專利名稱：一種海參用復方免疫增強劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及免疫增強劑技術領域，具體涉及一種海參用復方免疫增強劑及制備方 法。
背景技術：
海參具有極高的營養(yǎng)價值和保健功能，近年來其養(yǎng)殖業(yè)已成為一項新興產(chǎn)業(yè)。然 而由于海參病害問題日漸突出，極易被寄生蟲、細菌、病毒、原生動物等病原感染，造成了巨 大的經(jīng)濟損失，為控制病害發(fā)生，減少損失，生產(chǎn)者多數(shù)通過大量使用抗生素來避免疾病的 發(fā)生，抗生素的過度使用必然使病原抗性增加以及產(chǎn)生毒力更強的病原，同時可能帶來的 藥物殘留也將影響產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，危害人類的健康。中草藥的免疫作用顯著，且無毒、無殘留，已經(jīng)逐漸應用到海水養(yǎng)殖業(yè)的研 究?，F(xiàn)有的研究和專利都是使用的中草藥成品，按照比例配伍后直接投喂(專利 CN200910187415. 3)或是通過水煎法提取藥液后用于藥浴治療(專利200810012641)。由 于中草藥的有效化學成分復雜同時兼有營養(yǎng)和藥物的雙重作用，既能促進機體酶合成及活 性，又能增加機體抗體效價，調(diào)節(jié)機體免疫功能，具有非特異性抗菌作用，中草藥中的多糖 是眾多中草藥的主要活性物質(zhì)，其關鍵性作用舉足輕重，目前研究中草藥的例如多糖這種 單一成分應用到海參疾病防治還甚少。中草藥免疫增強劑的開發(fā)成為一個新的重要發(fā)展方向，然而口服多糖類免疫增強 劑雖具有較多優(yōu)點但損失多，效果出現(xiàn)時間長，對于海參的攝食性來說，產(chǎn)品的利用效率 低?；诖?，如何研發(fā)制備一種安全、無毒、無殘留的中草藥免疫增強劑，起效快，利用率高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了避免在海參疾病防治中使用抗生素以及克服現(xiàn)有中草藥成品利用率 低的問題，提供了一種海參用復方免疫增強劑及其制備方法，安全、高效。為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用以下技術方案予以實現(xiàn)一種海參用復方免疫增強劑，包括至少由芯材和壁材組成的多糖微膠囊，其中所 述壁材包括海藻酸鈉和殼聚糖，所述芯材與壁材各組分的重量比為芯材海藻酸鈉殼 聚糖=1 (2. 8 3. 5) (1 2)；所述的芯材為黃芪多糖提取物和茯苓多糖提取物的至少一種。優(yōu)選的，芯材海藻酸鈉殼聚糖=1:3:1。進一步的，當所述的芯材同時包含黃芪多糖提取物和茯苓多糖提取物時，兩者的 重量比為黃芪多糖提取物茯苓多糖提取物=1 1。又進一步的，海參用復方免疫增強劑還包括枯草芽孢桿菌活菌制劑，添加量為 (1 2) X 109cfu/g基礎飼料，所述多糖微膠囊的添加量為基礎飼料的2 4. 5%。
