專利名稱：中藥材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法。
背景技術(shù)：
枳殼為蕓香科植物酸橙及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)，主要分布于江 西、湖南和四川。枳殼是一種常用中藥，性微苦，味苦、酸，具有理氣寬中、 行滯消脹、化痰等功效，主治胸腹?jié)M悶脹痛、食積不化、痰飲內(nèi)停、胃下垂、 脫肛、子宮脫垂等癥。目前，枳殼的繁殖多采用播種和嫁接的方法，而種子繁 殖后代易出現(xiàn)變異，不能很好地保持母樹(shù)的優(yōu)良特性；嫁接繁殖雖能保持良種 的特性，但嫁接費(fèi)工費(fèi)時(shí)，且技術(shù)性強(qiáng)，短時(shí)間內(nèi)不能達(dá)到良種枳殼快速繁殖 的目的。賀紅(1998)曾報(bào)道過(guò)枳殼(枸橘尸o/7"'7Y^ ^^'/o/j'WeRaf.)的組 織培養(yǎng)和植株再生研究，但是以實(shí)生苗上胚軸為材料進(jìn)行的離體培養(yǎng)，并不能 很好地保證優(yōu)良品種的遺傳穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種生長(zhǎng)繁殖快、遺傳穩(wěn)定性好、成活率高的中藥 材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法。
本發(fā)明的中藥材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法，包括以下步驟
1、 無(wú)菌系的建立以枳殼新生健壯幼嫩莖段為外植體，用洗潔精清洗外
植體表面，并用流水沖洗l-2h，然后在超凈工作臺(tái)上分別用O. l%HgCUB75% 酒精進(jìn)行滅菌處理，將其切成1-2 cm長(zhǎng)的莖段，接種在已滅菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基 MS+6-BA 0.5-2.0 mg/L+IAA 0. 1-1.5 mg/L+CH 400上，7-12天后，獲得無(wú)菌 系，培養(yǎng)溫度(25±1) °C，光照時(shí)間為10-12 h*d—'，光照強(qiáng)度為30 40 ti mol nf2 s、
2、 增殖培養(yǎng)待誘導(dǎo)培養(yǎng)的腋芽長(zhǎng)至2-3cm時(shí)，將其切下轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng) 基MS+6-BA 0. 1-1.0 mg/L +IAA 0. 1-1.0 mg/L + CH 400進(jìn)行增殖培養(yǎng)，增殖 培養(yǎng)周期為15-25天，長(zhǎng)出密集叢生的不定芽，培養(yǎng)溫度(25±1) °C，光照 時(shí)間為10-12 h d—、光照強(qiáng)度為30 40 u mol m—2 s—';
3、 生根培養(yǎng)待增殖培養(yǎng)的不定芽長(zhǎng)至2 3 cm時(shí)，將其切下轉(zhuǎn)接到生 根培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0. 5-2. 0 mg/L +IBA 1. 0-2. 0 mg/L + CH 400」，進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)，20-30天后，幼苗基部平均有3 4條白色粗壯的根出現(xiàn)，生根率 可達(dá)80%，培養(yǎng)溫度(25±1) °C，光照時(shí)間為10-12 h d—'，光照強(qiáng)度為30 40 y mol m-2 s—、
4、組培苗移栽待生根組培苗長(zhǎng)到3 4cm時(shí)，掀去封口膜，煉苗3天， 取出組培苗并洗凈根部培養(yǎng)基，移栽入滅菌的營(yíng)養(yǎng)土中，按緊苗木基部，使土 壤與苗木根系緊密接觸，覆蓋塑料薄膜，早晚噴水各l次，15天后，組培苗成 活。
本發(fā)明的中藥材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法，以枳殼新生枝條為材料快速繁殖 大量無(wú)菌組培苗，可周年生產(chǎn)枳殼良種苗木， 一年四季均可移栽，且成活率高 達(dá)80%以上，通過(guò)組織培養(yǎng)生產(chǎn)出的枳殼種苗具有生長(zhǎng)繁殖快、遺傳穩(wěn)定性好 等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
一種中藥材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法，包括以下步驟
1、 無(wú)菌系的建立以枳殼新生健壯幼嫩莖段為外植體，用洗潔精清洗外
植體表面，并用流水沖洗1-2 h，然后在超凈工作臺(tái)上分別用0. P/。HgC]2和75% 酒精進(jìn)行滅菌處理，將其切成1-2 cm長(zhǎng)的莖段，接種在己滅菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基 MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L+CH 400上，10-15天后，獲得無(wú)菌系，培養(yǎng) 溫度(25士1)。C，光照時(shí)間為10-12 h d—'，光照強(qiáng)度為30 40 u mol m—2 s—';
