專利名稱:金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法,尤其是涉及金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù):
金心黃菖蒲為鳶尾科鳶尾屬植物,多年生濕生或挺水宿根草本植物,植株高大,葉 子茂密,新葉呈黃色,花莖呈淡黃色稍高出于葉,花期為5-6月。金心黃菖蒲是水生花卉中 的驕子,春天新葉黃色,花色黃艷,花姿秀美,觀賞價值極高,并且適應(yīng)范圍廣泛,可在水池 邊露地栽培,亦可在水中挺水栽培,效果很好。但是作為國外引進(jìn)的新品種,引種數(shù)量較少, 分株繁殖慢,種子播種易變易,因此種苗供應(yīng)受到了一定的限制。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度,并提高性狀穩(wěn)定性的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗l_3h后于超凈工 作臺上,依次利用質(zhì)量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s,體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min,再用無菌水沖洗4_6次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成0. 5-2cm 長的帶腋芽的芽段,接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上;(2)芽的分化和增殖芽段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2-4周后,芽的基部開始膨大,出現(xiàn)黃綠色突起,3-5 周后可見芽分生組織,再培養(yǎng)1-2個月,芽增殖到3-4個,將不定芽切下轉(zhuǎn)入不定芽增殖培 養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng),芽的基部雖有較多愈傷組織,但不影響不定芽的增殖,不定芽生長迅 速且無玻璃化等不良現(xiàn)象,在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好;(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有3-5株能夠伸長,其余的處于 小芽狀態(tài),將叢生芽分成小叢后,轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長,不定芽迅速長大,20-40天后可以 長至2-3cm ;(4)生根培養(yǎng)取2_3cm的不定芽小植株,轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根,5-15天后幼苗基部分 化出白色的根原基,25-35天后可以長至2-3cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為90-100% ;(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)25-35天,根系長至2-3cm時,選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗,于室內(nèi) 開瓶煉苗1-3天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20-40天,即可 移栽室外,給予肥水管理,最終的移栽成活率為90-100%。
所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA3. Omg/L+NAAO. 3mg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. Omg/L+NAAO. 1-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. Omg/L+NAAO. 1-0. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的生根培養(yǎng)基優(yōu)選MS+NAAO. lmg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L,培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度 24-26°C,光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明通過組培技術(shù),極大提高了金心黃菖蒲的繁殖速度和苗 的整齊度,并提高了其性狀的穩(wěn)定性,可實現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實施例1(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗lh后于超凈工作 臺上,依次利用質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸泡10s,體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin,再用無 菌水沖洗4次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成0. 5cm長的帶腋芽的芽段,接 種于包括MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上;(2)芽的分化和增殖芽段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2周后,芽的基部開始膨大,出現(xiàn)黃綠色突起,3周后 可見芽分生組織,再培養(yǎng)1個月,芽增殖到3個,將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括MS+6-BA0. 5mg/ L+NAAO. lmg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng),芽的基部雖有較多愈傷組織,但不影 響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象,在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好;(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長,其余的處于小 芽狀態(tài),將叢生芽分成小叢后,轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上生 長,不定芽迅速長大,20天后可以長至2cm ;(4)生根培養(yǎng)取2cm的不定芽小植株,轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 05mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根, 5天后幼苗基部分化出白色的根原基,25天后可以長至2cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為 90% ;(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)25天,根系長至2cm時,選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗,于室內(nèi)開瓶 煉苗1天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20天,即可移栽室外, 給予肥水管理,最終的移栽成活率為90%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉2g/L,pH = 5. 5,培養(yǎng)溫度22°C,光照 15001x。實施例2(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗2h后于超凈工作 臺上,依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡30s,體積濃度為1%。