專利名稱：一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海水魚類養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種提高大菱鲆免疫力，促進(jìn)大菱 鲆生長(zhǎng)、改善水質(zhì)、節(jié)水節(jié)能、節(jié)省人力物力、綠色低碳的新型無(wú)公害的大菱鲆養(yǎng)殖方法。
背景技術(shù)：
大菱鲆(Scophthalmus maximus)，屬于鰈形目鲆科，英文名Turbot，俗稱歐洲比目 魚，含有豐富的膠質(zhì)，體內(nèi)無(wú)小骨亂刺，內(nèi)臟團(tuán)小、出肉率高、肌肉豐厚白嫩、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng) 豐富、備受消費(fèi)者喜愛(ài)。大菱鲆引進(jìn)10年來(lái)，以其良種優(yōu)勢(shì)，先進(jìn)的創(chuàng)新模式和工業(yè)化養(yǎng)殖 潮流，成為我國(guó)北方沿海引人注目的重要養(yǎng)魚工業(yè)。然而，隨著大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)在我國(guó)的蓬勃 發(fā)展，特別是工廠化養(yǎng)殖規(guī)模的快速增長(zhǎng)，養(yǎng)殖環(huán)境不斷惡化，病害日趨嚴(yán)重，這些已成為 制約其養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的瓶頸?！皽厥掖笈?深井水養(yǎng)殖”是目前水產(chǎn)養(yǎng)殖最普遍的生產(chǎn)模式。這種養(yǎng)殖模式需 要大量的水循環(huán)，地下井水的過(guò)度開(kāi)采使用，不僅浪費(fèi)資源和能源，導(dǎo)致水資源枯竭，還會(huì) 嚴(yán)重影響地質(zhì)概況，為地質(zhì)災(zāi)害埋下隱患。大量的養(yǎng)殖廢水排放，也造成海洋水體的嚴(yán)重污
^fe ο配合飼料和化學(xué)藥物，大量的水循環(huán)，進(jìn)行高投入低產(chǎn)出的魚類精養(yǎng)，大大增加了 投入成本。傳統(tǒng)的抗生素和化學(xué)藥物的引用引起耐藥性菌株增加、魚類藥源性器官損害、藥 物殘留、危害生態(tài)環(huán)境等許多不良后果，造成水產(chǎn)品品質(zhì)的下降和出口障礙。因此，“綠色養(yǎng) 殖”成為近年來(lái)國(guó)家的重大需求，引起水產(chǎn)界的廣泛關(guān)注。目前，用蛭弧菌游泳體來(lái)提高大 菱鲆的免疫力，促進(jìn)大菱鲆快速生長(zhǎng)的養(yǎng)殖方式在國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無(wú)論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國(guó)外，Lenz and Hespell (1978) 研究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對(duì)動(dòng)物及人的細(xì)胞不具侵染性[Lenz R. W. , Hespell R. B. Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells. Archives of Microbiology, 1978,119(3) =245-248] 在國(guó)內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對(duì)魚類細(xì) 胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對(duì)魚類細(xì)菌沒(méi)有侵染作用[林茂，楊先樂(lè)，薛暉，曹海鵬，邱軍強(qiáng)。蛭弧菌 BDH21 02對(duì)魚類細(xì)胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報(bào)，2006，33(1) :7_11]。

發(fā)明內(nèi)容
為克服上述現(xiàn)有養(yǎng)殖技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種節(jié)水型的大 菱鲆養(yǎng)殖方法；該方法通過(guò)在飼料和水體中添加蛭弧菌游泳體實(shí)現(xiàn)，具體包括養(yǎng)殖水源選 擇，池水的處理，飼料的處理，換水周期的控制，其特征按照養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)原理，海洋生物的生 長(zhǎng)環(huán)境要求，生物之間的相互關(guān)系及無(wú)公害養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)，人工創(chuàng)造養(yǎng)殖環(huán)境，減少投入成本， 改善水質(zhì)，提高大菱鲆免疫力，促進(jìn)大菱鲆快速生長(zhǎng)，提高經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，包括以 下操作步驟
