一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，屬于分析化學技術領域。本發(fā)明采用脫脂棉收集唾液樣品、經離心和固相萃取后，采用氣相色譜?質譜聯(lián)用法測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質。其步驟包括：a.用脫脂棉采集唾液樣品，采集完后脫脂棉置于注射器針筒中，利用注射器推桿推移擠壓得到唾液樣品，經高速離心后取上清液；b.唾液樣品加入內標物，依次經固相萃取柱富集、溶劑洗脫；c.洗脫液濃縮后復溶，過微孔濾膜，然后采用氣相色譜?質譜聯(lián)用法測定，制作標準曲線，內標法定量。本發(fā)明方法可以有效的用于測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質，方法可行，檢出限低，精密度好，準確可靠，具有推廣應用價值。
【專利說明】
一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學技術領域，具體涉及一種專用于分離測定唾液中吡嗪類和吡 啶類物質的方法。
【背景技術】
[0002] 吡嗪類和吡啶類物質是食品、煙草等中的重要香味成分。飲食過程中食品中香味 成分被口腔唾液選擇性溶解吸收，那些被吸收的成分才是刺激人體產生感官感受的物質， 決定了食品的風格和風味。目前對食品香味的評價通常以口、鼻、舌、喉等的感知來評價，但 很難排除人為主觀性以及由此所產生的不確定性。研究測定唾液中吸收溶解的風味成分， 則能直接、客觀的得到決定食品風味的化學成分數(shù)據。進行飲食者唾液中吡嗪類、吡啶類香 吃味成分的分析，可為食品、煙草等的香吃味評定提供數(shù)據支持，為改善食品風味提供理論 依據。
[0003] 目前，關于香精香料、食品、白酒、煙氣等樣品中吡嗪類和吡啶類物質的測定已有 大量的報道，然而唾液樣品中吡嗪類和吡啶類物質的測定還未見報道。唾液樣品基體復雜， 主要成分是水（占99%)，但含有多種有機物如黏蛋白、黏多糖、唾液淀粉酶、溶菌酶、免疫球 蛋白、血型物質、尿素、尿酸和游離氨基酸等，以及無機物和一些氣體分子，被分析成分在唾 液中含量極低，還會受到唾液中多種有機成分和無機成分的干擾。因此，開發(fā)簡單快速、高 選擇性、高靈敏度、定量準確的唾液中吡嗪類和吡啶類物質的提取和分離測定方法非常迫 切。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于針對目前唾液中吡嗪類和吡啶類物質分離測定的方法未見文 獻報道的現(xiàn)狀，以及現(xiàn)有技術的不足，提供一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方 法，該方法可行，精密度好，檢出限低，準確可靠，具有推廣應用價值。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案如下： 一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，包括以下步驟： 步驟（1)，樣品采集:將脫脂棉置于口腔內，放置0.2-5 min后，取出吸收了唾液的脫脂 棉，置于注射器針筒中，利用注射器推桿推移擠壓，擠出液收集于離心管中，經高速離心后 收集上清液得到唾液樣品； 步驟(2)，萃取:移取唾液樣品，向唾液中加入適量內標物吡啶-D5，其加入量為使最終 樣品復溶溶液中內標物濃度為〇. 5-5 mg/L(最終樣品復溶溶液即為步驟(3 )用甲醇復溶后 得到的溶液），然后轉移至固相萃取柱，吡嗪類和吡啶類物質經固相萃取柱吸附，再經溶劑 洗脫，最后收集洗脫液； 其中，固相萃取柱為硅膠固相萃取柱、氨基固相萃取柱或HLB固相萃取柱;洗脫時采用 二氯甲烷對含有內標物的唾液樣品進行洗脫； 步驟（3)，測定:將步驟(2)收集到的洗脫液，經濃縮至近干后，用1-2 mL甲醇復溶，過 0.22 Ml微孔濾膜，濾液采用氣相色譜-質譜聯(lián)用法分析，內標法定量，根據標準曲線計算目 標物含量； 所述的濃縮溫度為30-40°C; 氣相色譜條件如下： 