專利名稱：動物浮游生物用飼料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為進(jìn)行種苗生產(chǎn)的魚介類的生物餌料的用于動物浮游生物的飼料、以及使用給餌該飼料的動物浮游生物生產(chǎn)仔稚魚的方法。
背景技術(shù)：
隨著人工種苗生產(chǎn)技術(shù)的發(fā)展，真鯛、比目魚、黑鯛、虎鲀、鲇、鰈、鬼鲉、藍(lán)蟹等的多種水產(chǎn)動物的種苗生產(chǎn)成為可能。另外，隨著近年來技術(shù)的飛速發(fā)展，以往難以生產(chǎn)的鰤、草鮨、紅頭鯛、金槍魚、章魚等的種苗生產(chǎn)也成為可能。
這樣的魚種的種苗生產(chǎn)成為可能的背景中，包括對仔稚魚攝食的輪蟲、豐年蟲的營養(yǎng)強(qiáng)化用飼料的改良。
有關(guān)海產(chǎn)魚介類的仔稚魚期或幼生期的脂肪酸需求中，高度不飽和脂肪酸二十碳五烯酸(以下稱為“EPA”)和二十二碳六烯酸(以下稱為“DHA”)是特別重要的，已經(jīng)明確這是提高生產(chǎn)出成率和防除畸形所必需的營養(yǎng)成分。
然而，EPA和DHA特別是仔稚魚期的必需營養(yǎng)素，對作為餌料的輪蟲、豐年蟲、水蚤等的動物浮游生物給餌營養(yǎng)強(qiáng)化EPA和DHA，是現(xiàn)今通常的做法。
在以營養(yǎng)強(qiáng)化為目的的動物浮游生物用飼料中，存在2種類型(1)在人工制造的微型膠囊或培養(yǎng)而得的微生物中，后天添加魚油或含EPA、DHA的油脂成分的飼料，和(2)培養(yǎng)先天自我產(chǎn)生EPA、DHA的微生物。
(1)類是一直以來采用的典型的方法(例如參照專利文獻(xiàn)1)。另一方面，在使用(2)類天然微生物的飼料中，將產(chǎn)生EPA或DHA的微生物培養(yǎng)、濃縮而成的飼料，兩者各自分別作為商品而存在(例如參照非專利文獻(xiàn)1)。
另外，含EPA的微生物擬微球藻，也由多個(gè)種苗生產(chǎn)機(jī)構(gòu)自行培養(yǎng)并用于營養(yǎng)強(qiáng)化中。但是，因?yàn)槠浼?xì)胞壁硬，所以，在咀嚼器官發(fā)達(dá)的輪蟲中可以強(qiáng)化營養(yǎng)，但在咀嚼器官比較不發(fā)達(dá)的豐年蟲中存在僅按其原樣就不能強(qiáng)化營養(yǎng)的問題。
因此，現(xiàn)在通過采用細(xì)胞壁的破碎處理，將含EPA的微生物擬微球藻用于豐年蟲的養(yǎng)成和營養(yǎng)強(qiáng)化中，其中該細(xì)胞壁的破碎處理是通過使用高壓均質(zhì)機(jī)的強(qiáng)制分散處理(以下稱為“可消化處理”)進(jìn)行的(例如參照專利文獻(xiàn)2)。
另外，最近，關(guān)注于n-6二十二碳五烯酸(以下稱為“n-6DPA”)的仔稚魚用飼料，也由于其具有種苗生產(chǎn)中的防止畸形效果而被廣泛地實(shí)用化(例如參照專利文獻(xiàn)3)。
如上所述，可以知道在魚介類的仔稚魚期或幼小期中的生產(chǎn)出成率的提高和畸形的防除中，EPA和DHA顯示出重要的效果，現(xiàn)在繼續(xù)被使用。作為顯示這些效果的健康種苗、即魚的健苗性的評價(jià)基準(zhǔn)，以往將重點(diǎn)放在種苗的形、色、器官發(fā)達(dá)情況等可以用眼睛判斷的部分上。
但是，近年來更進(jìn)一步發(fā)展，評價(jià)基準(zhǔn)的范圍還擴(kuò)大到魚的功能方面的提高，例如消化能力、運(yùn)動性，進(jìn)一步擴(kuò)大到游泳行為、群體行為。
在機(jī)能方面的重要的評價(jià)基準(zhǔn)，可以列舉對水槽變換、運(yùn)輸階段的物理性應(yīng)激反應(yīng)，例如對魚網(wǎng)捕獲時(shí)的人為處理應(yīng)激反應(yīng)的耐性、對不同水溫的適應(yīng)能力等(例如參照非專利文獻(xiàn)2)。其中，特別在栽培漁業(yè)中的放養(yǎng)用種苗中，放養(yǎng)到低水溫海域時(shí)，若放養(yǎng)后因應(yīng)激反應(yīng)而活力下降，則可以預(yù)料會立刻被大魚捕食，這成為問題。作為防止這些問題的嘗試，向魚礁近處放養(yǎng)等對放養(yǎng)場所進(jìn)行了各種研究。
在初期飼料領(lǐng)域，為了生產(chǎn)健康的種苗，除了一直以來進(jìn)行的對形態(tài)異常的改良之外，評價(jià)基準(zhǔn)中新使用對應(yīng)激反應(yīng)的耐性等等，進(jìn)行各種營養(yǎng)成分的探索。
在針對卵磷脂和EPA對歐洲平鯛的應(yīng)激反應(yīng)耐性等的效果進(jìn)行的研究中，在卵磷脂的存在下，隨著EPA的增加，顯示出對人為處理或溫度變化所引發(fā)的應(yīng)激反應(yīng)的耐性得到改善(例如參照非專利文獻(xiàn)3)。
在針對EPA和DHA對真鯛仔稚魚的活力試驗(yàn)(人為處理耐性)的效果進(jìn)行的研究中，顯示出EPA幾乎沒有效果，DHA具有較良好的效果(例如參照非專利文獻(xiàn)4)。
但是，無論是哪一個(gè)效果，都難以說是充分的，并不能反映在實(shí)際種苗生產(chǎn)現(xiàn)場中的應(yīng)激反應(yīng)耐性和對低水溫適應(yīng)能力的效果。另外，實(shí)際現(xiàn)場中，不能取得充分的效果。
如上所述，近年來作為種苗生產(chǎn)的指標(biāo)，對用網(wǎng)捕獲時(shí)的人為處理應(yīng)激反應(yīng)的耐性、對不同水溫的適應(yīng)能力等受到重視，但改善這些機(jī)能的初期飼料的營養(yǎng)成分的探索止步于初步研討，是極其不充分的。特別是以EPA、n-6DPA和DHA為中心的綜合探索還完全沒有進(jìn)行。
專利文獻(xiàn)1日本專利特許第1992146號專利文獻(xiàn)2日本專利特公平4-8021號公報(bào)專利文獻(xiàn)3日本專利特開平11-276091號公報(bào)非專利文獻(xiàn)1養(yǎng)殖臨時(shí)增刊“添加商品ベスドガイド”、株式會社綠書房、平成12年3月10日、第37卷、第4號、p.186-191非專利文獻(xiàn)2高橋隆行“種苗生產(chǎn)中的環(huán)境與應(yīng)激反應(yīng)”，アクアネツト，湊文社，平成13年7月，第4卷，第7號，p.62-65非專利文獻(xiàn)3JINGLE LIU等6人，Necessity ofdietary lecithinand eicosapentaenoic acid for growth，survival，stress resistance andlipoprotein formation in gilthead sea bream sparus aurata，“FISHERIES SCIENCE”；日本，日本水產(chǎn)學(xué)會志，2002年，第68卷，p.1165-1172非專利文獻(xiàn)4竹內(nèi)俊郎，“魚類中的營養(yǎng)素缺乏癥與需求量”，栽培漁業(yè)技術(shù)研修事業(yè)基礎(chǔ)理論課程教科書集V仔稚魚期的發(fā)育系列，社團(tuán)法人日本栽培漁業(yè)協(xié)會，平成3年，第4卷，p.20-2
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種種苗，其被賦予了對魚介類的種苗生產(chǎn)中的各種應(yīng)激反應(yīng)的耐性。
本發(fā)明的課題在于提供一種動物浮游生物用飼料，其能夠生產(chǎn)耐受低溫應(yīng)激反應(yīng)和人為處理應(yīng)激反應(yīng)的種苗。
