無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，屬于農(nóng)業(yè)種植【技術(shù)領(lǐng)域】。解決了現(xiàn)有技術(shù)所存在的吊瓜組培苗未經(jīng)過脫病毒處理，移植到田間后容易受病毒侵染的技術(shù)問題。它包括獲得吊瓜組培苗、將吊瓜組培苗置于光照培養(yǎng)箱中變溫培養(yǎng)8-12天、培養(yǎng)完成后取莖尖接種培養(yǎng)、轉(zhuǎn)接種培養(yǎng)、得到脫病毒的植株增殖步驟。本發(fā)明獲得了無病毒的吊瓜組培苗，該組培苗移植到田間后不易受病毒侵染，一致性好，組培苗生長旺盛、產(chǎn)量高，確保了吊瓜籽的產(chǎn)量和質(zhì)量。
【專利說明】無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)種植【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]吊瓜(Fructus Trichosanthis Kirilowii)是被子植物門(Angiospermae)、雙子葉綱(Dicotyledones)、葫蘆科(Cucurbitaceae)、瓜萎屬的多年生草本攀援植物，我國東部和長江及黃河流域等地均可栽種。吊瓜果實為白色與淺綠或深綠相間花紋，成熟后呈桔紅色。吊瓜食用性開發(fā)主要集中在吊瓜籽上。吊瓜籽占吊瓜果實凈重三分之一以上，一般情況下吊瓜果實中含種子75~210粒，畝產(chǎn)瓜子75~150公斤。現(xiàn)代醫(yī)藥學研究證明:吊瓜籽中脂肪酸占36.2%,其中65%為不飽和脂肪酸，蛋白質(zhì)占5.46%，并含17種以上的氨基酸，經(jīng)常食用具有保健作用。吊瓜籽炒熟后味道潤綿、脆香特異、其外觀褐色艷麗、籽仁飽滿，被譽為“瓜子之王”。
[0003]食用吊瓜雌雄異株，目前主流的繁殖法有籽播苗繁殖法和生塊根切斷繁殖法兩種，用籽播苗繁殖，繁殖率低后代分離嚴重，一致性差，不結(jié)果的雄株占總苗的70%以上，育苗成本高，且病毒病發(fā)病幾率高(種傳病毒)；用塊根切斷繁殖，由于受塊根數(shù)量的限制，繁殖效率低，且費工費時，直接影響播種面積的擴大及優(yōu)良品種的推廣。人們經(jīng)過多年的研究后，開發(fā)了吊瓜種苗的無性繁殖技術(shù)，該技術(shù)可以達到快速繁殖的目的，如中國發(fā)明專利公開了一種吊瓜組培苗育苗方法[申請?zhí)?200610161470.1]，但用該方法得到的吊瓜組培苗未進行脫病毒處理，組培苗中會存在病毒，目前關(guān)于吊瓜病毒病研究的結(jié)果顯示:西瓜花葉病毒(Watermelon mosaic virus, WMV)和黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)是引起吊瓜病毒病主要的主要病源。經(jīng)采摘的疑似感病毒的吊瓜樣品，經(jīng)檢測得出侵染吊瓜的病毒均為馬鈴薯Y病毒屬病毒(Potyvirus)，有常見的小西葫蘆黃化花葉病毒(Zucchiniyellow mosaic virus, ZYMV)、木瓜環(huán)斑病毒(Papaya ring spot virus, PRSV)和(Papayaleaf distortion mosaic virus, PLDMV)等。帶有上述這些病毒的組培苗移植到田間后容易造成病毒病流行，被病毒侵染的吊瓜在第一年癥狀表現(xiàn)不明顯，但果實的產(chǎn)出不高，主要產(chǎn)量集中在第二年，第三年基本沒有產(chǎn)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對上述問題，提供一種無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法；解決了現(xiàn)有技術(shù)所存在的吊瓜組培苗未經(jīng)過脫病毒處理，移植到田間后容易受病毒侵染的技術(shù)問題。
[0005]為達到上述目的，本發(fā)明采用了下列技術(shù)方案:一種無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0006]步驟1，在實驗室培養(yǎng)基中獲得吊瓜組培苗；
[0007]步驟2，將吊瓜組培苗置于光照培養(yǎng)箱中，所述光照培養(yǎng)箱的溫度每隔12小時在31°C -33°C和37°C _39°C兩個溫度區(qū)間進行交替變換，培養(yǎng)時間為8_12天；[0008]步驟3，培養(yǎng)完成后，從光照培養(yǎng)箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝?nèi)?.2-0.4mm的莖尖,接種于第一培養(yǎng)基上,將第一培養(yǎng)基放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)；
[0009]步驟4，當莖尖轉(zhuǎn)綠并膨大至1.8-2.2mm時，將莖尖轉(zhuǎn)接至第二培養(yǎng)基上，并繼續(xù)在培養(yǎng)室中培養(yǎng)；
[0010]步驟5，當莖尖培養(yǎng)成4_5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
[0011 ] 在上述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法中，在步驟3中，所述第一培養(yǎng)基為pH為5.6-6.0 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 瓊脂培養(yǎng)基。
[0012]在上述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法中，在步驟4中，所述第二培養(yǎng)基為pH為 5.6-6.0 的 MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 瓊脂培養(yǎng)基。
