專利名稱：一種魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的方法。
背景技術(shù)：
魚(yú)類的耳石是一種鈣化組織，存在于內(nèi)耳的膜迷路內(nèi)，起平衡和聽(tīng)覺(jué)的組織，硬骨魚(yú)類一般具有矢耳石、微耳石和星耳石3對(duì)耳石，分別存在于內(nèi)耳的球囊、橢圓囊和聽(tīng)壺中。魚(yú)類在與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的過(guò)程中，環(huán)境中的化學(xué)元素不斷被攝入魚(yú)體，在魚(yú)體內(nèi)經(jīng)過(guò)一系列的代謝、循環(huán)，最終會(huì)沉積到耳石上。因此，可通過(guò)改變魚(yú)類生長(zhǎng)的環(huán)境，使魚(yú)類在耳石上形成特定的標(biāo)記，以區(qū)別于自然種群。魚(yú)類增殖放流效果評(píng)估通常采用標(biāo)志重捕法，這就需要在放流前對(duì)魚(yú)類進(jìn)行標(biāo)記來(lái)區(qū)分放流群體和野生群體。目前常用的標(biāo)記方法有掛牌標(biāo)記法、體外標(biāo)記法、體內(nèi)標(biāo)記法、生物遙測(cè)技術(shù)四種，其中體外標(biāo)記法包括切鰭法、烙印法、顏料注射法等，體內(nèi)標(biāo)記法包括編碼金屬標(biāo)、被動(dòng)整合雷達(dá)標(biāo)、內(nèi)藏可視標(biāo)和化學(xué)標(biāo)記法。耳石熒光標(biāo)記屬于化學(xué)標(biāo)記法的一種，通常選用熒光染料，如茜素絡(luò)合物和鈣黃綠素等，因?yàn)樗鼈兛梢耘c鈣結(jié)合，并在耳石中沉積下來(lái)，在熒光顯微鏡下可檢測(cè)到紅色、綠色等熒光。該方法避免了其它標(biāo)記方法對(duì)魚(yú)體傷害較大，標(biāo)記遺失率高，標(biāo)記價(jià)格昂貴，保持率低、標(biāo)記數(shù)量有限等缺點(diǎn)，且該方法適用于不同大小的魚(yú)類群體，具有標(biāo)記效率高，成本低，標(biāo)記保留時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，是大規(guī)模魚(yú)苗標(biāo)記的理想手段，為人工放流種群識(shí)別和增殖放流效果評(píng)估等工作提供了新思路，具有較好的應(yīng)用前景。目前，耳石熒光標(biāo)記通常采用浸泡法，即把熒光染料溶解于水中，然后放入魚(yú)苗飼養(yǎng)一段時(shí)間后取出，在魚(yú)類耳石上將形成熒光標(biāo)記環(huán)。最常用的熒光標(biāo)記物是茜素絡(luò)合物和鹽酸四環(huán)素。但是研究表明，鹽酸四環(huán)素溶液對(duì)魚(yú)體有較大的毒性，濃度高時(shí)魚(yú)類會(huì)出現(xiàn)不同程度的不適應(yīng)或死亡，且標(biāo)記效果較差，因此一般不作為推薦的熒光標(biāo)記物，而茜素絡(luò)合物為比較合適的熒光標(biāo)記物。已有的研究報(bào)道表明一般用100mg/L以上的茜素絡(luò)合物溶液浸泡之后才能在魚(yú)類耳石上形成較為清晰的標(biāo)記輪。如何春林等在《用熒光物質(zhì)浸泡標(biāo)記重口裂腹魚(yú)仔魚(yú)耳石》，四川動(dòng)物2008年第3期，p331-314中所指出的，用熒光物質(zhì)對(duì)重口裂腹魚(yú)仔魚(yú)浸泡標(biāo)記表明，200 300mg/L的茜素絡(luò)合物溶液浸泡12h對(duì)重口裂腹魚(yú)仔魚(yú)耳石有很好的標(biāo)記效果，熒光和可見(jiàn)光下均能檢測(cè)到明顯的標(biāo)記環(huán)；100 150mg/L的標(biāo)記能檢測(cè)到熒光標(biāo)記環(huán)，但可見(jiàn)光下標(biāo)記環(huán)較微弱。相同浸泡時(shí)間，隨著浸泡濃度的增加， 耳石上標(biāo)記環(huán)強(qiáng)度增加；相同浸泡濃度，隨著浸泡時(shí)間的增加，耳石上標(biāo)記環(huán)強(qiáng)度增加。三對(duì)耳石中，微耳石和矢耳石對(duì)茜素絡(luò)合物較敏感，星耳石敏感性較低。鹽酸四環(huán)素的標(biāo)記效果很差，浸泡濃度為50 160mg/L時(shí)，三對(duì)耳石上均不能檢測(cè)到標(biāo)記環(huán)，同時(shí)110 160mg/ L的鹽酸四環(huán)素浸泡液對(duì)仔魚(yú)有較高的致昏或致死作用。因此，茜素絡(luò)合物是對(duì)重口裂腹魚(yú)魚(yú)苗進(jìn)行化學(xué)標(biāo)記比較合適的熒光物質(zhì)，而鹽酸四環(huán)素不適合于標(biāo)記該魚(yú)的耳石。又如付自東等在《用熒光物質(zhì)浸泡標(biāo)記胭脂魚(yú)仔、稚魚(yú)耳石》所指出的，100 200mg / L的茜素絡(luò)合物溶液浸泡24h對(duì)胭脂魚(yú)仔、稚魚(yú)耳石有很好的標(biāo)記效果。
