墨紫雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種墨紫雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建方法及應(yīng)用。該雄性不育系是不能產(chǎn)生有功能的精子，但其卵子能正常受精、發(fā)育，并能將其雄性不育特性遺傳給后代的雜交扇貝品系，其中墨紫雜交扇貝是墨西哥灣扇貝卵子與紫扇貝精子的雜交后代。首先構(gòu)建大量的子一代墨紫雜交家系，從中找到雄性不育的個體，然后用雄性不育個體的父本紫扇貝的精子連續(xù)回交選育，直到回交后代全部為雄性不育且卵子可育，即獲得墨紫雜交扇貝的雄性不育系；用雄性不育系與保持系雜交規(guī)模化生產(chǎn)雄性不育系親貝，用雄性不育系親貝與恢復(fù)系雜交規(guī)?；a(chǎn)墨紫雜交扇貝商品苗種。本發(fā)明首次在動物中建立了扇貝的雄性不育系，有效克服了雌雄同體扇貝雜交中自體受精的障礙。
【專利說明】墨紫雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于貝類育種技術(shù)一雜交扇貝商品苗種培育方法，尤其是涉及墨紫雜交 扇貝（墨西哥灣扇貝卵子與紫扇貝精子的雜交后代）雄性不育系的構(gòu)建方法及應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 墨西哥灣扇貝（Argopecten irradians concentricus)原產(chǎn)于美國墨西哥灣沿 岸，于上個世紀(jì)九十年代引入我國。墨西哥灣扇貝生長速度快，溫度適應(yīng)范圍廣，尤其是比 較適合高溫海區(qū)，抗逆性強，非常適合我國南方海域的養(yǎng)殖，目前是南方海域的主要扇貝養(yǎng) 殖品種。但是由于引進(jìn)后長期近交，墨西哥灣扇貝在養(yǎng)殖過程中種質(zhì)退化嚴(yán)重，表現(xiàn)為商品 貝規(guī)格越來越小，育苗養(yǎng)殖過程中死亡率較高，因此扇貝養(yǎng)殖業(yè)迫切需要對墨西哥灣扇貝 進(jìn)行遺傳改良，其中雜交育種是最有效的種質(zhì)改良方法之一。
[0003] 為此，發(fā)明人自2007年首次從秘魯引進(jìn)了紫扇貝（Argopecten purpuratus)。墨 西哥灣扇貝是原產(chǎn)于南太平洋的一種速生型中型扇貝，與墨西哥灣扇貝都屬于Argopecten 屬，染色體數(shù)相同，且都是雌雄同體，但二者在個體大小、生長和溫度適應(yīng)性等方面性狀互 補。因此發(fā)明人又通過將墨西哥灣扇貝與紫扇貝進(jìn)行種間雜交，培養(yǎng)出正交（紫扇貝卵 子和墨西哥灣扇貝精子受精）和反交（墨西哥灣扇貝卵子和紫扇貝精子受精）兩種雜交 子一代。雜交子一代的個體重比同期培育的墨西哥灣扇貝提高72-85%，顯示出巨大的產(chǎn) 業(yè)潛力（南樂紅等，2012.紫扇貝和墨西哥灣扇貝種間雜交的初步研究。中國農(nóng)學(xué)通報， 28:131-135)。
[0004] 上述雜交子一代雖然可以產(chǎn)生較大的雜種優(yōu)勢，但是要大面積推廣仍存在著較大 的困難，這是因為紫扇貝和墨西哥灣扇貝都是雌雄同體的扇貝，繁殖時同時排放精子和卵 子，排放的卵子容易受到同種精子的污染，難以大量獲得未受精卵用于種間雜交，從而導(dǎo)致 所獲得的商品苗種中真正的雜交后代比例大大降低，因而使其產(chǎn)量的提高幅度大大受限。