的汞浸泡30min,再用無菌 水沖洗5次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成Icm長的帶腋芽的芽段,接種于 包括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上;(2)芽的分化和增殖芽段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后,芽的基部開始膨大,出現(xiàn)黃綠色突起,4周后 可見芽分生組織,再培養(yǎng)1個半月,芽增殖到4個,將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng),芽的基部雖有較多愈傷組織,但不影 響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象,在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好;(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有4株能夠伸長,其余的處于小 芽狀態(tài),將叢生芽分成小叢后,轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上生 長,不定芽迅速長大,30天后可以長至3cm ;(4)生根培養(yǎng)取3cm的不定芽小植株,轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根,10 天后幼苗基部分化出白色的根原基,30天后可以長至3cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為 100% ;(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天,根系長至3cm時,選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗,于室內(nèi)開瓶 煉苗3天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化30天,即可移栽室外, 給予肥水管理,最終的移栽成活率為100%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L,pH = 5. 8,培養(yǎng)溫度25°C, 光照 20001x。實施例3(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗3h后于超凈工作 臺上,依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡50s,體積濃度為2%。的汞浸泡50min,再用無菌 水沖洗6次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成2cm長的帶腋芽的芽段,接種于 包括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上;(2)芽的分化和增殖芽段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上4周后,芽的基部開始膨大,出現(xiàn)黃綠色突起,5周后 可見芽分生組織,再培養(yǎng)2個月,芽增殖到4個,將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng),芽的基部雖有較多愈傷組織,但不影 響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象,在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好;(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有4株能夠伸長,其余的處于小
6芽狀態(tài),將叢生芽分成小叢后,轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的壯苗培養(yǎng)基上生 長,不定芽迅速長大,40天后可以長至3cm ;(4)生根培養(yǎng)取2cm的不定芽小植株,轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 2mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根,15 天后幼苗基部分化出白色的根原基,35天后可以長至3cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為 93% ;(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)35天,根系長至3cm時,選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗,于室內(nèi)開瓶 煉苗3天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化40天,即可移栽室外, 給予肥水管理,最終的移栽成活率為96%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L,pH = 6. 0,培養(yǎng)溫度26°C, 光照 25001x。
權(quán)利要求
金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得春季取萌發(fā)的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗1-3h后于超凈工作臺上,依次利用質(zhì)量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s,體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min,再用無菌水沖洗4-6次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成0.5-2cm長的帶腋芽的芽段,接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上;(2)芽的分化和增殖芽段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2-4周后,芽的基部開始膨大,出現(xiàn)黃綠色突起,3-5周后可見芽分生組織,再培養(yǎng)1-2個月,芽增殖到3-4個,將不定芽切下轉(zhuǎn)入不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng),芽的基部雖有較多愈傷組織,但不影響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象,在培養(yǎng)基中生長發(fā)育良好;(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有3-5株能夠伸長,其余的處于小芽狀態(tài),將叢生芽分成小叢后,轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長,不定芽迅速長大,20-40天后可以長至2-3cm;(4)生根培養(yǎng)取2-3cm的不定芽小植株,轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根,5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基,25-35天后可以長至2-3cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為90-100%;(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)25-35天,根系長至2-3cm時,選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌苗,于室內(nèi)開瓶煉苗1-3天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20-40天,即可移栽室外,給予肥水管理,最終的移栽成活率為90-100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的芽誘導(dǎo)培 養(yǎng)基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的芽誘導(dǎo)培 養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的不定芽增 殖培養(yǎng)基包括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的不定芽增 殖培養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的壯苗培養(yǎng) 基包括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的壯苗培養(yǎng) 基優(yōu)選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的生根培養(yǎng) 基包括 MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的生根培養(yǎng) 基優(yōu)選 MS+NAA0. lmg/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求2或4或6或8所述的金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L,培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度24-26°C,光 照 1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及金心黃菖蒲的組織培養(yǎng)方法,包括無菌材料的獲得,芽的分化和增殖,不定芽壯苗培養(yǎng),生根培養(yǎng),煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明大大提高了金心黃菖蒲的繁殖速度和苗的整齊度,并提高了其性狀的穩(wěn)定性,可實現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
文檔編號A01H4/00GK101869072SQ200910049980
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園林植物研究所