專利名稱：用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種保鮮方法，具體涉及一種在棉花育種領(lǐng)域用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法。
背景技術(shù)：
抗棉鈴蟲室內(nèi)生物測定起始于轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉的研發(fā)，我國自1992年范云六、郭三堆等對Bt基因進行改造、獲得具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗蟲性極強的Bt基因后，科研工作者將這些Bt基因轉(zhuǎn)入到棉花品種中進行抗蟲棉新品種的創(chuàng)立，從而開始了國內(nèi)抗棉鈴蟲室內(nèi)生物測定的研究工作。室內(nèi)抗棉鈴蟲生物測定就是將測定材料轉(zhuǎn)入了 Bt等抗蟲基因的抗蟲棉頂端生長倒2 3片真葉飼喂棉鈴蟲低齡幼蟲，觀察測定材料的抗蟲效果?！?br> 棉鈴蟲幼蟲的生物測定是能夠直觀的反應(yīng)棉花各器官對于棉鈴蟲幼蟲抗蟲性表現(xiàn)的一種方法，其優(yōu)點在于便于觀察、操作簡便、成本較低、準確性高。但是在生物測定過程中，需要解決棉花葉片的保鮮問題。中國棉花研究所馬麗華、李春華1998年報道了用于室內(nèi)抗棉鈴蟲性生物測定的瓊脂培養(yǎng)基葉片保鮮法。雖然該方法能夠為棉葉提供充足營養(yǎng)，但是此方法也存在弊端。首先，瓊脂培養(yǎng)基表面存在水分，對于進行生物測定的棉鈴蟲幼蟲有影響；其次，培養(yǎng)基對環(huán)境條件要求較高，若在不潔凈的條件下培養(yǎng)基容易產(chǎn)生霉變，并對棉花葉片造成一定的污染，測試中途需要更換保鮮棉葉和培養(yǎng)基及轉(zhuǎn)接測試幼蟲，致使測定工作量加大，并影響試驗效果。中國專利ZL200820137401. I說明書公開了一種抗棉鈴蟲性生物測定棉葉保鮮裝置，包括盒體、盒蓋，盒體為聚丙烯塑料盒體，盒蓋為聚丙烯塑料盒蓋，盒體底部填充有一層聚氨酯人造海綿，聚氨酯人造海綿上均勻開有縫口。具體是在長14cmX寬IOcmX高6cm規(guī)格的聚丙烯盒內(nèi)填聚氨酯并劃3個2cm長等距離刀口，注入20mL純凈水后插入保鮮測試棉葉，在室溫26°C和自然光周期條件下，保鮮30d。雖然該方法能達到棉葉保鮮的目的，但需要較大的專用盒體，并且聚氨酯人造海綿切口徒手操作人為性大，一致性差，增加了測定工作量。因此，為提高棉花抗蟲性室內(nèi)生物測定方法的效率，需要對生測過程中的棉葉保鮮技術(shù)進行不斷改良和保鮮新方法開發(fā)。以開發(fā)出滿足測定需要、工序簡單、操作方便、一致性高、通用性強、成本經(jīng)濟的棉葉保鮮方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種用于棉花品種抗蟲性室內(nèi)生物測定的棉葉保鮮方法。本方法包括棉葉摘取與處理、放入培養(yǎng)皿、接蟲、培養(yǎng)皿整理、皿內(nèi)培養(yǎng)等步驟，其具體步驟及技術(shù)要點為a.將新鮮的棉葉摘下，留取葉柄1-1. 5cm ；b.將脫脂棉用營養(yǎng)液濕潤后，包裹在棉葉葉柄處，并使棉球不滴水；c.將脫脂棉包裹好的棉葉正面向上放入培養(yǎng)皿中；
d.將待測的棉鈴蟲幼蟲接入到棉葉上；e.將PVC保鮮膜裁制成略大于培養(yǎng)皿的大小，將其包裹在培養(yǎng)皿上，使其平展，然后將培養(yǎng)皿蓋子蓋在已包裹好的培養(yǎng)皿上；f.用黑布覆在培養(yǎng)皿蓋上；g.在室溫下培養(yǎng)，直至生測。所述的營養(yǎng)液有效成分及濃度分別為 硝酸鉀I. 8-2. Og/L，硝酸銨I. 5-1. 8g/L、磷酸二氫鉀 O. 15-0. 2g/L、7H20 硫酸鎂 O. 3-0. 4g/L、2H20 氯化鈣 O. 3-0. 5g/L。本方法所使用的營養(yǎng)液能夠代替土壤給植物提供K、N、Mg、P、Ca、S、等離子螯合態(tài)營養(yǎng)元素，具有緩釋效應(yīng)和緩沖性能，能有效的提供植物所需養(yǎng)分，使葉柄斷裂處的細胞在吸收水分的同時亦吸收營養(yǎng)液的營養(yǎng)元素成分，并且能夠通過擴散作用，外界的高濃度營養(yǎng)元素能夠進入植物體內(nèi)，盡量保持葉片的鮮活能力，從而使植物能夠更具有更多的能量來保持更好的活性，達到保鮮的效果。本發(fā)明營養(yǎng)液為棉葉提供了足夠的水分和低濃度的大量元素，供給棉花葉片在培養(yǎng)期間的生理需要，保鮮效果均在一周以上。又避免了瓊脂培養(yǎng)基存在的易于污染的問題，在一周的保鮮期內(nèi)棉葉不變色、不萎蔫、不變質(zhì)腐爛，保持新鮮狀態(tài)。從而在測定期間中途不需要更換棉葉和培養(yǎng)基，也不需要轉(zhuǎn)接棉鈴蟲幼蟲，簡化了生測步驟，操作簡便，準確性高。同時上述營養(yǎng)液的配方簡單，藥品均為常見藥劑，容易購買；聚苯乙烯培養(yǎng)皿相比玻璃培養(yǎng)皿價格低、不易破碎、易于輸送；脫脂棉為醫(yī)用脫脂棉花，方便易得。從而保證了本方法的方便實用、高效經(jīng)濟。