[0005] 研究發(fā)現(xiàn)，上述兩種Argopecten扇貝的雌雄同體特性與許多農(nóng)作物的雌雄同株 特性相似。在雌雄同株的農(nóng)作物育種中也存在著同花授粉的問題，需要人工去雄，這一點與 墨西哥灣扇貝與紫扇貝雜交過程中遇到的自體受精問題相似。農(nóng)業(yè)上解決這個問題的關(guān)鍵 依賴于雄性不育植株的發(fā)現(xiàn)，利用雄性不育株與其父本連續(xù)回交，就可以選育出雄性不育 系、保持系和恢復(fù)系，以此來構(gòu)建農(nóng)作物育種中的三系配套育種體系，實現(xiàn)雜交種的大規(guī)模 生產(chǎn)，從而解決雜交制種難題。迄今為止，國內(nèi)外已經(jīng)在眾多的農(nóng)作物中建立了三系配套育 種體系，并廣泛應(yīng)用于雜交種的生產(chǎn)中，成為大幅度提高農(nóng)作物產(chǎn)量的主要途徑。
[0006] 但是在動物育種中，國內(nèi)外迄今為止尚無發(fā)現(xiàn)雄性不育且雌性可育個體的報道， 因而也無法建立類似于農(nóng)作物的雄性不育系、保持系和恢復(fù)系，用于雜交育種。顯然，如果 在動物育種中能夠構(gòu)建起類似的包括雄性不育系、保持系和恢復(fù)系的二系配套育種體系， 也就可以實現(xiàn)雌雄同體型動物的低成本、規(guī)?；N間雜交，提高雜交效率，提高育種動物的 抗逆性和產(chǎn)量，從而實現(xiàn)動物育種技術(shù)的重大突破。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是實現(xiàn)在動物育種中，具體地說是在雌雄同體型扇貝中首次構(gòu)建包 括雄性不育系、保持系和恢復(fù)系等品系的墨紫雜交扇貝三系配套育種體系，以克服現(xiàn)有雜 交扇貝育種技術(shù)的不足。
[0008] 本發(fā)明的另一目的是利用上述三系配套育種體系建立大規(guī)模、低成本生產(chǎn)墨紫雜 交扇貝苗種的應(yīng)用方法。
[0009] 本發(fā)明的第三個目的是用墨紫雜交扇貝雄性不育系與恢復(fù)系雜交建立大規(guī)模、低 成本生產(chǎn)墨紫雜交扇貝商品苗種的應(yīng)用方法。
[0010] 上述的三系是指扇貝雄性不育系及其保持系和恢復(fù)系。其中的雄性不育系是雄性 性腺發(fā)育不正常，不能產(chǎn)生有功能的精子，但其卵子發(fā)育正常，能接受正常精子而受精，并 能將其雄性不育特性遺傳給后代的品系。顯然雄性不育系是三系配套體系中的核心品系， 其主要作用是在雜交苗種商業(yè)化生產(chǎn)中提供大量的未受精卵子，同時其繁育依賴于與其配 套的保持系。雄性不育系是利用偶然發(fā)現(xiàn)的雄性不育且卵子可育的個體與其父本連續(xù)回 交建立回交家系，當(dāng)回交家系的所有個體均為雄性不育且卵子可育時所獲得的雜交扇貝品 系。
[0011] 保持系又稱雄性不育系保持系，當(dāng)作為父本與雄性不育系雜交時，能使子一代保 持雄性不育特性，保持系的主要作用是提供雄性不育系繁育所必須的精子。保持系是能夠 正常繁育的雌雄同體品系，可以通過自交繁育下一代保持系。
[0012] 恢復(fù)系又稱雄性不育系恢復(fù)系，用它的精子給雄性不育系的卵子受精后，所產(chǎn)生 的雜交后代雌性和雄性育性均恢復(fù)正常。因此，在動物育種中，恢復(fù)系的作用是提供精子與 雄性不育系的卵子受精，以實現(xiàn)優(yōu)良商品雜交苗種的培育?；謴?fù)系是能夠正常繁育的雌雄 同體品系，可以通過自交繁育下一代恢復(fù)系。