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優(yōu)選的，所述枯草芽孢桿菌活菌制劑添加量為1 X 109cfu/g基礎飼料，所述多糖微 膠囊的添加量為基礎飼料的4%。再進一步的，所述的基礎飼料由海泥和海藻干粉制劑組成。所述的黃芪多糖提取物中黃芪多糖含量為40 75%。所述的茯苓多糖提取物中茯苓多糖含量為40 75%。一種所述的海參用復方免疫增強劑的制備方法，包括以下步驟(1)、按照權利要求1所規(guī)定的重量比例稱取芯材和壁材；(2)、把海藻酸鈉配制成濃度為2. 8 3. 5%的海藻酸鈉溶液，并將芯材加入到所 述的海藻酸鈉溶液中，待溶解后使用攪拌器攪拌均勻，作用時間為30 40分鐘，形成芯材 與海藻酸鈉的凝膠液；(3)、配制濃度為2. 8% 4%的CaCl2溶液，利用噴霧器把所述凝膠液擠壓成微膠 珠放入到所述CaCl2溶液中，作用時間為30 50分鐘，形成混合顆粒物；(4)、使用濃度為的醋酸把殼聚糖配制成濃度為1 2%殼聚糖溶液，把所述混 合顆粒物經(jīng)蒸餾水至少洗滌3次后放入所述殼聚糖溶液中，使用攪拌器不斷攪拌，作用時 間為60 100分鐘，形成多糖微膠囊顆粒；(5)、將所述多糖微膠囊顆粒經(jīng)蒸餾水至少洗滌1次后置于干燥箱內(nèi)烘干，干燥溫 度為20 50°C，將烘干后的多糖微膠囊顆粒使用藥物粉碎機粉碎，經(jīng)100-160目篩子過濾。其中，步驟(3)中所述的CaCl2溶液的pH為5 6。其中，步驟(4)中所述的醋酸溶液的pH為2 3。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是本發(fā)明的海參用復方免疫增強劑 避免了使用抗生素對海參疾病的防治，無毒、無殘留，保證了海參產(chǎn)品的食用安全；通過提 取中草藥例如多糖這種單一成分應用到海參疾病防治；使用微膠囊技術將多糖物質(zhì)包埋， 提高了多糖的使用效率，增強了藥效，見效快。結(jié)合本發(fā)明具體實施例的詳細描述，本發(fā)明的其他特點和優(yōu)點將變得更加清楚。
具體實施例方式(1)、稱取芯材和壁材，其中所述壁材包括海藻酸鈉和殼聚糖，所述芯材與壁材各 組分的重量比為芯材海藻酸鈉殼聚糖=1 (2. 8 3. 5) (1 2);所述的芯材為黃芪多糖提取物和茯苓多糖提取物的至少一種，當芯材同時包含黃 芪多糖提取物和茯苓多糖提取物時，黃芪多糖提取物茯苓多糖提取物=1 1 ；(2)、把海藻酸鈉配制成濃度為2. 8 3. 5%的海藻酸鈉溶液，并將芯材加入到所 述的海藻酸鈉溶液中，待溶解后使用攪拌器攪拌均勻，海藻酸鈉由于靜電作用，可以吸附在 糖類表面，設定作用時間為30 40分鐘，形成芯材與海藻酸鈉的凝膠液；也可以先將多糖配成多糖溶液，然后將海藻酸鈉加入到多糖溶液中，只需使海藻 酸鈉質(zhì)量與配制多糖溶液所添加的蒸餾水體積比保持在2. 8 3. 5%即可；(3)、配制濃度為2. 8% 4%的CaCl2溶液，并將其pH值保持在5 6之間，利用 銳孔儀把所述凝膠液擠壓成微膠珠，并放入到所述CaCl2溶液中，CaCl2溶液中的Ca2+與海 藻酸發(fā)生離子交換，設定作用時間為30 50分鐘，形成混合顆粒物；(4)、由于殼聚糖只在強酸性環(huán)境中溶解，使用濃度為1 %的醋酸把殼聚糖配制成
