專利名稱：一種創(chuàng)制結縷草高頻再生系的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領域，尤其涉及一種創(chuàng)制結縷草高頻再生系的方法。
背景技術：
草坪草具有景觀功能、生態(tài)功能和運動功能。隨著經濟的快速發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，草坪對于城市的綠化和環(huán)境改善起著越來越重要的作用。人們利用有性雜交、輪回選育等常規(guī)育種手段培育出一些草坪草新品種。轉基因技術具有可以定向改良、打破生殖隔離等優(yōu)點，是草坪草遺傳改良的一種非常有前途的手段。草坪草與其他植物一樣，組織培養(yǎng)是遺傳轉化操作的前提。目前，盡管有不少報道已建立了各草種的再生體系，但由于大多數(shù)草坪草屬異花授粉植物，遺傳背景復雜，組織培養(yǎng)比其他植物更具有難度。
力和抗逆性，尤其以超群的耐踐踏、耐瘠薄和抗病能力而著稱。結縷草被譽為“最有前途”的草種，其形成的草坪彈力是早熟禾的30-40倍，耗水量比草地早熟禾少30-40%，建植和管理費用比早熟禾低80%左右(胡叔良，1997，發(fā)展草坪綠地關鍵問題的探討，中國草地，5 (2)67-70)。正是由于結縷草所具有的這些獨特的優(yōu)良性狀，使它們成為運動場、開放綠地、邊坡綠化以及水土保持的重要草種，也是適合我國水資源貧乏國情的草坪草種。同時，結縷草也是我國唯一具有出口創(chuàng)匯能力的草種。因此，建立穩(wěn)定高效的結縷草組織培養(yǎng)體系不僅具有重要的理論意義，還有實際應用價值。在結縷草組織培養(yǎng)和遺傳轉化方面，前人已做過一些探索和研究，并取得了一定的研究成果。早在1987年，Al-Khayri等以日本結縷草成熟胚作為實驗材料，通過切離成熟胚誘導愈傷組織，最終獲得再生植株(Al-Khayri J M, Huang F H, Thompson LF, etal.1987, In vitro plant regeneration of zoysia grass(Zoysia japonicaSteud. ). InVitro,23:3;Al-Khayri J M，Huang F H，Thompson L F，et al.1989,Plant regenerationof zoysia grass from embryo-derived callus. Crop Science, 29 (5):1324-1325)。但結縷草種子較小，成熟胚的分離操作相對困難，限制其廣泛應用。Inokuma等在1996年首次報道通過培養(yǎng)日本結縷草懸浮細胞系，用純化得到的原生質體再生出植株(IN0KUMAC，SUGIURA K，CHO C，et al. 1996, Plant regenerationfrom protoplasts of Japaneselawn grass. Plant Cell Reports, 15(10) :737_741)。但該操作不僅比較繁瑣，而且再生率較低。之后，人們又以結縷草幼穗、幼胚和根莖作為外植體，試圖通過體胚發(fā)生途徑獲得再生植株(Ν0Η H Y，CHOI J S，AHN B J. 1995，Plant regeneration through somaticembryogenesis in zoysia grasses(Zoysiaspp.). Journal of the Korean Society forHorticultural Science，36 (4) : 582-587 ;玄松南，陳慧哲，傅亞萍，等.1997，兩種草坪草愈傷組織的誘導及其分化研究.浙江農業(yè)學報，9:295-299 ;GE Yaxin, TINA Norton, WANGZeng-Yu. 2006, Transgeniczoysiagrass(Zoysia japonica)plants obtained by Agrobacterium-mediatedtransformation. Plant Cell Rep, 25:792 - 798),但該方法不僅取材受季節(jié)所限，無菌外植體的獲得也是一個難題。不管以哪種外植體再生植株，均有諸多因素影響再生率(齊春輝，韓烈保，黃麟，等.2005，幾種因素對日本結縷草愈傷組織誘導與生長影響的研究.