本發(fā)明人們?yōu)榱私鉀Q這些問題點(diǎn)(課題)而專心努力的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過作為動物浮游生物用飼料使用含有如下物質(zhì)的飼料含二十碳五烯酸(以下，稱為“EPA”)的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物、以及含n-6二十二碳五烯酸(以下稱為“n-6DPA”)和二十二碳六烯酸(以下稱為“DHA”)的微生物，就可發(fā)揮對種苗生產(chǎn)中的低水溫暴露或人為處理所引起的應(yīng)激反應(yīng)的防止效果，從而完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明提供一種飼料，該飼料在種苗生產(chǎn)中，能夠?qū)︳~介類、特別是對仔稚魚賦予低水溫暴露耐性、人為處理應(yīng)激反應(yīng)耐性。
另外，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，在所述動物浮游生物用飼料中，含二十碳五烯酸的微生物中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的二十碳五烯酸含量是10～50質(zhì)量％。
另外，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，在所述動物浮游生物用飼料中，所述含二十碳五烯酸的微生物是大眼點(diǎn)藻類擬微球藻屬(Nannnochloropsis.sp)。
另外，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，在所述動物浮游生物用飼料中，含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的n-6二十二碳五烯酸含量是10～60質(zhì)量％。
另外，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，在所述動物浮游生物用飼料中，含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的二十二碳六烯酸含量是20～80質(zhì)量％。
另外，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，在所述動物浮游生物用飼料中，含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物是裂殖壺菌屬(Schizochytrium.sp)或破囊壺菌屬(Thraustochytrium.sp)。
另外，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，在所述動物浮游生物用飼料中，含二十碳五烯酸的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物與含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物之間的質(zhì)量比例，以固體物計(jì)為1∶9～9∶1。
另外，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，在所述動物浮游生物用飼料中，動物浮游生物是選自由輪蟲、豐年蟲和水蚤所組成的組中的1種或2種或其以上。
另外，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，在所述動物浮游生物用飼料中，動物浮游生物用飼料中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的二十碳五烯酸含量是5～27質(zhì)量％、n-6二十二碳五烯酸含量是5～21質(zhì)量％、并且二十二碳六烯酸含量是5～52質(zhì)量％。由此，本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，該飼料含有有關(guān)EPA、n-6DHA和DHA具有特征組成的脂質(zhì)。
另外，本發(fā)明提供一種仔稚魚的生產(chǎn)方法，其特征在于作為仔稚魚的餌料，使用通過將所述動物浮游用飼料喂餌給動物浮游生物而強(qiáng)化營養(yǎng)的營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物。由此，提供具有低水溫暴露耐性、人為處理應(yīng)激反應(yīng)耐性的仔稚魚的生產(chǎn)方法。另外，換言之，提供一種仔稚魚的生產(chǎn)方法，該方法賦予仔稚魚低水溫暴露耐性、人為處理應(yīng)激反應(yīng)耐性。
本發(fā)明還提供一種對魚介類的應(yīng)激反應(yīng)耐性賦予劑，其含有含二十碳五烯酸的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物、和含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明中所謂的動物浮游生物用飼料，其特征在于，含有含二十碳五烯酸的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物、以及含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物的、動物浮游生物用飼料，指的是一種動物浮游生物用飼料，其至少含有(1)包含二十碳五烯酸的微生物細(xì)胞壁破碎處理物、和(2)包含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物。
本發(fā)明中的所謂“含二十碳五烯酸(以下，稱為“EPA”。)的微生物”，指的是在微生物中含有EPA的物質(zhì)和/或培養(yǎng)微生物時(shí)在微生物中產(chǎn)生EPA的物質(zhì)。EPA有時(shí)被標(biāo)記為“C205，n-3”或“C205”。
具體而言，可以列舉大眼點(diǎn)藻類擬微球藻屬(Nannochloropsis.sp)、綠枝藻類的扁藻(Tetraselmis.sp)以及硅藻類的角毛藻(Chaetceros.sp)等。其中優(yōu)選的是大眼點(diǎn)藻類擬微球藻屬(Nannochloropsis.sp)。
這些微生物的處理方法沒有特別的限制，例如，優(yōu)選使用從純粹培養(yǎng)的培養(yǎng)液體中僅將微生物菌體分離出并進(jìn)行濃縮的濃縮物或其干燥物。
本發(fā)明中的所謂“微生物”，廣義地包括來自微生物的物質(zhì)，包括培養(yǎng)菌體、干燥培養(yǎng)菌體和處理培養(yǎng)菌體以及包含菌體和培養(yǎng)上清的培養(yǎng)液。詳細(xì)地，除微生物本身以外，還包含例如微生物的濃縮物、冷凍干燥物、噴霧干燥物等。
本發(fā)明中的所謂“含EPA的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物”，指的是對含有EPA的微生物使用高壓均質(zhì)機(jī)等進(jìn)行強(qiáng)制分散處理，實(shí)質(zhì)上將該微生物的細(xì)胞壁進(jìn)行破碎處理而成的物質(zhì)(例如，參照專利文獻(xiàn)3)。該處理有時(shí)被稱為“可消化處理”。該破碎處理工序在制備微生物時(shí)不限于任何時(shí)期，例如，可以在培養(yǎng)微生物收集菌體的狀態(tài)下實(shí)施可消化處理，也可以在收集·干燥菌體后將該干燥物溶解或懸浮在任意的液體中實(shí)施可消化處理。
