一種高龍腦含量的龍腦樟組培繁育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種高龍腦含量的龍腦樟組培繁育方法。本發(fā)明從龍腦樟天然變異中選育出龍腦含量達(dá)90％以上的龍腦樟個體，采集當(dāng)年抽梢的半木質(zhì)化莖段作為外植體，經(jīng)消毒處理后，建立無菌系，再通過芽的初生誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)等，形成再生植株。本發(fā)明篩選出了高龍腦含量的龍腦樟組培繁殖各個環(huán)節(jié)的適宜配方及培養(yǎng)條件，成功的獲得了高龍腦含量的龍腦樟再生植株。因此本發(fā)明有效的解決了龍腦含量90％以上的龍腦樟組培繁育中出現(xiàn)褐化和死苗的技術(shù)難題，將為優(yōu)良龍腦樟原料林基地的建設(shè)提供種苗保障。
【專利說明】一種高龍腦含量的龍腦樟組培繁育方法

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種高龍腦含量的龍腦樟組培繁育方 法。

【背景技術(shù)】：
[0002] 龍腦樟是從樟樹（Cinnamonun Camphora(I)Presl)中發(fā)現(xiàn)的枝葉中富含天然右旋 龍腦（天然冰片）的一種化學(xué)類型，可從龍腦樟新鮮葉片中提取精油后加工成天然右旋龍 腦。天然龍腦是一種名貴中藥和高級香料，具有抗菌、消炎、收斂、生肌、抗妊娠、止痛等作 用，在醫(yī)藥和香料產(chǎn)業(yè)具有廣泛的應(yīng)用前景。
[0003] 由龍腦樟自由授粉種子繁育的半同胞后代，分化現(xiàn)象極其嚴(yán)重。其中可以發(fā)現(xiàn)葉 精油含量高、精油中主成分龍腦含量達(dá)到90%?97%以上的優(yōu)良個體。在優(yōu)良個體發(fā)現(xiàn) 后，大力擴大繁殖以便在生產(chǎn)上應(yīng)用，則是必須首先需決的關(guān)鍵技術(shù)問題。組培繁殖就是高 龍腦含量龍腦樟的高效快速繁殖途徑之一。
[0004] 目前，有關(guān)龍腦樟組培繁殖技術(shù)方面沒有公開專利申請，僅有2篇公開發(fā)表的論 文：一是2010年由陳美蘭，葉正良，歐陽少林等發(fā)表在《中國中藥》雜志35卷第5期上的 "龍腦樟愈傷組織的誘導(dǎo)及龍腦的產(chǎn)生"，該論文采用龍腦樟嫩葉、莖做外植體，目的旨在比 較取材部位不同的外植體誘導(dǎo)的愈傷組織是否能生產(chǎn)出龍腦，而未進行植株再生研究。二 是2011年劉秀芳、林文革、蘇明華等發(fā)表在《植物研究》雜志31卷第5期上的"龍腦樟組培 育苗及苗木工廠化生產(chǎn)技術(shù)研究"，該論文以樹干基部萌芽條為外植體開展了龍腦樟組培 快繁技術(shù)研究，其關(guān)鍵技術(shù)在于以降低MS培養(yǎng)中銨鹽的含量（NH 4N03降為825mg/L)作為 基本培養(yǎng)基，在附加 6-BA2. 0mg/L+NAA0· 05mg/L (增殖）和 1/2 改良 MS+IBA 0· 5mg/L+IAA 0.4mg/L (生根）的外源激素調(diào)控下獲得了增殖培養(yǎng)條件和再生植株。該論文沒有明確外 植體材料的龍腦含量。而事實上，龍腦樟不同基因型或龍腦含量的高低不同，在組培繁殖條 件篩選中起關(guān)鍵作用。龍腦含量越高，增殖培養(yǎng)過程中化感效應(yīng)越明顯，極易導(dǎo)致增殖苗因 培養(yǎng)基中龍腦含量過高而褐化或死亡。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種高龍腦含量的龍腦樟組培繁育方法，利用該方法能夠在 盡可能短的時間內(nèi)快速大量獲得高龍腦含量的龍腦樟的優(yōu)質(zhì)種苗。
