抗真菌組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及抗真菌組合物及其在處理農(nóng)產(chǎn)品中的用途。
【專利說明】抗真菌組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開了用于控制植物疾病和預(yù)防農(nóng)作物微生物腐敗的新的抗微生物組合 物。

【背景技術(shù)】
[0002] 據(jù)估計(jì)世界農(nóng)作物產(chǎn)量的約25%由于微生物腐敗而損失，其中真菌導(dǎo)致的腐敗是 迄今為止最重要的原因。從經(jīng)濟(jì)學(xué)觀點(diǎn)以及人道主義觀點(diǎn)來看，預(yù)防食品腐敗均非常重要。 畢竟，世界上許多地區(qū)的人在遭受饑餓。
[0003] 在對抗植物和農(nóng)作物疾病以及減輕它們對產(chǎn)量和品質(zhì)造成的損害方面的成功在 很大程度上取決于抗真菌劑的及時(shí)應(yīng)用。由于抗性現(xiàn)象的產(chǎn)生，許多抗真菌劑（例如苯并 咪唑）的長期和頻繁的使用促成了它們有效性的降低。
[0004] 二硫代氨基甲酸鹽/酯型（dithiocarbamate-type)化合物最開始用作橡膠硫化 工藝中的促進(jìn)劑。二硫代氨基甲酸鹽/酯類目前廣泛地用作一系列作物的抗真菌劑，這主 要是由于其在控制植物真菌疾病方面的高效性。作為抗真菌劑達(dá)到顯著作用的首個(gè)二硫代 氨基甲酸鹽/酯為于1934年被授予專利權(quán)的福美雙（thiram)。1961年開發(fā)出所有二硫代 氨基甲酸鹽/酯類中最重要且最具商業(yè)意義的代森猛鋅（mancozeb)。在超過50年的時(shí)間 里，對于世界范圍內(nèi)面臨控制農(nóng)作物真菌性害蟲的挑戰(zhàn)的種植者而言，代森錳鋅一直是一 種寶貴的工具。代森錳鋅的重要性在其銷量方面的體現(xiàn)，2007年世界范圍內(nèi)售出價(jià)值大約 7. 4億美元的含代森錳鋅產(chǎn)品。盡管其獲得了成功，但二硫代氨基甲酸鹽/酯類在開發(fā)和維 持方面并非沒有挑戰(zhàn)。一個(gè)關(guān)注點(diǎn)是二硫代氨基甲酸鹽/酯類對不同植物葉片上的酵母種 群的生物多樣性的負(fù)面影響。此外，與使用二硫代氨基甲酸鹽/酯類相關(guān)的可能的人類健 康風(fēng)險(xiǎn)是主要的關(guān)注點(diǎn)。此外，二硫代氨基甲酸鹽/酯類的長期和反復(fù)使用可導(dǎo)致目標(biāo)真 菌種群抗性的建立。現(xiàn)在已在若干種農(nóng)作物和疾病中觀察到對二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真 菌劑的抗性（參見Odeyemi等人，1977 ;Parry等人，1959 ;Barak等人，1984)。
[0005] 第一代二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑（包括萎銹靈（carboxin))發(fā)現(xiàn)于20世 紀(jì)60年代中期，這些分子僅針對擔(dān)子菌有效。最近已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了具有更寬活性譜的新的二硫 代氨基甲酸鹽/酯。盡管在不斷開發(fā)新的二硫代氨基甲酸鹽/酯，但這些抗真菌劑在開發(fā) 和維持方面并非不面臨挑戰(zhàn)。一個(gè)大的關(guān)注點(diǎn)是抗性的產(chǎn)生。現(xiàn)在已在若干種農(nóng)作物和疾 病中觀察到對二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑的抗性（參見Avenot等人，2007 ;Fillinger 等人，2008 ;Leroux 等人，1988)。
[0006] 幾十年來，多烯大環(huán)內(nèi)酯類殺真菌劑（antimycotic)那他霉素（natamycin)已 被用于預(yù)防食品如乳酪和香腸上的真菌生長。通過使用納塔爾鏈霉菌（Streptomyces natalensis)發(fā)酵生成的此天然防腐劑在全世界被廣泛用作食物防腐劑并且在食品工業(yè)中 具有安全使用的悠久歷史。其對所有已知的食物腐敗真菌均非常有效。盡管那他霉素在例 如乳酪業(yè)中被應(yīng)用多年，但迄今為止從未觀察到抗性真菌物種的產(chǎn)生。
[0007] 因此可得出結(jié)論：急需用于處理植物和農(nóng)作物中和植物和作物上的真菌生長的更 有效的抗微生物組合物，例如抗真菌組合物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明通過提供新的協(xié)同抗微生物例如抗真菌組合物來解決所述問題，所述組 合物包含多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑（dithiocarbamate fungicides)家族的至少一種抗真菌化合物。如本文所用，術(shù)語〃協(xié)同〃是指抗真菌化合物 組合使用時(shí)的組合效果大于其單獨(dú)使用時(shí)的累加效果。
[0009] 通常，兩種活性成分的協(xié)同活性可例如使用處理交互作用層（treatment interaction stratum)(參見Slinker, 1998)在方差分析模型中進(jìn)行測試。相對功效可通 過下式來計(jì)算：（（未經(jīng)處理的對照的進(jìn)化狀態(tài)值-組合物的進(jìn)化狀態(tài)值）八未經(jīng)處理的對 照的進(jìn)化狀態(tài)值））*1〇〇。然后可通過下式計(jì)算交互作用系數(shù)：（（組合化合物A+化合物B 的相對功效）八化合物A的相對功效+化合物B的相對功效））*100。大于100的交互作用 系數(shù)指示化合物間的協(xié)同作用。
[0010] 或者，可以如下計(jì)算協(xié)同作用：可通過計(jì)算與用對照組合物處理的產(chǎn)品上的霉菌 生長相比用活性成分處理的產(chǎn)品上所觀察到的霉菌生長的減少來測定各個(gè)活性成分的抗 真菌活性（以％計(jì)）。包含兩種活性成分的組合的抗真菌組合物的預(yù)期抗真菌活性（E，以％ 計(jì)）可根據(jù)Colby方程（Colby, 1967)計(jì)算：
[0011] E = X+Y - [ (X ·Υ) /100]，其中X和Y分別是各個(gè)活性成分X和Y的觀察至IJ的抗真 菌活性（以％計(jì)）。如果對組合所觀察到的抗真菌活性（0,以％計(jì)）超出組合的預(yù)期抗真 菌活性（Ε，以％計(jì)）并從而使協(xié)同作用因子0/Ε>1.0,則活性成分的組合應(yīng)用導(dǎo)致協(xié)同的抗 真囷效果。
[0012] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一 種抗真菌化合物選自代森銨（amobam)、福美砷（asomate)、氧化福美雙（azithiram)、硫雜 靈（cufraneb)、福美銅氯（cuprobam)、雙硫侖（disulfiram)、福美鐵（ferbam)、代森猛鋅、代 森猛（maneb)、威百畝（metam)、代森聯(lián)（metiram)、代森鈉（nabam)、甲代森鋅（propineb)、 福美雙聯(lián)（tecoram)、福美雙、福美甲胂（urbacide)、代森鋅（zineb)和福美鋅（ziram)。
