專利名稱：一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生態(tài)制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及了一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù) 合微生態(tài)制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
由于抗生素具有抗藥性、耐藥性、殘留性、二重感染等特性，并導(dǎo)致最近全球“超級 病菌”的出現(xiàn)，因而各國都在考慮如何來限制抗生素的應(yīng)用及尋找合適的抗生素替代產(chǎn)品。 歐盟已于2006年全面禁止抗生素作為動物的飼料添加劑，其他各國也在加大對抗生素的 限制。大量的研究證實，微生態(tài)制劑是抗生素的最佳替代品。微生態(tài)制劑是指一類通過調(diào) 節(jié)動物胃腸道微生態(tài)區(qū)系平衡，達(dá)到預(yù)防疾病、促進(jìn)動物生長和提高飼料利用率的活性微 生物、培養(yǎng)物以及其它物質(zhì)的統(tǒng)稱。但是，目前現(xiàn)有技術(shù)中還沒有一種能夠?qū)Υ竽c桿菌具有 有效抑制作用的微生態(tài)制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑及其制 備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑，所述復(fù)合微生態(tài)制劑由下述 體積配比的至少兩種原料菌制成枯草芽孢桿菌(Basillus subtilis)組合乳酪桿 菌(Lactobacillus casei)異常漢遜酵母(Hansenula anomala) = (0 3) (0 3) (0 3)，其中所述枯草芽孢桿菌組合為下述體積配比的至少兩種枯草芽孢桿菌的 組合物發(fā)酵用枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌=(0 3) (0 3) (0 3)。較好地，所述復(fù)合微生態(tài)制劑由下述體積配比的原料菌制成枯草芽孢桿菌組 合乳酪桿菌異常漢遜酵母=0 1:1或1:3:0或2:2:3或2:3: 2，其中 所述枯草芽孢桿菌組合為下述體積比的兩種枯草芽孢桿菌的組合物產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿 菌產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌=1 1?！N抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法首先將枯草芽孢桿 菌組合、乳酪桿菌、異常漢遜酵母分別擴(kuò)大培養(yǎng)活化后，再按體積配比混合均勻即制成復(fù)合 微生態(tài)制劑。進(jìn)一步，枯草芽孢桿菌組合接種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)活化，乳酪桿 菌接種MRS培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)活化，異常漢遜酵母接種YPD培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)活化?？?草芽孢桿菌培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基、YPD培養(yǎng)基均為本領(lǐng)域公知常用培養(yǎng)，擴(kuò)大培養(yǎng)活化亦為 本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)技術(shù)。本發(fā)明微生態(tài)制劑的使用方法將本發(fā)明微生態(tài)制劑，與載體(次粉)按體積/重量比(體積單位為ml，重量單位為g) 1 1的比例混合均勻，在45 50°C的條件下烘干， 然后按每噸全價料添加1 2公斤的添加量添加到畜禽日糧中。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明不同配比的復(fù)合微生態(tài)制劑對大腸桿菌均有抑制作用，并且都要大于金 霉素的抑制作用，尤其當(dāng)枯草芽孢桿菌組合為產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌產(chǎn)淀粉酶枯草芽 孢桿菌=1 1體積比的組合物，枯草芽孢桿菌組合乳酪桿菌異常漢遜酵母分別以 0 1 1,1 3 0,2 2 3,2 3 2的體積比復(fù)合成微生態(tài)制劑時，對大腸桿菌有 很強(qiáng)的抑制作用，使得大腸桿菌在48小時內(nèi)就不再生長。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施措施對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一地詳細(xì)介紹，但本發(fā)明的保護(hù) 范圍并不局限于此發(fā)酵用枯草芽孢桿菌、產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌、乳酪桿 菌、異常漢遜酵母，均是從北京的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC) 購買，并由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)飼料生物技術(shù)研究室保藏和提供。實施例1一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑，由下述原料菌制成乳酪桿菌 30ml、異常漢遜酵母30ml。制備方法乳酪桿菌的培養(yǎng)MRS培養(yǎng)基組成為胰蛋白胨10g、牛肉蛋白胨10g、酵母浸出物 5g、葡萄糖20g、吐溫(80) 1ml、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸鈉2g、硫酸鎂200mg、硫酸 錳50mg，用蒸餾水定容至1L，pH為6. 