[0006] 本發(fā)明的高龍腦含量的龍腦樟組培繁育方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0007] a、無菌系的建立：以葉精油中龍腦含量90 %?97 %的高龍腦含量龍腦樟母樹當(dāng) 年生枝條作為外植體，經(jīng)滅菌后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在光照強度2000?3000LuX，12h/ 天，溫度20?30°C下培養(yǎng)，直到長出初生芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基每升含有：6-BA 5. 0? 7. Omg、IBA2. 0?3. Omg、白糖30g、卡拉膠5. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，ρΗ5· 6?5. 8 ;在初 代增殖培養(yǎng)過程中，以芽生芽的方式及叢生芽的方式進行增殖，削弱從愈傷組織中分化芽 的能力。此方法能最大限度地保持親本遺傳特性。
[0008] b、增殖培養(yǎng)：將初生芽接種到第一增殖培養(yǎng)基上，在光照強度2500Lux? 3000LUX，溫度23?28°C下增殖培養(yǎng)，繼代若干個周期后，待芽基部分化出不定芽并有白 色愈傷組織產(chǎn)生時，再接種到第二增殖培養(yǎng)基上，在光照強度2500Lux?3000Lux，溫度 23?28°C下增殖培養(yǎng)，獲得增殖苗，所述的第一增殖培養(yǎng)基每升含有：6-BA 5. 0?7. Omg、 IBA2. 0?3. Omg、卡拉膠3. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH6. 8?7. 0 ;所述的第二增殖培養(yǎng)基 每升含有：6-BA 0· 5?3. 5mg、IBA2. 0?3. 0mg、VB210?30mg、卡拉膠3. 0g，余量為改良MS 培養(yǎng)基，PH6. 8?7. 0 ;增殖培養(yǎng)基可使增殖培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的不定芽數(shù)和有效苗數(shù)（高 3?4cm，葉寬1?2cm)得到均衡發(fā)展，既減少愈傷組織產(chǎn)生，又減緩愈傷組織褐化變黑。
[0009] c、生根培養(yǎng)：剪取增殖苗中具有4?5片葉且葉面完全展開、光滑發(fā)亮的無根小 苗，接入生根培養(yǎng)基中，在光照強度2000?3000Lux，12h/d，溫度20?30°C下進行生根培 養(yǎng)，得到生根苗，所述的生根培養(yǎng)基每升含有：ΝΑΑ0. 5?I. 5mg、ΙΒΑ0. 1?I. Omg、白糖30g、 卡拉膠5. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH5. 6?5. 8 ; -般培養(yǎng)12?15天后，能產(chǎn)生4?5 條根系，小苗長成完整植株。
[0010] d、組培苗移栽：將生根苗洗去基部培養(yǎng)基后再移植到基質(zhì)中，移植后澆足定根水， 常規(guī)育苗管理，滿足水肥供應(yīng)，長出高龍腦含量的龍腦樟幼苗，所述的基質(zhì)是由紅壤心土和 草木灰按照質(zhì)量比3:1的比例混合攪拌均勻而成，該基質(zhì)配方取材方便，價格低廉，保水性 強，病蟲害少，利于應(yīng)用；
[0011] 上述培養(yǎng)基都是將除改良MS培養(yǎng)基之外的組份加入到改良MS培養(yǎng)基中，混合均 勻后再滅菌備用。
[0012] 所述的改良MS培養(yǎng)基，每升含有：（1)大量元素：硝酸鉀1900mg，硝酸銨SOOmgjt 酸鎂· 7H20 370mg，硝酸鈣· 4H20 200mg，氯化鈣· 2H20 437mg，磷酸二氫鉀 170mg，（2)鐵 鹽：硫酸亞鐵· 7H20 27. 8mg，乙二胺四乙酸二鈉 37. 3mg ; (3)微量元素：硼酸10mg，硫酸錳 ? H2O 25mg，硫酸鋅· 7H20 10mg，鑰酸鈉· 2H20 0.25mg，硫酸銅· 5H20 0.025mg;(4)有機 成分：肌醇lOOmg，抗壞血酸10mg，鹽酸硫胺素0. 5mg，煙酸5mg，鹽酸批卩多辛0. 5mg，甘氨酸 2mg，余量為水，其是將除水之外的成分加入到水中，攪拌均勻，溶解完全后即為改良MS培 養(yǎng)基。該配方在高龍腦含量的龍腦樟增殖培養(yǎng)過程中，能滿足其基本生長需要，提高大量 元素中鈣的含量可加強芽體木質(zhì)化程度，且對減少不定芽玻璃化現(xiàn)象效果明顯；增加有機 成分的含量，可有效緩解愈傷組織褐化。此配方是減少龍腦樟組培苗生長過程?；?、褐化現(xiàn) 象發(fā)生的關(guān)鍵因素之一。
