一種利用蒜瓣誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用蒜瓣誘導(dǎo)愈傷組織的方法，包括取蒜瓣消毒后縱向切取組織塊，將組織塊接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上于黑暗條件下誘導(dǎo)愈傷組織形成，誘導(dǎo)溫度為18-22℃；所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，1LMS培養(yǎng)基中添加1-2mg的NAA、1-1.5mg的6-BA、0.5-1mg的ZT、20-30g蔗糖和7g瓊脂；本發(fā)明方法以蒜瓣作為外植體，取材方便、簡單易行，誘導(dǎo)率可達(dá)88%。
【專利說明】ー種利用蒜瓣誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及ー種利用蒜瓣誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]欠荒、{AlIium sativum L.Garlic)是一種多年生草本植物，屬于百合科蔥屬的植物；地下鱗莖分瓣，辛辣且具有刺激性氣味，可以供食用或調(diào)味，也可以用于藥材。大蒜的營養(yǎng)豐富，每100克含有水分69.8克、蛋白質(zhì)4.4克、脂肪0.2克、碳水化合物23.6克、鈣5毫克、磷44毫克，鐵0.4毫克，維生素C3毫克。此外，還含有硫胺素、核黃素、尼克酸、蒜素、檸檬醛以及硒和鍺等微量元素。含揮發(fā)油約0.2%，油中主要成分為大蒜辣素，具有殺菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解產(chǎn)生。尚含多種烯丙基、丙基和甲基組成的硫醚化合物等。蒜中含有“蒜胺”，這種物質(zhì)對大腦的益處比維生素B，還強(qiáng)許多倍。
生產(chǎn)上均采用傳統(tǒng)的地方品種和自然變異的大蒜品種培植，很難獲得或創(chuàng)造可育的大蒜材料進(jìn)行有性雜交育種。但隨著新的育種技術(shù)發(fā)展，人工誘變、原生質(zhì)體的分離和融合以及組織培養(yǎng)等新的手段相繼涌現(xiàn)，使大蒜的育種工作取得了很大的進(jìn)展。但是目前，一般以大蒜的鱗莖的莖芽、莖尖或者胚作為外植體來誘導(dǎo)大蒜進(jìn)行再生；利用上述外植體雖然可以成功的誘導(dǎo)出愈傷組織，但是需要以損失大量的鱗莖為代價，不利于種質(zhì)資源的保存，且莖尖或者莖芽的體積較小，取材不便，給育種工作増加困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供ー種利用蒜瓣為外植體誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的方法，此方法既可以獲得高誘導(dǎo)率、高質(zhì)量的胚型愈傷組織，且外植體來源廣泛，制備簡單、易行。
[0004]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
(1)外植體處理:ー種利用蒜瓣誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的方法:包括如下步驟:將大蒜剝皮后用無菌水清洗蒜瓣，先于體積濃度為75%的こ醇中浸泡30s，再于體積濃度為3%-10%的次氯酸鈉中消毒3-8min，無菌水清洗干凈后于無菌操作臺中切掉蒜瓣的頂部和基部，以中間部分的蒜瓣作為外植體，縱向先將外植體平均切成兩個組織塊，然后縱向?qū)⒚繅K組織塊再切成兩份組織塊；
(2)接種:將步驟I中的組織塊隨機(jī)接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種時，按照大蒜原本生長方向縱向接種，即組織塊原本處于蒜瓣基部的部位與培養(yǎng)基接觸；
(3)愈傷組織誘導(dǎo):將裝有蒜瓣組織塊的培養(yǎng)皿于全黑暗、18-22°C下培養(yǎng)至愈傷組織形成。
[0005]所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，ILMS培養(yǎng)基中添加l_2mg的NAA、1_1.5mg的6-BA、0.5-lmg的ZT、20_30g蔗糖和7g瓊脂，高溫高壓滅菌冷卻后待用。
[0006]所述的蒜瓣組織塊的長度為0.5-lcm。[0007]本發(fā)明的有益效果是:
(1)提出ー種利用大蒜的蒜瓣作為外植體誘導(dǎo)愈傷組織形成的方法，最高誘導(dǎo)率可達(dá)
88% ；
(2)本方法以大蒜的蒜瓣作為外植體，外植體來源廣泛、取材方便；避免因為采用莖尖或莖芽作為外植體而帶來的大蒜種質(zhì)資源匱乏的缺陷，也可以克服莖尖、莖芽制備的困難的難題。
【具體實施方式】
[0008]以下通過實施例進(jìn)ー步闡述本發(fā)明的有益效果:
實施例1:
(1)外植體處理:將大蒜剝皮后用無菌水清洗蒜瓣，先于體積濃度為75%的こ醇中浸泡30s，再于體積濃度為3%的次氯酸鈉中消毒8min，無菌水清洗干凈后于無菌操作臺中切掉蒜瓣的頂部和基部，以中間部分的蒜瓣作為外植體，縱向先將外植體平均切成兩個組織塊，然后縱向?qū)⒚繅K組織塊再切成兩份組織塊；
(2)接種:將步驟I中的組織塊隨機(jī)接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種時，組織塊原本處于蒜瓣基部的部位與培養(yǎng)基接觸，共接種100塊組織塊；所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，ILMS培養(yǎng)基中添加2mg的NAA、Img的6_BA、0.5mg的ZT、25g蔗糖和7g瓊脂；所述的蒜瓣組織塊的長度為0.5-lcm。
[0009](3)愈傷組織誘導(dǎo):將裝有蒜瓣組織塊的培養(yǎng)皿于全黑暗、18_22°C下培養(yǎng)至愈傷組織形成，100塊組織塊中有85塊外植體上有愈傷組織形成，愈傷組織誘導(dǎo)率為85%。