2、 增殖培養(yǎng)待誘導(dǎo)培養(yǎng)的腋芽長(zhǎng)至2-3cm時(shí)，將其切下轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng) 基MS+6-BA 0. 5 mg/L +IAA 0. 25 mg/L + CH 400進(jìn)行增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)周 期為20-25天，生長(zhǎng)出不定芽，培養(yǎng)溫度(25士irC，光照時(shí)間為10-12h d-'， 光照強(qiáng)度為30 40 P mol m—2 s—';
3、 生根培養(yǎng)待增殖培養(yǎng)的不定芽長(zhǎng)至2 3 cm時(shí)，將其切下轉(zhuǎn)接到生 根培養(yǎng)基1/2MS+NAA 1.0 mg/L +IBA2. 0 mg/L + CH 400上，進(jìn)行不定根的誘 導(dǎo)，25-30天后，幼苗基部平均有3 4條白色粗壯的根出現(xiàn)，生根率可達(dá)80%， 培養(yǎng)溫度(25±1) °C，光照時(shí)間為10-12 h'd—、光照強(qiáng)度為30 40 ti mol m—2 s—、
4、 組培苗移栽待生根組培苗長(zhǎng)到3 4cm時(shí)，掀去封口膜，煉苗3天， 取出組培苗并洗凈根部培養(yǎng)基，移栽入滅菌的營(yíng)養(yǎng)土中，按緊苗木基部，使土 壤與苗木根系緊密接觸，覆蓋塑料薄膜，早晚噴水各l次，15天后，組培苗成 活。
權(quán)利要求
1、一種中藥材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法，其特征在于它包括以下步驟(1)、無(wú)菌系的建立以枳殼新生健壯幼嫩莖段為外植體，用洗潔精清洗外植體表面，并用流水沖洗1-2h，然后在超凈工作臺(tái)上分別用0.1％HgCl2和75％酒精進(jìn)行滅菌處理，將其切成1-2cm長(zhǎng)的莖段，接種在已滅菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA 0.5-2.0mg/L+IAA 0.1-1.5mg/L+CH 400上，7-12天后，獲得無(wú)菌系，培養(yǎng)溫度(25±1)℃，光照時(shí)間為10-12h·d-1，光照強(qiáng)度為30～40μmol·m-2·s-1；(2)、增殖培養(yǎng)待誘導(dǎo)培養(yǎng)的腋芽長(zhǎng)至2-3cm時(shí)，將其切下轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 0.1-1.0mg/L+IAA 0.1-1.0mg/L+CH 400進(jìn)行增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)周期為15-25天，生長(zhǎng)出不定芽，培養(yǎng)溫度(25±1)℃，光照時(shí)間為10-12h·d-1，光照強(qiáng)度為30～40μmol·m-2·s-1；(3)、生根培養(yǎng)待增殖培養(yǎng)的不定芽長(zhǎng)至2～3cm時(shí)，將其切下轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.5-2.0mg/L+IBA 1.0-2.0mg/L+CH 400上，進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)20-30天，培養(yǎng)溫度(25±1)℃，光照時(shí)間為10-12h·d-1，光照強(qiáng)度為30～40μmol·m-2·s-1；(4)、組培苗移栽待生根組培苗長(zhǎng)到3～4cm時(shí)，掀去封口膜，煉苗3天，取出組培苗并洗凈根部培養(yǎng)基，移栽入滅菌的營(yíng)養(yǎng)土中，按緊苗木基部，使土壤與苗木根系緊密接觸，覆蓋塑料薄膜，早晚噴水各1次，15天后即可。
全文摘要
一種中藥材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法，包括以下步驟無(wú)菌系的建立、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及組培苗移栽，它采用枳殼莖段為外植體進(jìn)行組培繁育，克服了枳殼以往種子繁育和嫁接繁育方法的缺陷。本發(fā)明的中藥材枳殼組織培養(yǎng)繁育方法，以枳殼新生枝條為材料快速繁殖大量無(wú)菌組培苗，可周年生產(chǎn)枳殼良種苗木，一年四季均可移栽，且成活率高達(dá)80％以上，通過(guò)組織培養(yǎng)生產(chǎn)出的枳殼種苗具有生長(zhǎng)繁殖快、遺傳穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101300959SQ20081010698
公開(kāi)日2008年11月12日 申請(qǐng)日期2008年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日
發(fā)明者朱培林, 楊春霞, 黃小春 申請(qǐng)人:江西省林業(yè)科學(xué)院