2 6. 6，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min，接種乳 酪桿菌后，37 °C靜止培養(yǎng)24h。異常漢遜酵母的培養(yǎng)YPD培養(yǎng)基組成為酵母浸提物10g、蛋白胨20g、葡萄糖 20g、用蒸餾水定容至1L、pH為7. 0 7. 2，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min，接種異常漢 遜酵母后，30°C振蕩(150轉(zhuǎn)/分)培養(yǎng)24h。按比例取上述擴(kuò)大培養(yǎng)后的乳酪桿菌、異常漢遜酵母，混合均勻即制成復(fù)合微生 態(tài)制劑。實施例2一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑，由下述原料菌制成枯草芽孢 桿菌組合10ml、乳酪桿菌30ml，其中所述枯草芽孢桿菌組合為下述枯草芽孢桿菌的組合 物產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌5ml、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌5ml。制備方法枯草芽孢桿菌組合的培養(yǎng)培養(yǎng)基組成為20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化鈉、 0. 5g牛肉膏，用蒸餾水定容至1L，pH為7. 0 7. 2，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min ；分別 接種產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌和產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌后，37°C振蕩(150轉(zhuǎn)/分)培養(yǎng)24h。乳酪桿菌的培養(yǎng)MRS培養(yǎng)基組成為胰蛋白胨10g、牛肉蛋白胨10g、酵母浸出物 5g、葡萄糖20g、吐溫(80) 1ml、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸鈉2g、硫酸鎂200mg、硫酸 錳50mg，用蒸餾水定容至1L，pH為6. 2 6. 6，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min，接種乳酪桿菌后，37 °C靜止培養(yǎng)24h。按比例取上述擴(kuò)大培養(yǎng)后的產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌、乳 酪桿菌，混合均勻即制成復(fù)合微生態(tài)制劑。實施例3—種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑，由下述原料菌制成枯草芽孢 桿菌組合20ml、乳酪桿菌20ml、異常漢遜酵母30ml，其中所述枯草芽孢桿菌組合為下述枯 草芽孢桿菌的組合物產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌10ml、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌10ml。制備方法枯草芽孢桿菌組合的培養(yǎng)培養(yǎng)基組成為20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化鈉、 0. 5g牛肉膏，用蒸餾水定容至1L，pH為7. 0 7. 2，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min ；分別 接種產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌和產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌后，37°C振蕩(150轉(zhuǎn)/分)培養(yǎng)24h。乳酪桿菌的培養(yǎng)MRS培養(yǎng)基組成為胰蛋白胨10g、牛肉蛋白胨10g、酵母浸出物 5g、葡萄糖20g、吐溫(80) 1ml、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸鈉2g、硫酸鎂200mg、硫酸 錳50mg，用蒸餾水定容至1L，pH為6. 2 6. 6，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min，接種乳 酪桿菌后，37 °C靜止培養(yǎng)24h。異常漢遜酵母的培養(yǎng)YPD培養(yǎng)基組成為酵母浸提物10g、蛋白胨20g、葡萄糖 20g、用蒸餾水定容至1L、pH為7. 0 7. 2，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min，接種異常漢 遜酵母后，30°C振蕩(150轉(zhuǎn)/分)培養(yǎng)24h。按比例取上述擴(kuò)大培養(yǎng)后的產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌、乳 酪桿菌、異常漢遜酵母，混合均勻即制成復(fù)合微生態(tài)制劑。實施例4一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑，由下述原料菌制成枯草芽孢 桿菌組合20ml、乳酪桿菌30ml、異常漢遜酵母20ml，其中所述枯草芽孢桿菌組合為下述枯 草芽孢桿菌的組合物產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌10ml、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌10ml。制備方法枯草芽孢桿菌組合的培養(yǎng)培養(yǎng)基組成為20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化鈉、 0. 5g牛肉膏，用蒸餾水定容至1L，pH為7. 0 7. 