色譜柱為長度X內徑X膜厚為30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INNOWAX石英毛細管柱或 相當者;載氣氦氣，純度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;進樣口溫度:250°C;分流 進樣或不分流進樣，分流進樣時分流比1-30;進樣量：1-2 yL;程序升溫:初始溫度50 °C，保 持1 min，然后以5°C/min升溫到130°C，再以20 °C /min升溫到230°C，保持10 min; 質譜條件如下：電離方式為電子轟擊源，色譜質譜接口溫度為250°C，離子源溫度為 180-250°C，電離能量為70 eV，溶劑延遲:4.0 min，選擇離子監(jiān)測模式，離子選擇參數(shù)見表 1〇
[0006] 表1吡嗪類和吡啶類的定量和輔助定性離子
進一步，優(yōu)選的是步驟(1)中的脫脂棉的質量為0.2-2.0 g。
[0007] 進一步，優(yōu)選的是步驟（1)中唾液離心轉速不低于10000 rpm，離心時間不少于10 min〇
[0008] 進一步，優(yōu)選的是步驟(2)中唾液移取量為0.5-10 mL。
[0009] 進一步，優(yōu)選的是步驟(2)中固相萃取柱填料為200-1000 mg;使用前采用5-10 mL 二氯甲燒、5-10 mL甲醇和5-15 mL去離子水依次預淋洗。
[0010] 進一步，優(yōu)選的是步驟(2)中樣品轉移至固相萃取柱時，控制流速不大于0.5滴/s; 洗脫時，加入5-10 mL二氯甲烷洗脫，控制洗脫流速不大于5 mL/min。
[0011] 進一步，優(yōu)選的是步驟(3)中收集到的洗脫液在30-40°C水浴中減壓蒸發(fā)濃縮至近 干，用1.0-2.0 mL甲醇復溶。減壓蒸發(fā)時，壓力沒有具體限制。
[0012] 進一步，優(yōu)選的是步驟(3)中標準曲線繪制方法如下:配制吡嗪類和吡啶類物質系 列標準溶液，濃度為:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，系 列標準溶液中加入內標物吡啶-D5,內標物濃度與樣品復溶溶液中內標物濃度相同，內標物 濃度為0.5-5 mg/L，對系列標準溶液進行氣相色譜-質譜聯(lián)用儀分析，得到標準溶液的總離 子流色譜圖（如圖1所示），根據各物質定量離子峰面積與內標物定量離子峰面積的比值為 縱坐標，以各物質濃度與內標物濃度比值為橫坐標，作各測定物質的標準曲線。
[0013]進一步，優(yōu)選的是所述的吡嗪類物質為2-甲基吡嗪、2,5_二甲基吡嗪、2,6_二甲基 吡嗪、2，3-二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶類物質為吡啶、2-丙基吡啶、 3-乙基吡啶、5-乙基-2-甲基吡啶。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，其有益效果為:本發(fā)明方法可以有效的用于測定唾液中 吡嗪類和吡啶類物質，方法可行，前處理簡單，操作簡便，檢測限低，精密度好，準確可靠，具 有推廣應用價值。
[0015] 以上說明為本發(fā)明技術方案的概述，為了更清楚的了解本發(fā)明的技術手段，而可 依照說明書的內容予以實施，并且為了讓本發(fā)明的上述和其它目的、特征和優(yōu)點能夠更明 顯易懂，現(xiàn)特舉較佳實施例，并配合附圖，詳細說明如下。
【附圖說明】
[0016] 圖1是本發(fā)明吡嗪類和吡啶類物質混合標準溶液(2.0 mg/L)的總離子流色譜圖； 圖2為煙草吸食者唾液樣品的總離子流圖； 圖3為白酒飲用者唾液樣品的總離子流圖。
[0017] 圖中各峰的含義如下：1，6.47 min，吡啶；2,8.32 min，2-甲基吡嗪；3,9.60 min， 2,5-二甲基吡嗪;4,9.75 1^11，2,6-二甲基吡嗪；5，10.18 111111，2,3-二甲基吡嗪；6，10.63 min，2_丙基吡啶；7，10.99 min，3_乙基吡啶；8，11.53 min，三甲基吡嗪；9，11.74 min，5_乙 基-2_甲基[1比啶；10，13.20111；[11，四甲基[1比嗪；13,6.54 111；[11，[1比啶-05。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細描述，但其并不限制本發(fā)明。