[0013] 本發(fā)明基于以下構(gòu)思和實踐：1)發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)了墨紫雜交扇貝（墨西哥灣扇貝 卵子與紫扇貝精子的雜交后代）子一代中存在2-8%的雄性不育個體，這些個體不產(chǎn)生有 活性的精子，但其卵子可以被紫扇貝的精子受精，且所獲得的受精卵能夠正常發(fā)育，即獲得 了回交扇貝；2)研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，由此獲得的回交扇貝性腺成熟后約有8-10%的個體仍為 雄性不育且其卵子可被紫扇貝精子受精，因此只要將上述雄性不育個體的卵子與父本紫扇 貝自交后代的精子連續(xù)多代回交，就能選育出后代全部為雄性不育且卵子可育的雄性不育 系（母本）-紫扇貝（父本）組合，該組合中的紫扇貝品系具有使相應(yīng)的雄性不育系的后 代仍保持雄性不育特性的能力，即獲得墨紫雜交扇貝的雄性不育系和該雄性不育系的保持 系；3)研究還發(fā)現(xiàn)，用紫扇貝精子與墨紫雜交扇貝中雄性不育個體的卵子回交所培育的回 交扇貝養(yǎng)成后約90%個體仍表現(xiàn)為雌雄同體，因此可以通過建立多個回交家系并進(jìn)行配合 力測驗的方法，選育出其后代全部為雌雄同體且性狀優(yōu)良的雄性不育系（母本）_紫扇貝 (父本）組合，這個組合中的紫扇貝品系具有使雄性不育系恢復(fù)雄性育性的能力，即獲得墨 紫雜交扇貝雄性不育系的恢復(fù)系；4)應(yīng)用墨紫雜交扇貝雄性不育系-保持系雜交可以大 規(guī)模生產(chǎn)雄性不育且卵子可育的種貝；通過將這些雄性不育種貝與相應(yīng)的恢復(fù)系的精子雜 交，能實現(xiàn)方便、高效、規(guī)?；a(chǎn)墨紫雜交扇貝商品苗種，且所獲得的雜交扇貝商品苗種 在生長、個體大小和溫度耐受性方面具有顯著的優(yōu)勢。
[0014] 本發(fā)明的墨紫雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建方法如下：
[0015] 1)墨紫雜交扇貝雄性不育個體的篩選及其父本的繁育：選擇優(yōu)良的墨西哥灣扇 貝與紫扇貝個體同步促熟后，用常規(guī)的紫扇貝陰干和溫度刺激方法誘導(dǎo)墨西哥灣扇貝和紫 扇貝產(chǎn)卵，并分別收集墨西哥灣扇貝和紫扇貝的卵子，同時誘導(dǎo)紫扇貝排精，并用500目篩 絹過濾獲得紫扇貝精子，然后向墨西哥灣扇貝的卵子中加入適量的紫扇貝精子，受精卵正 常發(fā)育后即獲得墨紫雜交扇貝（墨西哥灣扇貝卵子與紫扇貝精子受精）子一代家系，待用 于選擇雄性不育個體，同時將紫扇貝的卵子用自體的精子受精，建立該紫扇貝的自交家系。 由于雜交子一代中雄性不育個體存在的比例很低，因此需要構(gòu)建大量的雜交子一代家系， 從而找到雄性不育的個體用于雄性不育系的選育。
[0016] 2)墨紫雜交扇貝雄性不育系的選育：選擇上述墨紫雜交扇貝子一代家系中的雄 性不育個體，與父本紫扇貝自交家系中的優(yōu)良個體同步促熟，性腺成熟后用常規(guī)的紫扇貝 陰干和溫度刺激的方法誘導(dǎo)上述雜交子一代扇貝排卵并收集卵子，同時誘導(dǎo)紫扇貝排精， 并用500目篩絹過濾獲得紫扇貝精子，將上述獲得的雜交子一代的卵子與紫扇貝精子受 精，收集受精且發(fā)育正常的受精卵建立回交家系，同時將供精的紫扇貝自體受精建立自交 家系；翌年將回交家系及其父本紫扇貝自交家系促熟，選擇回交家系中仍為雄性不育的個 體用常規(guī)的紫扇貝產(chǎn)卵誘導(dǎo)方法刺激產(chǎn)卵后，用其父本紫扇貝自交后代的精子繼續(xù)回交， 同時仍將供精的紫扇貝繼續(xù)自交建立自交家系；以后每年按照同樣的方法連續(xù)回交選育， 直到回交后代全部為雄性不育且卵子可育的個體，即獲得墨紫雜交扇貝雄性不育系。雄性 不育系是三系配套育種體系的核心品系，是前提，建立墨紫雜交扇貝雄性不育系的目的是 為雜交扇貝苗種的生產(chǎn)提供大量的雄性不育扇貝種貝，從而實現(xiàn)方便、高效、規(guī)?；@得大 量的未受精卵。