四川草業(yè)，4:1-3;張俊衛(wèi)，唐蜻，包滿珠.2006，日本結縷草成熟種子愈傷組織誘導及植株再生的影響因子分析.中國農業(yè)科學，39(2) :368-374)。目前，尚未見有關結縷草高頻再生系的創(chuàng)制方法相關報道或專利。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的是提供一種創(chuàng)制結縷草再生愈傷組織系的方法。本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟將單粒結縷草種子依次經誘導培養(yǎng)、第一次繼代培養(yǎng)、第二次繼代培養(yǎng)、第三次繼代培養(yǎng)，得到結縷草再生愈傷組織系。上述方法中，上述誘導培養(yǎng)、所述第一次繼代培養(yǎng)、所述第二次繼代培養(yǎng)和所述第三次繼代培養(yǎng)采用的培養(yǎng)材料均源自同一個種子。上述方法中，所述誘導培養(yǎng)為將所述結縷草種子在誘導培養(yǎng)基中誘導培養(yǎng)，得到誘導愈傷組織； 所述第一次繼代培養(yǎng)為將所述誘導愈傷組織在第一代繼代培養(yǎng)基中第一代繼代培養(yǎng)，得到第一次愈傷組織；所述第二次繼代培養(yǎng)為將所述第一次愈傷組織在第二代繼代培養(yǎng)基中第二代繼代培養(yǎng)，得到第二次愈傷組織；所述第三次繼代培養(yǎng)為將所述第三次愈傷組織在第三代繼代培養(yǎng)基中第三代繼代培養(yǎng)，得到再生愈傷組織系；所述誘導培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度2mg/L的2，4-D(2，4- 二氯苯氧乙酸)、終濃度的O. 15mg/L 6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)、終濃度30g · Γ1的蔗糖、終濃度7. Og · Γ1的瓊脂、終濃度O. 5g · Γ1的水解酪蛋白、終濃度Img · Γ1的VBi (維生素BI)、終濃度Img · Γ1的VB2 (維生素B2)，用水補足體積；所述第一代繼代培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為lmg/L的2，4-D、終濃度為O. 2mg/L的6-BA、終濃度為O. 2mg/L的ABA (脫落酸)、終濃度為40g · L—1的蔗糖、終濃度為9. Og · L—1的瓊脂、終濃度為O. 5g · L—1的水解酪蛋白、終濃度為Img · Γ1的VB1和終濃度為Img · Γ1的VB2，用水補足體積；所述第二代繼代培養(yǎng)基為將所述第一次繼代培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度調整為35g · L_\瓊脂終濃度調整為8. Og · L—1，其他成分和濃度不變，用水補足體積；所述第三代繼代培養(yǎng)基為將所述第二次繼代培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度調整為30g · L_\瓊脂終濃度調整為7. Og · L—1，其他成分和濃度不變，用水補足體積。上述方法中，所述誘導培養(yǎng)的條件為溫度24_26°C、光照強度1000-3000umolm_2s_1下暗培養(yǎng)I個月；所述第一次、第二次、第三次繼代培養(yǎng)條件均為溫度24_26°C、黑暗培養(yǎng)20天。上述方法中，在所述第一次繼代培養(yǎng)后和所述第二次繼代培養(yǎng)前還包括如下步驟選取第一次繼代愈傷組織中的胚性愈傷組織；所述選取第一次繼代愈傷組織中的胚性愈傷組織具體為剝離松軟第一次繼代愈傷組織，而選取質地變硬的第一次繼代愈傷組織。