[0019] 本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限定本發(fā) 明的范圍。實施例中未注明具體技術或條件者，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件 或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過購買獲得的 常規(guī)廣品。
[0020] 實施例1 一種分離測定煙草吸食者唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，包括以下步驟： 步驟(1)，樣品采集:將0.2 g脫脂棉置于煙草吸食者口腔內，放置0.3 min后取出，置于 注射器針筒中，利用注射器推桿推移擠壓，擠出液收集于離心管中，于10000 rpm轉速下離 心時間10 min得到唾液樣品。
[0021 ]步驟(2)，萃取:移取2.0 mL唾液樣品于離心管中，加入內標吡啶-D5至內標物濃度 為2.0 mg/L;過填料為300 mg的硅膠固相萃取柱，首先加入6 mL二氯甲燒、6 mL甲醇和10 mL去離子水依次預淋洗;樣品轉移至至經過預淋洗的固相萃取柱，控制流速為0.5滴/s，加 入6 mL二氯甲烷洗脫，洗脫速度為3 mL/min，收集洗脫液。
[0022]步驟（3)，測定：將步驟（2)收集到的洗脫液在35°C水浴中，用減壓蒸發(fā)濃縮至近 干，用1.0 mL甲醇復溶，過0.22 wii濾膜后進樣分析，濾液采用氣相色譜-質譜聯(lián)用法分析， 得到的樣品的總離子流色譜圖如圖2所示，根據標準曲線計算吡嗪類和吡啶類物質的含量。 [0023] 氣相色譜條件如下：色譜柱為長度X內徑X膜厚為30 mX 0.25 mm X 0.25 wii， INN0WAX石英毛細管柱或相當者;載氣氦氣，純度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min; 進樣口溫度：250°C ;分流進樣，分流進樣時分流比15;進樣量：1 yL;程序升溫:初始溫度50 °C，保持1 min，然后以5°C/min升溫到130°C，再以20 °C /min升溫到230°C，保持10 min。 [0024]質譜條件如下：電離方式為電子轟擊源(El)，色譜質譜接口溫度為250°C，離子源 溫度為230°C，電離能量為70 eV，溶劑延遲:4.0 min，選擇離子監(jiān)測模式。
[0025]表2是本方法分析煙草吸食者唾液中吡嗪類和吡啶類物質的試驗數(shù)據。表2給出了 本分析方法的線性相關系數(shù)、精密度(RSD)、檢出限、定量限和回收率相關參數(shù)，表明該方法 結果可靠，精密度好。采用固相萃取柱凈化，操作簡便，能有效去除干擾物質，基質干擾顯著 降低，從而獲得較低的檢出限和定量限;通過濃縮提高了目標物的濃度，進一步降低了檢出 限；用甲醇復溶后，實現(xiàn)了溶劑交換，樣品可進入極性色譜柱分析，不僅保護了色譜柱，還提 高了樣品分析的穩(wěn)定性。因此該方法適合于煙草吸食者唾液中吡嗪類和吡啶類物質的分析 檢測。
[0026]表2線性相關系數(shù)、精密度(RSD)、檢出限、定量限和回收率
n表示實驗重復次數(shù)。
[0027] 實施例2 一種分離測定白酒飲用者唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，包括以下步驟： 步驟(1)，樣品采集:將1.5 g脫脂棉置于煙草吸食者口腔內，放置4.0 min后取出，置于 注射器針筒中，利用注射器推桿推移擠壓，擠出液收集于離心管中，于15000 rpm轉速下離 心時間12 min得到唾液樣品。
[0028] 步驟(2)，萃取:移取10.0 mL唾液樣品于離心管中，加入內標吡啶-D5至內標物濃 度為1.0 mg/L;過填料為600 mg的HLB固相萃取柱，首先加入10 mL二氯甲烷、10 mL甲醇 和12 mL去離子水依次預淋洗;樣品轉移至經過預淋洗的固相萃取柱，控制流速為0.25滴/ s，加入10 mL二氯甲燒洗脫，控制流速為4 mL/min，收集洗脫液。