[0013] 所述的步驟b的增殖培養(yǎng)中的繼代若干個周期，優(yōu)選為繼代1?2個周期。
[0014] 龍腦樟是樟樹中葉精油富含天然右旋龍腦（天然冰片）的一種特異化學(xué)類型，在 醫(yī)藥和香料產(chǎn)業(yè)中具有廣泛應(yīng)用前景。但龍腦樟資源稀少，而個體間差異卻極大，因此，篩 選出葉精油含量高、精油中主成分龍腦含量高的優(yōu)良品系，并建立其高效無性繁育技術(shù)體 系，是最大限度保持母本特性并能快速、大量獲得優(yōu)質(zhì)種苗的有效途徑，而組培繁殖技術(shù)當(dāng) 首先。前人對龍腦樟的組培繁殖技術(shù)有過嘗試，一是直接誘導(dǎo)愈傷組織生產(chǎn)龍腦，二是在組 織培養(yǎng)過程中未解決基部褐化問題，最終導(dǎo)致在增殖培養(yǎng)過程中死苗的現(xiàn)象發(fā)生。事實上， 母本材料的龍腦含量越高，越容易出現(xiàn)褐化和死苗現(xiàn)象。本發(fā)明從龍腦樟天然變異中選育 出龍腦含量達(dá)90%以上的龍腦樟個體，采集當(dāng)年抽梢的半木質(zhì)化莖段作為外植體，經(jīng)消毒 處理后，建立無菌系，再通過芽的初生誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)等，形成再生植株。本發(fā)明 篩選出了高龍腦含量的龍腦樟組培繁殖各個環(huán)節(jié)的適宜配方及培養(yǎng)條件，成功的獲得了高 龍腦含量的龍腦樟再生植株。因此本發(fā)明有效的解決了龍腦含量90%以上的龍腦樟組培繁 育中出現(xiàn)褐化和死苗的技術(shù)難題，將為優(yōu)良龍腦樟原料林基地的建設(shè)提供種苗保障。

【專利附圖】

【附圖說明】：
[0015] 圖1是龍腦樟初生芽；
[0016] 圖2是龍腦樟增殖瓶苗；
[0017] 圖3是龍腦樟組培生根苗；
[0018] 圖4是龍腦樟組培移栽苗。

【具體實施方式】：
[0019] 以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。
[0020] 實施例1 :
[0021] a、無菌系的建立：以葉精油中龍腦含量90 %?97 %的高含量龍腦樟母樹當(dāng)年生 枝條作為外植體，剪去葉片及頂芽，取頂芽下部含有4?5個腋芽的莖段，用洗滌劑清洗表 面，在超凈工作臺上用酒精浸過30s后，先用5 %次氯酸鈉溶液滅菌6min后，再用0. 1 %的 升汞消毒5?6min，之后用無菌水沖洗5?6遍，剪去莖段兩端約0. 5cm，視節(jié)間長短，將 莖段剪成帶1?2個腋芽的小段，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在光照強度2000?3000LuX，12h/ 天，溫度20?30°C下培養(yǎng)，培養(yǎng)約1周后，莖段上的腋芽開始膨大，繼而慢慢長出葉片，未被 污染的外植體即可作為進一步培養(yǎng)，直到長出初生芽（圖1)，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基每升含有： 6-BA 5. Omg、IBA2. Omg、白糖30g、卡拉膠5. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH5. 6?5. 8 ;初芽 誘導(dǎo)率可達(dá)85%?90%。
[0022] b、增殖培養(yǎng)：將初生芽接種到第一增殖培養(yǎng)基上，在光照強度2500Lux? 3000Lux，溫度23?28°C下增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)周期40d，繼代2周期后，待芽基部分化出多個不 定芽并有少量白色愈傷組織產(chǎn)生時，再接種到第二增殖培養(yǎng)基上，在光照強度2500LUX? 3000LUX，溫度23?28°C下增殖培養(yǎng)，獲得增殖苗（圖2)，所述的第一增殖培養(yǎng)基每升含 有：6-BA 5. Omg、IBA2. Omg、卡拉膠3. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH6. 8?7. 0 ;所述的第二 增殖培養(yǎng)基每升含有：6-BA0. 5mg、IBA2. 0mg、VB210mg、卡拉膠3. 0g，余量為改良MS培養(yǎng)基， pH6. 8?7. 0 ;增殖培養(yǎng)基可使增殖培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的不定芽數(shù)和有效苗數(shù)（高3?4cm， 葉寬1?2cm)得到均衡發(fā)展，既減少愈傷組織產(chǎn)生，又減緩愈傷組織褐化變黑；每生長周 期增殖系數(shù)可達(dá)6以上；