(1)取海域無(wú)污染的海水作為養(yǎng)殖用水；養(yǎng)殖用水經(jīng)砂濾、沉淀后注入養(yǎng)殖池；在 養(yǎng)殖池上方蓋遮光布，控制光照強(qiáng)度為150 2001ux ；(2)在養(yǎng)殖池中加入蛭弧菌游泳體菌液，并加大曝氣，攪拌均勻，使池水中的蛭弧 菌游泳體的濃度達(dá)10 107pfu/mL ；(3)向養(yǎng)殖池中投放魚苗；(4)養(yǎng)殖期間正常曝氣，控制水溫在15 30°C，日投餌量為魚體重的質(zhì)量百分?jǐn)?shù) 3 5%，餌料在投入前用濃度為10 107pfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液浸泡15 30min ；每 隔5 40天換掉池水(全池)一次，每次換水后加入蛭弧菌游泳體菌液，使池水中的蛭弧 菌游泳體濃度達(dá)到10 107pfu/mL。所述的蛭弧菌游泳體為蛭弧菌游離在宿主菌外部的狀態(tài)；步驟(1)所述養(yǎng)殖池的池底為凹型或平底，養(yǎng)殖池在注入養(yǎng)殖用水之前清洗消毒 干凈；所述遮光布的遮光率為95%。步驟⑵和(4)所述加入蛭弧菌游泳體菌液的方法為用養(yǎng)殖池中的池水稀釋菌 液后，均勻潑灑全池。步驟(2)所述加大曝氣的曝氣量為90 100L/h/m3 ；步驟(4)所述正常曝氣的曝 氣量為70 80L/h/m3。步驟(3)所述投放魚苗在水溫15 30°C時(shí)按照以下標(biāo)準(zhǔn)魚苗重量為25 50g 時(shí)，投放密度為300 400尾/m2 ；魚苗重量為70 IOOg時(shí)，投放密度為200 300尾/m2 ； 魚苗重量為100 200g時(shí)，投放密度為100 150尾/m2。溫度升高時(shí)則減少養(yǎng)殖密度。步驟(4)所述餌料為顆粒餌料；所述餌料在早上、中午和晚上各投放一次，每次投 餌間隔5 6小時(shí)，投餌方式為灑遍全池。步驟⑵和⑷所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp. )BDFM05，所述蛭弧菌于 2009年8月7日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO =M 209172。所述蛭弧菌BDFM05進(jìn)行負(fù)染后于電子顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察BDFM05呈單細(xì)胞， 橢圓形，大小為1. 43X0. 53um，端生鞭毛，鞭毛長(zhǎng)度至少2um ；所述蛭弧菌BDFM05以雙層平 板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑；所述蛭弧菌BDFM05是由野生型蛭弧菌BDS02經(jīng)紫外誘變得到；所述蛭弧菌游泳體菌液按照以下方法制備得到接種嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，購(gòu)于廣東省微生物所菌種保藏中心，編號(hào)GIM1. 172)于營(yíng)養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基 中，26 30°C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經(jīng)5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加入至DNB液 體培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，溶于IOOOmL蒸餾水中， PH值為7. 2 7. 6)中，接入蛭弧菌BDFM05，28°C培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經(jīng)6000 8000rpm 離心15 20min后，將蛭弧菌游泳體的上清經(jīng)16000 18000rpm離心15 20min后，沉 淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮， 得到蛭弧菌游泳體菌液，蛭弧菌BDFM05游泳體菌液的濃度可達(dá)到109pfu/mL。所述DNB液體培養(yǎng)基是將營(yíng)養(yǎng)肉湯0. Sg、酪蛋白酸水解物0. 5g和酵母精提物 0. Ig溶于IOOOmL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH值至7. 2 7. 6。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果發(fā)展無(wú)公害養(yǎng)殖，提高大菱鲆的免疫力，促進(jìn)大菱鲆的快速生長(zhǎng)，降低生產(chǎn)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益，是我國(guó)海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的必由之路。