[0029]步驟（3)，測定：將步驟（2)收集到的洗脫液在30°C水浴中，用減壓蒸發(fā)濃縮至近 干，用2.0 mL甲醇復溶，過0.22 wii濾膜后進樣分析，濾液采用氣相色譜-質譜聯(lián)用法分析， 得到的樣品的總離子流色譜圖如圖3所示，根據標準曲線計算吡嗪類和吡啶類物質的含量。 氣相色譜條件如下：色譜柱為長度X內徑X膜厚為30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INNOWAX石 英毛細管柱或相當者;載氣氦氣，純度多99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;進樣口溫 度：250 °C;不分流進樣;進樣量:2 yL;程序升溫:初始溫度50 °C，保持1 min，然后以5 °C/ min升溫到130°C，再以20 °C /min升溫到230°C，保持10 min。
[0030] 質譜條件如下：電離方式為電子轟擊源(El)，色譜質譜接口溫度為250°C，離子源 溫度為190°C，電離能量為70 eV，溶劑延遲:4.0 min，選擇離子監(jiān)測模式。
[0031] 表3是本方法分析白酒飲用者唾液中吡嗪類和吡啶類物質的試驗數(shù)據。表3給出了 本分析方法的線性相關系數(shù)、精密度(RSD)、檢出限、定量限和回收率相關參數(shù)，表明該方法 結果可靠，精密度好，采用固相萃取柱凈化，操作簡便，能有效去除基質對測定的干擾，從而 獲得較低的檢出限和定量限;通過濃縮提高了目標物的濃度，進一步降低了檢出限；用甲醇 復溶后，實現(xiàn)了溶劑交換，不僅保護了色譜柱，還提高了樣品分析的穩(wěn)定性。因此該方法適 合于煙草吸食者唾液中吡嗪類和吡啶類物質的分析檢測。
[0032]表3線性相關系數(shù)、精密度(RSD)、檢出限、定量限和回收率
n表示實驗重復次數(shù)。
[0033] 實施例3 一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，包括以下步驟： 步驟（1)，樣品采集:將0.2 g脫脂棉置于口腔內，放置0.2min后，取出吸收了唾液的脫 脂棉，置于注射器針筒中，利用注射器推桿推移擠壓，擠出液收集于離心管中，經高速離心 后收集上清液得到唾液樣品;所述的離心轉速不低于10000 rpm，離心時間不少于10 min; 步驟(2)，萃取:移取0.5 mL唾液樣品，向唾液中加入內標物吡啶-D5至內標物濃度為 lmg/L，然后轉移至經過預淋洗的填料為200mg的固相萃取柱，控制流速不大于0.5滴/s，吡 嗪類和吡啶類物質經固相萃取柱吸附，再經5mL二氯甲烷洗脫，控制洗脫流速不大于5 mL/ min，最后收集洗脫液； 轉移前固相萃取柱采用5mL二氯甲烷、5mL甲醇和5mL去離子水依次預淋洗。
[0034] 其中，固相萃取柱為硅膠固相萃取柱； 步驟(3)，測定:將步驟(2)收集到的洗脫液在35°C水浴中減壓蒸發(fā)濃縮至近干，用1.0 mL甲醇復溶，過0.22 wii微孔濾膜，濾液采用氣相色譜-質譜聯(lián)用法分析，內標法定量，根據 標準曲線計算目標物含量； 氣相色譜條件如下： 色譜柱為長度X內徑X膜厚為30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INNOWAX石英毛細管柱或 相當者;載氣氦氣，純度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;進樣口溫度:250°C;分流 進樣，分流進樣時分流比1;進樣量：1 yL;程序升溫：初始溫度50 °C，保持1 min，然后以5 °C/min升溫到 130°C，再以20 °C /min 升溫到230°C，保持 10 min; 質譜條件如下：電離方式為電子轟擊源，色譜質譜接口溫度為250°C，離子源溫度為180 °C，電離能量為70 eV，溶劑延遲:4.0 min，選擇離子監(jiān)測模式，離子選擇參數(shù)見表1。