[0023] c、生根培養(yǎng)：剪取增殖苗中具有4?5片葉且葉面完全展開、光滑發(fā)亮的無根小 苗，接入生根培養(yǎng)基中，在光照強度2000?3000Lux，12h/d，溫度20?30°C下進行生根培 養(yǎng)，得到生根苗（圖3)，所述的生根培養(yǎng)基每升含有：NAA0. 5mg、IBA0. lmg、白糖30g、卡拉膠 5. 〇g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH5. 6?5. 8 ; -般培養(yǎng)12?15天后，生根率達(dá)95%以上，根 系數(shù)量4?5條，小苗長成完整植株。
[0024] d、組培苗移栽：用粉碎機把紅壤心土粉碎成細(xì)小顆粒，按3質(zhì)量份紅壤心土和 1質(zhì)量份草木灰的比例混合攪拌均勻后，作為龍腦樟組培苗移栽的基質(zhì)，用直徑和高度為 6cmX8cm左右的杯狀營養(yǎng)袋裝填基質(zhì)。將生根苗洗去基部培養(yǎng)基后放到篩盤中濾干水，即 可移栽到營養(yǎng)袋的基質(zhì)中，栽完后澆足定根水，使基質(zhì)與苗木根系緊密融合。一周內(nèi)用霧狀 噴水器每天給葉面補充水分3?5次，之后每天補水1?2次。1個月后待葉片光滑平整 時，可適時適量噴施葉面肥，進入常規(guī)育苗管理，得到高龍腦含量的龍腦樟的可用于移栽的 幼苗（圖4)。
[0025] 所述的改良MS培養(yǎng)基，每升含有：（1)大量元素：硝酸鉀1900mg，硝酸銨800mg，硫 酸鎂· 7H20 370mg，硝酸鈣· 4H20 200mg，氯化鈣· 2H20 437mg，磷酸二氫鉀 170mg，（2)鐵 鹽：硫酸亞鐵· 7H20 27. 8mg，乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg ; (3)微量元素：硼酸10mg，硫酸錳 ? H2O 25mg，硫酸鋅· 7H20 10mg，鑰酸鈉· 2H20 0.25mg，硫酸銅· 5H20 0.025mg;(4)有機 成分：肌醇lOOmg，抗壞血酸10mg，鹽酸硫胺素0. 5mg，煙酸5mg，鹽酸批卩多辛0. 5mg，甘氨酸 2mg，余量為水。該配方在高龍腦含量的龍腦樟增殖培養(yǎng)過程中，能滿足其基本生長需要，提 高大量元素中鈣的含量可加強芽體木質(zhì)化程度，且對減少不定芽玻璃化現(xiàn)象效果明顯；增 加有機成分的含量，可有效緩解愈傷組織褐化。此配方是減少龍腦樟組培苗生長過程玻 化、褐化現(xiàn)象發(fā)生的關(guān)鍵因素之一。
[0026] 實施例2 :
[0027] a、無菌系的建立：以葉精油中龍腦含量90 %?97 %的高含量龍腦樟母樹當(dāng)年生 枝條作為外植體，剪去葉片及頂芽，取頂芽下部含有4?5個腋芽的莖段，用洗滌劑清洗表 面，在超凈工作臺上用酒精浸過30s后，先用5 %次氯酸鈉溶液滅菌6min后，再用0. 1 %的 升汞消毒5?6min，之后用無菌水沖洗5?6遍，剪去莖段兩端約0. 5cm，視節(jié)間長短，將 莖段剪成帶1?2個腋芽的小段，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在光照強度2000?3000LuX，12h/ 天，溫度20?30°C下培養(yǎng)，培養(yǎng)約1周后，莖段上的腋芽開始膨大，繼而慢慢長出葉片，未被 污染的外植體即可作為進一步培養(yǎng)，直到長出初生芽（圖1)，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基每升含有： 6-BA 7. Omg、IBA3. Omg、白糖30g、卡拉膠5. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH5. 6?5. 8 ;初芽 誘導(dǎo)率可達(dá)85%?90%。