[0013] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物還可包含來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑 家族的兩種或更多種抗真菌化合物。應(yīng)當(dāng)理解，來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家 族的抗真菌化合物的衍生物（包括但不限于來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的 抗真菌化合物的鹽或溶劑化物）或來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的抗真菌化 合物的經(jīng)修飾形式也可應(yīng)用于本發(fā)明的組合物中。包含二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑 例如代森錳鋅的商業(yè)產(chǎn)品的實(shí)例為具有商標(biāo)名Dithane?，Kencozeb?、Manzate?和 Pemcozeb?的產(chǎn)品。包含二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑例如代森聯(lián)的商業(yè)產(chǎn)品的實(shí) 例為具有商標(biāo)名Polyram?的產(chǎn)品。包含二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑例如福美雙的商 業(yè)產(chǎn)品的實(shí)例為具有商標(biāo)名Vitavax?、Thiraflo?和Thiragranz?的產(chǎn)品。所述商業(yè) 產(chǎn)品可并入本發(fā)明中。
[0014] 在一個(gè)實(shí)施方案中，多烯抗真菌化合物選自那他霉素、制霉菌素（nystatin)、兩 性霉素 B、三烯菌素（trienin)、意北霉素（etruscomycin)、菲律賓菌素（filipin)、欽氏 菌素（chainin)、制皮菌素（dermostatin)、lymphosarcin、殺念珠菌素（candicidin)、 金色制霉素（aureofungin)A、金色制霉素 B、哈霉素（hamycin)A、哈霉素 B和魯斯霉素 (Iucensomycin)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，多烯抗真菌化合物為那他霉素。在一個(gè)實(shí)施 方案中，所述組合物還可包含兩種或更多種不同的多烯抗真菌化合物。應(yīng)當(dāng)理解，多烯抗真 菌化合物的衍生物（包括但不限于多烯抗真菌化合物的鹽或溶劑化物）或多烯抗真菌化合 物的經(jīng)修飾形式也可應(yīng)用于本發(fā)明的組合物中。包含那他霉素的商業(yè)產(chǎn)品的實(shí)例為具有商 標(biāo)名Delv〇cid__:K...的產(chǎn)品。此類產(chǎn)品由DSM Food Specialties (荷蘭）生產(chǎn)，并且可為包含 例如50% (w/w)那他霉素的固體或是包含例如2-50% (w/v)那他霉素的液體。所述商業(yè) 產(chǎn)品可并入本發(fā)明的組合物中。
[0015] 本發(fā)明的組合物通常包含約0· 005g/l至約100g/l和優(yōu)選地約0· Olg/Ι至約50g/ 1的多烯抗真菌化合物。優(yōu)選地，所述量為〇. 〇lg/l至3g/l。
[0016] 本發(fā)明的組合物通常包含約0. 0001g/l至約2000g/l和優(yōu)選地約0. 0005g/l至約 1500g/l的來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的抗真菌化合物。更優(yōu)選地，所述量為 0·001g/l 至 1000g/l。
[0017] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物還包含至少一種選自以下的額外的化合物： 粘著劑（Sticking agent)、載體、著色劑、保護(hù)性膠體、粘合劑（adhesive)、除草劑、肥料、 增稠劑、螯合劑、觸變劑、表面活性劑、其他抗微生物化合物、去污劑、防腐劑、鋪展劑、填 充劑、噴灑油、流動(dòng)添加劑、礦物質(zhì)、溶劑、分散劑、乳化劑、潤濕劑、穩(wěn)定劑、消泡劑、緩沖 齊[J、UV吸收劑和抗氧化劑。其他抗微生物抗真菌化合物可為抗真菌化合物（例如抑霉唑 (imazalil)、噻苯咕唑（thiabendazole))或?qū)估ハx、線蟲、螨蟲和/或細(xì)菌的化合物。當(dāng) 然，根據(jù)本發(fā)明的組合物還可包含兩種或更多種任何上述額外的化合物。在分開應(yīng)用抗真 菌化合物的情況下，任何上述額外的化合物還可與多烯抗真菌化合物和/或來自二硫代氨 基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，額外的化 合物對于特定用途（例如食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)業(yè)）可接受的添加劑。適合用于食 物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)業(yè)的額外的化合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的。
[0018] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，其他抗微生物化合物為屬于亞磷酸類的天然農(nóng)作物保護(hù) 化合物，例如KH 2PO3或K2HPO3或兩種亞磷酸鹽的混合物。如本文所用，含亞磷酸類化合物 (phosphite containing compound)是指包含亞憐酸基團(tuán)即P03(呈例如H2PO3^ HPO廣或 PO廣的形式）的化合物，或允許釋放亞磷酸離子的任何化合物，包括化合物例如亞磷酸和 膦酸及其衍生物例如其酯和/或堿金屬鹽或堿土金屬鹽。在本發(fā)明的組合物包含多烯抗 真菌化合物（例如那他霉素）和至少一種含亞磷酸類化合物的情況下，對于每克多烯抗真 菌化合物，它們優(yōu)選地包含〇. Ig或更少的木質(zhì)素磺酸鹽，更優(yōu)選〇. Ig或更少的多酚。優(yōu) 選地，對于每克多烯抗真菌化合物，它們包含0. Olg或更少的木質(zhì)素磺酸鹽，更優(yōu)選0. Olg 或更少的多酚。特別地，它們不含木質(zhì)素磺酸鹽以及優(yōu)選地不含多酚。含亞磷酸類化合物 的合適實(shí)例是亞磷酸及其（堿金屬或堿土金屬）鹽，例如亞磷酸鉀例如KH 2PO3和Κ2ΗΡ03、 亞磷酸鈉和亞磷酸銨，和亞磷酸的（C 1-C4)烷基酯及其鹽，例如乙基亞磷酸鋁（三乙膦酸鋁 (fosetyl-Al))、乙基亞磷酸鈣、異丙基亞磷酸鎂、異丁基亞磷酸鎂、仲丁基亞磷酸鎂和正丁 基亞磷酸鋁。當(dāng)然，含亞磷酸類化合物的混合物也包括在內(nèi)。例如KH 2PO3和K2HPO3的混合 物可以通過例如向KH 2PO3溶液中添加 KOH或K2CO3至5. 0-6. 0的最終pH來容易地獲得。如 上所述，農(nóng)作物或植物中被代謝成亞磷酸類化合物的前體-型化合物也可包含在本發(fā)明的 組合物中。實(shí)例為膦酸鹽/酯，例如三乙膦酸鋁絡(luò)合物。在例如農(nóng)作物或植物中，該分子的 膦酸乙酯部分被代謝成亞磷酸類。此類化合物的一個(gè)實(shí)例是被稱為AHette? (Bayer，德 國）的商業(yè)膦酸氫乙酯（ethyl hydrogen phosphonate)產(chǎn)品。組合物中亞磷酸類與那他霉 素的比率（以重量計(jì)）通常為2:1至500:1 (w/w)之間，優(yōu)選地3:1至300:1 (w/w)之間， 更優(yōu)選地5:1至200:1 (w/w)之間。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明的組合物的pH可為1至10、優(yōu)選2至9、更優(yōu)選3至8、最優(yōu)選4至7。 它們可為固體例如粉末組合物或可為液體。本發(fā)明的組合物可為水性或非水性即用型組合 物，但是也可為水性或非水性濃縮組合物/懸浮液，或在使用前必須用合適的稀釋劑例如 水或緩沖體系稀釋的儲備組合物、懸浮液和/或溶液。或者，本發(fā)明的組合物還可用于制備 涂料乳劑。本發(fā)明的組合物還可具有濃縮干產(chǎn)品（例如粉末、顆粒和片劑）的形式。它們 可用于制備用于對諸如農(nóng)產(chǎn)品（包括植物、農(nóng)作物、蔬菜和/或水果）的產(chǎn)品進(jìn)行浸沒或噴 灑的組合物。當(dāng)然，當(dāng)多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至 少一種抗真菌化合物作為分開的組合物應(yīng)用時(shí)，以上也適用。
[0020] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及試劑盒，其包含多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基 甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物。多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基 甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物可存在于兩個(gè)獨(dú)立的包裝例如容器中。 所述試劑盒的組分在包裝中可為干燥形式或液體形式。如果需要，所述試劑盒可包含用于 溶解所述化合物的說明書。此外，所述試劑盒可包含用于應(yīng)用所述化合物的說明書。
[0021] 在另一方面，本發(fā)明涉及一種通過用多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽 /酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物處理產(chǎn)品來保護(hù)所述產(chǎn)品抵抗真菌的方法。此 夕卜，可在用多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真 菌化合物處理產(chǎn)品之前、同時(shí)或之后，用其他抗真菌和/或抗微生物化合物處理產(chǎn)品?？赏?過順次應(yīng)用多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗 真菌化合物來處理產(chǎn)品，或反之亦然?；蛘撸赏ㄟ^同時(shí)應(yīng)用多烯抗真菌化合物和來自二硫 代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物的來處理產(chǎn)品。在同時(shí)應(yīng)用的情 況下，所述化合物可存在于同時(shí)應(yīng)用的不同的組合物中，或所述化合物可存在于單一組合 物中。在另一實(shí)施方案中，可通過以分開（separate)模式或交替（alternate)模式應(yīng)用所 述抗真菌化合物來處理產(chǎn)品。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通過對產(chǎn)品應(yīng)用多烯抗真菌 化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物來處理產(chǎn)品 的方法。通過應(yīng)用化合物，可預(yù)防產(chǎn)品上或產(chǎn)品中的真菌生長。換句話講，所述化合物保護(hù) 產(chǎn)品免于真菌生長和/或真菌感染和/或真菌腐敗。所述化合物還可用于處理已經(jīng)感染真 菌的產(chǎn)品。通過應(yīng)用所述化合物，可減緩、停止由于這些產(chǎn)品上或產(chǎn)品中的真菌所導(dǎo)致的疾 病發(fā)展，或產(chǎn)品甚至可從所述疾病中痊愈。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，用根據(jù)本發(fā)明的組 合物或試劑盒來處理產(chǎn)品。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述產(chǎn)品為食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)產(chǎn) 品。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述產(chǎn)品為農(nóng)產(chǎn)品。
[0022] 多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗 真菌化合物、根據(jù)本發(fā)明的組合物和根據(jù)本發(fā)明的試劑盒可通過噴灑而應(yīng)用至產(chǎn)品。適 用于將液體形式的這些化合物、組合物和試劑盒應(yīng)用至產(chǎn)品的其他方法也是本發(fā)明的 一部分。這些方法包括但不限于浸蘸、澆水、浸透、引入傾倒池 （dump tank)、蒸發(fā)、霧化 (atomizing)、成霧（fogging)、熏蒸、涂抹、刷涂、粉化（dusting)、起泡、鋪展、包裝和涂覆 (例如使用蠟或靜電）。此外，還可將抗真菌化合物注射到土壤中。已知使用自動(dòng)系統(tǒng)的噴 灑應(yīng)用降低人力成本并且節(jié)約成本。為此目的，可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法和設(shè)備。 當(dāng)感染風(fēng)險(xiǎn)高時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的組合物可定期噴灑。當(dāng)感染風(fēng)險(xiǎn)較低時(shí)，噴灑間隔可更長。 根據(jù)應(yīng)用類型，所應(yīng)用的多烯抗真菌化合物的量可從5ppm至10, OOOppm、優(yōu)選地從IOppm至 5, OOOppm，最優(yōu)選地從20ppm至1，OOOppm變化。根據(jù)應(yīng)用類型，所應(yīng)用的來自二硫代氨基 甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物的量可從IOppm至5, OOOppm、優(yōu)選地從 20ppm 至 3, OOOppm，最優(yōu)選地從 50ppm 至 1，OOOppm 變化。
[0023] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，可在收獲后處理農(nóng)產(chǎn)品。通過使用多烯抗真菌化合物 和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物，在長時(shí)間段內(nèi) 實(shí)現(xiàn)對收獲后和/或儲存疾病的控制，從而允許經(jīng)長距離和在溫度與濕度方面具有不 同受控氣氛體系的多種儲存條件下運(yùn)輸所收獲的農(nóng)產(chǎn)品。收獲后儲存病癥為例如皮孔 斑點(diǎn)、枯萎、衰老性分解、苦陷癥、灼枯（scald)、水心?。╳ater core)、褐化、維管分解、 CO2損傷、CO2或O2不足和軟化。真菌疾病可例如由以下真菌引起：Blumeria spp.，例如 Blumeria graminis ；Uncinula spp.，例如 Uncinula necator ；Leveillula spp.，例如 Leveillula taurica ；Podosphaera spp.，例如 Podosphaera leucotricha, Podosphaera fusca， Podosphaera aphanis ；Microsphaera spp.， 例 如 Microsphaera syringae ； Sawadaea spp.，例如 Sawadaea tulasnei ；Mycosphaerella spp.，例如 Mycosphaerella musae， Mycosphaerella fragariae， Mycosphaerella citri ；Mucor spp.，例如 Mucor piriformis ；Monilinia spp.，例如 Monilinia fructigena，Monilinia Iaxa ；Phomopsis spp. , Phomopsis natalensis ；Colletotrichum spp.， 例 如 Colletotrichum musae， Colletotrichum gloeosporioides， Colletotrichum coccodes ；Verticillium spp.， 例如 Verticillium theobromae ；Nigrospora spp. ；Botrytis spp.，例如 Botrytis cinerea ；Diplodia spp.，例如 Diplodia citri ；Pezicula spp. ；Alternaria spp.，例如 Alternaria citri，Alternaria alternata ；Septoria spp.，例如 Septoria depressa ； Venturia spp.，例如 Venturia inaequalis，Venturia pyrina ；Rhizopus spp.，例 如 Rhizopus stolonifer, Rhizopus oryzae ；Glomerella spp.， 例 如 Glomerella cingulata ；Sclerotinia spp.，例 如 Sclerotinia fruiticola ；Ceratocystis spp.， 例如 Ceratocystis paradoxa ；Fusarium spp.，例如 Fusarium semitectum, Fusarium moniliforme，F(xiàn)usarium solani，F(xiàn)usarium oxysporum ；Cladosporium spp.， 例 如 Cladosporium fulvum， Cladosporium cladosporioides， Cladosporium cucumerinum， Cladosporium musae ；Penicillium spp.，例如 Penicillium funiculosum，Penicillium expansum，Penicillium digitatum，Penicillium italicum ；Phytophthora spp.， 例 如 Phytophthora citrophthora, Phytophthora fragariae， Phytophthora cactorum， Phytophthora parasitica ；Phacydiopycnis spp.， 例 如 Phacydiopycnis malirum ； Gloeosporium spp.，例如 Gloeosporium album，Gloeosporium perennans，Gloeosporium fructigenum，Gloeosporium singulata ；Geotrichum spp.， 例 如 Geotrichum candidum ；Phlyctaena spp.， 例 如 Phlyctaena vagabunda ；Cylindrocarpon spp.， 例如 Cylindrocarpon mali ；StemphylIium spp.,例如 Stemphyllium vesicarium ； Thielaviopsis spp., 例 如 Thielaviopsis paradoxy ；Aspergillus spp., 例 如 Aspergillus niger, Aspergillus carbonarius ；Nectria spp., 例 如 Nectria galligena ；Cercospora spp.，例如 Cercospora angreci，Cercospora apii, Cercospora atrofiliformis,Cercospora musae, Cercospora zeae-maydis。
[0024] 本發(fā)明的另一方面涉及多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌 劑家族的至少一種抗真菌化合物保護(hù)產(chǎn)品抵抗真菌的用途。如上文所述，所述化合物可順 次或同時(shí)使用（例如應(yīng)用）。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種用途，其中將根據(jù)本發(fā)明 的組合物或試劑盒應(yīng)用至產(chǎn)品。在一個(gè)實(shí)施方案中，產(chǎn)品為食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)產(chǎn) 品。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，產(chǎn)品為農(nóng)產(chǎn)品。
[0025] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌 劑家族的至少一種抗真菌化合物可用于藥物以例如治療和/或預(yù)防真菌疾病。多烯抗真菌 化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物可例如以藥 物組合物的形式使用。所述組合物可還包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。所述抗真菌化合物可 經(jīng)口施用或腸胃外施用。所述組合物的類型取決于施用途徑。
[0026] 本發(fā)明的另一方面涉及用多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真 菌劑家族的至少一種抗真菌化合物處理的產(chǎn)品。在一個(gè)實(shí)施方案中，用根據(jù)本發(fā)明的組合 物或試劑盒來處理產(chǎn)品。本發(fā)明因此涉及包含多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸 鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物的產(chǎn)品。經(jīng)處理的產(chǎn)品的表面上和/或產(chǎn)品 內(nèi)可包含多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真 菌化合物。或者，經(jīng)處理的產(chǎn)品可包含含有這些化合物的涂層。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)處 理的產(chǎn)品表面上包含0. 000001至200mg/dm2,優(yōu)選0. 00001至100mg/dm2,更優(yōu)選0. 00005 至lOmg/dm2的多烯抗真菌化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，它們的表面上包含0. 000001至 200mg/dm2,優(yōu)選0· 00001至100mg/dm2,更優(yōu)選0· 00005至10mg/dm2的來自二硫代氨基甲酸 鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，產(chǎn)品為食物、飼料、藥 物、化妝品或農(nóng)產(chǎn)品。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，產(chǎn)品為農(nóng)產(chǎn)品。
[0027] 如本文所用，術(shù)語"食品"應(yīng)當(dāng)非常廣義地理解，包括但不限于乳酪、奶油乳酪、碎 乳酪、軟干酪、經(jīng)加工的乳酪、酸奶油、干燥的經(jīng)發(fā)酵的肉制品，包括薩拉米香腸和其他香 腸、酒、啤酒、酸乳、果汁和其他飲料、沙拉醬、軟干酪醬、蘸料、烘焙制品和烘焙填料、表面釉 和糖霜、涂抹醬、披薩餅餡料、糕餅和糕餅填料、橄欖、橄欖鹵水（olive brine)、橄欖油、果 汁、番爺泥和番爺糊、佐料（condiment)、水果楽以及類似食品。
[0028] 如本文所用，術(shù)語"飼料產(chǎn)品"也應(yīng)當(dāng)非常廣義地理解，包括但不限于寵物食物、肉 雞飼料等。
[0029] 如本文所用，術(shù)語"藥物產(chǎn)品"也應(yīng)當(dāng)非常廣義地理解，包括包含活性分子例如藥 物、藥劑或藥物化合物和任選地藥學(xué)上可接受的賦形劑的產(chǎn)品，所述賦形劑即與活性分子 組合用于制備合適或便利的劑型的任何惰性物質(zhì)。
[0030] 如本文所用，術(shù)語"化妝品"也應(yīng)當(dāng)非常廣義地理解，包括下述產(chǎn)品，所述產(chǎn)品用于 通過防止水分的蒸騰來保護(hù)或治療角質(zhì)組織如皮膚和唇、頭發(fā)和指甲的干燥，而且護(hù)理組 織以及賦予這些組織以良好的外觀。術(shù)語"化妝產(chǎn)品"涵蓋的產(chǎn)品包括但不限于保濕劑、個(gè) 人清潔產(chǎn)品、閉合的藥物遞送貼片、指甲油、粉、擦拭物、護(hù)發(fā)劑、皮膚護(hù)理乳、剃須膏等。
[0031] 如本文所用，術(shù)語"農(nóng)產(chǎn)品"也應(yīng)當(dāng)非常廣義地理解，包括但不限于谷物，例如 小麥、大麥、裸麥、燕麥、水稻、高粱等等；甜菜，例如糖用甜菜（sugar beet)和飼料甜菜 (fodder beet);梨果和核果和漿果，例如蘋果、梨、李子、杏、桃、杏仁、櫻桃、草莓、覆盆子 和黑莓；豆科植物，例如豆子、扁豆、豌豆、大豆；油料植物，例如油菜、芥末、罌粟、橄欖、向 日葵、椰子、蓖麻植物、可可、花生；葫蘆科，例如南瓜、小黃瓜（gherkins)、甜瓜、黃瓜、倭 瓜、爺子；纖維植物，例如棉花、亞麻、大麻、黃麻；柑橘水果，例如橙、梓檬、葡萄柚、蜜桔、枸 櫞；熱帶水果，例如木瓜、百香果、芒果、楊桃、菠蘿、香蕉、奇異果；蔬菜，例如菠菜、萵苣、蘆 筍、十字花科如卷心菜和蕪菁、胡蘿卜、洋蔥、番茄、馬鈴薯、馬鈴薯種子（seed-potatoes)、 尖辣椒（hot pepper)和甜椒；月桂樣植物，例如酪梨、肉桂、樟腦樹；或產(chǎn)品如玉米、煙草、 堅(jiān)果、咖啡、甘蔗、茶、葡萄藤、酒花、橡膠植物、以及觀賞植物例如切花、玫瑰、郁金香、百合、 水仙花、藏紅花、風(fēng)信子、大麗花、大丁草、康乃馨、倒掛金鐘（fuchsias)、菊花和球根花舟 (flower bulbs)、灌木、落葉樹和常綠樹例如松柏植物、溫室植物和樹木。其包括但不限于 植物及其部分、果實(shí)、種子、插條（cuttings)、栽培種、移植物、鱗莖、塊莖、根-塊莖、根莖、 切花和蔬菜。
[0032] 用于制備本文所述的組合物的方法是本發(fā)明的另一個(gè)方面。所述方法包括向來自 二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌化合物添加多烯抗真菌化合物。所 述化合物可例如被單獨(dú)地添加至水性組合物并混合，隨后如需要?jiǎng)t調(diào)節(jié)PH值、粘度等。如 果單獨(dú)添加，則單獨(dú)化合物中的一些或全部可為粉末形式，但或者，一些或全部也可為液體 形式。所述化合物也可例如以粉末形式添加至彼此并混合以獲得粉末狀組合物。所述粉末 狀組合物可隨后添加至水性組合物。 實(shí)施例
[0033] 實(shí)施例1
[0034] 香蕉的處理
[0035] 每次處理使用四個(gè)有機(jī)的、未成熟的（綠色）香蕉。根據(jù)de Lapeyre de Bellaire 和Dubois (1987)所述方法，使用木塞鉆孔器對每個(gè)香蕉的皮造成三次創(chuàng)傷。隨后，用15 μ 1 包含I X IO5個(gè)孢子/毫升的Fusarium proliferatum懸浮液對每個(gè)創(chuàng)口進(jìn)行接種。在20°C 下孵育4小時(shí)后，用100 μ 1新鮮制備的包含那他霉素 （DSM Food Specialties, Delft,荷 蘭）、代森銨或兩者的水性抗真菌組合物處理每個(gè)香蕉創(chuàng)口。此外，測試單獨(dú)的或與那他 霉素組合的二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑福美砷、氧化福美雙、硫雜靈、福美銅氯、雙硫 侖、福美鐵、代森錳鋅、代森錳、威百畝、代森聯(lián)、代森鈉、甲代森鋅、福美雙聯(lián)、福美雙、福美 甲胂、代森鋅和福美鋅。所述抗真菌組合物包含1.00% (w/w)甲基羥乙基纖維素（MHEC)、 0. 40% (w/w)黃原膠、0. 20% (w/w)消泡劑、0. 30% (w/w)朽1 檬酸、0. 39% (w/w)乳酸和 0.11% (w/w)山梨酸鉀。所述組合物的pH為4.0。將不含那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/ 酯抗真菌劑的組合物用作對照。將經(jīng)處理的、未成熟的香蕉在密閉箱中于黑暗中、20°C下和 95%的相對空氣濕度中孵育，所述條件在飽和Na 2HPO4水溶液的存在下獲得。在前20天的 孵育期間，密閉箱中包含成熟的（黃色）香蕉以提高乙烯氣體水平，從而誘導(dǎo)經(jīng)處理的、未 成熟的香蕉成熟。
[0036] 在孵育期間，香蕉上的霉菌生長程度以下列兩重方式進(jìn)行評價(jià)：（i)計(jì)數(shù)每總共 12個(gè)創(chuàng)口中長有霉菌的創(chuàng)口數(shù)；和（ii)通過計(jì)算與用對照組合物處理的香蕉創(chuàng)口上的霉 菌生長相比，用所述抗真菌組合物處理的香蕉創(chuàng)口上觀察到的霉菌生長的減少來測定各個(gè) 活性成分的抗真菌活性（以％計(jì)）。根據(jù)Colby公式（Colby，1967)來計(jì)算包含兩種活性成 分的組合抗真菌組合物的預(yù)期抗真菌活性（E，以％計(jì)）：
[0037] E = X+Y - [(X · Y)/100]
[0038] 其中X和Y分別是各個(gè)活性成分X和Y的觀察到的抗真菌活性（以％計(jì)）。如果 對組合的觀察到的抗真菌活性（〇,以％計(jì)）超出組合的預(yù)期抗真菌活性（Ε，以％計(jì)）并從 而使協(xié)同作用因子〇/Ε>1. 0,則活性成分的組合應(yīng)用導(dǎo)致協(xié)同的抗真菌效果。
[0039] 結(jié)果清楚地證實(shí)，與單獨(dú)的那他霉素或二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑相比，包 含那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑兩者的抗真菌組合物保護(hù)香蕉更好地對抗 霉菌生長。
[0040] 因此，那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑的組合在香蕉上具有協(xié)同抗真 菌活性。
[0041] 實(shí)施例2
[0042] 草莓的處理
[0043] 每次處理使用十二個(gè)新鮮的、有機(jī)草莓。用0. 5_長的切口對每個(gè)草莓造成創(chuàng)傷， 用10 μ 1包含IX IO5個(gè)孢子/毫升的Botrytis cinerea懸浮液對每個(gè)創(chuàng)口進(jìn)行接種。在 20°C下孵育2小時(shí)后，在新鮮制備的包含那他霉素 （DSM Food Specialties, Delft,荷蘭）、 代森銨或兩者的水性抗真菌組合物中將每個(gè)草莓各自浸漬1分鐘。此外，測試單獨(dú)的或與 那他霉素組合的二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑福美砷、氧化福美雙、硫雜靈、福美銅氯、 雙硫侖、福美鐵、代森錳鋅、代森錳、威百畝、代森聯(lián)、代森鈉、甲代森鋅、福美雙聯(lián)、福美雙、 福美甲胂、代森鋅和福美鋅。所述抗真菌組合物也包含1.00% (w/w)甲基羥乙基纖維素 (MHECK0.40% (w/w)黃原膠、0.20% (w/w)消泡劑、0.30% (w/w)朽1 檬酸、0.39% (w/w)乳 酸和0.11% (w/w)山梨酸鉀。所述組合物的pH為4.0。將不含那他霉素和二硫代氨基甲 酸鹽/酯抗真菌劑的組合物用作對照。將經(jīng)處理的草莓在密閉箱中于黑暗中和20°C下孵 育。
[0044] 在孵育后，草莓上的霉菌生長以下列兩重方式進(jìn)行評價(jià)：（i)計(jì)數(shù)每總計(jì)12個(gè)草 莓中長有霉菌的草莓?dāng)?shù)；和（ii)根據(jù)實(shí)施例4中描述的Colby方法（Colby，1967)計(jì)算與 用對照組合物處理的草莓上的霉菌生長相比，用所述抗真菌組合物處理的草莓上觀察到的 霉菌生長的減少來測定單獨(dú)的和組合的活性成分的抗真菌活性（以％計(jì)）。
[0045] 結(jié)果證實(shí)，與單獨(dú)的那他霉素或二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑相比，包含那他 霉素和二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑的抗真菌組合物在草莓上具有更強(qiáng)的抗真菌活性。
[0046] 因此，那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑的組合應(yīng)用協(xié)同地減少草莓上 的霉菌生長。
[0047] 實(shí)施例3
[0048] 蜜桔（mandarins)的處理
[0049] 每次處理使用十個(gè)新鮮的、有機(jī)蜜桔。根據(jù)de Lapeyre de Bellaire和 Dubois (1987)所述方法，使用木塞鉆孔器對每個(gè)蜜桔的皮造成一次創(chuàng)傷。隨后，用10 μ 1 包含I X IO4個(gè)孢子/毫升的Penicillium italicum懸浮液對每個(gè)創(chuàng)口進(jìn)行接種。在20°C 下孵育2小時(shí)后，在新鮮制備的包含那他霉素 （DSM Food Specialties，Delft，荷蘭）、代 森銨或兩者的水性抗真菌組合物中將蜜桔各自浸漬1分鐘。此外，測試單獨(dú)的或與那他霉 素組合的二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑福美砷、氧化福美雙、硫雜靈、福美銅氯、雙硫侖、 福美鐵、代森錳鋅、代森錳、威百畝、代森聯(lián)、代森鈉、甲代森鋅、福美雙聯(lián)、福美雙、福美甲 胂、代森鋅和福美鋅。此外，所述抗真菌組合物包含3.1% (w/w)蜂錯(cuò)、0.76% (w/w)甘油、 0. 66% (w/w)聚氧乙烯脫水山梨醇單硬脂酸酯（Tween 60)、0.03 % (w/w)甲基輕乙基纖維 素（MHEC)、0.02% (w/w)黃原膠、0.02% (w/w)消泡劑、0· 15% (w/w)檸檬酸和 0.01% (w/ w)山梨酸鉀。所述組合物的pH為4.0。將不含那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌 劑的組合物用作對照。
[0050] 將經(jīng)處理的蜜桔在封閉箱中于黑暗中、20°C下孵育，并在孵育25、28、31和34天后 評價(jià)霉菌生長。根據(jù)實(shí)施例1和2中所述的Colby方法（Colby, 1967),通過計(jì)算與用對照 組合物處理的蜜桔上的霉菌生長相比，用所述抗真菌組合物處理的蜜桔上觀察到的霉菌生 長的減少來測定單獨(dú)的和組合的活性成分的抗真菌活性（以％計(jì)）。
[0051] 結(jié)果證明，在預(yù)防蜜桔上的霉菌生長方面，包含那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/ 酯抗真菌劑的抗真菌組合物優(yōu)于包含單獨(dú)的那他霉素或二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑 的組合物。
[0052] 因此，那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑的組合應(yīng)用協(xié)同地減少蜜桔上 的霉菌生長。
[0053] 實(shí)施例4
[0054] 體外抗真菌活性
[0055] 為了證實(shí)那他霉素與二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑的組合對抗Botrytis cinerea的協(xié)同抗真菌活性，使用96孔微量滴定板進(jìn)行體外測定。測試以下組合物：
[0056]-對照（無活性成分）；
[0057] -那他霉素 （DSM Food Specialties, Delft,荷蘭）；
[0058] -二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑；
[0059] -那他霉素+二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑。
[0060] 用92 μ I PCB培養(yǎng)基填充微量滴定板的每個(gè)孔后，從PCB培養(yǎng)基或甲醇中制備的 單獨(dú)儲備溶液中添加活性成分，這導(dǎo)致每孔100 μ 1的中間體積。隨后，使用PCB培養(yǎng)基中 制備的IOOul Botrytis cinerea懸浮液以2. 5X IO3個(gè)孢子/毫升接種每個(gè)孔。因此，每 個(gè)孔包含200 μ 1的最終體積和〈1 %的甲醇，這不影響B(tài)otrytis cinerea的生長（數(shù)據(jù)未 示出）。
[0061] 將微量滴定板在25°C下孵育后，通過計(jì)算與不存在活性成分時(shí)觀察到的霉菌生 長相比，存在活性成分時(shí)觀察到的霉菌生長的減少來評價(jià)各個(gè)活性成分的體外抗真菌活性 (以％計(jì)）。根據(jù)Colby公式（Colby，1967)來計(jì)算活性成分組合的預(yù)期抗真菌活性（E，以％ 計(jì)）：
[0062] E = X+Y - [(X · Y)/100]
[0063] 其中X和Y分別是各個(gè)活性成分X和Y的觀察到的抗真菌活性（以％計(jì)）。如果 對組合觀察到的抗真菌活性（〇,以％計(jì)）超出組合的預(yù)期抗真菌活性（Ε，以％計(jì)）并從而 使所得協(xié)同作用因子〇/Ε>1. 0,則活性成分的組合應(yīng)用導(dǎo)致協(xié)同的抗真菌效果。
[0064] 結(jié)果證實(shí)，與單獨(dú)的那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑相比，那他霉素+ 二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑組合具有更強(qiáng)的對抗Botrytis cinerea的抗真菌活性。 [0065] 因此，那他霉素和二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑的組合應(yīng)用協(xié)同地抑制 Botrytis cinerea 的生長。
[0066] 實(shí)施例5
[0067] 草莓的處理
[0068] 每次處理使用十二個(gè)新鮮的、有機(jī)草莓。用0. 5mm長的切口對每個(gè)草莓造成創(chuàng)傷， 用10 μ 1包含IX IO5個(gè)孢子/毫升的Botrytis cinerea懸浮液對每個(gè)創(chuàng)口進(jìn)行接種。在 20°C下孵育3小時(shí)后，在新鮮制備的包含500ppm那他霉素 （DSM Food Specialties, Delft, 荷蘭）、600ppm甲代森鋅或兩者的水性抗真菌組合物中將每個(gè)草莓各自浸漬1分鐘。每種 抗真菌組合物還包含3.2% (w/w)蜂錯(cuò)、0.8% (w/w)甘油、0.7% (w/w)聚氧乙烯脫水山梨 醇單硬脂酸酯（Tween 60)、0· 1% (w/w)聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯（Tween 80)、0· 05% (w/w)甲基輕乙基纖維素（MHECK0.031% (w/w)消泡劑、0.02% (w/w)黃原膠、0.02% (w/w) 檸檬酸、0.01% (w/w)乳酸和0.01%山梨酸鉀。將不含那他霉素和甲代森鋅的組合物用作 對照。每種組合物的pH為4。將經(jīng)處理的草莓在密閉箱中于黑暗中在20°C下孵育9天。 [0069] 在孵育期間，草莓上的霉菌生長以下列兩重方式進(jìn)行評價(jià)：（i)計(jì)數(shù)每總計(jì)12個(gè) 草莓中長有霉菌的草莓?dāng)?shù)；和（ii)通過計(jì)算與用對照組合物處理的草莓上的霉菌生長相 t匕，用所述抗真菌組合物處理的草莓上觀察到的霉菌生長的減少來測定單獨(dú)的和組合的活 性成分的抗真菌活性（以％計(jì)）。根據(jù)Colby公式（Colby，1967)來計(jì)算包含兩種活性成分 的組合抗真菌組合物的預(yù)期抗真菌活性（E，以％計(jì)）：
[0070] E = X+Y - [(X · Y)/100]
[0071] 其中X和Y分別是各個(gè)活性成分X和Y的觀察到的抗真菌活性（以％計(jì)）。如果 對組合觀察到的抗真菌活性（〇,以％計(jì)）超出組合的預(yù)期抗真菌活性（Ε，以％計(jì)）并從而 使協(xié)同作用因子〇/Ε>1. 0,則活性成分的組合應(yīng)用導(dǎo)致協(xié)同的抗真菌效果。
[0072] 表1(每總共12個(gè)草莓中長有霉菌的草莓?dāng)?shù)）和表2(抗真菌活性）中的結(jié)果明 確證實(shí)，與包含單獨(dú)的那他霉素或甲代森鋅的組合物相比，包含500ppm那他霉素和600ppm 甲代森鋅的組合抗真菌組合物可更有效地保護(hù)草莓對抗霉菌生長。
[0073] 孵育5至9天后，用對照組合物或單獨(dú)甲代森鋅處理的所有12個(gè)草莓均顯示出霉 菌生長，分別用單獨(dú)的那他霉素處理的11個(gè)草莓以及所有12個(gè)草莓同樣如此（參見表1)。 然而，當(dāng)用那他霉素和甲代森鋅的活性成分組合處理時(shí)，12個(gè)草莓中僅有9個(gè)在孵育5天后 長有霉菌，并且12個(gè)草莓中僅有10個(gè)在孵育6至9天后長有霉菌（參見表1)。此外，在4 至9天的孵育期間所觀察到的抗真菌活性超出預(yù)期抗真菌活性大約6至MO %，其所產(chǎn)生的 協(xié)同作用因子范圍為1. 5至4. 7 (參見表2)。
[0074] 因此，500ppm那他霉素和600ppm甲代森鋅的組合應(yīng)用導(dǎo)致對草莓上霉菌生長的 強(qiáng)的協(xié)同減少。
[0075] 實(shí)施例6
[0076] 橙的處理
[0077] 每次處理使用十個(gè)新鮮的、有機(jī)橙。將每個(gè)橙在ISOppm次氯酸鹽溶液中浸泡10分 鐘，然后用新鮮的自來水充分沖洗并干燥。根據(jù)de Lapeyre de Bellaire和Dubois (1987) 所述方法，使用木塞鉆孔器對每個(gè)經(jīng)消毒（disinfected)的橙的皮造成一次創(chuàng)傷。隨后， 用10 μ 1包含I X IO5個(gè)孢子/毫升的Penicillium italicum懸浮液對每個(gè)創(chuàng)口進(jìn)行接 種。在20°C下孵育3小時(shí)后，用總共150 μ 1的新鮮制備的包含500ppm那他霉素 （DSM Food Specialties, Delft,荷蘭）、500ppm甲代森鋅或兩者的水性抗真菌組合物處理每個(gè)創(chuàng)口和 創(chuàng)口周圍Icm的橙皮區(qū)域。每種抗真菌組合物還包含3.2% (w/w)蜂錯(cuò)、0.8% (w/w)甘油、 0. 7% (w/w)聚氧乙烯脫水山梨醇單硬脂酸酯（Tween 60)、0. 2% (w/w)聚氧乙烯脫水山梨 醇單油酸酯（Tween 80)、0. 05% (w/w)甲基輕乙基纖維素（MHEC)、0. 03% (w/w)消泡劑、 0. 02% (w/w)黃原膠、0.02% (w/w)檸檬酸、0.01 % (w/w)乳酸和0.01 %山梨酸鉀。將不含 那他霉素和甲代森鋅的組合物用作對照。每種組合物的PH為4。
[0078] 將經(jīng)處理的橙在封閉箱中于黑暗中、20°C下孵育，并在17天的孵育期間評價(jià)霉菌 生長。根據(jù)實(shí)施例5中所述的Colby方法（Colby, 1967)，通過計(jì)算與用對照組合物處理的 橙上的霉菌生長相比，用所述抗真菌組合物處理的橙上觀察到的霉菌生長的減少來測定單 獨(dú)的和組合的活性成分的抗真菌活性（以％計(jì)）。
[0079] 表3中的結(jié)果顯示，與單獨(dú)的那他霉素或甲代森鋅相比，500ppm那他霉素和 500ppm甲代森鋅的活性成分組合在限制橙上的霉菌生長方面更成功。
[0080] 孵育10至17天后，包含那他霉素和甲代森鋅的組合物的觀察到的抗真菌活性比 預(yù)期抗真菌活性高16%至大約30%。因此，相應(yīng)的協(xié)同作用因子的范圍從第10天的1. 3 至第15和17天的2. 2 (參見表3)。
[0081] 總之，此實(shí)施例的結(jié)果清楚地證實(shí)500ppm那他霉素和500ppm甲代森鋅在組合應(yīng) 用于橙上時(shí)的協(xié)同抗真菌效果。
[0082] 實(shí)施例7
[0083] 橙的處理
[0084] 如實(shí)施例6中所述進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不同之處在于以下事實(shí)：用150 μ 1新鮮制備的包含 250ppm那他霉素 （DSM Food Specialties, Delft,荷蘭）、600ppm福美鐵或兩者的水性抗真 菌組合物來處理每個(gè)有創(chuàng)口并且經(jīng)接種的橙。在17天的孵育期間，根據(jù)實(shí)施例6中所述的 方法來評價(jià)經(jīng)處理的橙的霉菌生長。