蛭弧菌能改善養(yǎng)殖生物腸道環(huán)境，提高 免疫力，促進(jìn)生長(zhǎng)。對(duì)魚類無(wú)毒性作用，對(duì)人類無(wú)致病性。蛭弧菌游泳體侵入宿主細(xì)菌的過(guò)程非?？?，一般幾秒鐘內(nèi)即可完成。相對(duì)于蛭弧 菌蛭質(zhì)體而言，雖然存在著制備繁瑣、不易保存的弱點(diǎn)，但用蛭弧菌游泳體控制和消除海洋 致病或潛在致病菌起效快、活力強(qiáng)。這些優(yōu)點(diǎn)使得蛭弧菌游泳體同樣適合作為抑止或清除 生物體及其環(huán)境中致病或潛在致病菌的生物凈化因子。由于蛭弧菌游泳體對(duì)水產(chǎn)的致病或潛在致病菌，特別是海洋弧菌有強(qiáng)的裂解力， 對(duì)水質(zhì)也有一定的凈化作用，用蛭弧菌游泳體浸泡飼料，并在池水中潑灑一定濃度的蛭弧 菌游泳體菌液，既能促進(jìn)大菱鲆的生長(zhǎng)，提高免疫力，又能凈化水質(zhì)，且最長(zhǎng)可40天換(全 池)水一次，從而克服了抗生素濫用帶來(lái)的副作用和大量養(yǎng)殖廢水排放污染環(huán)境，節(jié)省人 力物力，為人類提供安全、綠色、無(wú)公害的水產(chǎn)品，提高養(yǎng)殖戶的收入。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。本發(fā)明的具體實(shí)施地點(diǎn)為山東省某養(yǎng)殖場(chǎng)，實(shí)施時(shí)間為8個(gè)月。試驗(yàn)地海域的水 源水質(zhì)符合中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(GB11607-89)要求，海水經(jīng)過(guò)砂濾、沉 淀處理后進(jìn)入養(yǎng)殖池，符合農(nóng)業(yè)部《無(wú)公害食品海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)》(NY5052-2001)要求。 大菱鲆的養(yǎng)殖池建在養(yǎng)殖大棚內(nèi)，每個(gè)水池面積為40m2，水深1. 2米，池底盡量凹型，有利于 排水吸污等操作；但也可有平底的。水池上方蓋上遮光度為95%的遮光布，避免光照過(guò)強(qiáng)。 光照強(qiáng)度控制在150 2001ux。挑選體質(zhì)健康、個(gè)體大小均勻的大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼魚，平均體重 為28 士 2. 5g，平均體長(zhǎng)為11 士0. 55cm，采用隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，按照300尾/m2的養(yǎng)殖密度 投入池中，平均分為A-D4個(gè)試驗(yàn)組，B、C、D每個(gè)試驗(yàn)組有8個(gè)小組，分別為Bi、Cl、Dl ；B2、 C2、D2 ；、B3、C3、D3 ；B4、C4、D4 ；B5、C5、D5 ；B6、C6、D6 ；B7、C7、D7 ；B8、C8、B8 ；Bl D8 每小 組再分為4組，即Bl-I B1-4…D8-1 D8-4，每組2個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)的處理如下A組正常流水，投喂正常的顆粒飼料(工廠生產(chǎn)的養(yǎng)殖方式)；B組在水中潑灑蛭弧菌游泳體菌液，使水體中游泳體菌液濃度分別達(dá)到10、103、 105、107pfu/mL，投放顆粒飼料；C組投喂?jié)舛葹?0、ΙΟ3、105、107pfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液浸泡后的顆粒飼料；D組在水中加入蛭弧菌游泳體菌液，使菌體濃度分別達(dá)到10、103、105、107pfu/ mL,同時(shí)分別投喂?jié)舛葹?0、103、105、107pfU/mL的蛭弧菌游泳體菌液浸泡后的顆粒飼料；Bi、Cl、Dl組每5天換(全池)水一-次，換水后重新加菌；
B2、C2、D2組每10天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B3、C3、D3組每15天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B4、C4、D4組每20天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B5、C5、D5組每25天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B6、C6、D6組每30天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B7、C7、D7組每35天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B8、C8、D8組每40天換(全池)水--次，換水后]重新加菌