上述方法中，所述結縷草種子為去穎后的結縷草種子。在上述方法中，也可以在第二次、第三次繼代培養(yǎng)時均選用胚性愈傷組織作為培養(yǎng)材料。本發(fā)明的另一個目的是提供一種制備結縷草再生植株的方法。本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟在上述創(chuàng)制結縷草再生愈傷組織系的方法中的第三次繼代培養(yǎng)后，將所述結縷草再生愈傷組織系依次經分化培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，得到結縷草再生植株；所述分化培養(yǎng)為將所述結縷草再生愈傷組織系在分化培養(yǎng)基中進行分化培養(yǎng)，得到生芽愈傷組織；所述分化培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為
I.Omg/L 6-BA、終濃度為O. 2mg/L KT (6-糠氨基嘌呤)、終濃度為O. 5mg/L ZT (玉米素)、終濃度為30g · L—1蔗糖、終濃度為7. Og · L—1瓊脂、終濃度為O. 5g · L—1水解酪蛋白，終濃度為Img · L-1VB1、終濃度為Img · L1VB2，用水補足體積。上述獲得再生植株的方法中，在所述分化培養(yǎng)中，所述結縷草再生愈傷組織系的直徑大小均為O. 3-0. 5cm ；上述獲得再生植株的方法中，所述生根培養(yǎng)為將所述生芽愈傷組織在所述生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，得到結縷草再生植株；所述生根培養(yǎng)基為在液體1/2MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為10mg/L VB1、終濃度為O. 25mg/L IBA (吲哚丁酸)、終濃度為25g · L—1蔗糖和終濃度為
7.Og · L—1瓊脂,用水補足體積。上述獲得再生植株的方法中，所述分化培養(yǎng)和所述生根培養(yǎng)的條件均如下溫度24-26°C、光照強度1000-3000umol n^s—1及光照14h/黑暗IOh的條件下培養(yǎng)I個月。本發(fā)明的第三個目的是提供一種創(chuàng)制結縷草再生愈傷組織系或制備結縷草再生植株的培養(yǎng)基組。本發(fā)明提供的培養(yǎng)基組，包括誘導培養(yǎng)基、第一次繼代培養(yǎng)基、第二次繼代培養(yǎng)基和第三次繼代培養(yǎng)基；所述誘導培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度2mg/L的2，4-D(2，4- 二氯苯氧乙酸)、終濃度的O. 15mg/L 6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)、終濃度30g · Γ1的蔗糖、終濃度7. Og · Γ1的瓊脂、終濃度O. 5g · Γ1的水解酪蛋白、終濃度Img · Γ1的VBi (維生素BI)、終濃度Img · Γ1的VB2 (維生素B2)，用水補足體積；所述第一代繼代培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為lmg/L的2，4-D、終濃度為O. 2mg/L的6-BA、終濃度為O. 2mg/L的ABA (脫落酸)、終濃度為40g · L—1的蔗糖、終濃度為9. Og · L—1的瓊脂、終濃度為O. 5g · L—1的水解酪蛋白、終濃度為Img · Γ1的VB1和終濃度為Img · Γ1的VB2，用水補足體積；所述第二代繼代培養(yǎng)基為將所述第一次繼代培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度調整為35g · L_\瓊脂終濃度調整為8. Og · L—1，其他成分和濃度不變，用水補足體積；所述第三代繼代培養(yǎng)基為將所述第二次繼代培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度調整為30g · L_\瓊脂終濃度調整為7. Og · L—1，其他成分和濃度不變，用水補足體積。所述培養(yǎng)基組還具體包括分化培養(yǎng)基；所述分化培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分 終濃度為I. Omg/L 6-BA、終濃度為O. 2mg/L KT (6-糠氨基嘌呤)、終濃度為O. 5mg/L ZT (玉米素)、終濃度為30g · Γ1蔗糖、終濃度為7. Og · Γ1瓊脂、終濃度為O. 5g · Γ1水解酪蛋白，終濃度為Img · L4VB1、終濃度為Img · L4VB2，用水補足體積。