[0028] b、增殖培養(yǎng)：將初生芽接種到第一增殖培養(yǎng)基上，在光照強度2500Lux? 3000Lux，溫度23?28°C下增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)周期40d，繼代1周期后，待芽基部分化出多個不 定芽并有少量白色愈傷組織產(chǎn)生時，再接種到第二增殖培養(yǎng)基上，在光照強度2500LUX? 3000LUX，溫度23?28°C下增殖培養(yǎng)，獲得增殖苗（圖2)，所述的第一增殖培養(yǎng)基每升含 有：6-BA 7. Omg、IBA3. Omg、卡拉膠3. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH6. 8?7. 0 ;所述的第二 增殖培養(yǎng)基每升含有：6-BA3. 5mg、IBA3. 0mg、VB230mg、卡拉膠3. 0g，余量為改良MS培養(yǎng)基， pH6. 8?7. 0 ;增殖培養(yǎng)基可使增殖培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的不定芽數(shù)和有效苗數(shù)（高3?4cm， 葉寬1?2cm)得到均衡發(fā)展，既減少愈傷組織產(chǎn)生，又減緩愈傷組織褐化變黑；每生長周期 增殖系數(shù)可達(dá)6以上；
[0029] c、生根培養(yǎng)：剪取增殖苗中具有4?5片葉且葉面完全展開、光滑發(fā)亮的無根小 苗，接入生根培養(yǎng)基中，在光照強度2000?3000Lux，12h/d，溫度20?30°C下進行生根培 養(yǎng)，得到生根苗（圖3)，所述的生根培養(yǎng)基每升含有：NAA1. 5mg、IBA lmg、白糖30g、卡拉膠 5. 〇g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH5. 6?5. 8 ; -般培養(yǎng)12?15天后，生根率達(dá)95%以上，根 系數(shù)量4?5條，小苗長成完整植株。
[0030] d、組培苗移栽：用粉碎機把紅壤心土粉碎成細(xì)小顆粒，按3質(zhì)量份紅壤心土和 1質(zhì)量份草木灰的比例混合攪拌均勻后，作為龍腦樟組培苗移栽的基質(zhì)，用直徑和高度為 6cmX8cm左右的杯狀營養(yǎng)袋裝填基質(zhì)。將生根苗洗去基部培養(yǎng)基后放到篩盤中濾干水，即 可移栽到營養(yǎng)袋的基質(zhì)中，栽完后澆足定根水，使基質(zhì)與苗木根系緊密融合。一周內(nèi)用霧狀 噴水器每天給葉面補充水分3?5次，之后每天補水1?2次。1個月后待葉片光滑平整 時，可適時適量噴施葉面肥，進入常規(guī)育苗管理，得到高龍腦含量的龍腦樟的可用于移栽的 幼苗（圖4)。
[0031] 所述的改良MS培養(yǎng)基，每升含有：（1)大量元素：硝酸鉀1900mg，硝酸銨SOOmgjt 酸鎂· 7H20 370mg，硝酸鈣· 4H20 200mg，氯化鈣· 2H20 437mg，磷酸二氫鉀 170mg，（2)鐵 鹽：硫酸亞鐵· 7H20 27. 8mg，乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg ; (3)微量元素：硼酸10mg，硫酸錳 ? H2O 25mg，硫酸鋅· 7H20 10mg，鑰酸鈉· 2H20 0.25mg，硫酸銅· 5H20 0.025mg;(4)有機 成分：肌醇lOOmg，抗壞血酸10mg，鹽酸硫胺素0. 5mg，煙酸5mg，鹽酸批卩多辛0. 5mg，甘氨酸 2mg，余量為水。該配方在高龍腦含量的龍腦樟增殖培養(yǎng)過程中，能滿足其基本生長需要，提 高大量元素中鈣的含量可加強芽體木質(zhì)化程度，且對減少不定芽玻璃化現(xiàn)象效果明顯；增 加有機成分的含量，可有效緩解愈傷組織褐化。此配方是減少龍腦樟組培苗生長過程玻化、 褐化現(xiàn)象發(fā)生的關(guān)鍵因素之一。
[0032] 本發(fā)明的改良MS培養(yǎng)基配方與常規(guī)的MS配方的用量對比如表1所示：