本發(fā)明中的含EPA的微生物的E PA含量沒有特別的限定，例如在含EPA的微生物中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的EPA含量是10質(zhì)量％或其以上，優(yōu)選10～50質(zhì)量％，更優(yōu)選15～48質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選20～45質(zhì)量％，特別優(yōu)選23～43質(zhì)量％，最優(yōu)選28～38質(zhì)量％。
本發(fā)明中的所謂“脂質(zhì)”，通常也有稱為“油脂”、“油分”以及“油”的情況，是指例如通過Bligh-Dyer法提取的脂質(zhì)。在飼料和微生物中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的脂肪酸含量，可以根據(jù)現(xiàn)有方法求出，該方法沒有特別的限定。例如，冷凍干燥分析樣品，通過Bligh-Dyer法從該冷凍干燥物中提取脂質(zhì)，將其甲酯化后，用氣相色譜法算出脂肪酸組成，將相應(yīng)的脂肪酸的量除以脂質(zhì)中的脂肪酸總量而求出。
本發(fā)明中的含EPA的微生物中的脂質(zhì)的量沒有特別的限定。該脂質(zhì)的量根據(jù)微生物的培養(yǎng)方法而受很大的影響，因此難以特別限定，但例如為1質(zhì)量％或其以上，優(yōu)選為3質(zhì)量％或其以上。
本發(fā)明中的含EPA的微生物的EPA的存在狀態(tài)沒有特別的限定。例如，可以是甘油三酸酯、甘油二酸酯、甘油一酸酯、脂肪酸、脂肪酸甲酯、脂肪酸乙酯、磷脂、糖脂等復(fù)合脂質(zhì)中的任意一種。
本發(fā)明中的所謂“含n-6二十二碳五烯酸(以下稱為“n-6DPA”)和二十二碳六烯酸(以下，稱為“DHA”)的微生物”，指的是在微生物中含有n-6DPA和DHA的物質(zhì)和/或培養(yǎng)時(shí)在微生物內(nèi)產(chǎn)生n-6DPA和DHA的物質(zhì)。n-6DPA有時(shí)被標(biāo)記為“C225，n-6”或“C225”，DHA有時(shí)被標(biāo)記為“C226，n-3”或“C226”。
具體地，可以列舉裂殖壺菌屬(Schizochytrium.sp)、破囊壺菌屬(Thraustochytrium.sp)、吾肯氏壺菌屬(Ulkenia屬)、以及節(jié)壺菌屬(Althornia屬)。其中，優(yōu)選的是裂殖壺菌屬(Schizochytrium.sp)或破囊壺菌屬(Thraustochytrium.sp)，更詳細(xì)地，可以列舉ATCC 20888、20889、20891、24473、28209、28221、34304等，但本發(fā)明不限定于這些。
這些微生物的處理方法沒有特別的限定，例如，優(yōu)選使用由純粹培養(yǎng)的培養(yǎng)液體中僅將微生物菌體分離出并進(jìn)行濃縮的濃縮物和其干燥物。
本發(fā)明中的含n-6DPA和DHA的微生物中的n-6DPA含量沒有特別的限定，例如在含n-6DPA和DHA的微生物中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的n-6DPA含量是5質(zhì)量％或其以上，優(yōu)選5～60質(zhì)量％，更優(yōu)選11～45質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選11～30質(zhì)量％，特別優(yōu)選11～25質(zhì)量％，最優(yōu)選13～20質(zhì)量％。
本發(fā)明中的含n-6DPA和DHA的微生物中的DHA含量沒有特別的限定，例如在含n-6DPA和DHA的微生物的脂質(zhì)中的DHA含量是20質(zhì)量％或其以上，優(yōu)選20～80質(zhì)量％，更優(yōu)選30～70質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選30～60質(zhì)量％，特別優(yōu)選30～50質(zhì)量％，最優(yōu)選33～43質(zhì)量％。
本發(fā)明中的含n-6DPA和DHA的微生物中的n-6DPA與DHA的含量比例沒有特別的限定。例如，在本發(fā)明中可以使用以上述含n-6DPA和DHA的微生物中的n-6DPA含量與上述含n-6DPA和DHA的微生物中的DHA含量的任意比例(任意的組合)所構(gòu)成的微生物。詳細(xì)地，例如，可以列舉在含n-6DPA和DHA的微生物中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的n-6DPA含量為10～30質(zhì)量％、且DHA含量為30～70質(zhì)量％的物質(zhì)。
本發(fā)明中的含n-6DPA和DHA的微生物中的脂質(zhì)的量沒有特別的限定。該脂質(zhì)的量根據(jù)微生物的培養(yǎng)方法而受很大的影響，因此難以特別限定，但例如為5質(zhì)量％或其以上，優(yōu)選為30質(zhì)量％或其以上。
本發(fā)明中的含n-6DPA和DHA的微生物的EPA的存在狀態(tài)沒有特別的限定。例如，可以是甘油三酸酯、甘油二酸酯、甘油一酸酯、脂肪酸、脂肪酸甲酯、脂肪酸乙酯、磷脂、糖脂等復(fù)合脂質(zhì)中的任意一種。
本發(fā)明的動物浮游生物用飼料中，含EPA的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物與含n-6DPA和DHA的微生物之間的質(zhì)量比例沒有特別的限定，例如，具體地以固體物計(jì)為1∶9～9∶1，優(yōu)選以固體物計(jì)為1∶1。
本發(fā)明中使用的微生物的存在通?？梢酝ㄟ^利用光學(xué)顯微鏡的形狀確認(rèn)和其油脂中的脂肪酸組成來鑒定。例如，具有n-6DPA的裂殖壺菌屬·破囊壺菌屬藻類是一種不具有葉綠素的直徑為6～7μm的球形細(xì)胞。
本發(fā)明中，所謂固體物，只要是外觀為固體狀、粉末狀或塊狀等就可以，并不特別限定水分含量。另外，并不是液狀、糊狀、懸浮狀。在本說明書中，作為包含在固體物范疇的物質(zhì)，有時(shí)特別將粉末狀物稱為“干燥粉末”。
調(diào)節(jié)質(zhì)量比例時(shí)，含EPA的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物，只要是上述那樣的固體物就可以，水分含量沒有限定，但水分含量例如為10質(zhì)量％或其以下，優(yōu)選為9～0.1質(zhì)量％，更優(yōu)選為8～0.1質(zhì)量％。
調(diào)節(jié)質(zhì)量比例時(shí)，含n-6DPA和DHA的微生物，只要是上述那樣的固體物就可以，其水分含量并沒有限定，但水分含量例如為10質(zhì)量％或其以下，優(yōu)選為8～0.1質(zhì)量％，更優(yōu)選為7～0.1質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選為6～0.1質(zhì)量％，特別優(yōu)選為5～0.1質(zhì)量％，最優(yōu)選為4～0.1質(zhì)量％。
本發(fā)明的動物浮游生物用飼料不拘于性狀，可以提供任何性狀。例如，可以作為固體(固體形狀、粉末狀)、糊狀、液體(溶液、溶液狀)或懸浮液(懸浮狀)提供。
另外，在為液體(溶液、溶液狀)或懸浮液(懸浮狀)時(shí)，相對于其水分的飼料的量不受限定，不拘于濃度。例如，相對于1質(zhì)量份的飼料，可以混合、溶解或懸浮0.1～100質(zhì)量份的溶液來使用。