B1-1、α-1、01-Ρ..08_1 投放的菌液濃度為 10pfu/mL ；Bl-2、Cl-2、D1-2…D8-2 投放的菌液濃度為 103pfu/mL ；Bl-3、Cl-3、D1-3…D8-3 投放的菌液濃度為 105pfu/mL ；Bl-4、Cl-4、Dl-4... D8-4 投放的菌液濃度為 107pfu/mL ；所用顆粒符合中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《無(wú)公害食品漁用配合飼料安全限 量》(NY5072-2002)的規(guī)定。試驗(yàn)期間，日投餌量與魚體重的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3_5 %，每日投喂 三次(7 00，12:00，17:00)，每次投喂過(guò)程持續(xù)30min。試驗(yàn)結(jié)束測(cè)量魚的生長(zhǎng)指標(biāo)、免疫指 標(biāo)。(1)、魚體生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定方法如下每組隨機(jī)抽取40尾魚檢測(cè)生長(zhǎng)情況，魚體長(zhǎng)度測(cè)定采用精度為Imm的游標(biāo)卡尺度 量，體長(zhǎng)為魚的吻端到脊椎骨最下端之間的距離。體重采用電子天平稱量。試驗(yàn)生長(zhǎng)指標(biāo) 按如下公式計(jì)算成活率(%) = Nt/NoX100% ；增重率(%) = (Wt-W0)/W0X 100% ；體長(zhǎng)增長(zhǎng)率(%) = (Lt-L0)/L0X 100% ；肥滿度=1。/1^或^/1^;式中N。為試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)魚體總尾數(shù)；Nt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚體總尾數(shù)；W。為試驗(yàn)開(kāi)始時(shí) 魚體重;Wt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚體重；L。為試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)魚體長(zhǎng)；Lt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚體長(zhǎng)；試驗(yàn)測(cè)得的大菱鲆各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)見(jiàn)表一 表四從表中可以看出，A組成活率、增 重率、體長(zhǎng)增長(zhǎng)率、肥滿度分別為81. 45%、1792%、56. 65%、21. 43。與A組相比，B、C、D組 的成活率、增重率、體長(zhǎng)增長(zhǎng)率、肥滿度均有明顯提高。說(shuō)明在常規(guī)的養(yǎng)殖方式下，不換水會(huì) 影響大菱鲆的成活率、增重率、體長(zhǎng)增長(zhǎng)率、肥滿度。在相同的換水周期下，隨著蛭弧菌濃度 的升高，成活率、增重率、體長(zhǎng)增長(zhǎng)率、肥滿度都在逐漸升高，且都明顯高于A組。Bl-I B8-1…D1-4 D8_4之間的成活率、增重率、體長(zhǎng)增長(zhǎng)率、肥滿度無(wú)明顯差 異。說(shuō)明在水中和/或者是在飼料中添加濃度為10 IO7PfuAiL蛭弧菌游泳體菌液，5-40 天換(全池)水一次，對(duì)成活率、增重率、體長(zhǎng)增長(zhǎng)率、肥滿度影響不明顯，均可促進(jìn)生長(zhǎng)。由此可見(jiàn)，無(wú)論在水體中還是飼料中添加濃度為10 107pfu/mL蛭弧菌游泳體菌 液，40天換(全池)水一次，均可促進(jìn)大菱鲆生長(zhǎng)。相同換水周期下，蛭弧菌游泳體菌液濃 度越高，效果越好。在水中和飼料中同時(shí)添加，效果更佳。表一大菱鲆生長(zhǎng)指標(biāo)的檢測(cè)
權(quán)利要求
一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于包括以下操作步驟(1)取海域無(wú)污染的海水作為養(yǎng)殖用水；養(yǎng)殖用水經(jīng)砂濾、沉淀后，注入養(yǎng)殖池；在養(yǎng)殖池上方蓋遮光布，控制光照強(qiáng)度為150～200lux；(2)在養(yǎng)殖池中加入蛭弧菌游泳體菌液，并加大曝氣，攪拌均勻，使池水中的蛭弧菌游泳體的起始濃度達(dá)10～107pfu/mL；(3)向養(yǎng)殖池中投放魚苗；(4)養(yǎng)殖期間正常曝氣，控制水溫在15～30℃，日投餌量為魚體重的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)3～5％，餌料在投入前，用濃度為10～107pfu/mL蛭弧菌游泳體菌液浸泡15～30min；每隔5～40天換掉池水一次，每次換水后加入蛭弧菌游泳體菌液，使池水中的蛭弧菌游泳體濃度達(dá)到10～107pfu/mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(1)所述 養(yǎng)殖池的池底為凹型或平底，養(yǎng)殖池在注入養(yǎng)殖用水之前清洗消毒干凈；所述遮光布的遮 光率為95%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟⑵和⑷ 所述加入蛭弧菌游泳體菌液的方法為用養(yǎng)殖池中的池水稀釋菌液后，均勻潑灑全池。