蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法
【專利摘要】本發(fā)明為一種蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，屬于植物栽培領(lǐng)域種苗技術(shù)，具體的講是一種紅色花蝴蝶蘭無菌根誘導(dǎo)叢生芽增殖培養(yǎng)成苗方法。本發(fā)明選取優(yōu)良無病蟲害蝴蝶蘭品種的植株，從健壯母株上切取長度為2cm的花梗腋芽莖段為外植體材料，經(jīng)過一個(gè)月的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)，待腋芽生長切下腋芽進(jìn)行40天的生根培養(yǎng)，將根從腋芽處切下，接種至誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基中，20天后從切口處長出許多芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)長出大量的芽叢，待芽叢長大后即可切下芽叢進(jìn)行生根培養(yǎng)，則無菌根繼續(xù)培養(yǎng)可再次得到大量叢生芽。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，所述的無菌根誘導(dǎo)叢生芽增殖獲得大量叢生芽進(jìn)而對(duì)蝴蝶蘭進(jìn)行擴(kuò)繁，實(shí)現(xiàn)蝴蝶蘭的工業(yè)化生產(chǎn)，通過該本發(fā)明方法極大提高繁育系數(shù)，縮短了繁育的周期，成活率可達(dá)90%以上。
【專利說明】蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物栽培領(lǐng)域種苗技術(shù)，具體的講是一種紅色花蝴蝶蘭無菌根誘導(dǎo)叢生芽增殖培養(yǎng)成苗方法。

【背景技術(shù)】
[0002]紅花蝴蝶蘭又稱蝶蘭，屬熱帶氣生蘭，蘭科蝴蝶蘭屬多年生草本植物。原產(chǎn)地在阿薩姆、緬甸、菲律賓、臺(tái)灣等亞洲熱帶地區(qū)，其繁殖慢，生長周期長，株型美觀、花大色艷、花形別致、花期持久，深受各國人民的喜愛，是具有商業(yè)價(jià)值的四大觀賞熱帶蘭之一。全世界原生種約有70多種，經(jīng)雜交選育的品種有530多個(gè)，但原生種的觀賞性較差，商業(yè)上用于大規(guī)模生產(chǎn)的品種多為雜交種。蝴蝶蘭的學(xué)名按希臘文的原意為“好像蝴蝶般的蘭花”。它能吸收空氣中的養(yǎng)分而生存，歸入氣生蘭范疇，每棵只長出數(shù)張活象湯匙般肥厚的闊葉，交互疊列在基部之上。白色粗大的氣根則露在葉片周圍，有的攀附在花盆的外壁，極富天然野趣。到了新春時(shí)節(jié)，一枝長達(dá)盈尺的花梗就從葉腋抽出，然后一朵接一朵地開放。每花均有5瓣，中間嵌鑲唇瓣。其性喜高溫、高濕、半陰環(huán)境，生長適溫為20 °C，冬季10°C以下就會(huì)停止生長，低于5°C容易死亡。在嶺南各地如要進(jìn)行批量生產(chǎn)，必須要有防寒設(shè)施，實(shí)行保護(hù)性栽培。如果家庭小量種植，在遇冷時(shí)立即移入室內(nèi)便可以安全過冬。對(duì)它的繁殖大多采用細(xì)胞組織培養(yǎng)，經(jīng)試管育成幼苗移栽，大約經(jīng)過兩年左右便可開花。有些母株當(dāng)花期結(jié)束后，有時(shí)花梗上的腋芽也會(huì)生長發(fā)育成為子株，當(dāng)它長出根時(shí)可從花梗上切下進(jìn)行分株繁殖。其盆栽的植料不一宜用泥土，而要采用水苔、浮石、秒鑼屑、木炭碎等，或者直接把幼苗固定在渺楞板上，讓它自行附著生長。這種栽培方法乃系仿照它在原始時(shí)的生態(tài)環(huán)境。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的在于提供一種蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，采用無菌根誘導(dǎo)叢生芽增殖獲得大量叢生芽進(jìn)而對(duì)蝴蝶蘭進(jìn)行擴(kuò)繁。
[0004]本發(fā)明目的實(shí)現(xiàn)由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
本發(fā)明包括以下技術(shù)步驟:
(1)選取無病蟲害的蝴蝶蘭植株，切取帶腋芽的2-3cm的花梗莖段為外植體材料；將芽點(diǎn)外層的苞葉用鑷子剔除，加入2滴吐溫20在自來水下沖洗半個(gè)小時(shí)，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%的酒精消毒30s，用無菌水處理2次，加入2%NaC10溶液處理5~6min后用無菌水沖洗4~5遍，用消毒濾紙吸干表面水分；切去花梗上下兩端與消毒液接觸的表面，接種至初梗代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，花梗初代培養(yǎng)為:1/2MS +5mg/L6-BA +0.5mg/L NAA +30g/L蔗糖+6g/L瓊脂+400mg/L梓檬酸+40g/L香蕉泥，pH值為5.4 ；
(2)待花梗腋芽葉片伸展至2cm，在無菌操作臺(tái)上切下腋芽接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為:1/2MS +0.5mg/L +NAA +30g/L蔗糖+6g/L瓊脂+lg/L活性炭+40g/L香蕉泥，pH值為5.4 ；
