專利名稱：珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物培植技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法。
背景技術(shù)：
蘭花雜交種子很小，內(nèi)含一些發(fā)育不完全的胚，無胚乳，自然狀態(tài)下很難萌發(fā)。雖有人作過蘭屬(Cmbidium)植物的育種和種子的萌發(fā)研究，但以上雜交蘭屬植物的雜交育種和種子無菌萌發(fā)未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種為蘭花育種和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定重要的技術(shù)基礎(chǔ)的珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法。
本發(fā)明對四種蘭花種子進(jìn)行了無菌萌發(fā)研究，成功地培育出大量試管苗。
沉香虎頭蘭變種(Cmbidium tracyanum L castle var huang su)、大雪蘭(C.mstersii Griff)及黃蟬蘭(C.iridioides)是蘭科蘭屬中不同種植物，以這三種蘭花為親本培育雜交種蘭花，具體的育種與繁殖方法為1、材料來源將采得的蘭株在資源圃內(nèi)進(jìn)行雜交育種和果實(shí)培育(現(xiàn)有技術(shù))，待培育至蘭花果實(shí)到九成熟，果皮略顯黃色時(shí)摘取。
2、培養(yǎng)方法(1)雜交育種1)建立蘭花資源圃，資源圃內(nèi)的環(huán)境能人工調(diào)控，創(chuàng)造最適合蘭花生長發(fā)育的最佳環(huán)境；2)這幾種蘭花的自然花期接近一致，待父母本花序基部1-2個(gè)花蕾開放時(shí)進(jìn)行育種操作；3)育種操作洗盡手和鑷子，用手輕輕摘除父母本藥帽(花藥頂端帽狀物)，用鑷子摘下父本花粉塊，送入母本合蕊柱的腔(柱頭)內(nèi)即可；4)加強(qiáng)溫、光和肥水管理，注意防治病蟲危害，直到蘭果發(fā)育成熟。
(2)種子無菌萌發(fā)1)外植體處理90％成熟度果實(shí)經(jīng)75％酒精消毒40秒后，轉(zhuǎn)入1％升汞表面消毒8～12分鐘，用無菌水沖洗3～4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子后，以少量無菌水潤洗5次，然后0.1mol/L KOH(氫氧化鉀)溶液預(yù)處理8～12分鐘，再用無菌水沖洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10～20分鐘，再用無菌水沖洗5次后接種到固體培養(yǎng)基中；2)種子萌發(fā)經(jīng)過多種配方試驗(yàn)比較，篩選出改良MS(即1/2MS)為較適宜的種子萌發(fā)基本培，在改良MS基本培養(yǎng)基中加入生長調(diào)節(jié)劑，即1/26-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L培養(yǎng)基(6-BA即6-芐基腺嘌呤，為細(xì)胞分裂素；NAA即奈乙酸，為生長素)；3)培養(yǎng)條件在整個(gè)培養(yǎng)過程中，種子無菌萌發(fā)采用暗箱培養(yǎng)，圓球莖成苗的培養(yǎng)、增殖和生根培養(yǎng)均采用光照培養(yǎng)，光照1800～2500勒克斯(lx)，每天光照12小時(shí)；溫度24±2℃，培養(yǎng)基pH5.4，瓊脂7g/L，接種3～6個(gè)月后發(fā)芽率達(dá)90％以上；4)種子萌發(fā)長出幼根時(shí)，轉(zhuǎn)接到改良MS+KT1.5～2.5mgL-1+NAA0.2～0.5mg.L-1培養(yǎng)基中培養(yǎng)(KT即6-糠氨基嘌呤或糠基腺嘌呤，為激動(dòng)素)，4～6個(gè)月后逐漸成為具有根系并可煉苗和移栽的試管苗。
本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)過程中得出的結(jié)論1、引種馴化必須引種馴化野生蘭花和建立種質(zhì)資源圃，調(diào)控環(huán)境培育好父母本植株以便進(jìn)行雜交育種。
2、花期調(diào)控用設(shè)施按蘭花生理生態(tài)要求條件下的環(huán)境調(diào)控使父母本花期一致。
3、根據(jù)花器官特點(diǎn)正確進(jìn)行雜交技術(shù)操作。
4、不同培養(yǎng)基對雜交種子萌發(fā)的影響將種子分別接種在多種改良MS培養(yǎng)基上，從播種到發(fā)芽形成圓球莖需3～6個(gè)月，經(jīng)觀察改良的培養(yǎng)基更有利于雜交種子萌發(fā)。
