專利名稱：一種天麻種子萌發(fā)菌(xl-m0701)及制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是國家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品“昭通天麻” 種子萌發(fā)菌(XL-M0701)及制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
以云南省彝良縣小草壩林區(qū)烏天麻為代表的國家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品“昭通天 麻”(2004年獲得認(rèn)證)是享譽(yù)中外的名貴中藥材。天麻是樹蘭亞科異養(yǎng)型植物，在自然條 件下，天麻種子萌發(fā)生長必須依靠萌發(fā)菌、蜜環(huán)菌這類真菌供給營養(yǎng)，不同萌發(fā)菌所提供的 營養(yǎng)對天麻種子的萌發(fā)和種子發(fā)芽后原球莖的生長都有不同影響。國內(nèi)公知的已鑒定到種 的天麻種子萌發(fā)菌株紫萁小菇(Mycena osmundicola)、石斛小菇(Mycena dendrobii)、蘭 小燕(Mycena orchidicola)禾口開唇蘭小 (Mycena anoectochila)，其中石解小 在天麻 人工種植中運(yùn)用較多。為了在人工栽培“昭通天麻”的過程中得到純正品質(zhì)的烏天麻種子， 需要在烏天麻野生環(huán)境尋找一種與烏天麻最具共生優(yōu)勢的萌發(fā)菌源，并分離、純化出對昭 通天麻種子萌發(fā)、生長較優(yōu)良的萌發(fā)菌株，以保證昭通天麻栽培質(zhì)量和產(chǎn)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于播種“昭通天麻”種子的萌發(fā)菌(XL-M0701)，以及它 的制備方法和應(yīng)用，該菌株有效地保證昭通天麻的純正品質(zhì)。本發(fā)明以采自野生狀態(tài)萌發(fā)的烏天麻初生球菌為菌源，篩選、分離、純化出能保 持昭通天麻特性的優(yōu)良萌發(fā)菌株(XL-M0701)，該菌株的分類命名為石斛小菇Mycena dendrobii，保藏登記號為CGMCC No. 3848。該菌株的制備方法為1)野外培育天麻原球莖選擇天麻種子自然成熟的7-8月，用雙層地膜制成一個約30立方厘米的袋子，袋 底鑿幾個孔后裝上10厘米鮮沙土，采集野生天麻適生林間地面潮濕的含有闊葉樹半腐落 葉或日本金星蕨根，平鋪在袋內(nèi)沙土上，適量噴水后均勻播上天麻種子，種面上蓋一層落葉 再覆鮮沙土 8-10厘米，扎好袋口并將播種袋置于事先挖好的林地塘穴內(nèi)，蓋土堆高出地 面，稍壓緊，再蓋一層枯枝落葉。2)整粒球莖分離上述播種袋培育50-60天后，取出袋子(可見到部分天麻種子已經(jīng)被萌發(fā)成初生 球莖)，挑選發(fā)育健壯的烏天麻原球莖置于培養(yǎng)皿內(nèi)，用自來水洗凈雜物后帶入接種室，在 潔凈工作臺內(nèi)經(jīng)消毒處理后，無菌操作將球莖接入PDA斜面培養(yǎng)基，接種完畢，貼上標(biāo)簽， 將接種管(皿)放入2 恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)；3)菌種純化恒溫培養(yǎng)3-10天，見球莖萌生出白色菌絲后，立即挑取基質(zhì)內(nèi)菌絲點(diǎn)無菌移接到 斜面培養(yǎng)基上，觀察菌絲生長情況并作好記錄，將長勢不一(或有雜菌)的管(皿)種再度提純，把提純后的菌種兩兩之間做拮抗試驗(yàn)，從而純化出本發(fā)明的XL-M0701菌株；4)將純化的菌株制成生產(chǎn)種用于天麻種子萌發(fā)，再次得到了優(yōu)質(zhì)的烏天麻栽培種子。菌落特性XL-M0701菌株在PDA固體培養(yǎng)基上生長的形態(tài)特征為菌落白色、規(guī)則，具有熒光 反應(yīng)，菌絲無色，具有鎖狀聯(lián)合，菌絲呈束狀螺旋彎曲生長，氣生菌絲發(fā)達(dá)。該菌株經(jīng)中科院昆明植物所標(biāo)本館用延長因子(EFl-a)序列分子鑒定與石斛小 菇形似性最近。該菌株在101-301均能生長，以251生長最快，基質(zhì)含水量40%-60%，？!15. 5-6 范圍菌絲生長最好。菌株應(yīng)用將XL-M0701菌株擴(kuò)轉(zhuǎn)培養(yǎng)為三級生產(chǎn)種，在干凈容器內(nèi)把片狀的生 產(chǎn)種撕成碎片，與粉狀的天麻種子均勻拌合后，再播種在林下塘穴內(nèi)的闊葉樹枝材(直徑 50-80mm)上，覆葉蓋土 50-60天后，天麻粉種即可萌發(fā)生長為天麻原生球莖。本發(fā)明的積極效果因XL-M0701菌株的菌源采自于野生狀態(tài)的烏天麻原球莖，保 證了國家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品昭通天麻的品質(zhì)特性，并且在與其他菌種的對比試驗(yàn)中證明本 發(fā)明(XL-M0701)菌株對昭通烏天麻種子的萌發(fā)數(shù)量和速度較優(yōu)。能夠?yàn)檎淹ㄌ炻榈囊?guī)模 化種植提供優(yōu)質(zhì)烏天麻良種。本發(fā)明的萌發(fā)菌株(XL-M0701)于2010年5月20日保藏于中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏登記號為CGMCC No. 3848，保藏地址北京市朝 陽區(qū)北辰西路1號院3號。
具體實(shí)施例方式1、XL-M0701菌株的制備方法1)野外培育天麻原球莖選擇天麻種子自然成熟的7-8月，用雙層地膜制成一個 約30立方厘米的袋子，袋底鑿幾個孔后裝上10厘米鮮沙土，采集野生天麻適生林間地面 潮濕的含有闊葉樹半腐落葉或日本金星蕨根的腐殖土，平鋪在袋內(nèi)沙土上，適量噴水后均 勻播上天麻種子，種面上蓋一層落葉再覆鮮沙土 8-10厘米，扎好袋口并將播種袋置于事先 挖好的林地塘穴內(nèi)，蓋土堆高出地面，稍壓緊，再蓋一層枯枝落葉；2)整粒球莖分離上述播種袋培育50-60天后，取出袋子，挑選發(fā)育健壯的烏天麻 原球莖置于培養(yǎng)皿內(nèi)，用自來水洗凈雜物后帶入接種室，在潔凈工作臺內(nèi)經(jīng)消毒處理后，無 菌操作將球莖接入PDA斜面培養(yǎng)基，接種完畢，貼上標(biāo)簽，將接種管(皿)放入2 恒溫箱 內(nèi)培養(yǎng)；3)菌種純化恒溫培養(yǎng)3-10天，見球莖萌生白色菌絲后，立即挑取基質(zhì)內(nèi)菌絲點(diǎn) 無菌移接到PDA斜面培養(yǎng)基上，觀察菌絲生長情況并作好記錄，將長勢不一(或有雜菌)的 管(皿)種再度提純，把提純后的菌種兩兩之間做拮抗試驗(yàn)，從而純化出本發(fā)明的XL-M0701 菌株(試管種)。2、菌種擴(kuò)繁使用含水量55%的木屑、麥麩等體積比的混合培養(yǎng)料，將XL-M0701 試管種擴(kuò)轉(zhuǎn)培養(yǎng)成600ml瓶裝二級種，再用等體積的木屑、麥麩混合料拌合闊葉樹樹葉制 成袋裝培養(yǎng)料，滅菌后在無菌條件下接入二級種，在濕度70%、室溫22°C _25°C條件下培養(yǎng) 60-80天，即成為三級生產(chǎn)用種。
