一種轉(zhuǎn)基因番茄組培苗煉苗的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種轉(zhuǎn)基因番茄組培苗煉苗的方法，包括如下步驟：待轉(zhuǎn)基因組培苗在生根培養(yǎng)基中生長健壯，高度4-5cm，根系發(fā)達，即可將培養(yǎng)瓶的封口膜打開，加0.5-1cm蒸餾水在25℃光照培養(yǎng)箱中煉苗2d，然后將苗取出，洗去根部培養(yǎng)基殘渣，將幼苗移栽至經(jīng)高溫滅菌澆足水的營養(yǎng)土花缽中，營養(yǎng)土的配置為花卉有機土∶蛭石∶珍珠巖2∶1∶1。蓋塑料薄膜保濕，在25℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周，期間用稀釋10倍的MS營養(yǎng)液澆1次。待小苗有新葉長出時，可去掉塑料薄膜；移栽時把花缽中苗和營養(yǎng)土一起移至大田，然后按照正常的水肥管理，成活率達100％。
【專利說明】一種轉(zhuǎn)基因番茄組培苗煉苗的方法
一、【技術(shù)領(lǐng)域】[0001 ] 本發(fā)明涉及一種番茄組培苗煉苗的方法，尤其是轉(zhuǎn)基因番茄煉苗的方法。
二、【背景技術(shù)】
[0002]番茄營養(yǎng)豐富，產(chǎn)量高，適應(yīng)性廣，是世界各國的主要蔬菜作物之一。同時番茄也是最早進行基因轉(zhuǎn)化研究的高等模式植物之一，其研究結(jié)果常常被借鑒用于其他植物上。因此番茄轉(zhuǎn)基因的研究是當(dāng)前植物基因工程研究的熱點之一。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，利用基因工程進行番茄品種遺傳改良的研究取得了重要的進展，迄今為止，已獲得了抗病毒、抗病蟲害、抗除草劑、抗凍、貯藏期延長和雄性不育轉(zhuǎn)基因番茄等。
[0003]目前絕大多數(shù)轉(zhuǎn)基因番茄組培苗存在成活率低的問題，嚴重影響番茄轉(zhuǎn)基因研究的進展。例如歐陽波等(2002)利用番茄下胚軸成功獲得轉(zhuǎn)基因植株，他們煉苗的方法是生根的再生苗長至5cm以上時，將根部培養(yǎng)基沖洗干凈，栽入裝有滅菌土的塑料杯中，待幼苗長到比較健壯后，移栽至瓦缽或大田。張艷芳等(2008)獲得番茄轉(zhuǎn)基因植株后煉苗的方法是揭去培養(yǎng)瓶的封口膜，煉苗一周后移栽于苗缽中(苗缽培養(yǎng)基質(zhì)經(jīng)高溫高壓滅菌)。移栽后先套塑料袋保濕數(shù)天后再去袋，室溫下20-25°C生長。這兩種常用的方法缺點是煉苗時外界環(huán)境變化大，幼嫩的轉(zhuǎn)基因組培苗由于根系功能未完全恢復(fù)，不適應(yīng)干燥的外界環(huán)境，容易萎蔫和染病致死。
三、
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因組培苗煉苗方法的缺點與不足，提供一種成活率較高轉(zhuǎn)基因番茄組培苗煉苗的方法。
[0005]本發(fā)明的方法包括如下步驟:
[0006]通過前期的組織培養(yǎng)和農(nóng)桿菌的侵染，獲得轉(zhuǎn)基因番茄組培苗，待苗在生根培養(yǎng)基中生長健壯，高度4-5cm，根系發(fā)達，即可將培養(yǎng)瓶的封口膜打開，加入0.5-lcm蒸餾水在25°C光照培養(yǎng)箱中煉苗2d，然后將苗取出，洗去根部培養(yǎng)基殘渣，將幼苗移栽至經(jīng)高溫滅菌澆足水的營養(yǎng)土花缽中，營養(yǎng)土的配置為花卉有機土:蛭石:珍珠巖2:1:1。蓋塑料薄膜保濕，在25°C光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周，期間用稀釋10倍的MS營養(yǎng)液澆I次。待小苗有新葉長出時，可去掉塑料薄膜。移栽時把花缽中苗和營養(yǎng)土一起移至大田，然后按照正常的水肥管理，成活率達100%。
[0007]由上述公開的技術(shù)方案可見，本發(fā)明的方法比現(xiàn)在常規(guī)的技術(shù)增加了煉苗的步驟，使轉(zhuǎn)基因組培苗有2個適應(yīng)外部環(huán)境的階段，極大提高了組培苗移栽至大田后成活率。
四、【具體實施方式】
[0008]將在MS培養(yǎng)基上生長7天的“中蔬四號”番茄無菌苗子葉作為外殖體，采用含有目的基因農(nóng)桿菌EH105菌株進行遺傳轉(zhuǎn)化，待轉(zhuǎn)基因組培苗在生根培養(yǎng)基中生長健壯，高度4-5cm，根系發(fā)達，即可進行煉苗。供試轉(zhuǎn)基因番茄苗共50株，煉苗時先將培養(yǎng)瓶的封口膜打開，加0.5-lcm蒸餾水在25°C光照培養(yǎng)箱中煉苗2d，然后將苗取出，洗去根部培養(yǎng)基殘渣，將幼苗移栽至經(jīng)高溫滅菌澆足水的營養(yǎng)土花缽中，營養(yǎng)土的配置為花卉有機土:蛭石:珍珠巖2:1:1。蓋塑料薄膜保濕，在25°C光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周，期間用稀釋10倍的MS營養(yǎng)液澆I次；待小苗有新葉長出時，可去掉塑料薄膜。移栽時把花缽中苗和營養(yǎng)土一起移至大田，然 后按照正常 的水肥管理，成活率達100 %。
【權(quán)利要求】
1.一種轉(zhuǎn)基因番茄組培苗煉苗的方法，包括如下步驟: 待轉(zhuǎn)基因番茄組培苗在生根培養(yǎng)基中生長健壯，高度4-5cm，根系發(fā)達，即可將培養(yǎng)瓶的封口膜打開；加入0.5-lcm蒸餾水在25°C光照培養(yǎng)箱中煉苗2d，然后將苗取出，洗去根部培養(yǎng)基殘渣，將幼苗移栽至經(jīng)高溫滅菌澆足水的營養(yǎng)土花缽中，營養(yǎng)土的配置為花卉有機土:蛭石:珍珠巖2: I: I ;蓋塑料薄膜保濕，在25°C光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周，期間用稀釋10倍的MS營養(yǎng)液澆I次，待小 苗有新葉長出時，可去掉塑料薄膜；移栽時把花缽中苗和營養(yǎng)土一起移至大田，然后按照正常的水肥管理，成活率達100 %。
【文檔編號】A01G1/00GK103535168SQ201210256325
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2012年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月15日
【發(fā)明者】李立芹, 魯黎明, 王西瑤, 曾富春, 楊翠芹, 趙勤 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)