[0085] 表4中的結(jié)果表明與包含單獨(dú)的那他霉素或福美鐵的組合物的抗真菌活性相比， 包含500ppm那他霉素和600ppm福美鐵的組合物具有更高的抗真菌活性。
[0086] 孵育7至17天后，那他霉素和福美鐵的活性成分組合的觀察到的抗真菌活性超出 預(yù)期抗真菌活性6%至幾乎30%，其所產(chǎn)生的協(xié)同作用因子介于I. 1和1. 8之間（參見表 4)。
[0087] 因此，此實(shí)施例證明500ppm那他霉素和600ppm福美鐵在橙上的組合應(yīng)用具有協(xié) 同抗真菌效果。
[0088] 實(shí)施例8
[0089] 甜椒的處理
[0090] 每次處理使用十個(gè)新鮮的、有機(jī)的甜椒。將每個(gè)甜椒在ISOppm次氯酸鹽溶液 中浸泡10分鐘，然后用新鮮的自來水充分沖洗并干燥。根據(jù)de Lapeyre de Bellaire 和Dubois (1987)所述方法，使用木塞鉆孔器對每個(gè)經(jīng)消毒的甜椒的皮造成一次創(chuàng)傷。隨 后，用10 μ 1包含I X IO5個(gè)孢子/毫升的Botrytis cinerea懸浮液對每個(gè)創(chuàng)口進(jìn)行接 種。在20°C下孵育3小時(shí)后，用總共75μ 1新鮮制備的包含200ppm那他霉素 （DSM Food Specialties, Delft,荷蘭）、200ppm甲代森鋅或兩者的水性抗真菌組合物處理每個(gè)創(chuàng)口和 創(chuàng)口周圍〇.5cm的表皮區(qū)域。每種抗真菌組合物還包含3.2% (w/w)蜂錯(cuò)、0.8% (w/w)甘 油、0.7% (w/w)聚氧乙烯脫水山梨醇單硬脂酸酯（Tween 60)、0. 2% (w/w)聚氧乙烯脫水 山梨醇單油酸酯（Tween 80)、0. 05% (w/w)甲基輕乙基纖維素（MHEC)、0. 03% (w/w)消泡 齊[]、0.02%(￥/^)黃原膠、0.02%^/^)檸檬酸、0.01%(￥/^)乳酸和0.01%山梨酸鉀。將 不含那他霉素和甲代森鋅的組合物用作對照。每種組合物的PH為4。
[0091] 將經(jīng)處理的甜椒在封閉箱中于黑暗中在20°C下孵育，并在27天的孵育期間評價(jià) 霉菌生長。根據(jù)實(shí)施例5中所述的Colby方法（Colby, 1967),通過計(jì)算與用對照組合物處 理的甜椒上的霉菌生長相比，用所述抗真菌組合物處理的甜椒上觀察到的霉菌生長的減少 來測定單獨(dú)的和組合的活性成分的抗真菌活性（以％計(jì)）。
[0092] 表5中的結(jié)果表明與包含那他霉素或甲代森鋅的組合物相比，包含200ppm那他霉 素和200ppm甲代森鋅的組合抗真菌組合物更好地保護(hù)甜椒對抗霉菌生長。
[0093] 在11至27天的孵育期間所觀察到的抗真菌活性超出預(yù)期抗真菌活性大約5至 >20%，其所產(chǎn)生的協(xié)同作用因子>1. 0 (參見表5)。
[0094] 因此，200ppm那他霉素和200ppm甲代森鋅的組合應(yīng)用協(xié)同地減少甜椒上的霉菌 生長。
[0095] 表L在用包含500ppm那他霉素、600ppm甲代森鋅或兩者的組合物處理后，在 20°C下孵育的長有霉菌的草莓的數(shù)量。
[0096]

【權(quán)利要求】
1. 組合物，其包含多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至 少一種抗真菌化合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族 的至少一種抗真菌化合物選自：代森銨、福美砷、氧化福美雙、硫雜靈、福美銅氯、雙硫侖、福 美鐵、代森錳鋅、代森錳、威百畝、代森聯(lián)、代森鈉、甲代森鋅、福美雙聯(lián)、福美雙、福美甲胂、 代森鋅和福美鋅。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中所述多烯抗真菌化合物為那他霉素。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物還包含至少一種選自 以下的額外的化合物：粘著劑、載體、著色劑、保護(hù)性膠體、粘合劑、除草劑、肥料、增稠劑、螯 合劑、觸變劑、表面活性劑、其他抗微生物化合物、去污劑、防腐劑、鋪展劑、填充劑、噴灑油、 流動(dòng)添加劑、礦物質(zhì)、溶劑、分散劑、乳化劑、潤濕劑、穩(wěn)定劑、消泡劑、緩沖劑、UV吸收劑和抗 氧化劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述多烯抗真菌化合物的量在 0. 005g/l至約100g/l的范圍內(nèi)，所述來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種 抗真菌化合物的量在約〇. 〇〇〇lg/l至約2000g/l的范圍內(nèi)。
6. 試劑盒，其包含多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至 少一種抗真菌化合物。
7. 通過用多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種 抗真菌化合物處理產(chǎn)品來保護(hù)所述產(chǎn)品抵抗真菌的方法。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中用根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的組合物或 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒來處理所述產(chǎn)品。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述產(chǎn)品選自：食品、飼料產(chǎn)品、藥物產(chǎn)品、化 妝品和農(nóng)廣品。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述產(chǎn)品為農(nóng)產(chǎn)品。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述產(chǎn)品在收獲后被處理。
12. 產(chǎn)品，其包含多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至 少一種抗真菌化合物。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品選自：食品、飼料產(chǎn)品、藥物產(chǎn)品、化妝 品和農(nóng)廣品。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品為農(nóng)產(chǎn)品。
15. 多烯抗真菌化合物和來自二硫代氨基甲酸鹽/酯抗真菌劑家族的至少一種抗真菌 化合物在保護(hù)產(chǎn)品抵抗真菌中的用途。
【文檔編號】A01N47/14GK104270948SQ201380023066
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2013年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月1日
【發(fā)明者】雅克布斯·斯塔克, 伊娃·路易絲·威廉敏娜·薩克 申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司