專利名稱：復(fù)合型玉米種衣劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)合型玉米種衣劑及其制備方法，本玉米種衣劑由多種具較強抑菌活性的拮抗木霉菌和內(nèi)生細菌、化學(xué)農(nóng)藥克百威和烯唑醇以及相關(guān)助劑復(fù)配加工而成，用于防治玉米土傳病害、促進玉米生長。
背景技術(shù)：
玉米土傳病害一直被視為頑疾，上世紀90年代以來又有逐年加重的趨勢。一般年份發(fā)病率大約在10-30％，嚴重年份甚至可達60％以上，使得玉米的產(chǎn)量顯著降低；特別是絲黑穗病在一些地區(qū)甚至造成絕收。目前玉米土傳病害的防治上，主要采用化學(xué)種衣劑進行種子包衣，如多菌靈、福美雙、三唑醇等，殺菌劑有效成分含量高達20％以上，易引起人畜及作物本身中毒；而生物型種衣劑僅以生防菌作為其活性成份，易受環(huán)境因素影響，藥效緩慢且不穩(wěn)定，推廣應(yīng)用面積有限。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種復(fù)合型玉米種衣劑及其制備方法，制備的復(fù)合型玉米種衣劑能在降低化學(xué)農(nóng)藥的殘留和藥害的同時，有效防治玉米主要土傳病害、促進玉米生長。
為實現(xiàn)這樣的目的，本發(fā)明利用具有較強生物防治能力的活性成分拮抗木霉菌和拮抗內(nèi)生細菌菌株，分別加以培養(yǎng)后，與化學(xué)農(nóng)藥克百威和烯唑醇，相關(guān)助劑十二烷基苯磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉、羅丹明B和聚乙二醇，添加劑SA(誘抗劑水揚酸)和無機離子，復(fù)配制得含重量百分比為5％的化學(xué)原藥的種衣劑，可成功防治玉米莖基腐病、絲黑穗病菌、紋枯病菌等土傳病害。
本發(fā)明的復(fù)合型玉米種衣劑的組分除蒸餾水外，以重量百分比計，包含化學(xué)原藥烯唑醇2％，克百威3％；助劑十二烷基苯磺酸鈉(助劑1)1.5％，羧甲基纖維素鈉(助劑2)2％，羅丹明B(助劑3)1％，聚乙二醇(助劑4)2％，SA水楊酸0.01％；
無機離子K2HPO31％，MgSO40.1％，CaCO30.1％，ZnSO40.01％，四硼酸鉀0.01％。
拮抗木霉菌孢子濃度為108個/毫升，拮抗內(nèi)生細菌濃度為1010cfu/毫升。
本發(fā)明的復(fù)合型玉米種衣劑制備方法按如下步驟進行1.拮抗內(nèi)生細菌的培養(yǎng)將拮抗內(nèi)生細菌接種于改進的LB(蛋白胨-酵母膏-氯化鈉)液體培養(yǎng)基中，25℃135rpm培養(yǎng)4天后，5000rpm離心5分鐘，棄上清液，用無菌蒸餾水洗滌沉淀，5000rpm離心5分鐘，棄上清液，洗滌3次后用少量無菌蒸餾水懸浮菌體，得到拮抗內(nèi)生細菌菌懸液，用于復(fù)合型種衣劑的配制。
2.拮抗木霉菌的培養(yǎng)將拮抗木霉菌按常規(guī)方法接種于改良的PDA(馬鈴薯—葡萄糖—瓊脂)(大量生產(chǎn)時，可采用小麥粒培養(yǎng)基)培養(yǎng)基上，于25℃下培養(yǎng)4-6天，菌落表面大量產(chǎn)生分生孢子，用無菌蒸餾水將孢子洗下(5000rpm離心10分鐘)，反復(fù)洗孢子三次，配成高濃度的拮抗木霉菌孢子懸液，用于復(fù)合型種衣劑的加工。