(3)當(dāng)有2~3條根，長到2~3cm時(shí)，切下腋芽的根接種到誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基上培養(yǎng)，20天后從切口處長出芽點(diǎn)，繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)得到大量的叢生芽，無菌根誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基為:1/2MS +10mg/L、6-BA +0.5mg/L> NAA +30g/L 鹿糖 +6 g/L 瓊脂 +400mg/L 梓檬酸+40g/L香蕉泥，pH值為5.4,培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為25±2°C,光照時(shí)間12h/d,光照強(qiáng)度2000 ~30001ux ；
(4)將上述誘導(dǎo)培養(yǎng)生長良好的叢生芽，從無菌根上切下接種到生根培養(yǎng)基中，再次將無菌根接種到誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，可再次得到大量的叢生芽叢，分別接種在芽增殖培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)；由于褐化對(duì)外植體的影響，20天繼代一次，增殖倍數(shù)為10株以上，試管苗出瓶種植生長性狀穩(wěn)定；
(5)誘導(dǎo)生根成苗:當(dāng)叢生芽長至2cm高時(shí)，將芽分割成單株，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中如步驟2 ;
(6)小苗移栽:當(dāng)試管苗長至3~4cm高，有2~3條根，3~4片葉片，長度2~3cm時(shí)，可進(jìn)行煉苗，將試管苗放在自然光下煉苗5天，打開瓶蓋上的封口膜先進(jìn)行煉苗2天，期間用噴壺噴灑葉片保證葉片不失水以增強(qiáng)試管苗對(duì)室外環(huán)境的適應(yīng)能力；然后從培養(yǎng)瓶中取出小苗，洗凈根部培養(yǎng)基，對(duì)根用0.1%高錳酸鉀侵泡5min后取出曬干，用干凈的水苔包裹根部種植于穴盤中，保持空氣濕度在80%以上，放置在陰涼通風(fēng)處，光線由前期弱到強(qiáng)。
[0005]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，采用本發(fā)明所述的無菌根誘導(dǎo)叢生芽增殖獲得大量叢生芽進(jìn)而對(duì)蝴蝶蘭進(jìn)行擴(kuò)繁，實(shí)現(xiàn)蝴蝶蘭的工業(yè)化生產(chǎn)，通過該本發(fā)明方法極大提高繁育系數(shù)，縮短了繁育的周期，成活率可達(dá)90%以上。

【具體實(shí)施方式】
[0006]本發(fā)明包括以下技術(shù)步驟:
(I)選取無病蟲害的紅花蝴蝶蘭品種的植株，切取帶腋芽的2-3cm的花梗莖段為外植體材料；將芽點(diǎn)外層的苞葉用鑷子剔除，加入2滴吐溫20在自來水下沖洗半個(gè)小時(shí)，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)內(nèi)以質(zhì)量濃度為75%的酒精消毒搖蕩30s.后倒出酒精，用無菌水處理2次，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%Nacl0溶液處理5~6min，將NacloO倒出用無菌水沖洗4~5遍后，用消毒濾紙吸干表面水分；切去花梗上下兩端與消毒液接觸的表面，接種至初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)。花梗初代培養(yǎng)為:1/2MS +5mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA +30g/L、蔗糖 +6 g/L 瓊脂 +400mg/L、梓檬酸+40g/L香蕉泥，pH值為5.4。
[0007](2)待花梗腋芽葉片伸展至2cm，在無菌操作臺(tái)上切下腋芽接種到生根培養(yǎng)基上。腋芽誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為:1/2MS +0.5mg/L +NAA +30g/L蔗糖+6 g/L瓊脂+lg/L活性炭+40g/L香蕉泥pH值為5.4 ；
(3)當(dāng)腋芽有2~3條根長約2~3cm時(shí)，切下腋芽的根接種到誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基上培養(yǎng)。20天后從切口處長出芽點(diǎn)，繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)得到大量的叢生芽。無菌根誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基為:1/2MS +10mg/L 6-BA +0.5mg/LNAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L 瓊脂 +400mg/L 檸檬酸+40g/L香蕉泥pH值為5.4。培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度 2000 ~30001ux ；
(4)將上述誘導(dǎo)培養(yǎng)生長良好的叢生芽，從無菌根上切下接種到生根培養(yǎng)基中，再次將無菌根接種到誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，可再次得到大量的叢生芽叢，分別接種在芽增殖培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)；由于褐化對(duì)外植體的影響，20天繼代一次，增殖倍數(shù)為10株以上，試管苗出瓶種植生長性狀穩(wěn)定。
[0008](5)誘導(dǎo)生根成苗:當(dāng)叢生芽長至2cm高時(shí)，將芽分割成單株，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中如步驟2 ；