2，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min ；分別 接種產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌后，37°C振蕩(150轉(zhuǎn)/分)培養(yǎng)24h。乳酪桿菌的培養(yǎng)MRS培養(yǎng)基組成為胰蛋白胨10g、牛肉蛋白胨10g、酵母浸出物 5g、葡萄糖20g、吐溫(80) 1ml、磷酸氫二鉀2g、乙酸鈉5g、檸檬酸鈉2g、硫酸鎂200mg、硫酸 錳50mg，用蒸餾水定容至1L，pH為6. 2 6. 6，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min，接種乳 酪桿菌后，37 °C靜止培養(yǎng)24h。異常漢遜酵母的培養(yǎng)YPD培養(yǎng)基組成為酵母浸提物10g、蛋白胨20g、葡萄糖 20g、用蒸餾水定容至1L、pH為7. 0 7. 2，在0. 15MPa高壓下蒸汽滅菌20min，接種異常漢 遜酵母后，30°C振蕩(150轉(zhuǎn)/分)培養(yǎng)24h。按比例取上述擴(kuò)大培養(yǎng)后的產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌、乳 酪桿菌、異常漢遜酵母，混合均勻即制成復(fù)合微生態(tài)制劑。本發(fā)明復(fù)合微生態(tài)制劑對大腸桿菌的抑制作用1.材料和方法
1. 1菌種發(fā)酵用枯草芽孢桿菌、產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌、產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿 菌、乳酪桿酸菌、異常漢遜酵母、豬致病性大腸桿菌，均是從北京的中國微生物菌種保藏管 理委員會普通微生物中心(CGMCC)購買，并由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)飼料生物技術(shù)研究室保藏和提{共。1. 2試驗設(shè)計見表1和表2。表1三種枯草芽孢桿菌不同的添加比例對大腸桿菌抑制作用的試驗設(shè)計
權(quán)利要求
1.一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于所述復(fù)合微生態(tài)制劑 由下述體積配比的至少兩種原料菌制成枯草芽孢桿菌組合乳酪桿菌異常漢遜酵母= (0 3) (0 3) (0 3)，其中所述枯草芽孢桿菌組合為下述體積配比的至少兩種枯 草芽孢桿菌的組合物發(fā)酵用枯草芽孢桿菌產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢 桿菌=(0 3) (0 3) (0 3)。
2.如權(quán)利要求1所述的抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑，其特征在于所 述復(fù)合微生態(tài)制劑由下述體積配比的原料菌制成枯草芽孢桿菌組合乳酪桿菌異常漢 遜酵母=0 :1:1或1:3:0或2:2:3或2:3: 2，其中所述枯草芽孢桿菌組合 為下述體積比的兩種枯草芽孢桿菌的組合物產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢 桿菌=1:1。
3.一種制備如權(quán)利要求1或2所述的抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑的方 法，其特征在于首先將枯草芽孢桿菌組合、乳酪桿菌、異常漢遜酵母分別擴(kuò)大培養(yǎng)活化后， 再按體積配比混合均勻即制成復(fù)合微生態(tài)制劑。
4.如權(quán)利要求3所述的抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其 特征在于枯草芽孢桿菌組合接種枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)活化，乳酪桿菌接種 MRS培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)活化，異常漢遜酵母接種YPD培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)活化。
全文摘要
本發(fā)明屬于微生態(tài)制劑技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種抑制致病性大腸桿菌生長的復(fù)合微生態(tài)制劑及其制備方法。由下述體積配比的至少兩種原料菌制成枯草芽孢桿菌組合∶乳酪桿菌∶異常漢遜酵母＝(0～3)∶(0～3)∶(0～3)，其中所述枯草芽孢桿菌組合為下述體積配比的至少兩種枯草芽孢桿菌的組合物發(fā)酵用枯草芽孢桿菌∶產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌∶產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌＝(0～3)∶(0～3)∶(0～3)。本發(fā)明不同配比復(fù)合微生態(tài)制劑對大腸桿菌均有抑制作用，且都要大于金霉素的抑制作用，最佳配比枯草芽孢桿菌組合為產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌∶產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌＝1∶1，枯草芽孢桿菌組合∶乳酪桿菌∶異常漢遜酵母分別以0∶1∶1，1∶3∶0，2∶2∶3，2∶3∶2。
文檔編號A23K1/17GK101999531SQ20101028746
公開日2011年4月6日 申請日期2010年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月20日
發(fā)明者劉俊熙, 尹清強(qiáng), 常娟, 王瀟, 范國歌, 鄭秋紅 申請人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué), 河南普愛飼料股份有限公司