3、以重量百分比計，將化學(xué)原藥2％烯唑醇、3％克百威粉碎、研磨，并與1.5％十二烷基苯磺酸鈉(助劑1)、0.01％水楊酸及無機離子K2HPO31％，MgSO40.1％，CaCO30.1％，ZnSO40.01％，四硼酸鉀0.01％混合，加入蒸餾水攪拌均勻。
4、在上述混合液中依次加入重量百分比為2％的羧甲基纖維素鈉(助劑2)、1％的羅丹明B(助劑3)、2％的聚乙二醇(助劑4)，攪拌成均勻的黏稠液，進行液體研磨。
5、分別將步驟1和步驟2得到的拮抗內(nèi)生細菌菌懸液及拮抗木霉菌孢子懸液加入到研磨好的上述黏稠液中，振蕩混合均勻，調(diào)節(jié)拮抗內(nèi)生細菌終濃度為1010cfu/毫升，拮抗木霉菌孢子濃度為108個/毫升。得到復(fù)合型玉米種衣劑。
本發(fā)明中種衣劑活性成分之一拮抗木霉菌菌株系采用土壤稀釋法從玉米根際土壤分離純化獲得、經(jīng)平板對峙法多次篩選得到的對腫囊腐霉(Pythiuminflatum)、禾谷鐮孢菌(Fusarium graminearum)、串珠鐮孢菌(F.moniliforme)和立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)有較強抑制能力的菌株。
種衣劑另一活性成分拮抗內(nèi)生細菌系采用平板稀釋法分離自玉米根部、并經(jīng)平板抑菌試驗篩選獲得的對上述四種病原真菌(腫囊腐霉、禾谷鐮孢菌、串珠鐮孢菌和立枯絲核菌)具有明顯抑制作用的細菌菌株。
本發(fā)明為避免木霉菌菌株間的抑制、更好地發(fā)揮其協(xié)同拮抗病原菌的作用，同時為了避免內(nèi)生細菌菌株間相互抑制而降低內(nèi)生定殖能力，分別測定拮抗木霉菌菌株相互間及拮抗內(nèi)生細菌相互間的親和性，篩選出親和性好的拮抗木霉菌和親和性好的內(nèi)生細菌菌株作為復(fù)合型種衣劑生產(chǎn)使用的菌株。木霉菌菌株包括TS2、TB9和T21；拮抗內(nèi)生細菌菌株有B20-006和B21-070。
本發(fā)明為玉米土傳病害的可持續(xù)生態(tài)化防治提供一種新的方法，可成功防治玉米絲黑穗病、玉米莖基腐病、玉米紋枯病等土傳病害。其中對玉米絲黑穗病的防效與化學(xué)型種衣劑20％黑穗凈相當。
本發(fā)明所得的復(fù)合型玉米種衣劑，能有效防治玉米主要土傳病害、促進玉米生長，克服單一使用化學(xué)種衣劑易引起藥害和農(nóng)藥殘留、以及單一使用生物型種衣劑防病效果不理想等方面的不足，既具有與常規(guī)種衣劑相當?shù)姆乐涡Ч?，又降低了化學(xué)農(nóng)藥的用量，適合于玉米病害的持續(xù)生態(tài)化控制。
具體實施例方式
以下結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步描述。
實施例11.拮抗內(nèi)生細菌的培養(yǎng)將拮抗內(nèi)生細菌B20-006接種于改進的LB液體培養(yǎng)基中，25℃135rpm培養(yǎng)4天，5000rpm離心5分鐘，棄上清液，用無菌水洗滌沉淀，再5000rpm離心5分鐘，棄上清液，洗滌3次后用少量無菌蒸餾水懸浮菌體備用。
2.拮抗木霉菌的培養(yǎng)將拮抗木霉菌T21接種于改良的PDA固體培養(yǎng)基上(大量生產(chǎn)時，可采用小麥粒培養(yǎng)基)，25℃下培養(yǎng)6天后，菌落表面產(chǎn)生大量分生孢子，用無菌蒸餾水將孢子洗下，5000rpm離心10分鐘，棄上清，重洗沉淀，反復(fù)3次，然后配成高濃度的孢子懸液備用。