下面給出本發(fā)明的動物浮游生物用飼料的制造方法的一個(gè)例子。
在本發(fā)明中，調(diào)節(jié)質(zhì)量比例時(shí)，通過混合將各微生物作成粉末狀的物質(zhì)，可以提供粉末狀的動物浮游生物用飼料。例如，可以列舉將含EPA的微生物進(jìn)行細(xì)胞壁破碎處理后經(jīng)冷凍干燥而得的水分含量8質(zhì)量％或其以下的干燥粉末100g和含n-6DPA和DHA的微生物經(jīng)噴霧干燥而得的水分含量4質(zhì)量％或其以下的干燥粉末100g進(jìn)行混合而成的物質(zhì)。各個(gè)來自微生物的干燥粉末的混合方法沒有特別的限定。
另外，可以將各個(gè)微生物作成粉末狀，分別與任意的液體混合成為溶液狀或懸浮狀，之后再混合。由此，可以提供溶液狀或懸浮狀的動物浮游生物用飼料。例如，可以列舉混合以下懸浮液而得的物質(zhì)將含EPA的微生物經(jīng)冷凍干燥而得的水分含量8質(zhì)量％的干燥粉末100g加到1升蒸餾水中并進(jìn)行細(xì)胞壁破碎處理而得的懸浮液；以及將含n-6DPA和DHA的微生物經(jīng)噴霧干燥而得的水分含量4質(zhì)量％的干燥粉末100g加到1升蒸餾水中并攪拌而得的懸浮液。各個(gè)來自微生物的溶液或作成懸浮狀的物質(zhì)的混合方法并沒有特別的限定。另外，也可以將上述混合后的溶液狀或懸浮狀的物質(zhì)再次作為干燥物以固體狀或粉末狀提供。
提供溶液狀或懸浮狀的動物浮游生物用飼料時(shí)，沒有特別限定液體中的微生物量，但通常以15質(zhì)量％或其以下使用，優(yōu)選為15～5質(zhì)量％，例如，可以列舉15、12.5、10、7.5、5質(zhì)量％。
本發(fā)明中的所謂動物性浮游生物，指的是輪蟲(鹽水萼花臂尾輪蟲等)、豐年蟲(鰓足蟲)、水蚤等的通常在種苗生產(chǎn)中作為生物餌料被使用的生物。這些可以同時(shí)使用1種或2種或其以上。
本發(fā)明中，所謂“動物浮游生物用飼料”，指的是用以喂餌給動物浮游生物的飼料。將該飼料喂餌給動物浮游生物的主要目的是為了使動物浮游生物中積累營養(yǎng)素(例如，EPA、n-6DPA和DHA等)(營養(yǎng)強(qiáng)化)。
本發(fā)明中，所謂“營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物”，指的是通過給動物浮游生物喂餌動物浮游生物用飼料，而使動物浮游生物中的營養(yǎng)素(例如，EPA、n-6DPA和DHA等)強(qiáng)化了的動物浮游生物。該營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物是在種苗生產(chǎn)時(shí)用于對仔稚魚給餌的餌料。
本發(fā)明中，動物浮游生物的一次培養(yǎng)以及伴隨營養(yǎng)強(qiáng)化的二次培養(yǎng)的條件，可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員通常的方法進(jìn)行。具體的培養(yǎng)條件可在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識范圍內(nèi)進(jìn)行適時(shí)修正。
本發(fā)明中，將所述動物浮游生物用飼料用于營養(yǎng)強(qiáng)化時(shí)，該飼料的添加量沒有特別的限定。這可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員通常的方法進(jìn)行。具體的濃度，可以在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識范圍內(nèi)進(jìn)行適時(shí)修正。例如，作為該飼料的固體物，可以以0.2g/升添加。詳細(xì)地，將含EPA的微生物的固體物100g加到1升蒸餾水中進(jìn)行細(xì)胞破碎處理而得的物質(zhì)和含n-6DPA和DHA的微生物的固體物100g加到1升蒸餾水中進(jìn)行攪拌而得的物質(zhì)進(jìn)行混合(因此成為200g飼料/2升)。接著，在動物浮游生物的培養(yǎng)液中，以2ml/升的濃度使用該混合液(因此成為200mg飼料/2ml/升，換算的話成為0.2g飼料/升)。
本發(fā)明中，所述動物浮游生物用飼料中的EPA、n-6DPA和DHA的含量沒有特別的限定。
本發(fā)明中，所述動物浮游生物用飼料中的EPA的含量沒有特別的限定，例如，該飼料中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的EPA含量是5～35質(zhì)量％，優(yōu)選5～30質(zhì)量％，更優(yōu)選5～27質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選5～25質(zhì)量％，特別優(yōu)選5～20質(zhì)量％，最優(yōu)選10～20質(zhì)量％。
本發(fā)明中，所述動物浮游生物用飼料中的n-6DPA的含量沒有特別的限定，例如，該飼料中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的n-6DPA含量是5～40質(zhì)量％，優(yōu)選5～30質(zhì)量％，更優(yōu)選5～21質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選6～20質(zhì)量％，特別優(yōu)選7～18質(zhì)量％，最優(yōu)選7～15質(zhì)量％。
本發(fā)明中，所述動物浮游生物用飼料中的DHA的含量沒有特別的限定，例如，該飼料中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的DHA含量是5～60質(zhì)量％，優(yōu)選5～55質(zhì)量％，更優(yōu)選5～52質(zhì)量％，進(jìn)一步優(yōu)選10～40質(zhì)量％，特別優(yōu)選15～35質(zhì)量％，最優(yōu)選25～35質(zhì)量％。
本發(fā)明中，所述動物浮游生物用飼料中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的EPA、n-6DPA和DHA含量的比例沒有特別的限定。例如，在本發(fā)明中可以使用由上述相對于動物浮游生物用飼料的脂質(zhì)中的總脂肪酸的EPA、n-6DPA和DHA含量的任意比例(任意的組合)構(gòu)成的脂質(zhì)。詳細(xì)地，例如可以提供在所述動物浮游生物用飼料中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的脂肪酸含量為EPA是5～27質(zhì)量％，n-6DPA是5～21質(zhì)量％，并且DHA是5～52質(zhì)量％的動物浮游生物用飼料。
本發(fā)明中，所述動物浮游生物用飼料的脂質(zhì)的量沒有特別的限定。該脂質(zhì)的量根據(jù)各個(gè)微生物的培養(yǎng)方法、混合比例而大不相同，不能一概地表示其含量。
本發(fā)明中，所述動物浮游生物用飼料的脂質(zhì)的存在狀態(tài)沒有特別的限定。例如，可以是甘油三酸酯、甘油二酸酯、甘油一酸酯、脂肪酸、脂肪酸甲酯、脂肪酸乙酯、磷脂、糖脂等復(fù)合脂質(zhì)中的任意一種。