[0035]步驟(3)中標準曲線繪制方法如下:配制吡嗪類和吡啶類物質系列標準溶液，濃度 為:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，并加入加入內標物 吡啶-D5至內標物濃度為0.5 mg/L，對系列標準溶液進行氣相色譜-質譜聯(lián)用儀分析，得到 標準溶液的總離子流色譜圖（如圖1所示），根據各物質定量離子峰面積與內標物定量離子 峰面積的比值為縱坐標，以各物質濃度與內標物濃度比值為橫坐標，作各測定物質的標準 曲線。
[0036] 所述的吡嗪類物質為2-甲基吡嗪、2,5_二甲基吡嗪、2,6_二甲基吡嗪、2,3_二甲基 吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶類物質為吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙 基_2_甲基P比啶。
[0037] 實施例4 一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，包括以下步驟： 步驟(1)，樣品采集:將2.0 g脫脂棉置于口腔內，放置5 min后，取出吸收了唾液的脫脂 棉，置于注射器針筒中，利用注射器推桿推移擠壓，擠出液收集于離心管中，經高速離心后 收集上清液得到唾液樣品;所述的離心轉速不低于10000 rpm，離心時間不少于10 min; 步驟（2)，萃取:移取10 mL唾液樣品，向唾液中加入內標物吡啶-D5至內標物濃度為 0.75 mg/L，然后轉移至經過預淋洗的填料為-1000 mg的固相萃取柱，控制流速不大于0.5 滴/s，吡嗪類和吡啶類物質經固相萃取柱吸附，再經10 mL二氯甲烷洗脫，控制洗脫流速不 大于5 mL/min，最后收集洗脫液； 轉移前固相萃取柱采用10 mL二氯甲烷、10 mL甲醇和15 mL去離子水依次預淋洗。
[0038] 其中，固相萃取柱為氨基固相萃取柱； 步驟(3)，測定:將步驟(2)收集到的洗脫液在35°C水浴中減壓蒸發(fā)濃縮至近干，用1.5 mL甲醇復溶，過0.22 wii微孔濾膜，濾液采用氣相色譜-質譜聯(lián)用法分析，內標法定量，根據 標準曲線計算目標物含量； 氣相色譜條件如下： 色譜柱為長度X內徑X膜厚為30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INN0WAX石英毛細管柱或 相當者;載氣氦氣，純度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;進樣口溫度:250°C;分流 進樣，分流進樣時分流比30;進樣量：2 yL;程序升溫:初始溫度50°C，保持1 min，然后以5 °C/min升溫到 130°C，再以20 °C /min 升溫到230°C，保持 10 min; 質譜條件如下：電離方式為電子轟擊源，色譜質譜接口溫度為250°C，離子源溫度為250 °C，電離能量為70 eV，溶劑延遲:4.0 min，選擇離子監(jiān)測模式，離子選擇參數(shù)見表1。
[0039] 步驟(3)中標準曲線繪制方法如下:配制吡嗪類和吡啶類物質系列標準溶液，濃度 為:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，并加入加入內標物 吡啶-D5至內標物濃度為5 mg/L，對系列標準溶液進行氣相色譜-質譜聯(lián)用儀分析，得到標 準溶液的總離子流色譜圖（如圖1所示），根據各物質定量離子峰面積與內標物定量離子峰 面積的比值為縱坐標，以各物質濃度與內標物濃度比值為橫坐標，作各測定物質的標準曲 線。
[0040] 所述的吡嗪類物質為2-甲基吡嗪、2,5_二甲基吡嗪、2,6_二甲基吡嗪、2,3_二甲基 吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶類物質為吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙 基_2_甲基P比啶。