3、菌株的應(yīng)用將上述三級生產(chǎn)用種用于烏天麻種的培養(yǎng)，得到了優(yōu)質(zhì)的烏天麻 栽培種子。應(yīng)用實(shí)例1)2008年7-10月，在云南省彝良縣小草壩林間，使用XL-M0701轉(zhuǎn)擴(kuò)的三級生產(chǎn) 種，拌合小草壩野生烏天麻粉種1080穴/袋，播種90天后抽樣檢查，結(jié)果見下表
權(quán)利要求
1.一種天麻種子萌發(fā)菌(XL-M0701)，其特征在于該菌株的分類命名為 Mycenadendrobii，保藏登記號為CGMCC No. 3848。
2.權(quán)利要求1所述的天麻種子萌發(fā)菌(XL-M0701)的制備方法，其特征在于按以下步驟 進(jìn)行1)野外培育天麻原球莖選擇天麻種子自然成熟的7-8月，用雙層地膜制成一個約30 立方厘米的袋子，袋底鑿幾個孔后裝上10厘米鮮沙土，采集野生天麻適生林間地面潮濕的 含有闊葉樹半腐落葉或日本金星蕨根的腐殖土，平鋪在袋內(nèi)沙土上，適量噴水后均勻播上 天麻種子，種面上蓋一層落葉再覆鮮沙土 8-10厘米，扎好袋口并將播種袋置于事先挖好的 林地塘穴內(nèi)，蓋土堆高出地面，稍壓緊，再蓋一層枯枝落葉；2)整粒球莖分離上述播種袋培育50-60天后，取出袋子，挑選發(fā)育健壯的烏天麻原球 莖置于培養(yǎng)皿內(nèi)，用水洗凈雜物后帶入接種室，經(jīng)消毒處理后，無菌操作將球莖接入PDA斜 面培養(yǎng)基，接種完畢，將接種管(皿)放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)；3)菌種純化恒溫培養(yǎng)3-10天，見球莖萌生白色菌絲后，立即挑取基質(zhì)內(nèi)菌絲點(diǎn)無菌 移接到PDA斜面培養(yǎng)基上，觀察菌絲生長情況，將長勢不一的管種再度提純，把提純后的菌 種兩兩之間做拮抗試驗(yàn)，從而純化出XL-M0701菌株；
3.權(quán)利要求1所述的天麻種子萌發(fā)菌(XL-M0701)的應(yīng)用，其特征在于將純化的菌株制 成生產(chǎn)種用于烏天麻種的培養(yǎng)，得到了優(yōu)質(zhì)的烏天麻栽培種子。
全文摘要
本發(fā)明是一種天麻種子萌發(fā)菌(XL-M0701)及其制備方法。該菌株的分類命名為Mycenadendrobii，保藏登記號為CGMCC No.3848。將純化的菌株制成生產(chǎn)種用于烏天麻種的培養(yǎng)，得到了優(yōu)質(zhì)的烏天麻栽培種子。因XL-M0701菌株的菌源采自于野生狀態(tài)的烏天麻原球莖，保證了國家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品昭通天麻的品質(zhì)特性，并且在與其他菌種的對比試驗(yàn)中證明本發(fā)明(XL-M0701)菌株對昭通烏天麻種子的萌發(fā)數(shù)量和速度較優(yōu)。能夠?yàn)檎淹ㄌ炻榈囊?guī)?；N植提供優(yōu)質(zhì)烏天麻良種。
文檔編號C05F11/08GK102061263SQ20101051870
公開日2011年5月18日 申請日期2010年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月26日
發(fā)明者凌敏, 徐暢 申請人:昭通神農(nóng)烏天麻良種繁育有限公司