所述培養(yǎng)基組還進一步具體包括生根培養(yǎng)基，所述生根培養(yǎng)基為在液1/2MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為10mg/L VB1、終濃度為O. 25mg/L IBA (吲哚丁酸)、終濃度為25g · L—1蔗糖和終濃度為7. Og · L—1瓊脂，用水補足體積。所述培養(yǎng)基組中的各種培養(yǎng)基的pH值均為5. 8。本發(fā)明的第四個目的是提供一種愈傷組織的繼代保存的方法。本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟將愈傷組織按照上述的創(chuàng)制結縷草再生愈傷組織系中的第三次繼代培養(yǎng)2次，得到繼代產物；再將所述繼代產物按照上述創(chuàng)制結縷草再生愈傷組織系的方法中的第一次繼代培養(yǎng)、第二次繼代培養(yǎng)、第三次繼代培養(yǎng)依次進行 培養(yǎng)；所述愈傷組織具體為上述創(chuàng)制結縷草再生愈傷組織系中結縷草再生愈傷組織。本發(fā)明的實驗證明，本發(fā)明提供了一種創(chuàng)制結縷草高頻再生系的方法，本發(fā)明的方法具有如下優(yōu)點1)由于結縷草屬異花授粉植物，不同種子可能是不同的基因型，植物再生能力很大程度上依賴于其自身的基因型，本發(fā)明通過篩選日本結縷草品種，以單粒種子為外植體，分別誘導出不同的愈傷系，經培養(yǎng)基配比組合和多次干化繼代培養(yǎng)，篩選出分化能力強的愈傷系，每一系增殖的大量高頻再生愈傷組織均為同質，可以最大程度上將具有較強再生能力的基因型保留下來，淘汰再生能力弱的基因型；2)由于結縷草品種內基因型復雜，不同基因型的表型可能有差異，建立單獨的高頻再生系而不是混系，有利于轉基因后代或變異株系與親本在遺傳背景一致的條件下進行比較分析；3)本發(fā)明采用的專用培養(yǎng)基制備高頻再生愈傷系，該高頻再生愈傷系分化率高，且保存時間長。


圖I為結縷草高頻再生系的誘導培養(yǎng)圖2為結縷草高頻再生系的繼代培養(yǎng)圖3為結縷草高頻再生系的掃描電鏡鑒定圖4為結縷草高頻再生系的分化和生根培養(yǎng)圖5為結縷草高頻再生系的創(chuàng)制過程
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施例中的結縷草以日本結縷草品種‘Qingdao’(克勞沃集團http://www.bjclover. com/center/aboutcpl. asp,產品目錄號zj-011-02)為例，也可以換為其他所有結縷草屬(Zoysia Willd.)植物。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了影響結縷草植株再生率的關鍵因素是如何高效地將非胚性愈傷組織調整為胚性愈傷組織。具有同一基因型、再生力強的胚性愈傷組織，在本專利稱之為“高頻再生愈傷組織系”。
下述實施例中液體MS培養(yǎng)基中的組分如表I所示，液體MS培養(yǎng)基為將表I的溶質按所示的終濃度均溶于水配制表I為MS培養(yǎng)基中的組分
權利要求
1.一種創(chuàng)制結縷草再生愈傷組織系的方法，包括如下步驟將單粒結縷草種子依次經誘導培養(yǎng)、第一次繼代培養(yǎng)、第二次繼代培養(yǎng)、第三次繼代培養(yǎng)，得到結縷草再生愈傷組織系O
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于 所述誘導培養(yǎng)、所述第一次繼代培養(yǎng)、所述第二次繼代培養(yǎng)和所述第三次繼代培養(yǎng)采用的培養(yǎng)材料均源自同一個種子； 所述誘導培養(yǎng)為將所述結縷草種子在誘導培養(yǎng)基中誘導培養(yǎng)，得到誘導愈傷組織； 所述第一次繼代培養(yǎng)為將所述誘導愈傷組織在第一代繼代培養(yǎng)基中第一代繼代培養(yǎng)，得到第一次愈傷組織； 所述第二次繼代培養(yǎng)為將所述第一次愈傷組織在第二代繼代培養(yǎng)基中第二代繼代培養(yǎng)，得到第二次愈傷組織； 所述第三次繼代培養(yǎng)為將所述第三次愈傷組織在第三代繼代培養(yǎng)基中第三代繼代培養(yǎng)，得到再生愈傷組織系； 所述誘導培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度2mg/L的2，4-D、終濃度的O. 