但根據(jù)物理性質(zhì)可知茜素絡(luò)合物微溶于水，需要使用其他助溶劑才可以達(dá)到可標(biāo)記的濃度。而助溶劑的使用，對(duì)魚(yú)類有著一定的副作用。因此，使用浸泡標(biāo)記耳石的方法， 只有極少量的標(biāo)記物會(huì)沉淀到耳石上，大部分標(biāo)記物或存在于水中，無(wú)法得到利用，標(biāo)記物的利用率極低，存在茜素絡(luò)合物使用量大，浪費(fèi)嚴(yán)重等問(wèn)題，且會(huì)對(duì)環(huán)境造成一定的不良影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新型的魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的方法。 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是
一種魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的方法，包括以下步驟
1)將茜素絡(luò)合物與魚(yú)飼料混合均勻，使飼料中含有茜素絡(luò)合物，得到標(biāo)記飼料；
2)使用標(biāo)記飼料喂養(yǎng)待標(biāo)記魚(yú)。優(yōu)選的，使用標(biāo)記飼料喂養(yǎng)待標(biāo)記魚(yú)的時(shí)間不短于24小時(shí)。優(yōu)選的，茜素絡(luò)合物的含量占標(biāo)記飼料總質(zhì)量的2% 10%。本發(fā)明的有益效果是
本發(fā)明方法避免了掛牌標(biāo)記法和體外標(biāo)記法對(duì)魚(yú)體傷害較大且標(biāo)記遺失率高的問(wèn)題， 與編碼金屬標(biāo)和被動(dòng)整合雷達(dá)標(biāo)等其它體內(nèi)標(biāo)記方法相比，標(biāo)記價(jià)格低廉且適合大規(guī)模標(biāo)記，與傳統(tǒng)浸泡法進(jìn)行耳石熒光標(biāo)記相比更節(jié)約茜素絡(luò)合物。本發(fā)明可根據(jù)待標(biāo)記魚(yú)種類、 大小以及數(shù)量，確定投喂標(biāo)記飼料的量和時(shí)間，是一種可以普遍適用的標(biāo)記方法。本發(fā)明方法中，茜素絡(luò)合物被攝入魚(yú)體內(nèi)，幾乎沒(méi)有標(biāo)記物分散至水體中，大大提高了標(biāo)記物的利用率。這同時(shí)也降低了標(biāo)記物對(duì)水體的潛在污染。


圖1是廣東魴矢耳石在黃綠光、藍(lán)光和紫光激發(fā)下的熒光圖像；
圖2是使用高茜素絡(luò)合物含量飼料(1 10)喂養(yǎng)后，廣東魴微耳石在黃綠光、藍(lán)光和紫光激發(fā)下的熒光圖像；
圖3是使用低茜素絡(luò)合物含量飼料(1 40)喂養(yǎng)后，廣東魴微耳石在黃綠光、藍(lán)光和紫光激發(fā)下的熒光圖像。
具體實(shí)施例方式一種魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的方法，包括以下步驟
1)將茜素絡(luò)合物與魚(yú)飼料混合均勻，使飼料中含有茜素絡(luò)合物，得到標(biāo)記飼料；
2)使用標(biāo)記飼料喂養(yǎng)待標(biāo)記魚(yú)。優(yōu)選的，使用標(biāo)記飼料喂養(yǎng)待標(biāo)記魚(yú)的時(shí)間不短于24小時(shí)。如果標(biāo)記飼料中茜素絡(luò)合物的含量高，可適當(dāng)縮短喂養(yǎng)時(shí)間，反之，可適當(dāng)延長(zhǎng)。優(yōu)選的，茜素絡(luò)合物的含量占標(biāo)記飼料總質(zhì)量的2% 10%，即將茜素絡(luò)合物與配合飼料按照質(zhì)量比約為1:10 1:40的比例混合即可。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例11)選用茜素絡(luò)合物作為熒光標(biāo)記物，使其與魚(yú)用配合飼料按照質(zhì)量比1:10混合，加少量水，潤(rùn)濕飼料和茜素絡(luò)合物，攪拌均勻，使得全部飼料呈紫紅色，晾干，研磨制成適當(dāng)顆粒大小的標(biāo)記飼料；