[0013]在上述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法中，在步驟3中，所述培養(yǎng)室溫度為230C _27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800_2200Lx，光照時間為10_14h/d。
[0014]在上述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法中，在步驟4中，所述培養(yǎng)室溫度為230C _27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800_2200Lx，光照時間為10_14h/d。
[0015]作為一種優(yōu)選的方案，無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0016]步驟1，在實驗室培養(yǎng)基中獲得吊瓜組培苗；
[0017]步驟2，將吊瓜組培苗置于光照培養(yǎng)箱中，所述光照培養(yǎng)箱的溫度每隔12小時在32°C和38°C兩個溫度間進行交替變換，培養(yǎng)時間為10天；
[0018]步驟3，培養(yǎng)完成后，從光照培養(yǎng)箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝?nèi)?.2-0.4mm 的莖尖，接種于 pH 為 5.8 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 瓊脂的第一培養(yǎng)基上，將第一培養(yǎng)基放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)室溫度為23°C _27°C,相對濕度為60% -80%，光照強度為1800-2200LX，光照時間為10_14h/d ；
[0019]步驟4，當莖尖轉(zhuǎn)綠并膨大至2mm時，將莖尖轉(zhuǎn)接至pH為5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂的第二培養(yǎng)基上，并繼續(xù)在培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)室溫度為23°C -27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為 10-14h/d ；
[0020]步驟5，當莖尖培養(yǎng)成4_5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
[0021]與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于:
[0022]1、熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)結(jié)合的方法，脫除了單用莖尖培養(yǎng)或熱處理難以脫除的病毒，提聞了脫毒成功的幾率；
[0023]2、采用變溫的熱處理脫毒法，提高了組培苗的存活率；
[0024]3、選取0.2-0.4mm的莖尖進行培養(yǎng)，成活率可達60%，脫毒率為100%，具有存活率聞和脫毒率完全的效果；
[0025]4、獲得了無病毒的吊瓜組培苗，利用無病毒組培苗進行組織培養(yǎng)，達到快速繁殖的目的，該組培苗移植到田間后不易受病毒侵染，一致性好，組培苗生長旺盛、產(chǎn)量高，確保了吊瓜籽的產(chǎn)量和質(zhì)量。
【具體實施方式】[0026]一種無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0027]步驟1，在實驗室培養(yǎng)基中獲得吊瓜組培苗；
[0028]步驟2，將吊瓜組培苗置于光照培養(yǎng)箱中，所述光照培養(yǎng)箱的溫度每隔12小時在31°C -33°C和37°C _39°C兩個溫度區(qū)間進行交替變換，培養(yǎng)時間為8_12天；
[0029]步驟3，培養(yǎng)完成后，從光照培養(yǎng)箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝?nèi)?br> 0.2-0.4mm 的莖尖，接種于 pH 為 5.6-6.0 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6%瓊脂培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)基放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)室溫度為23°C -27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800-2200LX，光照時間為10_14h/d ；
[0030]步驟4，當莖尖轉(zhuǎn)綠并膨大至1.8-2.2mm時，將莖尖轉(zhuǎn)接至pH為5.6-6.0的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂培養(yǎng)基上，并繼續(xù)在培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)室溫度為23°C -27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為10-14h/d ；
[0031]步驟5，當莖尖培養(yǎng)成4_5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
[0032]作為一種優(yōu)選的方案，無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
[0033]步驟1，在實驗室培養(yǎng)基中獲得吊瓜組培苗；
[0034]步驟2，將吊瓜組培苗置于光照培養(yǎng)箱中，所述光照培養(yǎng)箱的溫度每隔12小時在32°C和38°C兩個溫度間進行交替變換，培養(yǎng)時間為10天；