15mg/L 6-BA、終濃度30g · Γ1的蔗糖、終濃度7. Og · Γ1的瓊脂、終濃度O.5g · Γ1的水解酪蛋白、終濃度Img · Γ1的VB1、終濃度Img · Γ1的VB2，用水補足體積；所述第一代繼代培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為lmg/L的2，4-D、終濃度為O. 2mg/L的6-BA、終濃度為O. 2mg/L的ΑΒΑ、終濃度為40g -Γ1的蔗糖、終濃度為9. Og · Γ1的瓊脂、終濃度為O. 5g · Γ1的水解酪蛋白、終濃度為Img · Γ1的VB1和終濃度為Img · L—1的VB2，用水補足體積； 所述第二代繼代培養(yǎng)基為將所述第一次繼代培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度調整為35g · L—1、瓊脂終濃度調整為8. Og · L—1，其他成分和濃度不變，用水補足體積； 所述第三代繼代培養(yǎng)基為將所述第二次繼代培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度調整為30g · L'瓊脂終濃度調整為7. Og · L—1，其他成分和濃度不變，用水補足體積。
3.根據(jù)權利要求I或2所述的方法，其特征在于 所述誘導培養(yǎng)的條件為溫度24-26°C、光照強度1000-3000Umol JiT2iT1下暗培養(yǎng)I個月； 所述第一次、第二次、第三次繼代培養(yǎng)條件均為溫度24-26°C、黑暗培養(yǎng)20天。
4.根據(jù)權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于 在所述第一次繼代培養(yǎng)后和所述第二次繼代培養(yǎng)前還包括如下步驟選取第一次繼代愈傷組織中的胚性愈傷組織。
5.根據(jù)權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于所述結縷草種子為去穎后的結縷草種子。
6.一種制備結縷草再生植株的方法，包括如下步驟在權利要求1-5任一項中的方法中的第三次繼代培養(yǎng)后，將所述結縷草再生愈傷組織系依次經分化培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，得到結縷草再生植株； 所述分化培養(yǎng)為將所述結縷草再生愈傷組織系在分化培養(yǎng)基中進行分化培養(yǎng)，得到生芽愈傷組織； 所述分化培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為l.Omg/L 6-BA、終濃度為0. 2mg/L KT、終濃度為0. 5mg/L ZT、終濃度為30g · L—1蔗糖、終濃度為7. Og · Γ1瓊脂、終濃度為O. 5g · Γ1水解酪蛋白，終濃度為Img · L4VB1、終濃度為Img · L4VB2,用水補足體積； 在所述分化培養(yǎng)中，所述結縷草再生愈傷組織系的直徑大小均具體為O. 3-0. 5cm。
7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于 所述生根培養(yǎng)為將所述生芽愈傷組織在所述生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，得到結縷草再生植株； 所述生根培養(yǎng)基為在液體1/2MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為10mg/L VB1、終濃度為O. 25mg/L IBA、終濃度為25g -T1蔗糖和終濃度為7. Og-Γ1瓊脂，用水補足體積。
8.根據(jù)權利要求6或7所述的方法，其特征在于 所述分化培養(yǎng)和所述生根培養(yǎng)的條件均如下溫度24-26°C、光照強度1000-3000umolHT2s-1及光照14h/黑暗IOh的條件下培養(yǎng)I個月。