5、不同激素對圓球莖和根狀莖生長的影響由于蘭花種子非常細(xì)小，播種時(shí)有些種子聚集在一起，致使長出的圓球莖或根狀莖較擁擠，因此對圓球莖或根狀莖進(jìn)行轉(zhuǎn)接。將圓球莖或根狀莖從原來母瓶中取出，轉(zhuǎn)接到11個(gè)不同激素濃度的培養(yǎng)基中作對比試驗(yàn)，且培養(yǎng)基中加入了80g/L香蕉泥。經(jīng)過21天培養(yǎng)觀察時(shí)，培養(yǎng)基中均觀察到圓球莖或根狀莖上已全長出新綠葉，一般為2～3片，球狀莖向下的部分有些已長出根，植株3～5cm。研究表明，用改良的培養(yǎng)基加激動(dòng)素和生長素培養(yǎng)圓球莖生長效果最佳。
本發(fā)明從實(shí)驗(yàn)中找到了適宜四種雜交蘭花的育種與培養(yǎng)和快速增殖方法，為這類蘭花的雜交育種培育了創(chuàng)新材料和奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。
經(jīng)過多年努力，突破了種種技術(shù)難關(guān)，已培育出COt-1；COt-2；COi-1；COi-2四個(gè)雜交種(自命名)，可以進(jìn)行試管繁殖。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較具有的優(yōu)點(diǎn)蘭花的雜交育種已有一些報(bào)道，但采用沉香虎頭蘭變種(Cmbidiumtracyanum L castle var huang su)、大雪蘭(C.mastersii Griff)及黃蟬蘭(C.iridioides)三種蘭花作親本進(jìn)行雜交育種，突破一系列技術(shù)難關(guān)培育新品種還未見報(bào)道。此種方法不但培育出了新品種，還能進(jìn)行快速繁殖，以滿足“看葉勝看花”的產(chǎn)業(yè)化需求。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1COt-1的育種與繁殖1、材料來源兩種親本蘭株沉香虎頭蘭變種(Cmbidium tracyanum Lcastle var huang su及大雪蘭(C.mastersii Griff)采自云南山區(qū)，沉香虎頭蘭變種為母本，大雪蘭為父本；2、培養(yǎng)方法(1)雜交育種1)建立蘭花資源圃，資源圃內(nèi)的環(huán)境能人工調(diào)控，創(chuàng)造最適合蘭花生長發(fā)育的最佳環(huán)境；2)這幾種蘭花的自然花期接近一致，待父母本花序基部1～2個(gè)花蕾開放時(shí)進(jìn)行育種操作；3)育種操作洗盡手和鑷子，用手輕輕摘除父母本藥帽(花藥頂端帽狀物)，用鑷子摘下父本花粉塊，送入母本合蕊柱的腔(柱頭)內(nèi)即可；4)加強(qiáng)溫、光和肥水管理，注意防治病蟲危害，直到蘭花果實(shí)發(fā)育到九成熟，果皮略顯黃色時(shí)摘取；(2)種子無菌萌發(fā)1)外植體處理90％成熟度果實(shí)經(jīng)75％酒精消毒40秒后，轉(zhuǎn)入1％升汞表面消毒8～12分鐘，用無菌水沖洗3～4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子后，以少量無菌水潤洗5次，然后0.1mol/L KOH(氫氧化鉀)溶液預(yù)處理8～12分鐘，再用無菌水沖洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10～20分鐘，再用無菌水沖洗5次后接種到固體培養(yǎng)基中；2)種子萌發(fā)培養(yǎng)基篩選出改良MS(即1/2MS)為較適宜的基本培養(yǎng)基，加生長調(diào)節(jié)劑的配方為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L(細(xì)胞分裂素及生長素)；3)培養(yǎng)條件在整個(gè)培養(yǎng)過程中，除了種子無菌萌發(fā)采用暗箱培養(yǎng)外，圓球莖成苗的培養(yǎng)，增殖和生根培養(yǎng)均采用光照培養(yǎng)，溫度25±2℃，光照1800～2500勒克斯(lx)，每天光照12小時(shí)，培養(yǎng)基pH5.4；瓊脂7g/L，接種3個(gè)月后發(fā)芽；4)種子萌發(fā)后先長出芽，隨后長出幼根，轉(zhuǎn)接到1/2MS+KT2.0mgL-1+NAA0.5mg.L-1培養(yǎng)基中培養(yǎng)，4～6個(gè)月后逐漸成為具有根系并可煉苗和移栽的試管苗；這種技術(shù)適用于本發(fā)明的另三種雜交種實(shí)施例2COt-2的育種與繁殖父本沉香虎頭蘭變種(Cmbidium tracyanum L castle var huang su)、母本大雪蘭(C.mastersii Griff))，(1)雜交育種與實(shí)施例1相同；(2)種子無菌萌發(fā)1)外植體處理與實(shí)施例1相同；2)種子萌發(fā)培養(yǎng)基篩選出改良MS(即1/2MS)為較適宜的基本培養(yǎng)基，加生長調(diào)節(jié)劑的配方為1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L(細(xì)胞分裂素及生長素)；3)培養(yǎng)條件與實(shí)施例1相同；