[0035]步驟3，培養(yǎng)完成后，從光照培養(yǎng)箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝?nèi)?br> 0.2-0.4mm 的莖尖，接種于 pH 為 5.8 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 瓊脂培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)基放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)室溫度為23°C _27°C，相對濕度為60% -80%,光照強度為1800-2200LX，光照時間為10_14h/d ；
[0036]步驟4，當莖尖轉(zhuǎn)綠并膨大至2mm時，將莖尖轉(zhuǎn)接至pH為5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂培養(yǎng)基上，并繼續(xù)在培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)室溫度為23°C -27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為10-14h/d ；
[0037]步驟5，當莖尖培養(yǎng)成4_5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
[0038]下面結(jié)合試驗數(shù)據(jù)進一步說明本發(fā)明的有益效果:
[0039]表1為熱處理方法和時間對組培苗生長的影響。
[0040]表1
[0041]
【權(quán)利要求】
1.一種無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1，在實驗室培養(yǎng)基中獲得吊瓜組培苗； 步驟2，將吊瓜組培苗置于光照培養(yǎng)箱中，所述光照培養(yǎng)箱的溫度每隔12小時在31°C -33°C和37°C _39°C兩個溫度區(qū)間進行交替變換，培養(yǎng)時間為8_12天； 步驟3，培養(yǎng)完成后，從光照培養(yǎng)箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝?nèi)?.2-0.4mm的莖尖，接種于第一培養(yǎng)基上，將第一培養(yǎng)基放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)； 步驟4，當莖尖轉(zhuǎn)綠并膨大至1.8-2.2mm時，將莖尖轉(zhuǎn)接至第二培養(yǎng)基上，并繼續(xù)在培養(yǎng)室中培養(yǎng)； 步驟5，當莖尖培養(yǎng)成4-5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟3中，所述第一培養(yǎng)基為PH為5.6-6.0的MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟4中，所述第二培養(yǎng)基為PH為5.6-6.0的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟3中，所述培養(yǎng)室溫度為23°C -27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為10-14h/d。
5.根據(jù)權(quán)利要求1`所述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，在步驟4中，所述培養(yǎng)室溫度為23°C -27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為10-14h/d。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無病毒吊瓜組培苗的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1，在實驗室培養(yǎng)基中獲得吊瓜組培苗； 步驟2，將吊瓜組培苗置于光照培養(yǎng)箱中，所述光照培養(yǎng)箱的溫度每隔12小時在32°C和38°C兩個溫度間進行交替變換，培養(yǎng)時間為10天； 步驟3，培養(yǎng)完成后，從光照培養(yǎng)箱中取出吊瓜組培苗，在解剖鏡下剝?nèi)?.2-0.4mm的莖尖，接種于pH為5.8的MS+2.0mg -L-1BA+30.0mg-L-1蔗糖+0.6%瓊脂的第一培養(yǎng)基上，將第一培養(yǎng)基放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)室溫度為23°C _27°C，相對濕度為60% -80%,光照強度為1800-2200LX，光照時間為10_14h/d ； 步驟4，當莖尖轉(zhuǎn)綠并膨大至2mm時，將莖尖轉(zhuǎn)接至pH為5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%瓊脂的第二培養(yǎng)基上，并繼續(xù)在培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)室溫度為23°C -27°C，相對濕度為60% -80%，光照強度為1800-2200Lx，光照時間為 10-14h/d ； 步驟5，當莖尖培養(yǎng)成4-5cm的組培苗植株時，取組培苗植株葉子檢測植株是否脫病毒，如已脫病毒，將此植株進行增殖，得到無病毒吊瓜組培苗。
【文檔編號】A01H4/00GK103598097SQ201310579558
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月18日
【發(fā)明者】孫葉芳, 鄭琪, 羊安興, 邢海, 趙虎, 黃岳夫 申請人:紹興市農(nóng)業(yè)科學研究院