[0010]實施例2:
(1)外植體處理:將大蒜剝皮后用無菌水清洗蒜瓣，先于體積濃度為75%的こ醇中浸泡30s，再于體積濃度為:5%的次氯酸鈉中消毒3min，無菌水清洗干凈后于無菌操作臺中切掉蒜瓣的頂部和基部，以中間部分的蒜瓣作為外植體，縱向先將外植體平均切成兩個組織塊，然后縱向?qū)⒚繅K組織塊再切成兩份組織塊；
(2)接種:將步驟I中的組織塊隨機(jī)接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種時，組織塊原本處于蒜瓣基部的部位與培養(yǎng)基接觸，共接種100塊組織塊；所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，ILMS培養(yǎng)基中添加2mg的NAA、Img的6_BA、0.5mg的ZT、25g蔗糖和7g瓊脂；所述的蒜瓣組織塊的長度為0.5-lcm。
[0011](3)愈傷組織誘導(dǎo):將裝有蒜瓣組織塊的培養(yǎng)皿于全黑暗、18_22°C下培養(yǎng)至愈傷組織形成，100塊組織塊中有88塊外植體上有愈傷組織形成，愈傷組織誘導(dǎo)率為88%。
[0012]實施例3:
(1)外植體處理:將大蒜剝皮后用無菌水清洗蒜瓣，先于體積濃度為75%的こ醇中浸泡30s，再于體積濃度為3%的次氯酸鈉中消毒8min，無菌水清洗干凈后于無菌操作臺中切掉蒜瓣的頂部和基部，以中間部分的蒜瓣作為外植體，縱向先將外植體平均切成兩個組織塊，然后縱向?qū)⒚繅K組織塊再切成兩份組織塊；
(2)接種:將步驟I中的組織塊隨機(jī)接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種時，組織塊原本處于蒜瓣基部的部位與培養(yǎng)基接觸，共接種100塊組織塊；所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，ILMS培養(yǎng)基中添加2mg的NAA、1.5mg的6_BA、Img的ZT、25g蔗糖和7g瓊脂；所述的蒜瓣組織塊的長度為0.5-lcm。
[0013](3)愈傷組織誘導(dǎo):將裝有蒜瓣組織塊的培養(yǎng)皿于全黑暗、18_22°C下培養(yǎng)至愈傷組織形成，100塊組織塊中有80塊外植體上有愈傷組織形成，愈傷組織誘導(dǎo)率為80%。
[0014]實施例4:
(1)外植體處理:將大蒜剝皮后用無菌水清洗蒜瓣，先于體積濃度為75%的こ醇中浸泡30s，再于體積濃度為5%的次氯酸鈉中消毒3min，無菌水清洗干凈后于無菌操作臺中切掉蒜瓣的頂部和基部，以中間部分的蒜瓣作為外植體，縱向先將外植體平均切成兩個組織塊，然后縱向?qū)⒚繅K組織塊再切成兩份組織塊；
(2)接種:將步驟I中的組織塊隨機(jī)接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種時，組織塊原本處于蒜瓣基部的部位與培養(yǎng)基接觸，共接種100塊組織塊；所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，ILMS培養(yǎng)基中添加2mg的NAA、1.5mg的6_BA、Img的ZT、25g蔗糖和7g瓊脂；所述的蒜瓣組織塊的長度為0.5-lcm。 [0015](3)愈傷組織誘導(dǎo):將裝有蒜瓣組織塊的培養(yǎng)皿于全黑暗、18_22°C下培養(yǎng)至愈傷組織形成，100塊組織塊中有86塊外植體上有愈傷組織形成，愈傷組織誘導(dǎo)率為86%。
[0016]上述實例只是為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思以及技術(shù)特點(diǎn)，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)該涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.ー種利用蒜瓣誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的方法，其特征在于，所述方法為: (1)外植體處理:將大蒜剝皮后用無菌水清洗蒜瓣，先于體積濃度為75%的こ醇中浸泡30s，再于體積濃度為3%-10%的次氯酸鈉中消毒3-8min，無菌水清洗干凈后于無菌操作臺中切掉蒜瓣的頂部和基部，以中間部分的蒜瓣作為外植體，縱向先將外植體平均切成兩個組織塊，然后縱向?qū)⒚繅K組織塊再切成兩份組織塊； (2)接種:將步驟I中的組織塊隨機(jī)接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，接種時，按照大蒜原本生長方向縱向接種，即組織塊原本處于蒜瓣基部的部位與培養(yǎng)基接觸； (3)愈傷組織誘導(dǎo):將裝有蒜瓣組織塊的培養(yǎng)皿于全黑暗、18-22°C下培養(yǎng)至愈傷組織形成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用蒜瓣誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的方法，其特征在于，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，ILMS培養(yǎng)基中添加l_2mg的NAA、1_1.5mg的6_BA、0.5-lmg的ZT、20-30g蔗糖和7g瓊脂，高溫高壓滅菌冷卻后待用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用蒜瓣誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的方法，其特征在于，所述的蒜瓣組織塊的長度為0. 5-lcm。
【文檔編號】A01H4/00GK103598090SQ201310525495
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】李本明 申請人:李本明