新穎的抗真菌組合物的制作方法
【專利說明】
[00011本申請是申請?zhí)枮?01280011576.7的中國專利申請的分案申請，原申請是國際申 請PCT/EP2012/053509的中國國家階段申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002 ]本發(fā)明公開了控制植物疾病和預(yù)防作物微生物腐?。╯po i I age)的新穎的抗真菌 組合物。
【背景技術(shù)】
[0003]據(jù)估計(jì)世界作物產(chǎn)量的約25%由于微生物腐敗而損失，其中真菌導(dǎo)致的腐敗是迄 今為止最嚴(yán)重的原因。從經(jīng)濟(jì)學(xué)觀點(diǎn)以及人道主義觀點(diǎn)(humane point)來看，預(yù)防食品腐 敗都非常重要。畢竟世界上許多地方的人在遭受饑餓。
[0004]在抵抗植物和作物疾病以及減輕它們對產(chǎn)量和品質(zhì)造成的損傷方面的成功大幅 取決于殺真菌劑的及時(shí)應(yīng)用。由于抗性現(xiàn)象的發(fā)生，許多殺真菌劑(例如苯并咪唑）的長期 和頻繁使用促成了它們有效性的降低。
[0005] -類重要的殺真菌劑是三唑（triazoles )。提出的第一種三唑是三唑酮 (triadimefon)。這種三唑于1976年由拜耳首次提出（見Kuck et al. ,1987)。三唑酮在植物 中提供治療活性以及保護(hù)活性、低應(yīng)用率（low application rates)和極佳的再分布 (redistribution)。過去二十年間提出了其他的三唑殺真菌劑，它們具有改進(jìn)的效能和植 物安全性(例如氟環(huán)挫(epoxiconazole))、更寬的有效譜(例如丙環(huán)挫(propiconazole)、戊 P坐醇（tebuconazole))或?qū)ｉT的應(yīng)用（例如用于種子處理的苯釀甲環(huán)唑（difenoconazole) 和滅菌唑(triticonazole))(見Kuck et al. ,1987)。除了在保護(hù)農(nóng)產(chǎn)品方面的用途--例 如保護(hù)收獲的水果或蔬菜免受致植物病的真菌(見EP 2 036 438A1)或保護(hù)谷物免受真菌 毒素污染（見W02007/009969)之外，三唑還被用于保護(hù)食品免受真菌腐蝕（見EP 0 101102A2)。
[0006] 然而，三唑殺真菌劑在其發(fā)展和維持中仍未對挑戰(zhàn)免疫。它們對植物具有眾所周 知的副作用。應(yīng)用至幼芽和根上常常降低伸長并導(dǎo)致葉更小、更厚和更綠。經(jīng)處理的植物可 能在衰老方面被延遲，根據(jù)作物的不同這會(huì)阻礙收獲或提高產(chǎn)量(見Buchenauer, 1987)。
[0007] 更大的擔(dān)心是抗性的發(fā)生，因?yàn)槿驓⒄婢鷦┚哂性S多與苯并咪唑相同的特性。 對三唑殺真菌劑的抗性最初在白粉病中發(fā)生，也在其他疾病中觀察到過(見Kuck et al.， 1987;Buchenauer，1987;Ma et al.，2002)。另外，盡管三唑殺真菌劑的開創(chuàng)為子囊菌 (Ascomycete)和擔(dān)子菌(Basidiomycete)疾病提供了有效的、系統(tǒng)性的殺真菌劑解決方案， 但是破壞性的卵菌(Oomycete)疾病例如馬鈴薯晚疫病(potato late blight)和葡萄霜霉 ?。╣rape downy mildew)的控制受到限制，并且（由疫霉屬（Phytophthora)和腐酶屬 (Pythium)導(dǎo)致的）長成的植物的根部腐朽和系統(tǒng)性霜霉病完全不能通過應(yīng)用三唑殺真菌 劑來控制。
[0008] 幾十年來，多烯大環(huán)內(nèi)酯抗霉菌劑那他霉素(natamycin)已被用于預(yù)防食品如乳 酪和香腸上的真菌生長。例如，在EP O 748 588A1中描述了包含多烯抗真菌劑和咪唑抗真 菌劑的真菌組合物用于處理食品和農(nóng)產(chǎn)品的用途。通過使用Streptomyces natalensis發(fā) 酵生產(chǎn)的這一天然防腐劑在全世界被廣泛用作食物防腐劑，并且在食品工業(yè)中具有安全使 用的悠久歷史。其針對所有已知的食物腐敗真菌都非常有效。盡管那他霉素在例如乳酪工 業(yè)中被應(yīng)用多年，但是迄今為止從未觀察到抗性真菌物種的發(fā)生。
[0009]因此可以得出結(jié)論:對更有效的用于處理植物和作物中的真菌生長和植物和作物 上的真菌生長的抗微生物組合物(例如抗真菌組合物)具有嚴(yán)重的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明通過提供含有多烯抗真菌化合物和至少一種來自三唑殺真菌劑家族的抗 真菌化合物的新的協(xié)同抗微生物(例如抗真菌)組合物，解決了上述問題。在本文中使用時(shí)， 術(shù)語"協(xié)同的"表示組合使用時(shí)抗真菌化合物的組合效果大于他們各自使用時(shí)的效果之和。 [00 11] 通常，兩種活性成分的協(xié)同活性可以例如使用處理交互作用層（treatment interaction stratum，見SI inker，1998)在方差分析模型中測試。相對有效性可以通過下 式計(jì)算：（（未經(jīng)處理的對照的進(jìn)化狀態(tài)值-組合物的進(jìn)化狀態(tài)值)/(未經(jīng)處理的對照的進(jìn)化 狀態(tài)值））X 100。然后可以通過下式計(jì)算交互作用系數(shù)：（（化合物A+化合物B的組合的相對 有效性)/(化合物A的相對有效性+化合物B的相對有效性））X 100。大于100的交互作用系數(shù) 表示化合物之間的協(xié)同作用。