3.以重量百分比計，將化學(xué)原藥2％烯唑醇、3％克百威粉碎、研磨，并與1.5％十二烷基苯磺酸鈉(助劑1)、0.01％水楊酸及無機離子K2HPO31％，MgSO40.1％，CaCO30.1％，ZnSO40.01％，四硼酸鉀0.01％混合，加入300毫升蒸餾水攪拌均勻。
4.在上述混合液中依次加入重量百分比為2％的羧甲基纖維素鈉(助劑2)、1％的羅丹明B(助劑3)、2％的聚乙二醇(助劑4)，攪拌成均勻的黏稠液，進行液體研磨。
5.分別將步驟1和步驟2得到的拮抗內(nèi)生細菌菌懸液及拮抗木霉菌孢子懸液加入到研磨好的上述黏稠液中，振蕩混合均勻，調(diào)節(jié)拮抗內(nèi)生細菌終濃度為1010cfu/毫升，拮抗木霉菌孢子濃度為108個/毫升，加蒸餾水補足500毫升，即得到復(fù)合型玉米種衣劑。田間對絲黑穗病防效可達80.0％實施例21.拮抗內(nèi)生細菌的培養(yǎng)將拮抗內(nèi)生細菌B21-070接種于改進的LB液體培養(yǎng)基中，25℃135rpm培養(yǎng)4天，5000rpm離心5分鐘，棄上清液，用無菌蒸餾水洗滌沉淀，再5000rpm離心5分鐘，棄上清液，洗滌3次后用少量無菌蒸餾水懸浮菌體備用。
2.拮抗木霉菌的培養(yǎng)將拮抗木霉菌TS2接種于改良的PDA固體培養(yǎng)基上(同上)，25℃下培養(yǎng)6天后，菌落表面產(chǎn)生大量分生孢子，用適量無菌蒸餾水將分生孢子洗下，5000rpm離心10分鐘，棄上清，重洗沉淀，反復(fù)3次，然后配成高濃度的孢子懸液備用。
3.以重量百分比計，將化學(xué)原藥2％烯唑醇、3％克百威粉碎、研磨，并與1.5％十二烷基苯磺酸鈉(助劑1)、0.01％水楊酸及無機離子K2HPO31％，MgSO40.1％，CaCO30.1％，ZnSO40.01％，四硼酸鉀0.01％混合，加入500毫升蒸餾水攪拌成均勻的黏稠狀液體。
4.在上述混合液中依次加入重量百分比為2％的羧甲基纖維素鈉(助劑2)、1％的羅丹明B(助劑3)、2％的聚乙二醇(助劑4)，攪拌成均勻的黏稠液，進行液體研磨。
5.分別將步驟1和步驟2得到的拮抗內(nèi)生細菌菌懸液及拮抗木霉菌孢子懸液加入到研磨好的上述黏稠液中，振蕩混合均勻，調(diào)節(jié)拮抗內(nèi)生細菌終濃度為1010cfu/毫升，拮抗木霉菌孢子濃度為108個/毫升，加無菌蒸餾水補足1000毫升，即得到復(fù)合型玉米種衣劑，田間對絲黑穗病的防效可達90.0％。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合型玉米種衣劑，其特征在于種衣劑的組分除蒸餾水外，以重量百分比計，包含烯唑醇2％，克百威3％，十二烷基苯磺酸鈉1.5％，羧甲基纖維素鈉2％，羅丹明B 1％，聚乙二醇2％，水楊酸0.01％，K2HPO31％，MgSO40.1％，CaCO30.1％，ZnSO40.01％，四硼酸鉀0.01％，拮抗木霉菌孢子濃度為108個/毫升，拮抗內(nèi)生細菌濃度為1010cfu/毫升。
2.一種復(fù)合型玉米種衣劑的制備方法，其特征在于按如下步驟進行1)拮抗內(nèi)生細菌的培養(yǎng)將拮抗內(nèi)生細菌接種于蛋白胨—酵母膏—氯化鈉液體培養(yǎng)基中，25℃ 135rpm培養(yǎng)4天后，5000rpm離心5分鐘，棄上清液，用無菌蒸餾水洗滌沉淀，5000rpm離心5分鐘，棄上清液，洗滌3次后用無菌蒸餾水懸浮菌體，得到拮抗內(nèi)生細菌菌懸液；2)拮抗木霉菌的培養(yǎng)將拮抗木霉菌接種于馬鈴薯—葡萄糖—瓊脂PDA培養(yǎng)基上，于25℃下培養(yǎng)4-6天，菌落表面大量產(chǎn)生分生孢子，用無菌蒸餾水將孢子洗下，配成高濃度的拮抗木霉菌孢子懸液；3)以重量百分比計，將化學(xué)原藥2％烯唑醇、3％克百威粉碎、研磨，并與1.5％十二烷基苯磺酸鈉、0.01％水楊酸及K2HPO31％、MgSO40.1％、CaCO30.1％、ZnSO40.01％、四硼酸鉀0.01％混合，加入蒸餾水攪拌均勻；4)在上述混合液中依次加入重量百分比為2％的羧甲基纖維素鈉、1％的羅丹明B、2％的聚乙二醇，攪拌成均勻的黏稠液，進行液體研磨；5)分別將步驟1和步驟2得到的拮抗內(nèi)生細菌菌懸液及拮抗木霉菌孢子懸液依次加入到研磨好的上述黏稠液中，振蕩混合均勻，調(diào)節(jié)拮抗內(nèi)生細菌終濃度為1010cfu/毫升，拮抗木霉菌孢子濃度為108個/毫升，得到復(fù)合型玉米種衣劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的復(fù)合型玉米種衣劑的制備方法，其特征在于所述木霉菌菌株包括TS2、TB9和T21，系采用土壤稀釋法從玉米根際土壤分離所得、采用平板對峙法篩選出的對腫囊腐霉、禾谷鐮孢菌、串珠鐮孢菌以及立枯絲核菌具有明顯抑菌活性的菌株，并經(jīng)過親和性測定最終選定的菌株。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的復(fù)合型玉米種衣劑的制備方法，其特征在于所述拮抗內(nèi)生細菌菌株包括B20-006和B21-070，系采用平板稀釋法分離自玉米根部、并經(jīng)平板抑菌試驗篩選獲得的對腫囊腐霉、禾谷鐮孢菌、串珠鐮孢菌以及立枯絲核菌具有明顯抑制作用的細菌菌株，并經(jīng)過親和性測定最終選定的菌株。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)合型玉米種衣劑及其制備方法，將化學(xué)農(nóng)藥烯唑醇、克百威以及十二烷基苯磺酸鈉、水楊酸及無機離子，四硼酸鉀混合，加入蒸餾水攪拌均勻后，再加入助劑羧甲基纖維素鈉、羅丹明B、聚乙二醇，攪拌成均勻的黏稠液，進行液體研磨，然后加入分別經(jīng)培養(yǎng)后得到的拮抗內(nèi)生細菌菌懸液及拮抗木霉菌孢子懸液，振蕩混合均勻，調(diào)節(jié)拮抗內(nèi)生細菌終濃度和拮抗木霉菌孢子濃度，復(fù)配制得含重量百分比為5％的化學(xué)原藥的復(fù)合型玉米種衣劑。本發(fā)明所得的種衣劑既具有與常規(guī)種衣劑相當?shù)姆乐涡Ч?，又降低了化學(xué)農(nóng)藥的用量，適合于玉米病害的持續(xù)生態(tài)化控治，可防治玉米絲黑穗病、莖基腐病、紋枯病等土傳病害。
文檔編號A01C1/06GK1718000SQ20051002869
公開日2006年1月11日 申請日期2005年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月11日
發(fā)明者陳捷, 鄭俊強, 徐書法, 高增貴, 程根武 申請人:上海交通大學(xué)