專利名稱：毛花獼猴桃組培快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種獼猴桃科獼猴桃屬植物毛花獼猴桃的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
毛花獼猴桃"cftV^/aer/a^/zaBenth.)，別名白毛獼猴桃、毛冬瓜，是我國(guó)特有的一個(gè)獼猴桃種，主要分布于我國(guó)長(zhǎng)江以南。毛花獼猴桃果實(shí)富含維生素C和多種活性物質(zhì)，其維生素C含量高達(dá)568.9 1137.0 mg/100g.FW，并具有降低血脂、抗脂質(zhì)過氧化、清除活性氧自由基、抑制腫瘤細(xì)胞及提高免疫力等功能；同時(shí)，與其它獼猴桃種相比其果皮極易剝離，上述優(yōu)良的綜合性狀已引起獼猴桃研究者和商業(yè)生產(chǎn)者的廣泛重視。但當(dāng)前該品種的供苗量不足已成為當(dāng)前發(fā)展的限制因素之一，因此，該品種苗木的快速繁殖方法已受到了廣泛的重視。傳統(tǒng)生產(chǎn)中多使用嫁接苗或者少量扦插苗，現(xiàn)尚無成熟的可以用于大量生產(chǎn)毛花獼猴桃的組織培養(yǎng)育苗方法。但通過嫁接繁殖優(yōu)良苗木的速度較慢，而扦插繁殖成活率相對(duì)較低并易使植株帶菌，種子播種繁殖的實(shí)生苗其性狀不穩(wěn)定極不適合園藝作物商業(yè)化栽培，同時(shí)，長(zhǎng)期進(jìn)行上述常規(guī)繁殖會(huì)造成品種退化。毛花獼猴桃的研究至今尚在起步階段，是目前正在開發(fā)的新一代獼猴桃，可供參考的資料很少，如張遠(yuǎn)記，母錫金，蔡起貴等.毛花獼猴桃原生質(zhì)體再生植株[J].植物學(xué)報(bào),1995,37(1): 48-52;張遠(yuǎn)記，錢迎倩，蔡起貴等，毛花獼猴桃原生質(zhì)體再生植株根尖染色體數(shù)目變異與細(xì)胞多核現(xiàn)象[J].植物學(xué)報(bào),1997,39(2):102-105，他們經(jīng)原生質(zhì)體培養(yǎng)途徑獲得再生植株；又如WANGT，ATKINSON RG JANS SEN BJ. The choice of Agrobacteriuim strain fortransformation of kiwifruit[J]. Acta Horticulturae, 2006(a), 753-759; WANG T， RANY， ATKINSON RG， GLEAVE AP, GOHEN D. Transformation of Actinidia eriantha:A potential species for ftmctional genomics studies in Actinidia[J]. Plant Cell Rep,2006(b), 25: 425~431;他們的研究雖然也獲得了毛花獼猴桃遺傳轉(zhuǎn)化植株，但它們的研究目的、使用的外植體及培養(yǎng)再生途徑與本發(fā)明完全不同。
獼猴桃屬植物共有54個(gè)種，其中21個(gè)種下又有分類群，種與種間差異極大，其中，不同種獼猴桃組織培養(yǎng)研究中較為成功的有美味獼猴桃種和中華獼猴桃種，但即使在同一種內(nèi)不同分類群或品種其培養(yǎng)方式也各不相同，例如，田娜，徐子勤，何近剛.獼猴桃高頻直接再生體系的建立[J].武漢植物學(xué)研究，2007, 25 (1) : 79 83;秦永華，張上隆，朱道圩.獼猴桃的組織培養(yǎng)和遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J].細(xì)胞生物學(xué)雜志，2004， 26(1): 57 61;蘭大偉，劉永立，原田隆.狗棗獼猴桃葉片離體培養(yǎng)的器官、體細(xì)胞胚形成與植株再生[J].果樹學(xué)報(bào)2007, 24( 2) : 218 222;胡家金，熊興耀，張秋明，甘霖.美味獼猴桃原生質(zhì)體培養(yǎng)及植株再生技術(shù)研究[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998， 24(3): 184-190;朱道圩，秦永華，郅玉寶，易明林，陳占寬.軟棗獼猴桃G4c"m'Aa "rgwto)原生質(zhì)體培養(yǎng)與細(xì)胞團(tuán)再生的初步研究[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001， 35(3): 221-223;在這些研究中多使用了價(jià)格昂貴的ZT， GA或者酪氨酸；也有需要暗培養(yǎng)或其它特殊操作程序，如在生根前切下小苗置于50 ppm IBA溶液中浸泡2小時(shí)或在2 ppm IBA溶液中浸24小時(shí)后，再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根的；也有些研究目的是為基因遺傳轉(zhuǎn)化或?yàn)槠渌硌芯看蚧A(chǔ)，為此采用了原生質(zhì)體、子葉或胚組織等外植體，經(jīng)脫分化形成愈傷組織后再分化過程獲得再生。因此適合美味種與中華種的培養(yǎng)方式并不適合毛花獼猴桃種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是，針對(duì)毛花獼猴桃傳統(tǒng)嫁接繁殖、扦插繁殖及種子播種繁殖分別存在的，繁殖速度較慢和成活率較低、植株易帶菌及性狀不穩(wěn)定、易造成品種退化等缺陷，提出一種繁殖系數(shù)高，生產(chǎn)周期短、程序簡(jiǎn)單、成本低廉適于毛花獼猴桃快速繁殖的組織培養(yǎng)方法。