9.一種制備結縷草再生植株的培養(yǎng)基組，包括誘導培養(yǎng)基、第一次繼代培養(yǎng)基、第二次繼代培養(yǎng)基和第三次繼代培養(yǎng)基； 所述誘導培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度2mg/L的2，4-D、終濃度的O. 15mg/L 6-BA、終濃度30g · Γ1的蔗糖、終濃度7. Og · Γ1的瓊脂、終濃度O.5g · Γ1的水解酪蛋白、終濃度Img · Γ1的VB1、終濃度Img · Γ1的VB2，用水補足體積；所述第一代繼代培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為lmg/L的2，4-D、終濃度為O. 2mg/L的6-BA、終濃度為O. 2mg/L的ΑΒΑ、終濃度為40g -Γ1的蔗糖、終濃度為9. Og · Γ1的瓊脂、終濃度為O. 5g · Γ1的水解酪蛋白、終濃度為Img · Γ1的VB1和終濃度為Img · L—1的VB2，用水補足體積； 所述第二代繼代培養(yǎng)基為將所述第一次繼代培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度調整為35g · L—1、瓊脂終濃度調整為8. Og · L—1，其他成分和濃度不變，用水補足體積； 所述第三代繼代培養(yǎng)基為將所述第二次繼代培養(yǎng)基中的蔗糖終濃度調整為30g · L'瓊脂終濃度調整為7. Og · L—1，其他成分和濃度不變，用水補足體積； 所述培養(yǎng)基組還具體包括分化培養(yǎng)基；所述分化培養(yǎng)基為在液體MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為I. Omg/L 6-BA、終濃度為O. 2mg/L KT、終濃度為O. 5mg/LZT、終濃度為30g · L—1蔗糖、終濃度為7. Og · L—1瓊脂、終濃度為O. 5g · L—1水解酪蛋白，終濃度為Img · T1VB1、終濃度為Img · T1VB2，用水補足體積； 所述培養(yǎng)基組還進一步具體包括生根培養(yǎng)基，所述生根培養(yǎng)基為在液1/2MS培養(yǎng)基中添加具有如下終濃度的各組分終濃度為10mg/L VB1、終濃度為O. 25mg/L IBA、終濃度為25g · Γ1蔗糖和終濃度為7. Og · Γ1瓊脂，用水補足體積； 所述培養(yǎng)基組中的各種培養(yǎng)基的PH值均具體為5. 8。
10.一種愈傷組織的繼代保存的方法，包括如下步驟將愈傷組織按照權利要求1-5中任一所述的方法中的第三次繼代培養(yǎng)2次，得到繼代產物；再將所述繼代產物按照權利要求1-5中任一所述的方法中的第一次繼代培養(yǎng)、第二次繼代培養(yǎng)、第三次繼代培養(yǎng)依次進行培養(yǎng)； 所述愈傷組織具體為權利要求1-5中任一所述的方法中結縷草再生愈傷組織。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種創(chuàng)制結縷草高頻再生系的方法。本發(fā)明提供一種創(chuàng)制結縷草高頻再生系的方法，包括如下步驟將單粒結縷草種子依次經誘導培養(yǎng)、第一次繼代培養(yǎng)、第二次繼代培養(yǎng)、第三次繼代培養(yǎng)，得到結縷草高頻再生系。本發(fā)明的實驗證明，本發(fā)明提供了一種創(chuàng)制結縷草高頻再生愈傷組織系或再生植株及專用培養(yǎng)基，本發(fā)明通過篩選日本結縷草品種，以單粒種子為外植體，分別誘導出不同的愈傷系，經培養(yǎng)基配比組合和多次干化繼代培養(yǎng)，篩選出分化能力強的愈傷系，每一系增殖的大量高頻再生愈傷組織均為同質。最終，建立一種創(chuàng)制結縷草高頻再生系的方法，為提高結縷草組織培養(yǎng)再生率和遺傳轉化效率提供實用方法。
文檔編號A01H4/00GK102907322SQ20121042899
公開日2013年2月6日 申請日期2012年10月31日 優(yōu)先權日2012年10月31日
發(fā)明者李瑞芬, 張杰偉, 魏建華, 王宏芝, 孫振元 申請人:北京農業(yè)生物技術研究中心