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(2)所述 加大曝氣的曝氣量為90 100L/h/m3 ；步驟(4)所述正常曝氣的曝氣量為70 80L/h/m3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(3)所述 投放魚苗在水溫15 30°C時(shí)按照以下標(biāo)準(zhǔn)魚苗重量為25 50g時(shí)，投放密度為300 400尾/m2 ；魚苗重量為70 100g時(shí)，投放密度為200 300尾/m2 ；魚苗重量為100 200g 時(shí)，投放密度為100 150尾/m2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟(4)所述 餌料為顆粒餌料；所述餌料在早上、中午和晚上各投放一次，每次投餌間隔5 6小時(shí)，投餌 方式為灑遍全池。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于步驟⑵和⑷ 所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，所述蛭弧菌于2009年8月7日保藏于中 國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO :M 209172。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法，其特征在于所述蛭弧菌游 泳體菌液按照以下方法制備得到接種嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)于營(yíng)養(yǎng)肉湯 液體培養(yǎng)基中，26 30°C培養(yǎng)20h，培養(yǎng)液經(jīng)5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加 入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05，28°C培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經(jīng)6000 8000rpm 離心15 20min后，將蛭弧菌游泳體的上清經(jīng)16000 18000rpm離心15 20min后，沉 淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮， 得到濃度為109pfu/mL蛭弧菌游泳體菌液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種節(jié)水型的九孔鮑養(yǎng)殖方法，其特征在于所述DNB液體 培養(yǎng)基是將營(yíng)養(yǎng)肉湯0. 8g、酪蛋白酸水解物0. 5g和酵母精提物0. lg溶于1000mL蒸餾水 中，調(diào)節(jié)pH值至7. 2 7.6。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種節(jié)水型的大菱鲆養(yǎng)殖方法。該方法包括養(yǎng)殖水源選擇，池水的處理，飼料的處理，換水周期的控制，按照養(yǎng)殖水體生態(tài)學(xué)原理，海洋生物的生長(zhǎng)環(huán)境要求，生物之間的相互關(guān)系及無(wú)公害養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)，采用生物生態(tài)學(xué)的方法控制養(yǎng)殖環(huán)境。關(guān)鍵技術(shù)是在水體中添加蛭弧菌游泳體菌液，同時(shí)飼料也用蛭弧菌游泳體菌液浸泡，養(yǎng)殖期間可達(dá)到40天換掉池水一次。本發(fā)明為生物養(yǎng)殖方法，綠色、安全、無(wú)污染，效果顯著，能夠改善水質(zhì)，促進(jìn)大菱鲆生長(zhǎng)，提高其成活率和免疫力，有極好的發(fā)展前景。對(duì)提高經(jīng)濟(jì)效益和食用安全性，保障人類健康具有十分重要的意義。
文檔編號(hào)A23K1/18GK101940181SQ20101027095
公開(kāi)日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者何偉杰, 蔡俊鵬 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)