本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)。毛花獼猴桃組培快速繁殖方法，該方法按以卜一步驟進(jìn)行
(一) 組培培養(yǎng)基的配制包括基本培養(yǎng)基及各階段培養(yǎng)基的組分與各組分在每升中所含重量為
1) 基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基，其中，蔗糖或白糖25 35 g/L，瓊脂7 9g/L， pH5.0 6.2;
2) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA2.0 5.0mg/L + NAA0.1 0.5mg/L;
3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA1.0 5.0mg/L + NAA0.1 0.5mg/L或IBA0.1 0.5mg/L;
4) 生根培養(yǎng)基MS或1/2MS + IBA0.05 1.0 mg/L和/或NAA 0.1 0.5mg/L+活性碳1 g/L;
(二) 外植體的選取與滅菌取毛花獼猴桃半木質(zhì)化莖段為外植體，經(jīng)自來水沖洗lh、 70%酒精消毒30~40s、 0.1%升汞水溶液滅菌5 10min或2°/。次氯酸鈉水溶液滅菌10 15min后，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸去表面水分后，備用；
(三) 誘導(dǎo)培養(yǎng)將滅菌后外植體切成含單芽切段，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度25。C士3。C，光強(qiáng)2000LuX士500LuX，光照時(shí)間16h/d的無菌環(huán)境下，經(jīng)30~35天培養(yǎng)至外植體誘導(dǎo)萌發(fā)出初代幼芽或叢芽；
(四) 增殖培養(yǎng)將初代幼芽或叢芽接種在增殖培養(yǎng)基上，在同上條件下經(jīng)25 45天培養(yǎng)至分化形成2 7倍、芽長(zhǎng)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽；
(五) 生根培養(yǎng)將繼代幼芽或叢芽接種到生根培養(yǎng)基中，在同上條件下經(jīng)10~15天培養(yǎng)至幼苗基部長(zhǎng)出5~10條毛細(xì)根系，再經(jīng)20 30天培養(yǎng)至根長(zhǎng)
3 7厘米；
(六) 組培苗的馴化與移栽當(dāng)組培苗長(zhǎng)3 6厘米時(shí)，移至組培室外先將組培瓶蓋擰松培養(yǎng)2天，后開蓋培養(yǎng)5天，洗清根部培養(yǎng)基移栽入泥炭珍珠巖=4:1的基質(zhì)中，置于大棚溫室中，澆水、保濕至組培苗成苗、出圃。
所述的生根培養(yǎng)與馴化移栽將步驟(四)生長(zhǎng)達(dá)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽洗去基部培養(yǎng)基后，把該基部在100 mg/L IBA水溶液中浸蘸1 s~10 s，并用泡開的苔蘚包裹后植入穴盤內(nèi)；或?qū)⒃撓慈ヅ囵B(yǎng)基后的芽苗基部，用泡開并擠干水分的苔蘚包裹、栽入穴盤內(nèi)，再用0.6 1.0mg/LIBA水溶液澆濕苔蘚；將上述兩處理的穴盤放置在陰涼處，每天澆水1至2次以保持苔蘚濕潤(rùn)，經(jīng)7 14天培養(yǎng)至誘導(dǎo)發(fā)根，當(dāng)根長(zhǎng)3厘米以上時(shí)，去除根部苔蘚并栽入由泥炭和珍珠巖按體積4 : 1配制的基質(zhì)中，并按常規(guī)管理至成苗。
本發(fā)明的有益效果是-
1) 本發(fā)明提出的毛花獼猴桃組織培養(yǎng)基針對(duì)性強(qiáng)、適用性好，外殖體初代幼芽的誘導(dǎo)率達(dá)80%以上；繼代幼芽的增殖率每個(gè)培養(yǎng)周期達(dá)2 7倍，20 30天苗高可達(dá)2 5厘米，組培苗素質(zhì)提高，生根率達(dá)95%以上，移栽成活率95%以上。
2) 本發(fā)明達(dá)到了僅采用少量外植體材料即能實(shí)現(xiàn)大批量擴(kuò)繁毛花獼猴苗株的目的，該組培周期僅為80~90天就可移栽入溫室，并可周年供苗，極大的降低了育苗成本，提高了育苗效率，可實(shí)行規(guī)?；a(chǎn)，推動(dòng)毛花獼猴桃種植業(yè)大力發(fā)展。
