專利名稱：使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法。
背景技術：
大禿馬勃又稱大馬勃、馬勃、馬屁包，是一種食藥用真菌，具有相當?shù)慕?jīng)濟價值。子 實體大型，近球形至球形，直徑15 36cm，或更大，無不孕基部或很小，由粗菌索與地面相 連，包被白色，后變污白色，同臘狀外包被和較厚的內(nèi)包被組成，初期微具絨毛，漸變光滑， 脆，成熟后開裂成塊脫落，露出淺青和褐色的孢體。夏秋季生于曠野的草地上，單生至群生， 在新疆山地草原及內(nèi)蒙古呼盟草原可形成“蘑菇圈”。分布于我國河北、山西、內(nèi)蒙古、遼寧、 吉林、江蘇、西藏、甘肅、云南、青海、寧夏、新疆等地區(qū)。幼時可食用，味鮮可口。成熟后可藥 用。具有消腫，止血、清肺潤喉和解毒作用。目前人工栽培未能成功，但可利用菌絲體深層 發(fā)酵培養(yǎng)。因此此次實驗，對于研究和利用馬勃及食藥用真菌都具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培 養(yǎng)基的方法，根據(jù)該方法制備得到的培養(yǎng)基，。本發(fā)明提供食藥用菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基采用的技術方案是使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，培養(yǎng)時間為1-4天，溫度 為 20 0C 48°C，初始 pH 為 5. 0-6.0。優(yōu)選的，培養(yǎng)時間為2天。優(yōu)選的，培養(yǎng)溫度為22°C。通常真菌的最適生長溫度為^°C，本發(fā)明結果表明大 禿馬勃在此溫度下生長卻最差，這與其本身的特性有關。大禿馬勃屬于蕈菌類真菌，本身在 自然界生長繁殖的最佳溫度就是在20°C _25°C之間，本發(fā)明中當溫度從20°C升高到^°C， 菌絲體的產(chǎn)量經(jīng)歷了一個先增加再減少，而峰值出現(xiàn)在22°C。因此溫度選在22°C。優(yōu)選的，初始pH為5. 5。通過影響細胞內(nèi)PH值來影響細胞內(nèi)酶的活性及一些微量 元素，如鎂離子、鐵離子、鈣離子與鋅離子等的溶解性。還可以影響細胞膜透性，在酸性條件 下，細胞質膜被氫離子飽和，限制了陽離子的通行；在堿性條件下，細胞質膜被氫氧根離子 飽和，限制了陰離子的通行。本發(fā)明的有益效果是1)本發(fā)明通過控制初始pH、發(fā)酵時間及溫度得到大禿馬勃菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng) 本發(fā)明制得的培養(yǎng)基可在較短時間內(nèi)獲得大量菌絲體及其發(fā)酵產(chǎn)物；2)本發(fā)明周期短、產(chǎn)量高、成本低、工藝設備簡單。


圖1是溫度對菌絲生物量的影響；圖2是發(fā)酵時間對菌絲生物量的影響；
圖3是pH對菌絲生物量的影響。
具體實施例方式使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，培養(yǎng)時間為1-4天，溫度 為 20-28°C，初始 pH 為 5. 0-6.0。優(yōu)選的，培養(yǎng)時間為2天，培養(yǎng)溫度為22°C，初始pH為5. 5。菌種活化培養(yǎng)基——PDA培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL。配制方法稱取去皮馬鈴薯200g，切塊后加水煮沸，30min后兩層紗布過濾，濾液 中加入20g葡萄糖，加水至1000ml，煮沸，分裝，121°C高溫濕熱滅菌30min。取出冷卻備用。搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基——PDA液體培養(yǎng)基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000mL。在超凈工作臺上，取活化后的大禿馬勃斜面培養(yǎng)物一支，首先往試管里加入IOml 水，用滅菌竹簽輕輕刮落斜面表面的菌體(要注意刮時的力量大小，不能把培養(yǎng)基刮脫)， 然后把菌液加入50ml裝有小玻璃珠的三角瓶中，搖動三角瓶2min，使孢子分撒均勻，得到 大禿馬勃的孢子懸液，測得該孢子懸液的濃度為3. 