從其它觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供通過調(diào)節(jié)含EPA的微生物或該細(xì)胞壁破碎物與含n-6DPA和DHA的微生物之間的混合質(zhì)量比率，來提供調(diào)節(jié)EPA、n-6DPA和DHA含量的動物浮游生物用飼料及脂質(zhì)的調(diào)節(jié)方法或生產(chǎn)方法。另外，可將利用該調(diào)節(jié)方法或生產(chǎn)方法得到的脂質(zhì)含量調(diào)節(jié)為對仔稚魚的種苗生產(chǎn)有效的EPA、n-6DPA和DHA的含量。進(jìn)一步，利用該調(diào)節(jié)方法或生產(chǎn)方法，還可提供對仔稚魚的種苗生產(chǎn)有效的EPA、n-6DPA和DHA含量的飼料和油脂。
從其它觀點(diǎn)來看，本發(fā)明可以提供脂質(zhì)的總脂肪酸中的脂肪酸成分含量為EPA是5～27質(zhì)量％、n-6DPA是5～21質(zhì)量％、并且DHA是5～52質(zhì)量％的脂質(zhì)。
這些脂質(zhì)的使用方法沒有特別的限定，可以單獨(dú)使用或與其它物質(zhì)混合使用。這些可以在例如動物浮游生物用飼料、仔稚魚的生產(chǎn)方法等所有與魚介類的種苗生產(chǎn)相關(guān)的事務(wù)中使用，并且也可以在所有藥品、食品中使用。
本發(fā)明中，所述動物浮游生物用飼料中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的EPA、n-6DPA和DHA含量為特定比例的脂質(zhì)、以及含有該脂質(zhì)的飼料，即使不使用含EPA的微生物和/或含n-6DPA和DHA的微生物，也可以通過分別準(zhǔn)備各成分并混合，或者將各成分作成甘油三酸酯、甘油二酸酯、甘油一酸酯、脂肪酸、脂肪酸甲酯、脂肪酸乙酯、磷脂、糖脂等復(fù)合脂質(zhì)中的任意一種并混合而實(shí)現(xiàn)。但是，若使用本發(fā)明所述的含EPA的微生物以及含n-6DPA和DHA的微生物，其制造時(shí)簡單、工業(yè)上效率高、能夠廉價(jià)地制造。
另外，使用本發(fā)明的含EPA的微生物和含n-6DPA和DHA的微生物作為動物浮游生物用飼料的情況，與分別準(zhǔn)備各成分并作成與本發(fā)明的動物浮游生物用飼料中所含脂質(zhì)的總脂肪酸中的EPA、n-6DPA和DHA含量同樣比例的飼料相比，前者在效果方面也優(yōu)選。
所謂種苗生產(chǎn)，在魚類的情況下，通常是指從孵化魚苗開始到養(yǎng)到小魚為止的過程。這些通過種苗生產(chǎn)得到的小魚，其后用于放養(yǎng)或養(yǎng)殖中。因此，如果種苗生產(chǎn)順利，能夠得到存活率高、活力旺盛的小魚、進(jìn)一步具備各種應(yīng)激反應(yīng)耐性的小魚，那么，對此后的養(yǎng)殖等將大為有益。
從另一觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供一種營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物，其通過將所述動物浮游生物用飼料喂餌給動物浮游生物來強(qiáng)化營養(yǎng)。
從另一觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供一種營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物的生產(chǎn)方法，其通過將所述動物浮游生物用飼料喂餌給動物浮游生物來強(qiáng)化營養(yǎng)。
從另一觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供一種動物浮游生物的給餌方法，其通過將所述動物浮游生物用飼料喂餌給動物浮游生物而得到強(qiáng)化營養(yǎng)的營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物。
從另一觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供一種仔稚魚，其特征在于，作為仔稚魚的餌料，使用通過將所述動物浮游生物用飼料喂餌給動物浮游生物來強(qiáng)化營養(yǎng)的營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物。
從另一觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供一種仔稚魚的給餌方法，其特征在于，作為仔稚魚的餌料，使用通過將所述動物浮游生物用飼料喂餌給動物浮游生物來強(qiáng)化營養(yǎng)的營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物。
本發(fā)明中，提供一種生產(chǎn)仔稚魚的方法，其特征在于，作為仔稚魚的餌料，使用通過將所述動物浮游生物用飼料喂餌給動物浮游生物來強(qiáng)化營養(yǎng)的營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物。
從另一觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供一種仔稚魚，該仔稚魚是通過將所述動物浮游生物用飼料用于仔稚魚的種苗生產(chǎn)中而獲得的。
從另一觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供一種仔稚魚的種苗生產(chǎn)方法，其特征在于，將所述動物浮游生物用飼料用于仔稚魚的種苗生產(chǎn)中。
從另一觀點(diǎn)來看，本發(fā)明提供一種仔稚魚的生產(chǎn)方法，其特征在于，將所述動物浮游生物用飼料用于仔稚魚的種苗生產(chǎn)中。
另外，本發(fā)明的動物浮游生物用飼料中，可以混合該飼料以外的飼料成分來使用。該飼料以外的飼料成分沒有特別的限定，可以使用通常用作動物浮游生物用飼料的成分。例如，可以列舉淡水小球藻、酵母、魚油、磷脂等。另外，本發(fā)明的動物浮游生物用飼料，還可以將該飼料與該飼料以外的飼料成分同時(shí)或分別獨(dú)立地用于魚介類中。
可使用本發(fā)明的動物浮游生物用飼料來進(jìn)行種苗生產(chǎn)的魚介類并沒有特別的限定，可以對使用動物浮游生物進(jìn)行種苗生產(chǎn)的所有魚介類使用。例如，真鯛、比目魚、黑鯛、虎鲀、鰈、鲉、鲪、鯰、鬼鲉、鰤、草鮨、紅頭鯛、金槍魚等的魚類，藍(lán)蟹、車蝦等的甲殼類，章魚、烏賊等的頭足類等。其中，優(yōu)選真鯛、比目魚、黑鯛、虎鲀、鰈，更優(yōu)選真鯛、比目魚。
本發(fā)明的動物浮游生物用飼料，保持魚介類生產(chǎn)出成率的提高(存活率的提高)和防除畸形等的以往可用視覺識別的作用，同時(shí)具有魚介類的機(jī)能方面的提高這一優(yōu)異的效果。所謂魚介類的機(jī)能方面的提高，指的是不能以視覺識別，但在魚介類的內(nèi)在的機(jī)能方面的提高。例如，意指更換水槽時(shí)的應(yīng)激反應(yīng)、運(yùn)輸階段的物理性應(yīng)激反應(yīng)、用網(wǎng)捕獲時(shí)的人為處理應(yīng)激反應(yīng)、以及轉(zhuǎn)移到不同水溫下時(shí)的應(yīng)激反應(yīng)等的耐性提高。以往，魚介類的機(jī)能方面低時(shí)，存在由于這些工序而導(dǎo)致魚介類存活率下降、種苗生產(chǎn)不順利的情況。