[0012] 或者可以如下計(jì)算協(xié)同作用：可以通過計(jì)算與用對照組合物處理的產(chǎn)品上的霉菌 生長相比，用活性成分處理的產(chǎn)品上觀察到的霉菌生長的減少，來測定個(gè)體活性成分的抗 真菌活性（以％計(jì)）。可以根據(jù)Colby方程(Colby，1967)計(jì)算包含兩種活性成分的組合抗真 菌組合物的預(yù)期抗真菌活性(E，W^H+):E = X+Y-[(X · Y)/100]，其中X和Y分別是個(gè)體活性 成分X和Y的觀察到的抗真菌活性（以％計(jì)）。如果組合的觀察到的抗真菌活性(〇，以％計(jì))超 出組合的預(yù)期抗真菌活性化，以％計(jì))并且因而協(xié)同因子0/Ε>1.0,那么活性成分的組合應(yīng) 用導(dǎo)致協(xié)同的抗真菌效應(yīng)。
[0013] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，至少一種來自三唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物選 自由吲唑橫菌胺(amisulbrom)、氧環(huán)挫（azaconazole)、聯(lián)苯三唑醇(bitertanol)、糖菌挫 (bromuconazole)、環(huán)丙唑醇（cyproconazole)、節(jié)氯三唑醇（diclobutrazol)、苯釀甲環(huán)挫 ((111^11〇。〇11&2〇16)、稀唑醇（(1；[11；[。011&2016)、高效稀唑醇（(1；[11；[。011&2016-]\0、氣環(huán)挫 (epoxiconazole)、乙環(huán)唑啉（etaconazole)、臆苯挫（fenbuconazole)、三氣苯挫 (fluotrimazole)、氣喹挫（fluquinconazole)、氣娃挫（flusilazole)、粉挫醇 (flutriafol)、咲菌挫（furconazole)、順式咲菌唑（furconazole-cis)、己唑醇 (hexaconazole)、環(huán)菌挫（huanjunzuo)、亞胺挫（imibenconazole)、種菌挫（ipconazole)、 葉菌挫（metconazole)、臆菌挫（myclobutanil)、戊菌挫（penconazole)、丙環(huán)挫 (propiconazole)、丙硫菌挫（prothioconazole)、P奎挫（quinconazole)、石圭氣挫 (simeconazole)、戊挫醇（tebuconazole)、四氣釀挫（tetraconazole)、丁三挫 (triazbutil)、滅菌挫（triticonazole)、稀效挫（uniconazole)和稀效唑-P(uniconazole_ P)組成的組。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，至少一種來自三唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物 選自由聯(lián)苯三唑醇、環(huán)丙唑醇、苯醚甲環(huán)唑、氟環(huán)唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、葉菌 唑、腈菌唑、丙環(huán)唑、丙硫菌唑、戊唑醇、四氟醚唑、滅菌唑和烯效唑組成的組。在一個(gè)進(jìn)一步 更優(yōu)選的實(shí)施方式中，至少一種來自三唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物選自由苯醚甲環(huán) 唑、氟環(huán)唑、氟喹唑、氟娃唑、粉唑醇、丙環(huán)唑、丙硫菌唑、戊唑醇和四氟醚唑組成的組。在一 個(gè)實(shí)施方式中，組合物可還含有兩種或更多不同的來自三唑殺真菌劑家族的抗真菌化合 物。應(yīng)當(dāng)理解，來自三唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的衍生物(包括但不限于來自三唑殺 真菌劑家族的抗真菌化合物的鹽或溶劑合物)或來自三唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物的 經(jīng)修飾的形式也可以應(yīng)用在本發(fā)明的組合物中。