4殼聚糖的濃度為1 2%殼聚糖溶液，使溶液的PH保持在2 3，把所述混合顆粒物經(jīng)蒸餾 水至少洗滌3次，以洗除掉未發(fā)生反應的Ca2+或者其他雜質(zhì)離子，然后將混合顆粒物放入 配制好的殼聚糖溶液中，使用攪拌器不斷攪拌，令其混合均勻、充分作用，設定作用時間為 60 100分鐘，形成多糖微膠囊顆粒； (5)、將所述多糖微膠囊顆粒經(jīng)蒸餾水至少洗滌1次后置于干燥箱內(nèi)烘干，干燥溫 度為20 50°C，將烘干后的多糖微膠囊顆粒使用藥物粉碎機粉碎，經(jīng)100-160目篩子過濾， 即成多糖微膠囊。為了方便所制備的免疫增強劑易于沉入海參池的底部，防止由于重量輕而漂浮在 水面無法被刺參攝食，一般采用免疫增強劑與基礎飼料混合一起投喂，基礎飼料由海泥和 海藻組成，基礎飼料投喂量為刺參的體重的2%左右，具體投喂量可視殘餌量稍做調(diào)整。所 述基礎飼料優(yōu)選采用海泥和鼠尾藻，也可以海泥配合使用其他藻類。本發(fā)明的免疫增強劑 下述的所有實施例投喂海參時混合使用的基礎飼料均按海泥鼠尾藻=11進行配制， 不再作贅述。本發(fā)明的海參用復方免疫增強劑，可以只包含多糖微膠囊，也可以與枯草芽孢桿 菌活菌制劑配合使用。所述枯草芽孢桿菌起到調(diào)節(jié)水質(zhì)作用，同時也對海參體腔微生態(tài)起 到調(diào)節(jié)作用，兩者的含量視基礎飼料的重量而定，所述多糖微膠囊添加的重量為基礎飼料 的2 4. 5%，當同時包含多糖微膠囊和枯草芽孢桿菌活菌制劑時，所述多糖微膠囊的添加 量仍為基礎飼料的2 4. 5%，所述枯草芽孢桿菌制劑的添加量為(1 2) X 109cfu/g基礎 飼料。實施例一，稱取海藻酸鈉30g溶解于IOOOml蒸餾水中，黃芪多糖提取物和茯苓多 糖提取物各稱取5g，緩慢加入到海藻酸鈉溶液中，期間使用磁力攪拌器不斷攪拌，作用時間 為30分鐘，此時形成兩種多糖提取物與海藻酸鈉的凝膠液。所述黃芪多糖提取物中黃芪 多糖含量和茯苓多糖提取物中茯苓多糖含量均為50%。稱取30g CaCl2溶于1000ml蒸餾 水中，PH值約為5，利用銳孔儀把所述凝膠液擠壓成微膠珠放入到所述CaCl2溶液中，作用 時間為30分鐘，形成混合顆粒物。稱取IOg殼聚糖，溶解于IOOOml濃度為的醋酸溶液 中，所述醋酸溶液的PH約為2. 5，把所述混合顆粒物經(jīng)蒸餾水洗滌3次后放入所述殼聚糖溶 液中，使用磁力攪拌器不斷攪拌，作用時間為60分鐘，形成多糖微膠囊顆粒，然后將其經(jīng)蒸 餾水洗滌3次后置于干燥箱內(nèi)烘干，干燥溫度為40°C，烘干后的多糖微膠囊顆粒直徑約為 1mm，使用藥物粉碎機進行粉碎，經(jīng)100目篩子過濾，得到直徑約為0. 14mm的多糖微膠囊。在對海參喂食時，按照多糖微膠囊重量占基礎飼料的4%進行投喂。實施例二，本實施例的免疫增強劑使用實施例一制備的多糖微膠囊配合使用枯草 芽孢桿菌活菌制劑，其中枯草芽孢桿菌活菌制劑的添加量為lX109cfu/g基礎飼料，所述多 糖微膠囊的添加量為基礎飼料的4%。實施例三，稱取黃芪多糖提取物10g，海藻酸鈉30g，以及30g CaCl2和IOg殼聚糖， 其中，所述黃芪多糖提取物中黃芪多糖含量為50%，本實施例的黃芪多糖微膠囊的制備過 程中所配制的海藻酸鈉溶液濃度、CaCl2溶液濃度以及所使用的醋酸濃度均與實施例一中 保持一致，制備步驟也一致，只需將黃芪多糖提取物和茯苓多糖提取物部分替換為只有黃 芪多糖提取物，在此不做贅述，最終制得黃芪多糖微膠囊，并且按照多糖微膠囊重量占基礎 飼料的4%進行投喂。