更詳細(xì)而言，本發(fā)明的動物浮游生物用飼料的效果是，通過作為仔稚魚的餌料使用將該飼料喂餌給動物浮游生物而強(qiáng)化營養(yǎng)的營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物來進(jìn)行仔稚魚的種苗生產(chǎn)，可提高仔稚魚的上述應(yīng)激反應(yīng)耐性，因此，在仔稚魚更換水槽時(shí)、運(yùn)輸時(shí)、用網(wǎng)捕獲時(shí)、轉(zhuǎn)移到不同水溫的水槽中時(shí)，可以防止仔稚魚的存活率和活性降低。從而，作為其結(jié)果，種苗生產(chǎn)比現(xiàn)狀變得更良好。
與通常被認(rèn)為具有生產(chǎn)出成率的提高(存活率的提高)和防除畸形等效果的、(a)較多含有EPA、幾乎不含DPA和DHA的微生物、(b)較多含有DPA和DHA、微量含有EPA(在脂質(zhì)中的總脂肪酸中為5質(zhì)量％以下)的微生物相比，本發(fā)明的動物浮游生物用飼料具有很大的效果。特別是該飼料與這些相比，在仔稚魚對空氣中暴露的耐性和對低水溫暴露的耐性方面具有顯著的效果。
在空氣暴露試驗(yàn)中，測定本說明書中所說的“人為處理應(yīng)激反應(yīng)耐性”、“對人為處理應(yīng)激反應(yīng)的防止效果”。該試驗(yàn)可通過例如將飼養(yǎng)一定期間后的仔稚魚裝在網(wǎng)上，使之在空氣中暴露一定時(shí)間(例如120秒)后，轉(zhuǎn)移到其它相同水溫中，測定一定期間(例如24小時(shí))后的存活率來進(jìn)行。由此，如果還維持活力、且仔稚魚的存活率高(不死亡)的話，那么，在仔稚魚的種苗生產(chǎn)時(shí)，進(jìn)行處理時(shí)的死亡當(dāng)然也會變少，作為其結(jié)果，種苗生產(chǎn)順利進(jìn)行，對于水產(chǎn)業(yè)大為有益。
在低水溫暴露試驗(yàn)中，測定本說明書中所說的“低水溫暴露耐性(低溫應(yīng)激反應(yīng)耐性)”、“對低水溫暴露應(yīng)激反應(yīng)的防止效果”。該試驗(yàn)可通過例如將在水溫21℃下飼養(yǎng)一定期間后的仔稚魚轉(zhuǎn)移到水溫12℃、13℃、14℃或15℃的其它水槽中，測定一定期間(例如30分鐘)后的存活率來進(jìn)行。由此，如果還維持活力、且仔稚魚的存活率高(不死亡)的話，那么，在仔稚魚的種苗生產(chǎn)時(shí)，進(jìn)行處理時(shí)的死亡當(dāng)然也會變少，作為其結(jié)果，種苗生產(chǎn)順利進(jìn)行，對水產(chǎn)業(yè)大為有益。
根據(jù)本發(fā)明，通過將含有含EPA的微生物的細(xì)胞壁破碎物、以及含n-6DPA和DHA的微生物的物質(zhì)用作動物浮游生物用飼料，可以取得對種苗生產(chǎn)中仔稚魚的低水溫暴露和人為處理所帶來的應(yīng)激反應(yīng)的防止效果。
即，根據(jù)本發(fā)明，通過作為仔稚魚的餌料使用將所述動物浮游生物用飼料喂餌給動物浮游生物來強(qiáng)化營養(yǎng)的營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物，取得提高該仔稚魚的低水溫暴露耐性(低溫應(yīng)激反應(yīng)耐性)和人為處理應(yīng)激反應(yīng)耐性的效果。另外，投與本發(fā)明的動物浮游生物用飼料的豐年蟲、輪蟲等動物浮游生物，具有其活力不會下降的優(yōu)點(diǎn)。
這些效果是以往沒有的非常有效的效果，對魚介類的種苗生產(chǎn)、特別對仔稚魚的種苗生產(chǎn)大為有益。
以下，舉出實(shí)施例來更具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1[動物浮游生物用飼料的制備和營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物的制備]
(1-1)動物浮游生物用飼料的制備作為動物浮游生物用飼料的原料，從裂殖壺菌屬ATCC20891株的培養(yǎng)液100升中分離出約3kg的菌體。接著，對菌體進(jìn)行冷凍干燥處理后將其粉碎，得到1.2kg的干燥粉末。在100g該干燥粉末中加入蒸餾水成為1升，利用均質(zhì)機(jī)，得到分散的試驗(yàn)飼料A。
試驗(yàn)飼料A相當(dāng)于含n-6DPA和DHA的微生物。
又，從擬微球藻培養(yǎng)液5000升中得到4kg的菌體，將其噴霧干燥。在100g該干燥粉末中加入蒸餾水成為1升，用高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行細(xì)胞壁破碎處理，得到試驗(yàn)飼料B。
試驗(yàn)飼料B相當(dāng)于含EPA的微生物的細(xì)胞壁破碎物。
進(jìn)一步，分別制備500ml的飼料A和500ml的飼料B，并將兩者混合，得到試驗(yàn)飼料C。
試驗(yàn)飼料C相當(dāng)于該發(fā)明所述的動物浮游生物用飼料。
試驗(yàn)飼料A～C分別作為脂肪酸分析樣品。
表1顯示試驗(yàn)飼料的脂肪酸組成。脂肪酸組成是在冷凍干燥脂肪酸分析樣品之后，用Bligh-Dyer法提取脂質(zhì)，將其甲酯化之后，以氣相色譜法進(jìn)行分析。脂肪酸成分的比例(質(zhì)量％)從面積百分率求出。
作為試驗(yàn)飼料A中所用菌體的冷凍干燥品的干燥粉末，其水分為3.7％、油分為58.5％。另外，作為試驗(yàn)飼料B中所用噴霧干燥品的干燥粉末，其水分為7.0％、油分為7.5％。
(1-2)營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物的制備添加試驗(yàn)飼料而強(qiáng)化營養(yǎng)的動物浮游生物培養(yǎng)液，在淡水小球藻中培養(yǎng)，并分別制備輪蟲為1000個(gè)體/ml、豐年蟲為100個(gè)體/ml，水溫都維持在25℃。向其中，添加各種試驗(yàn)飼料以使飼料濃度分別成為2ml/升之后，將經(jīng)過2小時(shí)以上的(營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物)提供作脂肪酸分析樣品、并用作試驗(yàn)魚的餌料。在這里，將營養(yǎng)強(qiáng)化的輪蟲和豐年蟲分別稱作輪蟲A～C、豐年蟲A～C。
表2表示營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲的脂肪酸組成，表3表示營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲的脂肪酸組成。脂肪酸組成是在冷凍干燥脂肪酸分析樣品之后，用Bligh-Dyer法提取脂質(zhì)，將其甲酯化之后，以氣相色譜法進(jìn)行分析。脂肪酸成分的比例(質(zhì)量％)從面積百分率求出。
由這些可以知道，試驗(yàn)飼料的脂肪酸組成反映在強(qiáng)化營養(yǎng)的動物浮游生物的脂肪酸組成中。
使用如上所述地強(qiáng)化營養(yǎng)的輪蟲、豐年蟲，在實(shí)施例2和3中，分別利用真鯛進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)。
表1表示各種試驗(yàn)飼料的脂肪酸分析值。單位是質(zhì)量％。表中的“ND”意指沒有檢測出來。
表2表示用各種飼料強(qiáng)化營養(yǎng)的輪蟲的脂肪酸分析值。單位是質(zhì)量％。表中的“ND”意指沒有檢測出來。
表3表示用各種飼料強(qiáng)化營養(yǎng)的豐年蟲的脂肪酸分析值。單位是質(zhì)量％。
表1

表2

表3