[0041 ] 實施例5 一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，包括以下步驟： 步驟(1)，樣品采集:將1 g脫脂棉置于口腔內，放置3min后，取出吸收了唾液的脫脂棉， 置于注射器針筒中，利用注射器推桿推移擠壓，擠出液收集于離心管中，經高速離心后收集 上清液得到唾液樣品;所述的離心轉速不低于10000 rpm，離心時間不少于10 min; 步驟(2)，萃取:移取6 mL唾液樣品，向唾液中加入內標物吡啶-D5至內標物濃度為0.5 mg/L，然后轉移至經過預淋洗的填料為700 mg的固相萃取柱，控制流速不大于0.5滴/s，吡 嗪類和吡啶類物質經固相萃取柱吸附，再經8mL二氯甲烷洗脫，控制洗脫流速不大于5 mL/ min，最后收集洗脫液； 轉移前固相萃取柱采用7mL二氯甲烷、8mL甲醇和10 mL去離子水依次預淋洗。
[0042]其中，固相萃取柱為HLB固相萃取柱； 步驟(3)，測定:將步驟(2)收集到的洗脫液在40°C水浴中減壓蒸發(fā)濃縮至近干，用1.0 mL甲醇復溶，過0.22 wii微孔濾膜，濾液采用氣相色譜-質譜聯(lián)用法分析，內標法定量，根據 標準曲線計算目標物含量； 氣相色譜條件如下： 色譜柱為長度X內徑X膜厚為30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INN0WAX石英毛細管柱或 相當者;載氣氦氣，純度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;進樣口溫度:250°C;分流 進樣，分流進樣時分流比15;進樣量：1.5 yL;程序升溫:初始溫度50°C，保持1 min，然后以 5°C/min升溫到 130°C，再以20 °C /min 升溫到230°C，保持 10 min; 質譜條件如下：電離方式為電子轟擊源，色譜質譜接口溫度為250°C，離子源溫度為220 °C，電離能量為70 eV，溶劑延遲:4.0 min，選擇離子監(jiān)測模式，離子選擇參數(shù)見表1。
[0043] 步驟(3)中標準曲線繪制方法如下:配制吡嗪類和吡啶類物質系列標準溶液，濃度 為:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，并加入加入內標物 吡啶-D5至內標物濃度為3 mg/L，對系列標準溶液進行氣相色譜-質譜聯(lián)用儀分析，得到標 準溶液的總離子流色譜圖（如圖1所示），根據各物質定量離子峰面積與內標物定量離子峰 面積的比值為縱坐標，以各物質濃度與內標物濃度比值為橫坐標，作各測定物質的標準曲 線。
[0044] 所述的吡嗪類物質為2-甲基吡嗪、2,5_二甲基吡嗪、2,6_二甲基吡嗪、2,3_二甲基 吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶類物質為吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙 基_2_甲基P比啶。
[0045]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術 人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本 發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變 化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其 等效物界定。
【主權項】
1. 一種分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟（1)，樣品采集:將脫脂棉置于口腔內，放置0.2-5 min后，取出吸收了唾液的脫脂 棉，置于注射器針筒中，利用注射器推桿推移擠壓，擠出液收集于離心管中，經高速離心后 收集上清液得到唾液樣品； 步驟(2)，萃取:移取唾液樣品，向唾液中加入內標物P比啶-D5,內標物加入量為使最終 樣品復溶溶液中內標物濃度為0.5-5 mg/L，然后轉移至固相萃取柱，吡嗪類和吡啶類物質 經固相萃取柱吸附，再經溶劑洗脫，最后收集洗脫液； 其中，固相萃取柱為硅膠固相萃取柱、氨基固相萃取柱或HLB固相萃取柱;洗脫時采用 二氯甲烷對含有內標物的唾液樣品進行洗脫； 