2)投喂充足的標(biāo)記飼料喂養(yǎng)廣東魴幼魚(yú)24小時(shí)以上。標(biāo)記結(jié)束，取出廣東魴幼魚(yú)的耳石，用無(wú)水乙醇清洗耳石，去掉耳石表面雜質(zhì)，在熒光顯微鏡下觀察耳石，即可見(jiàn)如圖1和圖2的耳石標(biāo)記輪。其中1均為黃綠光激發(fā)下觀察圖像；2均為藍(lán)光激發(fā)下觀察圖像 ；3均為紫光激發(fā)下觀察圖像。實(shí)施例2
1)將茜素絡(luò)合物與魚(yú)飼料按1:40的比例混合，制成標(biāo)記飼料；
2)投喂充足的標(biāo)記飼料喂養(yǎng)廣東魴幼魚(yú)24小時(shí)以上。標(biāo)記結(jié)束，取出廣東魴幼魚(yú)的耳石，用無(wú)水乙醇清洗耳石，去掉耳石表面雜質(zhì)，在熒光顯微鏡下觀察耳石，發(fā)現(xiàn)在微耳石上形成有清晰的標(biāo)記輪。其結(jié)果如圖3所示。其中 1為黃綠光激發(fā)下觀察圖像；2均為藍(lán)光激發(fā)下觀察圖像；3均為紫光激發(fā)下觀察圖像。標(biāo)記飼料
標(biāo)記飼料，含有茜素絡(luò)合物。優(yōu)選的，為保證魚(yú)的正常采食，茜素絡(luò)合物占飼料的2 10%左右。可通過(guò)將茜素絡(luò)合物與普通的魚(yú)飼料，如各種商品飼料混合均勻得到。茜素絡(luò)合物與魚(yú)用配合飼料的比例可以根據(jù)待標(biāo)記魚(yú)的種類及其大小差異進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。用于易標(biāo)記的魚(yú)類的標(biāo)記飼料，茜素絡(luò)合物的添加量可稍低；要標(biāo)記的魚(yú)越大，茜素絡(luò)合物的添加量可稍高。為獲得良好的標(biāo)記效果，用標(biāo)記飼料喂養(yǎng)待標(biāo)記魚(yú)的時(shí)間最好不少要24小時(shí)，為得到更加明顯的標(biāo)記輪，可延長(zhǎng)用標(biāo)記飼料喂養(yǎng)的時(shí)間。
權(quán)利要求
1.一種魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的方法，包括以下步驟1)將茜素絡(luò)合物與魚(yú)飼料混合均勻，使飼料中含有茜素絡(luò)合物，得到標(biāo)記飼料；2)使用標(biāo)記飼料喂養(yǎng)待標(biāo)記魚(yú)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的方法，其特征在于使用標(biāo)記飼料喂養(yǎng)待標(biāo)記魚(yú)的時(shí)間不短于24小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的方法，其特征在于茜素絡(luò)合物的含量占標(biāo)記飼料總質(zhì)量的2% 10%。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種魚(yú)類耳石熒光標(biāo)記的新方法。本發(fā)明將茜素絡(luò)合物、魚(yú)用配合飼料混合，制成標(biāo)記飼料，然后喂養(yǎng)待標(biāo)記魚(yú)，從而可在標(biāo)記魚(yú)耳石上檢測(cè)到可識(shí)別的熒光標(biāo)記。它避免了其它標(biāo)記方法對(duì)魚(yú)體傷害較大，標(biāo)記遺失率高，標(biāo)記價(jià)格昂貴，保持率低，標(biāo)記數(shù)量有限等缺點(diǎn)。該方法解決了通過(guò)浸泡進(jìn)行耳石熒光標(biāo)記方法中茜素絡(luò)合指示劑的浪費(fèi)和污染問(wèn)題，是一種操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉、易推廣且適用于不同大小類型的魚(yú)類耳石標(biāo)記，特別適宜于進(jìn)行大規(guī)模放流標(biāo)記。
文檔編號(hào)A01K61/00GK102273418SQ201110172710
公開(kāi)日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月24日
發(fā)明者吳茜, 李捷, 李新輝, 李躍飛, 楊計(jì)平, 王超, 譚細(xì)暢, 賴子尼 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所