65X 107個/ml。滅菌所有培養(yǎng)基均采用高壓蒸汽滅菌121. 3°C，20min。接種每瓶液體培養(yǎng)基無菌操作接入3. 65 X 107個/ml的孢子懸液Iml。培養(yǎng)根據(jù)顧林峰同學得出的最佳轉速及第一次實驗得到的最佳培養(yǎng)溫度22°C 作為基本培養(yǎng)條件，在此基礎上結合實驗項目(培養(yǎng)時間，初始PH值)恰當組合進行搖床 培養(yǎng)。本次實驗采用目測，每天觀察菌絲體在各培養(yǎng)基中生長的快慢，并記錄。發(fā)酵結束后，發(fā)酵液過濾收集菌絲體，蒸餾水洗滌3次，于3000rpm離心lOmin， 60°C烘干至恒重，用電子天平稱量干重。取Iml液體培養(yǎng)基于培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿下面放一張黑白相間的格子紙，然后進 行計數(shù)，重復3次。隨機取液體培養(yǎng)基中15個菌絲球，在培養(yǎng)皿中排成一列，測其總長度， 求平均值，每一處理重復3次。在下所培養(yǎng)的大禿馬勃菌，長出的菌球最大，菌球平均直徑可達2. 67mm, 在20°C下所培養(yǎng)的大禿馬勃菌，長出的菌球最小，菌球平均直徑僅為1. 40mm ；除個別情況 (24°C )之外，菌球直徑體現(xiàn)出隨溫度上升而變大的規(guī)律。結合目測觀測發(fā)現(xiàn)下培養(yǎng)的大禿馬勃菌體生長較為迅速，能夠很快形成較 大菌球，菌球內(nèi)部菌絲體不再起到繁殖作用，無法使菌體進一步增殖，故生物量無法持續(xù)增 加，因此最終體現(xiàn)出生物量積累較少。下培養(yǎng)的大禿馬勃菌體生長速度適宜，菌球直徑 較小，總體表面積較大，增加了繁殖面，故菌球密度和生物量都較大。22°C下培養(yǎng)時，菌球直 徑大大低于更高溫度，如M°CJ8°C，也就是說增加了菌絲體與培養(yǎng)基接觸的面積，方便營 養(yǎng)的吸收和利用，因此積累了最多的生物量。但是對于20°C下培養(yǎng)的菌體而言，未能達到其 生長適宜溫度，無法保證菌體內(nèi)部生理代謝所需酶活性，因此溫度本身成為影響最大的限 制性因素，同時影響了菌絲體生物量，菌球密度，菌球直徑等各個生長相關因素。具體結果 見表1。表1溫度對菌球密度和直徑的影響
權利要求
1.使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特征在于，培養(yǎng)時間為 1-4天，溫度為2048°C，初始pH為5. 0-6.0。
2.根據(jù)權利要求1所述的使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特 征在于，培養(yǎng)時間為2天。
3.根據(jù)權利要求1所述的使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特 征在于，培養(yǎng)溫度為22°C。
4.根據(jù)權利要求1所述的使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特 征在于，初始PH為5. 5。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用搖瓶發(fā)酵法制備大禿馬勃液體發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，其特征在于，培養(yǎng)時間為1-4天，溫度為20℃-28℃，初始pH為5.0-6.0。本發(fā)明通過控制初始pH、發(fā)酵時間及溫度得到大禿馬勃菌液體發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)本發(fā)明制得的培養(yǎng)基可在較短時間內(nèi)獲得大量菌絲體及其發(fā)酵產(chǎn)物。
文檔編號C05G1/00GK102084778SQ200910216599
公開日2011年6月8日 申請日期2009年12月7日 優(yōu)先權日2009年12月7日
發(fā)明者黃友華 申請人:武侯區(qū)巔峰機電科技研發(fā)中心