4)種子萌發(fā)后先長出芽，隨后長出幼根，轉(zhuǎn)接到改良MS+KT2.5mgL-1+NAA0.2mg.L-1培養(yǎng)基中培養(yǎng)，4～6個(gè)月后逐漸成為具有根系并可煉苗和移栽的試管苗。
實(shí)施例3COi-1的育種與繁殖父本大雪蘭(C.mastersii Griff)，母本黃蟬蘭(C.iridioides)，育種與繁殖方法與實(shí)施例1或?qū)嵤├?相同。
實(shí)施例4COi-2的育種與繁殖父本黃蟬蘭(C.iridioides)，母本大雪蘭(C.mastersii Griff)，育種與繁殖方法與實(shí)施例1或?qū)嵤├?相同。
權(quán)利要求
1.一種珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行(1)材料將采得的沉香虎頭蘭變種、大雪蘭及黃蟬蘭蘭株在資源圃內(nèi)進(jìn)行雜交育種和果實(shí)培育，待培育至蘭花果實(shí)到九成熟，果皮略顯黃色時(shí)摘?。?2)培養(yǎng)方法1)雜交育種；2)種子無菌萌發(fā)①外植體處理90％成熟度果實(shí)經(jīng)75％酒精消毒40秒后，轉(zhuǎn)入1％升汞表面消毒8～12分鐘，用無菌水沖洗3～4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子后，以少量無菌水潤洗5次，然后0.1mol/L KOH溶液預(yù)處理8～12分鐘，再用無菌水沖洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10～20分鐘，再用無菌水沖洗5次后接種到固體培養(yǎng)基中；②種子萌發(fā)篩選出改良MS基本培養(yǎng)基，加生長調(diào)節(jié)劑后為1/2MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L培養(yǎng)基；③培養(yǎng)條件在整個(gè)培養(yǎng)過程中，種子無菌萌發(fā)采用暗箱培養(yǎng)，圓球莖成苗的培養(yǎng)、增殖和生根培養(yǎng)均采用光照培養(yǎng)，光照1800～2500勒克斯，每天光照12小時(shí)，溫度24±2℃，培養(yǎng)基pH5.4，瓊脂7g/L，接種3～6個(gè)月后發(fā)芽率達(dá)90％以上；④種子萌發(fā)長出幼根時(shí)，轉(zhuǎn)接到1/2MS+KT1.5～2.5mgL-1+NAA0.2～0.5mg.L-1培養(yǎng)基中培養(yǎng)，4～6個(gè)月后逐漸成為具有根系并可煉苗和移栽的試管苗。
全文摘要
本發(fā)明是一種珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法。其特征在于將采得的沉香虎頭蘭變種(Cmbidium tracyanum L castle var huang su)、大雪蘭(C.mastersii Griff)及黃蟬蘭(C. iridioides)蘭株在資源圃內(nèi)進(jìn)行雜交育種和果實(shí)培育，經(jīng)雜交育、種子無菌萌發(fā)種、外植體處理、種子萌發(fā)、種子萌發(fā)長出幼根轉(zhuǎn)接培養(yǎng)等得到。采用沉香虎頭蘭變種、大雪蘭及黃蟬蘭三種蘭花作親本進(jìn)行雜交育種，突破一系列技術(shù)難關(guān)培育新品種還未見報(bào)道。此種方法不但培育出了新品種，還能進(jìn)行快速繁殖，以滿足“看葉勝看花”的產(chǎn)業(yè)化需求。
文檔編號A01H1/02GK1729756SQ20051001076
公開日2006年2月8日 申請日期2005年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月22日
發(fā)明者李枝林, 余朝秀, 王卜瓊, 王玉英, 黃麗萍 申請人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué)