專利名稱：一種sod冬棗及其生產方法
技術領域：
本發(fā)明涉及SOD冬棗及其生產方法，特別是涉及一種具有較高SOD酶活性的冬棗及其生產方法。
背景技術：
冬棗又名蘋果棗、凍棗等，屬鼠李目，鼠李科，棗屬，因在寒露后成熟而得名。冬棗的樹干灰色，樹皮裂紋均勻，葉面卵形或披針形，葉片互生，葉片向正面卷曲，革質，無毛；果實扁圓或短圓錐形，褐紅色，果肉乳白，肉質細嫩、脆，汁液多，甜味濃，清香，每百克果肉含維生素C 650mg；栽后3-4年即可結果。
芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175是一種對植物有益的內生共生菌。SOD酶是生物的重要保護酶之一，能增強機體的抗逆能力，并且具有防衰老的功效。益微SOD是中國農業(yè)大學的專利產品(專利號為93103774.3)，是由芽孢桿菌(Bacillusspp.)制備而成，已有制劑、制品、粗酶、精酶、結晶五個層次的產品。益微SOD用于植物，具有增產、改善品質、提高SOD酶含量的作用。益微SOD酶的獨特優(yōu)點是耐熱性好，在深加工和貯藏過程中不易失活。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種具有較高SOD酶活性的冬棗。
本發(fā)明所提供的冬棗，是在常規(guī)栽培管理條件下，從花期開始，在冬棗結果樹的樹冠噴施濃度為1.0×107-5.0×107cfu/mL芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的菌液后得到的果實。
為獲得具有更高SOD酶活性的冬棗，噴施的芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的菌液為益微SOD制劑的稀釋液。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種上述冬棗的生產方法。
本發(fā)明所提供的生產方法，是在常規(guī)栽培管理條件下，從花期開始，在冬棗結果樹的樹冠噴施濃度為1.0×107-5.0×107cfu/mL芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的菌液，每隔15-25天噴施一次，共噴3-8次，得到具有較高SOD酶活性的冬棗。
所述芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的菌液濃度優(yōu)選為2.5×107-4.5×107cfu/mL；菌液噴施的間隔時間優(yōu)選為20天，噴施次數(shù)優(yōu)選為5次。
所述噴施的芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的菌液優(yōu)選為益微SOD制劑的800-1200倍稀釋液，更優(yōu)選為1000倍稀釋液。
本發(fā)明提供了一種具有較高SOD酶活性的冬棗。該冬棗是在冬棗常規(guī)的栽培管理條件下，在特定時期用有益內生菌芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175(優(yōu)選為益微SOD菌劑)進行處理，芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175在冬棗樹體內繁殖、轉移，從而提高冬棗體內的SOD活性和含量，最終得到富含SOD酶的冬棗，即SOD冬棗。本發(fā)明的SOD冬棗具有以下優(yōu)點1)除保持了原有冬棗的優(yōu)良性狀外，SOD含量明顯提高，可達500-800IU/g，且產生的SOD酶具有較強的耐熱能力，在70℃條件下處理1小時，酶活為原酶活的47％；100℃條件下處理30分鐘，酶活為原酶活的37％；2)對臭氧、高酸也具有較強的耐性；3)具有增強人體免疫力和延緩衰老的功效，食用安全性高；4)生產方法簡單，成本低廉?；谏鲜鰞?yōu)點，本發(fā)明具有廣闊的市場前景。
下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。
具體實施例方式
下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法，所述百分含量均為質量百分含量。
實施例1、冬棗的獲得及其SOD酶活性的測定一、SOD冬棗的獲得在冬棗常規(guī)的栽培管理條件下，從花期開始，在冬棗結果樹的樹冠噴施濃度為1.0×107-5.0×107cfu/mL芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的菌液，以清水作為對照(其余栽培管理條件均相同)，每隔25天噴施一次，共噴6次，最終得到SOD冬棗。
二、SOD活性的測定采用NBT光化學法測定步驟一獲得的冬棗的SOD活性，具體方法如下主要設備752型分光光度計、臺式離心機、光照培養(yǎng)箱。
試劑氯化硝基氮藍四唑(NBT)，上海前進制劑廠生產；L-甲硫氨酸(L-Met)，上海康達氨基酸廠生產；乙二胺四乙酸(EDTA)，北京化工廠生產；核黃素(VB2)，北京西中化工廠生產。
NBT反應液配制pH7.8，50mmol/L的磷酸緩沖液1000mL，加入1.933mg的L-Met，待完全溶解后，加入45.8mg NBT，0.47mg核黃素(使用時，先配成0.47mg/mL溶液，吸取1mL即可)和29.0mgEDTA，得到NBT反應液，各成分的終濃度Met為13mmol/L，NBT為6.3×10-3mmol/L，核黃素為1.3×10-3mmol/L，EDTA為0.1mmol/L。置于棕色試劑瓶中，用黑布罩遮光，于4℃冰箱中可保存1個月。
1、材料的預處理將步驟一獲得的冬棗果肉用研缽研碎，再按照果肉∶50mM磷酸緩沖液＝1∶2的體積比加入緩沖液，混勻后，10000rpm離心10分鐘，取上清液進行SOD酶活測定。
2、SOD酶活測定吸取30μl步驟1經預處理的樣品，放入10mL透明玻璃小燒杯中，加入3mL NBT反應液，混勻，在28℃的SOD光化反應室中，用2×15W日光燈光照20分鐘(光照為4000勒克司)，再在560nm處測定吸光度，以NBT反應液作空白對照，每組設3次重復，整個測定過程除光化反應外，均在避光條件下進行，同時以美國″Sigma″公司、上海寶安公司的標準SOD酶和貴州老來福藥業(yè)公司生產的SOD口服液作為測試對照。
3、計算酶活SOD酶活(IU/g)＝(OD對照-OD樣品)/(1/2OD對照)×稀釋倍數(shù)重復測定3次，結果步驟一獲得的冬棗的SOD酶活為570.6IU/g，而對照冬棗的SOD酶活僅為300.5IU/g，且在a＝0.05水平差異顯著，酶活提高達89.9％，表明用本發(fā)明的方法可獲得具有較高SOD酶活的保健冬棗。
實施例2、冬棗的獲得及其SOD酶活性的測定一、益微SOD制劑的制備1、芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的發(fā)酵滅菌條件溫度121-125℃，壓力0.11-0.14MPa，時間30min。
培養(yǎng)條件溫度28-34℃，壓力0.05mpa，通氣值1∶1，pH值7-7.5。
放罐指標含菌量≥70億/mL，芽孢形成≥70％，雜菌率≤0.3％。
1)菌種的獲得從芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175原菌種斜面上挑取少許在備用斜面試管內劃線，置于28℃溫箱中培養(yǎng)24h，取出檢查，確認無雜菌污染，菌體生長整齊時，再繼續(xù)培養(yǎng)36h，然后涂片、染色，并在油鏡下觀察，無雜菌污染，孢子整齊時，作為發(fā)酵生產的菌種。
2)發(fā)酵發(fā)酵生產分種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)兩部分進行，發(fā)酵液達到規(guī)定指標時及時放罐。
2、制備生物制劑1)添加吸附劑向步驟1中的發(fā)酵液中投入6倍菌體重量的細度為0.09mm的輕質碳酸鈣(也可用草炭或腐植酸)，然后機械攪拌5小時，使菌體充分被載體輕質碳酸鈣吸附。
2)壓濾采用明流式板扛壓濾機濾去多余水份。
3)干燥低溫干燥(不超過70℃)，使含水率≤5％。
4)粉碎用超細度粉碎機粉碎，細度要求為100％通過0.09mm孔徑篩，得到益微SOD制劑。所得益微SOD制劑為白色或灰色粉末，芽孢桿菌含量為3.0×1010cfu/g，含水率≤5％，細度為100％通過0.09mm篩。
二、SOD冬棗的獲得及其SOD酶活性的測定在冬棗的常規(guī)栽培管理條件下，從花期開始，在冬棗結果樹的樹冠噴施益微SOD制劑的1000倍稀釋液，以清水作為對照(其余栽培管理條件均相同)，每隔20天噴施一次，共噴5次，最終得到冬棗。用與實施例1相同的方法測定所獲冬棗的SOD酶活性，重復測定3次，結果噴施益微SOD制劑的冬棗的SOD酶活為583.6IU/g，而對照冬棗的SOD酶活僅為303.3IU/g，且在a＝0.05水平差異顯著，酶活提高達92.4％，表明用本發(fā)明的方法可獲得具有較高SOD酶活的保健冬棗。
實施例3、冬棗中SOD的耐熱性檢測對實施例2獲得的具有較高SOD酶活性的冬棗及對照冬棗中的SOD進行耐熱性檢測。先按實施例1的SOD酶活測定方法中所述的對待測及對照冬棗樣品進行預處理，再將待測和對照冬棗樣品在100℃中保持20分鐘，最后測定經熱處理的待測和對照冬棗樣品的SOD酶活，實驗重復三次，酶活測定結果如表1所示，經過熱處理后，SOD冬棗中仍保持較高的SOD酶活，但對照冬棗中的SOD酶活性急劇降低，表明用本發(fā)明方法獲得的具有較高SOD酶活的冬棗適于在常溫下保存和進行深加工，SOD活性穩(wěn)定。
表1 冬棗中SOD的抗熱性實驗結果

權利要求
1.一種SOD冬棗，是在常規(guī)栽培管理條件下，從花期開始，在冬棗結果樹的樹冠噴施濃度為1.0×107-5.0×107cfu/mL芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的菌液后得到的果實。
2.根據(jù)權利要求1所述的冬棗，其特征在于所述噴施的芽孢桿菌(Bacillusspp.)CGMCC 0175的菌液為益微SOD制劑的稀釋液。
3.一種權利要求1所述冬棗的生產方法，是在常規(guī)栽培管理條件下，從花期開始，在冬棗結果樹的樹冠噴施濃度為1.0×107-5.0×107cfu/mL芽孢桿菌(Bacillusspp.)CGMCC 0175的菌液，每隔15-25天噴施一次，共噴3-8次，得到冬棗。
4.根據(jù)權利要求3所述的生產方法，其特征在于所述芽孢桿菌(Bacillus spp.)CGMCC 0175的菌液濃度為2.5×107-4.5×107cfu/mL；噴施的間隔時間為20天，噴施次數(shù)為5次。
5.根據(jù)權利要求3所述的生產方法，其特征在于所述噴施的芽孢桿菌(Bacillusspp.)CGMCC 0175的菌液為益微SOD制劑的800-1200倍稀釋液。
6.根據(jù)權利要求5所述的生產方法，其特征在于所述噴施的芽孢桿菌(Bacillusspp.)CGMCC 0175的菌液為益微SOD制劑的1000倍稀釋液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種SOD冬棗及其生產方法。該冬棗是在常規(guī)栽培管理條件下，從花期開始，在冬棗結果樹的樹冠噴施濃度為1.0×10
文檔編號A01G7/00GK1799329SQ20051013551
公開日2006年7月12日 申請日期2005年12月28日 優(yōu)先權日2005年12月28日
發(fā)明者王 琦, 趙國防, 張金海, 梅汝鴻 申請人:中國農業(yè)大學