實施例四，稱取茯苓多糖提取物10g，海藻酸鈉30g，以及30g CaCljn IOg殼聚糖， 其中，所述茯苓多糖提取物中茯苓多糖含量為50%，本實施例的茯苓多糖微膠囊的制備過 程中所配制的海藻酸鈉溶液濃度、CaCl2溶液濃度以及所使用的醋酸濃度均與實施例一中 保持一致，制備步驟也一致，只需將黃芪多糖提取物和茯苓多糖提取物部分替換為只有茯 苓多糖提取物，在此不做贅述，最終制得茯苓多糖微膠囊，并且按照多糖微膠囊重量占基礎 飼料的4%進行投喂。實施例五，稱取28g海藻酸鈉溶解于IOOOml蒸餾水中，黃芪多糖提取物和茯苓多 糖提取物各稱取5g，緩慢加入到海藻酸鈉溶液中，期間使用磁力攪拌器不斷攪拌，作用時間 為40分鐘，此時形成兩種多糖提取物與海藻酸鈉的凝膠液。所述黃芪多糖提取物中黃芪多 糖含量和茯苓多糖提取物中茯苓多糖含量均為40%。稱取40g CaCl2溶于1000ml蒸餾水 中，利用銳孔儀把所述凝膠液擠壓成微膠珠放入到所述CaCl2溶液中，作用時間為50分鐘， 形成混合顆粒物。稱取20g殼聚糖，溶解于IOOOml濃度為1 %的醋酸溶液中，把所述混合 顆粒物經(jīng)蒸餾水洗滌3次后放入所述殼聚糖溶液中，使用磁力攪拌器不斷攪拌，作用時間 為90分鐘，形成多糖微膠囊顆粒，然后將其經(jīng)蒸餾水洗滌1次后置于干燥箱內(nèi)烘干，干燥溫 度為20°C，使用藥物粉碎機進行粉碎，經(jīng)160目篩子過濾，得到直徑約為0. Imm的多糖微膠 囊，并且按照多糖微膠囊重量占基礎飼料的2%進行投喂。
試驗例1，對實施例一制備的多糖微膠囊顆粒進行溶解實驗，稱取Ig多糖微膠囊， 溶解于50ml海水中，室溫下放置4小時，測定490nm下的吸光度OD值。根據(jù)標準曲線Y = 1.4563X(R2 = 0.998)計算，多糖的溶解率約為3% ；溶解到刺參體腔液中4小時，多糖溶解 率約為30%，說明本發(fā)明的實施例一制備的多糖微膠囊顆粒在水中的損失率很低，更多被 海參吸收。試驗例2，對實施例二制備的免疫增強劑進行攻毒實驗，按照刺參體重的2%將 100%免疫增強劑進行投喂，刺參狀態(tài)良好，未見明顯異常，死亡率為0，因此證明本發(fā)明的 實施例二的免疫增強劑對刺參無毒害、無刺激性作用。試驗例3，對海參幾種免疫指標的測定。實驗分為6組，其中4組為本發(fā)明實施例一至四中所制備的免疫增強劑，還設置有 兩組對照組，對照1為只有基礎飼料，即海泥和鼠尾藻，按1 1配制，對照2含有壁材和基 礎飼料，即海藻酸鈉殼聚糖=3 1，配合使用基礎飼料。實驗分早晚各一次進行投喂，早上投喂量為1/3，晚上投喂量為2/3，實驗中測定 的免疫指標包括堿性磷酸酶AKP，溶菌酶LSZ，超氧化物歧化酶SOD以及補體C3含量。海參池每天排污，隔天換水，連續(xù)充氣，設有重復實驗，每個實驗組三個平行，取樣 時間分別為第7，14，21，28天，剖取體腔液離心后測定，結(jié)果如下表1不同實驗組對刺參體腔液堿性磷酸酶AKP活性的影響對照ι 對照2 實施例一實施例二實施例三實施例四
權利要求
一種海參用復方免疫增強劑，其特征在于包括至少由芯材和壁材組成的多糖微膠囊，其中所述壁材包括海藻酸鈉和殼聚糖，所述芯材與壁材各組分的重量比為芯材∶海藻酸鈉∶殼聚糖＝1∶(2.8～3.5)∶(1～2)；所述的芯材為黃芪多糖提取物和茯苓多糖提取物的至少一種。
