檢測結果對比實施例1中的各條驢膠原特異性多肽的質譜譜圖，出現(xiàn)實施例1所述 質譜檢測譜圖時，即可判斷該組織樣本含有驢源性成分。
[0247] 經(jīng)檢測:某市公安局送檢的樣品中，
[0248] 樣品1為對照品東阿阿膠僅檢出驢源性成分，未檢出牛源性成分：
[0249] 選取實施例1中的兩條驢膠原多肽和已知兩條牛膠原特異性多肽作為參考，相同 的檢測條件下，樣品1中僅檢出選取的兩條驢膠原多肽的色譜峰(見圖37左上、右上），未見 牛膠原特異性多肽色譜峰(見圖37左下、右下）；
[0250] 樣品2既檢出驢源性成分也檢出牛源性成分：
[0251]選取實施例1中的兩條驢膠原多肽和已知兩條牛膠原特異性多肽作為參考，相同 的檢測條件下，樣品2中既檢出選取的兩條驢膠原多肽的色譜峰（見圖38左上、右上），也可 見牛膠原特異性多肽色譜峰(見圖38左下、右下）；
[0252] 樣品3為未檢出驢源性成分，僅檢出牛源性成分：
[0253] 選取實施例1中的兩條驢膠原多肽和已知兩條牛膠原特異性多肽作為參考，相同 的檢測條件下，樣品3中未檢出驢膠原多肽的色譜峰(見圖39左上、右上），檢出牛膠原特異 性多肽色譜峰(見圖39左下、右下）；
[0254]最后需要說明的是，以上實施例僅用作幫助本領域技術人員理解本發(fā)明的實質， 不用作的本發(fā)明保護范圍的限定。
【主權項】
1. 一組用于單獨或任意組合檢測阿膠及其制品中驢源性成分的多膚，所述的阿膠制品 包括但不限于阿膠糕、阿膠膏、阿膠漿、阿膠口服液、阿膠糖、阿膠補血顆粒，所述的多膚的 序列為： 膚段 1:沈Q ID N0.1:DGTSGHPGPIGPPGPR; 膚段2:沈Q ID N0.2:GPPGESGAAGPAGPIGSR; 膚段3:SEQ ID N0.3:PGEAGPPGPPGPAGEK; 膚段4:沈Q ID N0.4:GPPGPMGPPGIAGPPGESGR; 膚段5:沈Q ID N0.5:GPNGEPGSTGPAGPPGIR; 膚段6:沈Q ID N0.6:DGTLGHPGPIGPPGPR; 膚段7:沈Q ID N0.7:GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER; 膚段8:沈Q ID N0.8:TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK; 膚段9:沈Q ID N0.9:PGPTGLEGPPGER; 膚段 10:SEQ ID N0.10:GPAGPTGPVGK; 膚段11:SEQ ID N0.11:GPSGPAGKD皿； 膚段 12:沈Q ID N0.12:GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR; 膚段 13:SEQ ID N0.13:GEAGPAGPAGPIGPVGAR; 膚段 14:沈Q ID N0.14:GIPGPAGAAGATGAR; 膚段15:沈Q ID N0.15:GPPGPVGPPGIAGPPGESGR; 膚段 16:沈Q ID N0.16:GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR; 膚段17:沈Q ID N0.17:GEPGPVGSVGPVGAVGPR; 膚段18:沈Q ID N0.18:GPPGPVGPPGIAGPPGESGR; 膚段 19:SEQ ID N0.19:GPAGPNGIPGEK; 膚段20:沈Q ID N0.20:GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR; 膚段21:沈Q ID N0.21:GEPGPTCLPGPPGER; 膚段22:沈Q ID N0.22:GETGPSGPAGPTGAR; 膚段23:沈Q ID N0.23:SGDRGEAGPAGPAGPIGPVGAR; 膚段24:沈Q ID N0.24:IGAPGIIGIPGSR; 膚段25:沈Q ID N0.25:(iLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR; 膚段26:沈Q ID N0.26:VGPPGPSGNAGPPGPPGPVGK; 膚段27:沈Q ID N0.27:SGQPGTVGPAGVR; 膚段28:SEQ ID N0.28:GDGGPPGVTGFPGAAGR; 膚段29:SEQ ID N0.29:GSPGGPGAAGFPGAR; 膚段30:SEQ ID N0.30:EGSPGAEGSPGR; 膚段31:SEQ ID N0.31:GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR; 膚段32:沈Q ID N0.32:GEPGSTGPAGPPGIR; 膚段33:沈Q ID N0.33:GPPGESGAAGPAGPIGSR; 膚段：M:沈Q ID N0.34:AGPPGPPGPVGK; 膚段35:沈Q ID N0.35:TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK。2. 根據(jù)權利要求1所述多膚，其特征在于，所述多膚對應的m/z值及子離子分別為： 膚段 1:519.6; 膚段 2:517.6; 膚段 3:731.8; 膚段4:595.6; 膚段5:825.9; 膚段 6:514.3; 膚段7:940.8; 膚段8:602.0; 膚段9:640.3; 膚段 10:469.3; 膚段 11:539.8; 膚段 12:715.7; 膚段 13:765.9; 膚段 14:620.3; 膚段 15:893.0; 膚段 16:1073.1; 膚段 17:802.9; 膚段 18:601.0; 膚段 19:555.8; 膚段 20:914.4; 膚段21:733.3; 膚段22:656.3; 膚段23:649.3; 膚段24:620.4; 膚段25:961.8; 膚段 26:614.6; 膚段27:591.8; 膚段28:751.4; 膚段29:652.3; 膚段30:566.7; 膚段31:868.9; 膚段32:691.3; 膚段33:775.9; 膚段34:531.8; 膚段35:902.4。3. -種檢測阿膠及其制品中是否含有驢源性成分的檢測方法，所述方法包括如下步 驟： 步驟(1 )，對待測樣本進行質譜前處理，獲得待測多膚濾液： 步驟(2)，通過質譜法檢測步驟（1)獲得的多膚濾液，檢測待測樣本中是否含有權利要 求1或2所述膚段的質譜峰。4. 根據(jù)權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟（1)所述的對待測樣本進行質譜 前處理，獲得待測多膚濾液的步驟如下： (1) 將待測樣品均質成粉末狀態(tài)，稱取O.lg~〇.5g阿膠樣品或1.0~2.0g阿膠制品，加 入1 %畑祖0)3溶液，超聲處理10~30min使樣品完全溶解，定容至50血； (2) 溶液過0.22μπι濾膜； (3) 取10~20化化ypsin酶溶液（1μg/μL的化ypsin酶溶液)加入到上述10化L~20化L濾 液中，37°C酶解16-18小時，待上機檢測。5. 根據(jù)權利要求3或4所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)通過質譜法檢驗步驟（1) 獲得的多膚濾液的方法是下述方法A或方法B: 方法A:采用AB SCIEXT「ipleTOF?5600質譜檢測多膚濾液中是否含有權利要求1或2所述 的膚段的質譜峰， 上機參數(shù)為： 流動相A: 0.05~0.2 %甲酸-乙臘溶液，流動相B: 0.05~0.2 %甲酸-水， 流速:0.1 ~0.5mL/min， T0F掃描范圍：100-3000Da， 正離子反應模式，GS1:35，GS2:45，Curtain Gas: 35，ISVF: 5500，TEM: 500，DP: 100，CE: 10; 方法B:采用AB SCIEXS重四級桿質譜檢測多膚濾液中是否含有權利要求1或2所述的 膚段的質譜峰， 上機參數(shù)為： 流動相A: 0.05~0.2 %甲酸-乙臘，流動相B: 0.05~0.2 %甲酸-水， 流速:0.1 ~0.5mL/min， 電噴霧離子源，正離子反應模式，檢測方式:MRM，噴霧電壓：5500V，離子傳輸管溫度： 475 °C ;銷氣壓力:40;輔助氣壓力:6。6. 使用權利要求1所述的各個多膚或其任意組合W檢測目標阿膠及其制品樣本中是否 含有驢源性成分的方法，所述方法包括:質譜法、高效液相色譜法、核磁共振法等。7. 權利要求1所述的各個多膚或其任意組合在檢測目標阿膠及其制品樣本中是否含有 驢源性成分中的應用，所述的阿膠制品包括但不限于阿膠糕、阿膠膏、阿膠漿、阿膠口服液、 阿膠糖、阿膠補血顆粒。
【文檔編號】G01N30/88GK105842375SQ201610186229
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月29日
【發(fā)明人】張鴻偉, 張曉梅, 梁成珠, 鮑蕾, 徐彪
【申請人】山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心