3)本發(fā)明在增殖培養(yǎng)至形成繼代幼芽或叢芽的基礎(chǔ)上，還提供了一種移出培養(yǎng)基直接在室外誘導(dǎo)生根的方法，大大降低了電、培養(yǎng)基及人工成本，并可
縮短育苗周期4 7天。
具體實(shí)施例方式
通過以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施伊
1
2
4
實(shí)施伊
1
2
3
4
實(shí)施伊
1
2
1:(培養(yǎng)基l)
基本培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基，其中蔗糖25g/L，瓊脂8g/L， pH5.8;誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA2.0 mg/L + NAA 0.2mg/L;增殖培養(yǎng)基MS+6-BA5.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L;生根培養(yǎng)基MS+ IBA 0.05mg/L + NAA 0.2mg/L 。2 :(培養(yǎng)基2)
基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基，其中白糖35 g/L，瓊脂9 g/L， pH5.0;誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA5.0 mg/L + NAA0.4mg/L;增殖培養(yǎng)基MS+6-BA2.0mg/L + NAA 0.3mg/L;生根培養(yǎng)基l/2MS+IBA1.0mg/L。
3:(培養(yǎng)基3)
基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基，其中蔗糖30 g/L，瓊脂7 g/L， pH6.2;誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA3.0 mg/L +NAA 0.lmg/L;增殖培養(yǎng)基MS+6-BA3.0 mg/L +NAA 0.5mg/L;4)生根培養(yǎng)基l/2MS+NAA0.3mg/L + IBA0.4mg/L。 實(shí)施例4:(培養(yǎng)基4)
1) 基本培養(yǎng)基:MS或l/2MS培養(yǎng)基，其中蔗糖25g/L，瓊脂7.5g/L ，pH5.8;
2) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.3mg/L;
3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.4mg/L;
4) 生根培養(yǎng)基1/2MS + IBA 0.6mg/L +活性碳1 g/L。 實(shí)施例5:(培養(yǎng)基5)
1) 基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基，其中蔗糖30 g/L，瓊脂7 g/L， pH5.5;
2) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L;
3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;
4) 生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.8mg/L。 實(shí)施例6:(培養(yǎng)基6)
1) 基本培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基，其中白糖30g/L，瓊脂7g/L， pH6.0;
2) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L;
3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.5mg/L;
4) 生根培養(yǎng)基MS+ NAA 0. lmg/L + IB A 0.2mg/L +活性碳1 g/L 。 實(shí)施例7:(培養(yǎng)基7)
1) 基本培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基，其中蔗糖"g/L，瓊脂7.5g/L ， pH6,2;
2) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.3mg/L;
3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA4.0mg/L+IBA0.4mg/L;
4) 生根培養(yǎng)基MS+IBA0.1mg/L。
實(shí)施例8:(培養(yǎng)基8)
1)基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基，其中蔗糖30 g/L，瓊脂7 g/L， pH6.0;
92) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L;
3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA5.0mg/L+IBA0.3mg/L;
4) 生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.5mg/L。 實(shí)施例9:(培養(yǎng)基9)
1) 基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基，其中白糖25g/L，瓊脂7g/L， pH5.8;
2) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L;
3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L;
4) 生根培養(yǎng)基1/2MS+NAA0.4mg/L。 實(shí)施例10:(培養(yǎng)基IO)
1) 基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基，其中蔗糖30 g/L，瓊脂8 g/L， pH5.8;
2) 誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L;
3) 增殖培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L;
4) 生根培養(yǎng)基1/2MS + NAA0.3mg/L+活性碳1 g/L。
實(shí)施例ll:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法l) 按以下步驟進(jìn)行
1) 基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例1;
2) 外植體的處理與消毒采用毛花獼猴桃優(yōu)良單株的莖尖和莖段(一年中抽 生的新梢都可作為外植體)，用洗滌劑和自來水沖洗干凈后，經(jīng)70%酒精浸泡30s， 再用0.1%升澩溶液浸泡滅菌10min后，無菌水沖洗并用無菌濾紙吸去表面水分，
切成含單芽切段，備用；
3) 誘導(dǎo)培養(yǎng)在溫度25°C±3°C，光強(qiáng)2000LuX士500LuX，光照時(shí)間16h/d 的無菌條件下經(jīng)30天誘導(dǎo)培養(yǎng)，直接從外植體誘導(dǎo)出初代幼芽或叢芽；
4) 增殖培養(yǎng)將初代幼芽或叢芽接種在增殖培養(yǎng)基上，在同上條件下增殖培養(yǎng)35天至分化出大量的繼代幼芽或叢芽；
5)生根培養(yǎng)將繼代幼芽或叢芽接種到生根培養(yǎng)基上，在同上條件下生 根培養(yǎng)35天至誘導(dǎo)芽苗基部長(zhǎng)出根系；
6)組培苗馴化、移栽當(dāng)組培苗生長(zhǎng)達(dá)3-5厘米以上，并長(zhǎng)出發(fā)達(dá)根系時(shí)，
先將組培瓶移至常溫下擰松瓶蓋培養(yǎng)2天后，開蓋培養(yǎng)5天，取出組培苗，洗
去根部培養(yǎng)基后移栽入泥炭珍珠巖=4: l基質(zhì)中，最初兩周適當(dāng)遮陰后置大棚 溫室中，澆水、保濕至組培苗成苗、出圃。 實(shí)施例12:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法2)
本例中，步驟l)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例2;步驟2) 外植體經(jīng)70%酒精浸泡40s，再用0.P/。升汞溶液浸泡5min進(jìn)行消毒；步驟3) 的誘導(dǎo)培養(yǎng)為35天；步驟4)的增殖培養(yǎng)為25天；步驟5)的生根培養(yǎng)為30 天；其余步驟工藝同于實(shí)施例11。 實(shí)施例13:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法3)
本例中，步驟l)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例3;步驟2) 外植體經(jīng)70%酒精浸泡35s，再用0.1%升汞溶液浸泡8min進(jìn)行消毒；步驟3) 的誘導(dǎo)培養(yǎng)為32天；歩驟4)的增殖培養(yǎng)為30天；步驟5)的生根培養(yǎng)為40 天；其余步驟工藝同于實(shí)施例11。 實(shí)施例14:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法4)