2.根據(jù)權利要求1所述的海參用復方免疫增強劑，其特征在于當所述的芯材同時包 含黃芪多糖提取物和茯苓多糖提取物時，兩者的重量比為黃芪多糖提取物茯苓多糖提 取物=1 1。
3.根據(jù)權利要求1所述的海參用復方免疫增強劑，其特征在于所述多糖微膠囊的添 加量為基礎飼料的2 4. 5%。
4.根據(jù)權利要求1所述的海參用復方免疫增強劑，其特征在于還包括枯草芽孢桿菌 活菌制劑，添加量為(1 2) X 109cfu/g基礎飼料。
5.根據(jù)權利要求1至4任一項權利要求所述的海參用復方免疫增強劑，其特征在于 所述的黃芪多糖提取物中黃芪多糖含量為40 75%。
6.根據(jù)權利要求5所述的海參用復方免疫增強劑，其特征在于所述的基礎飼料由海 泥和海藻干粉制劑組成。
7.根據(jù)權利要求1至4任一項權利要求所述的海參用復方免疫增強劑，其特征在于 所述的茯苓多糖提取物中茯苓多糖含量為40 75%。
8.—種權利要求1所述的海參用復方免疫增強劑的制備方法，其特征在于包括以下 步驟(1)、按照權利要求1所規(guī)定的重量比例稱取芯材和壁材；(2)、把海藻酸鈉配制成濃度為2.8 3. 5%的海藻酸鈉溶液，并將芯材加入到所述的 海藻酸鈉溶液中，待溶解后使用攪拌器攪拌均勻，作用時間為30 40分鐘，形成芯材與海 藻酸鈉的凝膠液；(3)、配制濃度為2.8% 4%的CaCl2溶液，利用銳孔儀把所述凝膠液擠壓成微膠珠放 入到所述CaCl2溶液中，作用時間為30 50分鐘，形成混合顆粒物；(4)、使用濃度為的醋酸把殼聚糖配制成濃度為1 2%殼聚糖溶液，把所述混合顆 粒物經(jīng)蒸餾水至少洗滌3次后放入所述殼聚糖溶液中，使用攪拌器不斷攪拌，作用時間為 60 100分鐘，形成多糖微膠囊顆粒；(5)、將所述多糖微膠囊顆粒經(jīng)蒸餾水至少洗滌1次后置于干燥箱內(nèi)烘干，干燥溫度為 20 50°C，將烘干后的多糖微膠囊顆粒使用藥物粉碎機粉碎，經(jīng)100-160目篩子過濾。
9.根據(jù)權利要求8所述的海參用復方免疫增強劑的制備方法，其特征在于步驟(3) 中所述的CaCl2溶液的pH為5 6。
10.根據(jù)權利要求8所述的海參用復方免疫增強劑的制備方法，其特征在于步驟(4) 中所述的醋酸溶液的pH為2 3。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種海參用復方免疫增強劑及其制備方法，它所要解決的技術問題在于避免在海參疾病防治中使用抗生素以及克服現(xiàn)有中草藥成品利用率低的問題，提供了一種海參用復方免疫增強劑。為了解決上述問題，技術方案是，一種海參用復方免疫增強劑，包括至少由芯材和壁材組成的多糖微膠囊，其中所述壁材包括海藻酸鈉和殼聚糖，所述芯材與壁材各組分的重量比為芯材∶海藻酸鈉∶殼聚糖＝1∶(2.8～3.5)∶(1～2)，所述的芯材為黃芪多糖提取物和茯苓多糖提取物的至少一種，經(jīng)實驗證明，本發(fā)明的免疫增強劑有效提高了海參免疫保護能力，安全、高效。
文檔編號A23K1/16GK101966169SQ20101029274
公開日2011年2月9日 申請日期2010年9月20日 優(yōu)先權日2010年9月20日
發(fā)明者于曉清, 朱安成, 李天保, 楊秀生, 樊英, 王勇強, 王淑嫻 申請人:山東省海水養(yǎng)殖研究所