多肽/核苷酸合成用固相載體材料可控孔徑活性樹脂的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制藥固相載體材料技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種多肽/核苷酸合成用固 相載體材料可控孔徑活性樹脂的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著全新化學(xué)結(jié)構(gòu)新藥開發(fā)難度加大，投入費(fèi)用逐年增高，多肽類藥物的開發(fā)逐 漸成為醫(yī)藥領(lǐng)域的新熱點(diǎn)。小分子多肽類及核苷酸類藥物嚴(yán)格講是指以小分子多肽激素和 堿基為原料制備生產(chǎn)的藥物的統(tǒng)稱，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有生物活性的多肽數(shù)千個(gè)，成熟的產(chǎn)品多達(dá) 近百個(gè)，已經(jīng)在歐美國家普遍廣泛應(yīng)用多年，是21世紀(jì)制藥行業(yè)發(fā)展和激烈競爭的領(lǐng)域。
[0003] 多肽類藥物合成技術(shù)復(fù)雜，純化過程繁瑣，原材料、載體和工藝要求苛刻，導(dǎo)致多 肽類產(chǎn)品價(jià)格高昂，開發(fā)速度緩慢。雖然多肽和核苷酸被發(fā)現(xiàn)至今已經(jīng)有1〇〇多年，但是其 真正的飛速發(fā)展發(fā)生在最近的二三十年。隨著分子生物學(xué)和生物化學(xué)等生命科學(xué)研究的革 命性進(jìn)展，尤其是利用固相合成法合成多肽和核苷酸技術(shù)的出現(xiàn)，使得人工合成多肽和核 苷酸的質(zhì)量和產(chǎn)量得到明顯的改善。
[0004] 隨著市場對多肽類和核苷酸類藥物需求的急劇增長，制藥行業(yè)對生產(chǎn)過程中所必 需的多孔固相載體也產(chǎn)生了巨大的需求。開發(fā)出具有不同尺寸、形狀規(guī)整、官能團(tuán)多樣化、 以及官能度高的多孔固相載體對于多肽和核苷酸生產(chǎn)至關(guān)重要，直接關(guān)系到最終產(chǎn)品的分 子量分布和產(chǎn)率，進(jìn)一步?jīng)Q定藥物的純度和產(chǎn)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種多肽/核苷酸合成用固相載體材料可控孔徑活性樹 脂的制備方法，以解決上述【背景技術(shù)】中提出的問題。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案： 一種多肽/核苷酸合成用固相載體材料可控孔徑活性樹脂的制備方法，具體操作步驟 如下： (1)在裝有機(jī)械攪拌，冷凝管和導(dǎo)氣管的三口瓶中分別加入分散劑〇.3g聚乙烯，聚乙 烯吡咯烷酮蒸餾水，開動攪拌并通入氮?dú)?0min， (2) 將苯乙烯St、二乙烯基苯DVB、過氧化二苯甲酰BPO和正庚烷混合均勻后加入到步 驟（1)所述的體系中，所述的苯乙烯St和二乙烯基苯DVB均經(jīng)過一段中性氧化鋁柱子除去 阻聚劑 (3) 保持氮?dú)夥諊?，攪拌速度調(diào)至300-400rpm預(yù)處理15min后，升溫至70°C，反應(yīng)24h。
[0007] (4)反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液過濾，得到的微球用70°C熱水反復(fù)洗滌至濾液澄清，用丙 酮索氏抽提24h后50°C真空干燥。
[0008] 作為優(yōu)選的，在裝有機(jī)械攪拌，冷凝管和導(dǎo)氣管的三口瓶中分別加入分散劑0.3g聚乙烯醇PVAO. Olg聚乙烯吡咯烷酮PVP和100mL蒸餾水，開動攪拌并通入氮?dú)?0min，將 5g苯乙烯St、5g二乙烯基苯DVB，苯乙烯St和二乙烯基苯DVB均經(jīng)過一段中性氧化鋁柱子 除去阻聚劑)、〇. 05g過氧化二苯甲酰BPO和7g正庚烷混合均勻后加入到上述體系中，保持 氮?dú)夥諊?，攪拌速度調(diào)至400rpm預(yù)處理15min后升溫至70°C，反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后將反 應(yīng)液過濾，得到的微球用70°C熱水反復(fù)洗滌至濾液澄清，用丙酮索氏抽提24h后50°C真空 干燥。
[0009] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明制備方法操作簡單方便，制成的多 肽/核苷酸合成用固相載體材料活性樹脂具有孔徑可控的優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說明】
[0010] 圖1為聚集的聚苯乙烯微球（40倍率）圖 圖2破碎的聚苯乙烯微球（20倍率）圖。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述， 顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的 實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都 屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0012] 實(shí)施例1 在裝有機(jī)械攪拌，冷凝管和導(dǎo)氣管的三口瓶中分別加入分散劑〇.3g聚乙烯醇 PVAO. Olg聚乙烯吡咯烷酮PVP和100mL蒸餾水，開動攪拌并通入氮?dú)?0min，將5g苯乙烯 St、5g二乙烯基苯DVB(St和DVB均經(jīng)過一段中性氧化鋁柱子除去阻聚劑)、0. 05gBP0過氧化 二苯甲酰和7g正庚烷混合均勻后加入到上述體系中，保持氮?dú)夥諊?，攪拌速度調(diào)至400rpm 預(yù)處理15min后升溫至70°C，反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液過濾，得到的微球用70°C熱水 反復(fù)洗滌至濾液澄清，用丙酮索氏抽提24h后50°C真空干燥。