含有三唑殺真菌劑例如丙環(huán)唑的商業(yè)產(chǎn)品 的例子是具有以下商品名的產(chǎn)品：Tilt? (丙環(huán)唑）、Projpimax? (丙環(huán)唑）、Bumper? (丙 環(huán)唑）、Quilt? (丙環(huán)唑+嘧菌酯)或Stratego? (丙環(huán)唑+肟菌酯）。含有三唑殺真菌劑如戊唑 醇的商業(yè)產(chǎn)品的例子是具有以下商品名的產(chǎn)品：Folicur?(戊唑醇）、Orius?:(戊唑醇）、 Uppercut? (戊唑醇)或HeadlineSBR?(戊唑醇+吡唑醚菌酯）。含有三唑殺真菌劑如四氟 醚唑、葉菌唑或丙硫菌唑的商業(yè)產(chǎn)品的例子分別是具有以下商品名的產(chǎn)品：Dmnark? (四 氟醚唑）、Twinline? (葉菌唑+吡唑醚菌酯）或S t r a t e g 〇 YLD? (丙硫菌唑+肟菌酯）或 Proline?(丙硫菌唑）。所述商業(yè)產(chǎn)品可以被并入本發(fā)明中。
[0014]在一個(gè)實(shí)施方式中，多烯抗真菌化合物選自由以下化合物組成的組:那他霉素、制 霉菌素(115^丨31：；[11)、兩性霉素13、三稀菌素(1：1^611；[11)、意北霉素(61：1'118001115^；[11)、菲律賓菌 素（1^11?；[11)、欽氏菌素（(311&；[11；[11)、制皮菌素（(161'1]108七&1：；[11)、150]^)1108&1'(3；[11、殺念珠菌素 (candicidin)、金色制霉素(aureofungin)A、金色制霉素 B、哈霉素(hamycin)A、哈霉素 B和 魯斯霉素（lucensomycin)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，多稀抗真菌化合物是那他霉素。在一 個(gè)實(shí)施方案中，組合物也可含有兩種或更多種不同的多烯抗真菌化合物。應(yīng)當(dāng)理解，多烯抗 真菌化合物的衍生物(包括但不限于多烯抗真菌化合物的鹽或溶劑合物)或經(jīng)修飾形式的 多烯抗真菌化合物也可以在本發(fā)明的組合物中應(yīng)用。含有那他霉素的商業(yè)產(chǎn)品的一個(gè)例子 是商品名為Delvocid?的產(chǎn)品。所述產(chǎn)品由DSM Food Specialties(荷蘭)生產(chǎn)，并且可以 是含有例如50% (w/w)那他霉素的固體或是含有例如2-50% (w/v)那他霉素的液體。所述商 業(yè)產(chǎn)品可以被并入本發(fā)明的組合物中。
[0015] 本發(fā)明的組合物通常包含從約0.005g/l到約100g/l和優(yōu)選地從約O.Olg/Ι到約 50g/l的多烯抗真菌化合物。優(yōu)選地，所述量為O.Olg/Ι到3g/l。
[0016] 本發(fā)明的組合物通常包含從約0.0001g/l到約2000g/l和優(yōu)選地從約0.0005g/l到 約1500g/l的來自三唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物。更優(yōu)選地，所述量為從0.0 Olg/Ι到 1000g/l〇
[0017] 在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物還包含至少一種選自下組的額外化合物，所 述組由粘著劑(sticking agent)、載劑、著色劑、保護(hù)性膠體、粘合劑(adhesive)、除草劑、 肥料、增稠劑、掩蔽劑、觸變劑、表面活性劑、其他抗微生物化合物、洗滌劑、防腐劑、鋪展劑、 填充劑、噴霧油、流動(dòng)添加劑、礦物質(zhì)、溶劑、分散劑、乳化劑、濕潤劑、穩(wěn)定劑、消泡劑、緩沖 劑、UV-吸收劑和抗氧化劑組成。其他抗微生物抗真菌化合物可以是抗真菌化合物(例如抑 霉唑、噻苯達(dá)唑或百菌清），或抵抗昆蟲、線蟲、螨蟲和/或細(xì)菌的化合物。當(dāng)然，根據(jù)本發(fā)明 的組合物也可以包含兩種或更多種任何上述額外的化合物。在兩種防抗真菌化合物被分別 應(yīng)用的情況下，任何上述額外的化合物也可以與多烯抗真菌化合物和/或至少一種來自三 唑殺真菌劑家族的抗真菌化合物組合。在一個(gè)實(shí)施方式中，額外的化合物是特定用途(例如 食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)業(yè))可接受的添加劑。適用于食物、飼料、藥物、化妝品或農(nóng)業(yè) 的額外的化合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
[0018] 在一個(gè)特定的實(shí)施方式中，其他抗微生物化合物是屬于亞磷酸鹽類的天然作物保 護(hù)化合物，例如KH2PO 3或K2HPO3或這兩種亞磷酸鹽的混合物。在本文中使用時(shí)，含亞磷酸根 的化合物表示包含亞磷酸根即P〇3(以例如h 2p〇3-、hp〇32-或P03 3-的形式）的化合物，或允許釋 放亞磷酸根離子的任何化合物，包括化合物例如亞磷酸和膦酸及其衍生物如酯和/或堿金 屬鹽或堿土金屬鹽。在本發(fā)明的組合物包含多烯抗真菌化合物(例如那他霉素)和至少一種 含亞磷酸根的化合物的情況下，相對于每克多烯抗真菌化合物，它們優(yōu)選地包