本例中，步驟l)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例4;步驟2) 外植體酒精浸泡30s，再用2%次氯酸鈉水溶液浸泡15min進(jìn)行消毒；步驟3) 的誘導(dǎo)培養(yǎng)為30天；步驟4)的增殖培養(yǎng)為40天；步驟5)的生根 養(yǎng)為45 天；其余歩驟工藝同于實(shí)施例11。 實(shí)施例15:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法5)本例中，步驟1)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例5;步驟2)
外植體酒精浸泡40s，再用2%次氯酸鈉水溶液浸泡10min進(jìn)行消毒；步驟3) 的誘導(dǎo)培養(yǎng)為35天；步驟4)的增殖培養(yǎng)為45天；步驟5)與6)將生長(zhǎng)達(dá)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽洗去基部培養(yǎng)基后，把該基部在100 mg/L IBA水溶液 中浸蘸ls，并用泡開的苔蘚包裹后植入穴盤內(nèi)，放置在陰涼處，每天澆水l至 2次以保持苔蘚濕潤(rùn)，經(jīng)7 14天培養(yǎng)至誘導(dǎo)發(fā)根，當(dāng)根長(zhǎng)3厘米以上時(shí)，去除 根部苔蘚并栽入由泥炭和珍珠巖按體積4 : l配制的基質(zhì)中，并按常規(guī)管理至成 苗；其余步驟工藝同于實(shí)施例11。 實(shí)施例16:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法6)
本例中，步驟1)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例6;步驟2) 外植體酒精浸泡35s，再用2。/。次氯酸鈉水溶液浸泡12min進(jìn)行消毒；步驟3) 的誘導(dǎo)培養(yǎng)為32天；步驟4)的增殖培養(yǎng)為35天；步驟5)與6)將生長(zhǎng)達(dá)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽洗去基部培養(yǎng)基后，把該基部在100 mg/L IBA水溶液 中浸蘸5s;其余步驟工藝同于實(shí)施例15。 實(shí)施例17:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法7)
本例中，步驟1)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例7;步驟2) 至步驟4)同于例11;步驟5)與6)將生長(zhǎng)達(dá)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽洗去 基部培養(yǎng)基后，把該基部在100 mg/L IBA水溶液中浸蘸10s;其余步驟工藝同 于實(shí)施例15。
實(shí)施例18:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法8)
本例中，步驟1)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例8;步驟2) 至歩驟4)同于例12;步驟5)與6)將牛長(zhǎng)達(dá)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽洗去 基部培養(yǎng)基后，用泡開并擠干水分后的苔蘚包裹、栽入穴盤基質(zhì)內(nèi)，再用0.6 mg/LIBA水溶液澆濕苔蘚，將上述處理的穴盤放置在陰涼處，每天澆水1至2次以 保持苔蘚濕潤(rùn)；其余步驟工藝同于實(shí)施例11。 實(shí)施例19:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法9)
本例中，步驟1)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例9;步驟2)
至步驟4)同于例13，步驟5)與6)將生長(zhǎng)達(dá)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽洗去 基部培養(yǎng)基后，用泡開并擠干水分后的苔蘚包裹、栽入穴盤基質(zhì)內(nèi)，再用0.8mg/L IBA水溶液澆濕苔蘚；其余步驟工藝同于實(shí)施例18。 實(shí)施例20:(毛花獼猴桃組培快速繁殖方法10)
本例中，步驟l)基本培養(yǎng)基和各階段培養(yǎng)基配方同于實(shí)施例10;步驟2)
至步驟4)同例14;步驟5)與6)將生長(zhǎng)達(dá)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽洗去 基部培養(yǎng)基后，用泡開并擠干水分后的苔蘚包裹、栽入穴盤基質(zhì)內(nèi)，再用1.0mg/L IBA水溶液澆濕苔蘚；其余步驟工藝同于實(shí)施例18。
本發(fā)明采用上述組培培養(yǎng)基及與之配套的快繁方法后，外殖體初代幼芽的 誘導(dǎo)率達(dá)80%以上；繼代幼芽的增殖率每個(gè)培養(yǎng)周期達(dá)2 7倍，20 30天苗高 可達(dá)2 5厘米，組培苗素質(zhì)提高，生根率達(dá)95%以上；移栽成活率90%以上。