具體實施例方式實施例I。一種用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法，包括棉葉摘取與處理、放入培養(yǎng)皿、接蟲、培養(yǎng)皿整理、皿內(nèi)培養(yǎng)等步驟，具體步驟及技術(shù)要點為a.將新鮮的棉葉摘下，留取葉柄1-1. 5cm ；b.將2_3cm的脫脂棉用營養(yǎng)液濕潤，將其包裹在棉葉葉柄處，并使棉球不滴水；c.將脫脂棉包裹好的棉葉正面向上放入培養(yǎng)皿中；d.將待測的棉鈴蟲幼蟲接入到棉葉上；e.將PVC保鮮膜裁制成略大于培養(yǎng)皿的大小，將其包裹在培養(yǎng)皿上，使其平展，然后將培養(yǎng)皿蓋子蓋在已包裹好的培養(yǎng)皿上；f.用黑布覆在培養(yǎng)皿蓋上；g.在室溫下培養(yǎng)，直至生測。所述的營養(yǎng)液有效成分及濃度分別為硝酸鉀I. 9g/L、硝酸銨I. 65g/L、磷酸二氫鉀O. 17g/L、7H20硫酸鎂O. 37g/L、2H20氯化鈣O. 44g/L。這些成份均為化學(xué)實驗室常用試劑。所述的培養(yǎng)皿為聚苯乙烯培養(yǎng)皿。實施例2。本實施例與實施例I的區(qū)別為，所述的營養(yǎng)液有效成分及濃度分別為硝酸鉀
2.Og/L，硝酸銨 I. 8g/L、磷酸二氫鉀 O. 15g/L、7H20 硫酸鎂 O. 4g/L、2H20 氯化鈣 O. 35g/L。
上述兩個實施例的保鮮方法，所使用的PVC保鮮膜粘性適宜，保鮮膜包裹后可以減少葉片水分的快速散失，并且初孵幼蟲呼吸弱，皿內(nèi)的空氣足夠初孵幼蟲呼吸。黑布覆在培養(yǎng)皿蓋上可使棉鈴中幼蟲在相對弱光的環(huán)境中安靜取食，從而不會爬離逃逸。該方法在非抗蟲棉材料的對照試驗中棉鈴蟲幼蟲平均死亡率均低于5%，從而證明了該方法對棉鈴蟲幼蟲的安全性。項目組通過生物測定和ELISA (酶聯(lián)免疫法)相結(jié)合 的方法對Bt棉花的抗蟲性進行了綜合的評價，研究表明，生測結(jié)果和ELISA檢測Bt毒蛋白的結(jié)果呈現(xiàn)高度一致。
權(quán)利要求
1.一種用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法，包括棉葉摘取與處理、放入培養(yǎng)皿、接蟲、培養(yǎng)皿整理、皿內(nèi)培養(yǎng)等步驟，其特征在于本方法具體步驟及技術(shù)要點為 a.將新鮮的棉葉摘下，留取葉柄I I.5cm ； b.將脫脂棉用營養(yǎng)液濕潤后，包裹在棉葉葉柄處，并使棉球不滴水； c.將脫脂棉包裹好的棉葉正面向上放入培養(yǎng)皿中； d.將待測的棉鈴蟲幼蟲接入到棉葉上； e.將PVC保鮮膜裁制成略大于培養(yǎng)皿的大小，將其包裹在培養(yǎng)皿上，使其平展，然后將培養(yǎng)皿蓋子蓋在已包裹好的培養(yǎng)皿上； f.用黑布覆在培養(yǎng)皿蓋上； g.在室溫下培養(yǎng)，直至生測。
2.如權(quán)利要求I所述的棉葉保鮮方法，其特征在于所述的營養(yǎng)液有效成分及濃度分別為硝酸鉀1.8-2. Og/L，硝酸銨1.5-1.8g/L、磷酸二氫鉀O. 15-0. 2g/L、7H20硫酸鎂.O.3-0. 4g/L、2H20 氯化鈣 O. 3-0. 5g/L。
3.如權(quán)利要求I所述的棉葉保鮮方法，其特征在于所述的營養(yǎng)液有效成分及濃度分別為硝酸鉀I. 9g/L、硝酸銨I. 65g/L、磷酸二氫鉀O. 17g/L、7H20硫酸鎂O. 37g/L、2H20氯化鈣.O.44g/L。
4.如權(quán)利要求I所述的棉葉保鮮方法，其特征在于所述的培養(yǎng)皿為聚苯乙烯培養(yǎng)皿。
全文摘要
一種用于抗棉鈴蟲性生物測定的棉葉保鮮方法。包括棉葉摘取與處理、放入培養(yǎng)皿、接蟲、培養(yǎng)皿整理、皿內(nèi)培養(yǎng)等步驟，具體是用經(jīng)營養(yǎng)液浸濕的脫酯棉將棉葉包裹后，放入聚苯乙烯培養(yǎng)皿，接蟲后遮蓋培養(yǎng)，直至進行生測而不需要更換棉葉和重新接蟲，棉葉保鮮效果可達一周以上。
文檔編號A01N3/00GK102939955SQ20121048797
公開日2013年2月27日 申請日期2012年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月15日
發(fā)明者丁瑞豐, 李號賓, 劉建, 徐遙, 李海強, 王冬梅, 田立文 申請人:新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所