實(shí)施例2[使用營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲的真鯛的飼養(yǎng)試驗(yàn)和空氣暴露試驗(yàn)](2-1)使用營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲的真鯛的飼養(yǎng)試驗(yàn)分別在A～C區(qū)使用將實(shí)施例1中所得試驗(yàn)飼料A～C作為餌料給餌的輪蟲(營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲A～C)，供于試驗(yàn)的魚使用真鯛，實(shí)施飼養(yǎng)試驗(yàn)。
將自行采卵的真鯛受精卵以各區(qū)12500粒收容在500升容積的聚碳酸酯水槽中，以產(chǎn)卵水溫使之孵化后，將水溫緩慢提高到21℃。各區(qū)的孵化率都在98％以上，并沒有差異。
營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲A～C的添加如下在各區(qū)中，調(diào)節(jié)輪蟲的量，使其從孵化后第3天起維持在5個(gè)體/ml，并1天給餌1次。調(diào)節(jié)輪蟲的量，使其從孵化后第10天起維持8個(gè)體/ml、從第15天起維持10個(gè)體/ml，并早晚給餌2次，孵化后第20天結(jié)束飼養(yǎng)試驗(yàn)。
將飼養(yǎng)結(jié)束后的魚體作為脂肪酸分析樣品。
飼養(yǎng)結(jié)束后，分析魚體的脂肪酸組成，算出各區(qū)的存活率和平均全長。
(2-2)使用營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲的真鯛的空氣暴露試驗(yàn)另外，作為空氣暴露試驗(yàn)，使用網(wǎng)，將飼養(yǎng)結(jié)束后的100尾真鯛暴露在空氣中60秒鐘之后，轉(zhuǎn)移到其它相同水溫的水槽中，觀察24小時(shí)之后的存活率。
表4表示飼養(yǎng)試驗(yàn)之后的魚體的脂肪酸組成，表5表示飼養(yǎng)后的平均全長、存活率、空氣中暴露后的存活率的結(jié)果。A區(qū)是指營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲A投與群、B區(qū)是指營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲B投與群、C區(qū)是指營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲C投與群。脂肪酸組成是在冷凍干燥脂肪酸分析樣品之后，用Bligh-Dyer法提取脂質(zhì)，將其甲酯化之后，以氣相色譜法進(jìn)行分析。脂肪酸成分的比例(質(zhì)量％)從面積百分率求出。
表4中可以知道，與其它區(qū)相比，在A區(qū)，DHA組分最高；在B區(qū)，EPA組分最高；在C區(qū)，均衡良好地同時(shí)含有EPA、n-6DPA和DHA組分。由此可知，試驗(yàn)飼料和營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲的脂肪酸組成反映在飼養(yǎng)試驗(yàn)后的魚體中的脂肪酸組成中。
從表5中，各區(qū)的平均全長看不到大的差別；存活率是B區(qū)差、A區(qū)和C區(qū)大致相同。在空氣暴露試驗(yàn)(人為處理應(yīng)激反應(yīng)試驗(yàn))中，C區(qū)中的存活率為95.3％，是最高的，接著是A區(qū)、B區(qū)的順序。即，使用均衡良好地同時(shí)含有EPA、n-6DPA和DHA組分的飼料的群組，其效果最顯著。
表4表示輪蟲給餌試驗(yàn)后的真鯛魚體的脂肪酸組成。單位是質(zhì)量％。
表5表示給餌各種營養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲的真鯛的試驗(yàn)結(jié)果。單位是質(zhì)量％。
表4

表5

實(shí)施例3[使用營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲的真鯛的飼養(yǎng)試驗(yàn)、空氣暴露試驗(yàn)及低水溫暴露試驗(yàn)](3-1)使用營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲的真鯛的飼養(yǎng)試驗(yàn)分別在A～C區(qū)使用將實(shí)施例1中所得試驗(yàn)飼料A～C作為餌料給餌的豐年蟲(營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲A～C)，供于試驗(yàn)的魚使用真鯛，實(shí)施飼養(yǎng)試驗(yàn)。
所使用的真鯛是使用以各區(qū)魚卵提取油強(qiáng)化營養(yǎng)的輪蟲，將自行采卵的真鯛受精卵飼養(yǎng)到孵化后第20天為止。各區(qū)的水槽中各2000條，將其收容在500升容積的聚碳酸酯水槽中，將水溫調(diào)為21℃。各區(qū)的孵化率都在98％以上，沒有差異。
到孵化后30天為止，同時(shí)使用以魚卵提取油強(qiáng)化營養(yǎng)的輪蟲和以各區(qū)試驗(yàn)飼料強(qiáng)化營養(yǎng)的豐年蟲(營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲A～C)，其后到第36天為止僅給餌豐年蟲A～C。
以魚卵提取油強(qiáng)化營養(yǎng)的輪蟲，將其量調(diào)節(jié)成在飼養(yǎng)水中為10個(gè)體/ml，早晚2次給餌；營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲A～C，早晚以2個(gè)小時(shí)內(nèi)吃完的量給餌，并緩慢地增加給餌量。
將飼養(yǎng)結(jié)束后的魚體作為脂肪酸分析樣品。
飼養(yǎng)結(jié)束后，分析魚體的脂肪酸組成，算出各區(qū)的存活率和平均全長。
(3-2)使用營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲的真鯛的空氣暴露試驗(yàn)又，作為空氣暴露試驗(yàn)，使用網(wǎng)，將飼養(yǎng)結(jié)束后的100尾真鯛暴露在空氣中120秒之后，轉(zhuǎn)移到其它水槽，觀察24小時(shí)后的存活率。
(3-3)使用營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲的真鯛的低水溫暴露試驗(yàn)進(jìn)一步，作為低水溫暴露試驗(yàn)，觀察100條飼養(yǎng)結(jié)束后的真鯛在12℃、13℃、14℃、15℃的低水溫中暴露30分鐘之后的存活率。
表6表示飼養(yǎng)結(jié)束后的魚體的脂肪酸組成，表7表示飼養(yǎng)后的平均全長、存活率、空氣暴露試驗(yàn)、低溫暴露試驗(yàn)的存活率。A區(qū)是指營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲A投與群、B區(qū)是指營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲B投與群、C區(qū)是指營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲C投與群。脂肪酸組成是在冷凍干燥脂肪酸分析樣品之后，用Bligh-Dyer法提取脂質(zhì)，將其甲酯化之后，以氣相色譜法進(jìn)行分析。脂肪酸成分的比例(質(zhì)量％)從面積百分率求出。