權(quán)利要求
1、毛花獼猴桃組培快速繁殖方法，其特征在于該方法按以下步驟進(jìn)行(一)組培培養(yǎng)基的配制包括基本培養(yǎng)基及各階段培養(yǎng)基的組分與各組分在每升中所含重量為1)基本培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基，其中，蔗糖或白糖25～35g/L，瓊脂7～9g/L，pH5.0～6.2；2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA2.0～5.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L；3)增殖培養(yǎng)基MS+6-BA1.0～5.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L或IBA0.1～0.5mg/L；4)生根培養(yǎng)基MS或1/2MS+IBA0.05～1.0mg/L和/或NAA 0.1～0.5mg/L+活性碳1g/L；(二)外植體的選取與滅菌取毛花獼猴桃半木質(zhì)化莖段為外植體，經(jīng)自來水沖洗1h、70％酒精消毒30～40s、0.1％升汞水溶液滅菌5～10min或2％次氯酸鈉水溶液滅菌10～15min后，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸去表面水分后，備用；(三)誘導(dǎo)培養(yǎng)將滅菌后外植體切成含單芽切段，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度25℃±3℃，光強(qiáng)2000LuX±500LuX，光照時(shí)間16h/d的無菌環(huán)境下，經(jīng)30～35天培養(yǎng)至外植體誘導(dǎo)萌發(fā)出初代幼芽或叢芽；(四)增殖培養(yǎng)將初代幼芽或叢芽接種在增殖培養(yǎng)基上，在同上條件下經(jīng)25～45天培養(yǎng)至分化形成2～7倍、芽長(zhǎng)2～5厘米的繼代幼芽或叢芽；(五)生根培養(yǎng)將繼代幼芽或叢芽接種到生根培養(yǎng)基中，在同上條件下經(jīng)10～15天培養(yǎng)至幼苗基部長(zhǎng)出5～10條毛細(xì)根系，再經(jīng)20～30天培養(yǎng)至根長(zhǎng)3～7厘米；(六)組培苗的馴化與移栽當(dāng)組培苗長(zhǎng)3～6厘米時(shí)，移至組培室外先將組培瓶蓋擰松培養(yǎng)2天，后開蓋培養(yǎng)5天，洗清根部培養(yǎng)基移栽入泥炭∶珍珠巖＝4∶1的基質(zhì)中，置于大棚溫室中，澆水、保濕至組培苗成苗、出圃。
2、按權(quán)利要求1所述的組培快速繁殖方法，其特征在于所述的生根培養(yǎng)與 馴化移栽將步驟(四)生長(zhǎng)達(dá)2 5厘米的繼代幼芽或叢芽洗去基部培養(yǎng)基后， 把該基部在100 mg/L IBA水溶液中浸蘸1 s~10 s，并用泡開的苔蘚包裹后植入 穴盤內(nèi)；或?qū)⒃撓慈ヅ囵B(yǎng)基后的芽苗基部，用泡開并擠干水分的苔蘚包裹、栽 入穴盤內(nèi)，再用0.6 1.0mg/LIBA水溶液澆濕苔蘚；將上述兩處理的穴盤放置在 陰涼處，每天澆水1至2次以保持苔蘚濕潤(rùn)，經(jīng)7 14天培養(yǎng)至誘導(dǎo)發(fā)根，當(dāng)根 長(zhǎng)3厘米以上時(shí)，去除根部苔蘚并栽入由泥炭和珍珠巖按體積4 : 1配制的基質(zhì) 中，并按常規(guī)管理至成苗。
全文摘要
本發(fā)明公開了毛花獼猴桃組培快速繁殖方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。該方法包括(一)組培培養(yǎng)基的配制；(二)外植體的選取與滅菌；(三)誘導(dǎo)培養(yǎng)；(四)增殖培養(yǎng)；(五)生根培養(yǎng)；(六)組培苗的馴化與移栽等步驟。該方法培養(yǎng)基針對(duì)性強(qiáng)、適用性好，外殖體初代幼芽的誘導(dǎo)率達(dá)80％以上；繼代幼芽的增殖率達(dá)2～7倍，20～30天苗高可達(dá)2～5厘米，組培苗素質(zhì)提高，生根率達(dá)95％以上，移栽成活率95％以上。本發(fā)明可在果樹苗木企業(yè)中推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101647393SQ20091015297
公開日2010年2月17日 申請(qǐng)日期2009年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月24日
發(fā)明者吳延軍, 宋根華, 張慧琴, 徐紅霞, 鳴 謝, 陳俊偉, 隆前進(jìn) 申請(qǐng)人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院