[0013] 實(shí)施例2 保持其它各組分不變(如表1所示)，改變PVA的投入量，從0.1 g開始，隨著PVA的投入 量增加至0. 35g，微球的粒徑從220 y m減小至180 y m。然而PVA的投入量并不是無限增大 或降低的，當(dāng)PVA的投入量低于0.1 g時(shí)，得到的將會是聚集在一起的微球，如圖1中所示， 因?yàn)楫?dāng)PVA投入量過少時(shí)，液滴碰撞幾率增大，同時(shí)液滴表面張力增大，趨向于聚集，所以 得到聚集狀的微球。反之當(dāng)PVA的投入量大于0. 35g時(shí)，液滴表面張力過低且碰撞幾率減 少，在攪拌的作用下微球發(fā)生破碎(如圖2所示)。
[0014] 表1分散劑PVA用量和微球粒徑的關(guān)系 實(shí)施例3
保持各組分不變，攪拌速度從300rpm增至400rpm時(shí)，微球的粒徑從222 ym下降至 ISOiim (如表2所示)。當(dāng)攪拌速度增加時(shí)，液滴受到的剪切力增大，表面張力不足以維持 原狀態(tài)的液滴，較大的液滴就會裂分為小液滴。液滴裂分后導(dǎo)致液滴總數(shù)增多，單位面積分 散劑濃度降低，表面張力提高。當(dāng)表面張力提高到能維持液滴在高剪切力作用下的狀態(tài)時(shí) 便保持恒定。再提高攪拌速度，液滴就繼續(xù)裂分，所以微球的平均粒徑隨著攪拌速度的增加 而減小。如果攪拌速度過低，液滴碰撞幾率提高，將會發(fā)生聚集(如表2實(shí)驗(yàn)1);如果攪拌 速度過高，液滴將在高剪切作用力下發(fā)生破碎(如表2實(shí)驗(yàn)5)。所以攪拌速度必須控制在一 定范圍內(nèi)才能調(diào)節(jié)微球的粒徑。
[0015]表2.轉(zhuǎn)速和微球粒徑的關(guān)系
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背 離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪 一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要 求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化 囊括在本發(fā)明內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種多肽/核苷酸合成用固相載體材料可控孔徑活性樹脂的制備方法，其特征在 于，具體操作步驟如下： (1) 在裝有機(jī)械攪拌，冷凝管和導(dǎo)氣管的三口瓶中分別加入分散劑聚乙烯醇PVA，聚乙 烯吡咯烷酮PVP蒸餾水，開動攪拌并通入氮?dú)?0min， (2) 將苯乙烯St、二乙烯基苯DVB、過氧化二苯甲酰BPO和正庚烷混合均勻后加入到步 驟（1)所述的體系中，所述的苯乙烯St和二乙烯基苯DVB均經(jīng)過一段中性氧化鋁柱子除去 阻聚劑， (4) 保持氮?dú)夥諊瑪嚢杷俣日{(diào)至300-400rpm預(yù)處理15min后，升溫至70°C，反應(yīng)24h， (5) 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液過濾，得到的微球用70°C熱水反復(fù)洗滌至濾液澄清，用丙酮索 氏抽提24h后50°C真空干燥。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽/核苷酸合成用固相載體材料可控孔徑活性樹脂的制備 方法，其特征在于，在裝有機(jī)械攪拌，冷凝管和導(dǎo)氣管的三口瓶中分別加入分散劑0. 3g聚 乙烯醇PVAO.Olg、聚乙烯吡咯烷酮PVP和100mL蒸餾水，開動攪拌并通入氮?dú)?0min，將5g 苯乙烯St、5g二乙烯基苯DVB，苯乙烯St和二乙烯基苯DVB均經(jīng)過一段中性氧化鋁柱子除 去阻聚劑)、〇. 05g過氧化二苯甲酰BPO和7g正庚烷混合均勻后加入到上述體系中，保持氮 氣氛圍，攪拌速度調(diào)至400rpm預(yù)處理15min后升溫至70°C，反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液 過濾，得到的微球用70°C熱水反復(fù)洗滌至濾液澄清，用丙酮索氏抽提24h后50°C真空干燥。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種多肽/核苷酸合成用固相載體材料可控孔徑活性樹脂的制備方法，具體的在裝有機(jī)械攪拌，冷凝管和導(dǎo)氣管的三口瓶中分別加入分散劑聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮蒸餾水，開動攪拌并通入氮?dú)?0min，將苯乙烯、二乙烯基苯、過氧化二苯甲酰和正庚烷混合均勻后加入到上述所述的體系中，所述的苯乙烯St和二乙烯基苯DVB均經(jīng)過一段中性氧化鋁柱子除去阻聚劑保持氮?dú)夥諊瑪嚢杷俣日{(diào)預(yù)處理后，升溫反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液過濾，得到的微球用70℃熱水反復(fù)洗滌至濾液澄清，用丙酮索氏抽提24h后50℃真空干燥。本發(fā)明制備方法操作簡單方便，制成的多肽/核苷酸合成用固相載體材料活性樹脂具有孔徑可控的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】C07K1/04, C08F212/36, C07H1/00, C07H21/02, C08F212/08
【公開號】CN105175601
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】季生象, 韓苗苗
【申請人】山西科瑞迪生物科技有限公司
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月22日