[0033] 表1 :常規(guī)MS培養(yǎng)基各成分用量與本發(fā)明經(jīng)過改良的MS各成分用量對比表
[0034]

【權(quán)利要求】
1. 一種高龍腦含量的龍腦樟組培繁育方法，其特征在于，包括以下步驟： a、 無菌系的建立：以葉精油中龍腦含量90 %?97 %的高龍腦含量龍腦樟母樹當(dāng)年生 枝條作為外植體，經(jīng)滅菌后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在光照強度2000?3000Lux，12h/天， 溫度20?30°C下培養(yǎng)，直到長出初生芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基每升含有：6-BA5. 0?7. Omg、 IBA2. 0?3. Omg、白糖30g、卡拉膠5. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH5. 6?5. 8 ; b、 增殖培養(yǎng)：將初生芽接種到第一增殖培養(yǎng)基上，在光照強度2500Lux?3000Lux，溫 度23?28°C下增殖培養(yǎng)，繼代若干個周期后，待芽基部分化出不定芽并有白色愈傷組織產(chǎn) 生時，再接種到第二增殖培養(yǎng)基上，在光照強度2500Lux?3000Lux，溫度23?28°C下增殖 培養(yǎng)，獲得增殖苗，所述的第一增殖培養(yǎng)基每升含有：6_BA 5. 0?7. Omg、IBA2. 0?3. Omg、 卡拉膠3. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH6. 8?7. 0 ;所述的第二增殖培養(yǎng)基每升含有：6-BA 0? 5?3. 5mg、IBA2. 0?3. 0mg、VB210?30mg、卡拉膠3. 0g，余量為改良MS培養(yǎng)基，pH6. 8? 7. 0 ； c、 生根培養(yǎng)：剪取增殖苗中具有4?5片葉且葉面完全展開、光滑發(fā)亮的無根小苗，接 入生根培養(yǎng)基中，在光照強度2000?3000Lux，12h/d，溫度20?30°C下進行生根培養(yǎng)，得 到生根苗，所述的生根培養(yǎng)基每升含有：NAA0. 5?1. 5 mg、IBA0. 1?1. Omg、白糖30g、卡拉 膠5. 0g，其余為改良MS培養(yǎng)基，pH5. 6?5. 8 ; d、 組培苗移栽：將生根苗洗去基部培養(yǎng)基后再移植到基質(zhì)中，移植后澆足定根水，常規(guī) 育苗管理，滿足水肥供應(yīng)，長出高龍腦含量的龍腦樟幼苗，所述的基質(zhì)是由紅壤心土和草木 灰按照質(zhì)量比3:1的比例混合攪拌均勻而成，； 所述的改良MS培養(yǎng)基，每升含有：（1)大量元素：硝酸鉀1900mg，硝酸銨800mg，硫酸 鎂? 7H20 370 mg，硝酸鈣? 4H20 200mg，氯化鈣? 2H20 437mg，磷酸二氫鉀 170mg，（2)鐵 鹽：硫酸亞鐵? 7H20 27. 8mg，乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg ; (3)微量元素：硼酸10mg，硫酸錳 ? H20 25mg，硫酸鋅? 7H20 10mg，鑰酸鈉? 2H20 0.25mg，硫酸銅? 5H20 0.025mg;(4)有機 成分：肌醇lOOmg，抗壞血酸10mg，鹽酸硫胺素0. 5mg，煙酸5mg，鹽酸批卩多辛0. 5mg，甘氨酸 2mg，余量為水。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高龍腦含量的龍腦樟組培繁育方法，其特征在于，所述的步 驟b的增殖培養(yǎng)中的繼代若干個周期，其為繼代1?2個周期。
【文檔編號】A01H4/00GK104365476SQ201410376828
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年8月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月1日
【發(fā)明者】江香梅, 戴小英, 章挺, 肖復(fù)明, 楊海寬, 汪信東, 伍艷芳, 邱鳳英, 宋曉琛, 王召瀅 申請人:江西省林業(yè)科學(xué)院