(6)小苗移栽:當(dāng)試管苗長至3~4cm高，有2~3條根，3~4片葉片，長度2~3cm時(shí)，可進(jìn)行煉苗，將試管苗放在自然光下煉苗5天，打開瓶蓋上的封口膜先進(jìn)行煉苗2天，期間用噴壺噴灑葉片保證葉片不失水以增強(qiáng)試管苗對(duì)室外環(huán)境的適應(yīng)能力；然后從培養(yǎng)瓶中取出小苗，洗凈根部培養(yǎng)基，對(duì)根用0.1%高錳酸鉀侵泡5min后取出曬干，用干凈的水苔包裹根部種植于穴盤中，保持空氣濕度在80%以上，放置在陰涼通風(fēng)處，光線由前期弱到強(qiáng)。
[0009]雖然以上對(duì)本發(fā)明目的的構(gòu)思和實(shí)施例作了詳盡說明，但本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以認(rèn)識(shí)到，在沒有脫離權(quán)利要求限定范圍的前提條件下，仍然可以對(duì)本發(fā)明作出各種改進(jìn)和變換，而這種改進(jìn)和變換仍然應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)選取根系較多的蝴蝶蘭無菌植株，切取無菌根為外植體材料，接種到誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基上培養(yǎng)，15~25d后切口處長出芽點(diǎn)，把帶芽點(diǎn)的根用原培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)得到大量的叢生芽，無菌根誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基為:1/2MS或MS+5~10mg/L的6-BA+0.5~1.5mg/L 的 ΝΑΑ+0.5 ~1.5mg/L 的 KT +25 ~30g/L 的鹿糖 +5 ~6.5g/L 的瓊脂 +350 ~450mg/L的檸檬酸或/和維生素C或/和pvp或/和活性炭+40g/L的香蕉泥或/和馬鈴薯汁或/和椰子汁，PH值為5.4~5.9，培養(yǎng)條件為:溫度為25±2°C，開始5~8d暗培養(yǎng)，后光照時(shí)間12~14h/d,光照強(qiáng)度2000~30001ux ； (2)將上述誘導(dǎo)培養(yǎng)生長良好的叢生芽，從無菌根上切下接種到生根培養(yǎng)基中得到再生植株，生根培養(yǎng)基:l/2MS+0.5~1.5mg/L的NAA+25~30g/L的蔗糖+5~6.5g/L的瓊脂+30~40g/L的香蕉泥+1~3g/L的活性炭，pH值為5.85~5.90，培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度為2000~30001ux、光照時(shí)間 為12~14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2°C，濕度60~80% ； (3)再生植株煉苗及移栽:當(dāng)試管苗長至3~4cm高，誘導(dǎo)出2~3條根，3~4片葉片，長度2~3cm時(shí)，進(jìn)行煉苗，將試管苗帶試管放在自然光下煉苗5d~6d，后取掉瓶口上的封口膜進(jìn)行煉苗2d~3d，期間在葉片上噴灑水，然后從培養(yǎng)瓶中取出小苗，洗凈根部培養(yǎng)基，把根部用0.1%高錳酸鉀浸泡4~6min后取出用濾紙吸干或自然干燥，用滅菌的水苔包裹根部種植于穴盤中，保持空氣濕度在80%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的無菌根誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基為:l/2MS+5~10mg/L的6-BA+0.5~1.5mg/L的ΝΑΑ+0.5~1.5mg/L的KT +25~30g/L的鹿糖+5~6.5g/L的瓊脂+350~450mg/L的檸檬酸+40g/L的香蕉泥，,pH值為5.80。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，其特征在于，步驟(2)所述的生根培養(yǎng)基:l/2MS+lmg/L的NAA+25~30g/L的鹿糖+5~6.5g/L的瓊脂+40g/L的香蕉泥+2g/L的活性炭，pH值為5.90。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的無菌根誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基為:l/2MS+10mg/L的6-BA+1.5mg/L的ΝΑΑ+0.5mg/L的KT +30g/L的鹿糖+6g/L的瓊脂+400mg/L的檸檬酸+40g/L的香蕉泥，pH值為5.80。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，其特征在于，步驟(2)所述的生根培養(yǎng)基:l/2MS+lmg/L的NAA+30g/L的蔗糖+6g/L的瓊脂+40g/L的香蕉泥+2g/L的活性炭，pH值為5.90。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的培養(yǎng)條件為:溫度為25±2°C，開始7d暗培養(yǎng)，后光照時(shí)間12/d，光照強(qiáng)度2000~30001ux。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌根擴(kuò)繁的方法，其特征在于，步驟(2)所述的培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度為2000~30001UX、光照時(shí)間為12h/d，培養(yǎng)溫度為25±2°C，濕度80%。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104067943SQ201410341422
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月18日
【發(fā)明者】白玉娥, 何炎紅, 武欣慧 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)