步驟（3)，測定：將步驟（2)收集到的洗脫液，經濃縮至近干后，用1-2 mL甲醇復溶，過 0.22 μπι微孔濾膜，濾液采用氣相色譜-質譜聯(lián)用法分析，內標法定量，根據標準曲線計算目 標物含量； 所述的濃縮溫度為30-40Γ; 氣相色譜條件如下： 色譜柱為長度X內徑X膜厚為30 m X 0.25 mm X 0.25 μπι，INNOWAX石英毛細管柱或 相當者;載氣氦氣，純度彡99.999%，恒流模式，流量1.0 mL/min;進樣口溫度:250°C ;分流進 樣或不分流進樣，分流進樣時分流比1-30;進樣量：1-2 yL;程序升溫:初始溫度50°C，保持 I min，然后以5°C/min升溫到130°C，再以20 °C /min升溫到230°C，保持10 min; 質譜條件如下：電離方式為電子轟擊源，色譜質譜接口溫度為250°C，離子源溫度為 180-250°C，電離能量為70 eV，溶劑延遲:4.0 min，選擇離子監(jiān)測模式。2. 根據權利要求1所述的分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于:步 驟(1)中的脫脂棉的質量為0.2-2.0 g。3. 根據權利要求1所述的分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于:步 驟(1)中唾液離心轉速不低于10000 rpm，離心時間不少于10 min。4. 根據權利要求1所述的分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于:步 驟(2)中唾液移取量為0.5-10 mL。5. 根據權利要求4所述的分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于:步 驟(2)中固相萃取柱填料為200-1000 mg;使用前采用5-10 mL二氯甲烷、5-10 mL甲醇和 5-15 mL去離子水依次預淋洗。6. 根據權利要求5所述的分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于:步 驟(2)中樣品轉移至固相萃取柱時，控制流速不大于0.5滴/s;洗脫時，加入5-10 mL二氯甲 烷洗脫，控制洗脫流速不大于5 mL/min。7. 根據權利要求6所述的分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于:步 驟(3)中收集到的洗脫液在30-40°C水浴中減壓蒸發(fā)濃縮至近干，用1.0-2.0 mL甲醇復溶。8. 根據權利要求1所述的分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于:步 驟（3 )中標準曲線繪制方法如下：配制吡嗪類和吡啶類物質系列標準溶液，濃度為：0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，系列標準溶液加入內標物[!比 啶-D5，內標物濃度與樣品復溶溶液中內標濃度相同，內標物濃度為0.5-5 mg/L，對系列標 準溶液進行氣相色譜-質譜聯(lián)用儀分析，根據各物質定量離子峰面積與內標物定量離子峰 面積的比值為縱坐標，以各物質濃度與內標物濃度比值為橫坐標，作各測定物質的標準曲 線。9.根據權利要求1所述的分離測定唾液中吡嗪類和吡啶類物質的方法，其特征在于:所 述的吡嗪類物質為2-甲基吡嗪、2，5-二甲基吡嗪、2，6-二甲基吡嗪、2，3-二甲基吡嗪、三甲 基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶類物質為吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙基-2-甲基 吡啶。
【文檔編號】G01N30/02GK105929082SQ201610555349
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年7月14日
【發(fā)明人】司曉喜, 劉志華, 朱瑞芝, 張鳳梅, 石倩倩, 劉春波, 申欽鵬, 王昆淼, 何沛, 蘇鐘璧
【申請人】云南中煙工業(yè)有限責任公司