表6中可以知道，與其它區(qū)相比較，A區(qū)中D HA組分最高，B區(qū)中EPA組分最高，C區(qū)中均衡良好地同時(shí)含有EPA、n-6DPA和DHA組分。由此可知，試驗(yàn)飼料和營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲的脂肪酸組成反映在飼養(yǎng)試驗(yàn)后的魚體中的脂肪酸組成中。
從表7中，各區(qū)的平均全長看不到大的差別，存活率也未見有差異。另一方面，在空氣暴露試驗(yàn)中觀察到，A區(qū)和B區(qū)大致沒有變化，C區(qū)中存活率最高。即，使用均衡良好地同時(shí)含有EPA、n-6DPA和DHA組分的飼料的群組，其效果最顯著。
另外，低水溫暴露的存活率，暴露在12℃時(shí)，C區(qū)的存活率最高，接著是A區(qū)、B區(qū)的順序。在13℃時(shí)，也是同樣的順序。14℃、15℃時(shí)，B區(qū)為特別低的存活率，但在A區(qū)與C區(qū)之間看不到差別。B區(qū)在12～15℃的所有暴露試驗(yàn)中，其存活率與A區(qū)和C區(qū)相比較是特別低的。即，使用均衡良好地同時(shí)含有EPA、n-6DPA和DHA組分的飼料的群組，其效果最顯著。
在空氣暴露試驗(yàn)中，DHA具有提高空氣暴露試驗(yàn)?zāi)托缘男Ч@與到目前為止的報(bào)告是一致的結(jié)果(參照非專利文獻(xiàn)4)。但是，有報(bào)道稱，在歐洲平鯛中，在卵磷脂的存在下通過增加EPA而改善低水溫應(yīng)激反應(yīng)耐性(參照非專利文獻(xiàn)3)，但在本次的結(jié)果中明確可知，魚體中僅單獨(dú)存在EPA時(shí)并沒有低水溫耐性改善效果；魚體中存在n-6DPA和DHA時(shí)有若干改善；而魚體中均衡良好地存在EPA、n-6DPA和DHA時(shí)，具有顯著的效果。
表6表示豐年蟲給餌試驗(yàn)后的真鯛魚體的脂肪酸組成。單位是質(zhì)量％。
表7表示給餌各種營養(yǎng)強(qiáng)化豐年蟲的真鯛的試驗(yàn)結(jié)果。單位是質(zhì)量％。
表6

表7

權(quán)利要求
1.一種動物浮游生物用飼料，其含有含二十碳五烯酸的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物、以及含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物浮游生物用飼料，所述含二十碳五烯酸的微生物中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的二十碳五烯酸含量是10～50質(zhì)量％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的動物浮游生物用飼料，所述含二十碳五烯酸的微生物是大眼點(diǎn)藻類擬微球藻屬(Nannnochloropsis.sp)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的n-6二十二碳五烯酸含量是5～60質(zhì)量％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的二十二碳六烯酸含量是20～80質(zhì)量％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的n-6二十二碳五烯酸含量是5～60質(zhì)量％、二十二碳六烯酸含量是20～80質(zhì)量％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的n-6二十二碳五烯酸含量是10～30質(zhì)量％、二十二碳六烯酸含量是30～70質(zhì)量％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物是裂殖壺菌屬(Schizochytrium.sp)或破囊壺菌屬(Thraustochytrium.sp)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述含二十碳五烯酸的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物與所述含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物之間的質(zhì)量比例，以固體物計(jì)為1∶9～9∶1。
10.根據(jù)權(quán)利要求1～9中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述動物浮游生物是選自由輪蟲、豐年蟲和水蚤所組成的組中的1種或2種或其以上。
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述動物浮游生物用飼料中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的二十碳五烯酸含量是5～35質(zhì)量％。
12.根據(jù)權(quán)利要求1～11中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料，所述動物浮游生物用飼料中所包含的脂質(zhì)的總脂肪酸中的二十碳五烯酸含量是5～27質(zhì)量％、n-6二十二碳五烯酸含量是5～21質(zhì)量％、并且二十二碳六烯酸含量是5～52質(zhì)量％。
13.一種生產(chǎn)仔稚魚的方法，其包括作為仔稚魚的餌料，使用通過將權(quán)利要求1～12中任意1項(xiàng)所述的動物浮游生物用飼料喂餌給動物浮游生物而強(qiáng)化營養(yǎng)的營養(yǎng)強(qiáng)化動物浮游生物。
14.一種魚介類的應(yīng)激反應(yīng)耐性賦予劑，其含有含二十碳五烯酸的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物、以及含n-6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的應(yīng)激反應(yīng)耐性賦予劑，所述應(yīng)激反應(yīng)耐性是人為處理耐性。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的應(yīng)激反應(yīng)耐性賦予劑，所述應(yīng)激反應(yīng)耐性是低水溫暴露耐性。
全文摘要
本發(fā)明提供一種動物浮游生物用飼料，其含有含二十碳五烯酸的微生物的細(xì)胞壁破碎處理物、以及含n－6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的微生物。該飼料的特征之一在于在該飼料中所包含的脂質(zhì)中，均衡良好地含有二十碳五烯酸、n－6二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸。該飼料能夠生產(chǎn)耐受低溫應(yīng)激反應(yīng)和人為處理應(yīng)激反應(yīng)的種苗(仔稚魚等)，這些應(yīng)激反應(yīng)在仔稚魚等的種苗生產(chǎn)時(shí)成為問題。
文檔編號A23K1/18GK1852662SQ20048002695
公開日2006年10月25日 申請日期2004年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月19日
發(fā)明者加藤尚, 小島榮司, 柑本雅司, 五十島升 申請人:日清奧利友集團(tuán)株式會社, 日清瑪瑞納泰克株式會社