[0017] 3)墨紫雜交扇貝雄性不育系種貝的擴(kuò)繁：本發(fā)明通過墨紫雜交扇貝雄性不育系 與保持系的雜交繁育下一代墨紫雜交扇貝雄性不育系扇貝，從而實現(xiàn)墨紫雜交扇貝雄性不 育系種貝的擴(kuò)繁，并將墨紫雜交扇貝雄性不育系種貝用于下述的墨紫雜交扇貝商品苗種生 產(chǎn)。
[0018] 4)墨紫雜交扇貝商品苗種的生產(chǎn)方法：首先按照5:1的比例選擇墨紫雜交扇貝的 雄性不育系和恢復(fù)系種貝，并按常規(guī)方法促熟后分別刺激雄性不育系種貝產(chǎn)卵和恢復(fù)系種 貝產(chǎn)卵排精，再將該恢復(fù)系的精卵混合液用500目篩絹過濾即獲得恢復(fù)系的精液，將恢復(fù) 系的精液加入產(chǎn)卵池中并攪拌，且加入精子的量以每個卵子周圍有5-6個精子為宜，最后 按常規(guī)方法孵化后即獲墨紫雜交扇貝商品苗種。
[0019] 本發(fā)明的雄性不育系構(gòu)建方法也應(yīng)用于紫墨雜交扇貝（紫扇貝卵子與墨西哥灣 扇貝精子的雜交后代）、海紫雜交扇貝（海灣扇貝卵子與紫扇貝精子的雜交后代）和紫海雜 交扇貝（紫扇貝卵子與海灣扇貝精子的雜交后代）等Argopecten屬雜交扇貝的育種，并且 應(yīng)用于建立這些雜交扇貝商品苗種的規(guī)?；a(chǎn)方法。
[0020] 本發(fā)明的方法也應(yīng)用于其他雌雄同體型扇貝的種間雜交育種，例如Pecten屬扇 貝的種間雜交，本發(fā)明的基本方法也適用于其他雌雄同體型無脊椎動物的種間雜交育種。
[0021] 本發(fā)明構(gòu)建的墨紫雜交扇貝雄性不育系是首次在動物界中建立的，是動物三系配 套育種體系的核心和前提，應(yīng)屬于動物育種技術(shù)中的重大突破。本發(fā)明有效克服了雌雄同 體扇貝雜交過程中自體受精的障礙，實現(xiàn)了低成本和規(guī)?；@得完全的雜交后代，因此可 充分利用雜種優(yōu)勢，使所培育的墨紫雜交扇貝商品苗種同時具有紫扇貝和墨西哥灣扇貝的 特性，在生長、個體大小和溫度耐受性方面比墨西哥灣扇貝具有顯著優(yōu)勢，因此能在南方海 區(qū)如廣東、廣西和福建等海域成功養(yǎng)殖，且當(dāng)年產(chǎn)量可比墨西哥灣扇貝提高45%以上。

【具體實施方式】
[0022] 本發(fā)明首次構(gòu)建了墨紫雜交扇貝雄性不育系，并建立了用雄性不育系大規(guī)模生產(chǎn) 墨紫雜交扇貝雄性不育系種貝和墨紫雜交扇貝商品苗種的方法，具體步驟如下：
[0023] 實施例1
[0024] 1)墨紫雜交扇貝雄性不育個體的篩選及其父本的繁育：第一年選擇50個性腺發(fā) 育成熟的墨西哥灣扇貝和50個紫扇貝，陰干刺激30分鐘后將每個扇貝放在預(yù)先加入23°C 海水的單獨的容器中使其產(chǎn)卵、排精，單獨收集每個墨西哥灣扇貝的卵子和每個紫扇貝的 精子和卵子，向每個墨西哥灣扇貝的卵子懸浮液中加入少量來自單個紫扇貝的精液，攪拌 使精卵混合均勻，顯微鏡下觀察使每個卵子周圍有5-6個精子，并將受精卵置于黑暗環(huán)境 下孵化，即獲得墨紫雜交子一代家系。用上述方法建立至少20個這樣的雜交家系，同時將 供精的紫扇貝精卵混合受精，建立相應(yīng)數(shù)量的紫扇貝自交家系，按照常規(guī)的扇貝育苗方法 進(jìn)行幼蟲培育、保苗和養(yǎng)成后，用于雄性不育個體的篩選。
[0025] 2)墨紫雜交扇貝雄性不育系的選育：第二年春季將墨紫雜交子一代家系促熟后， 選擇50個性狀優(yōu)良的雄性不育個體，用常規(guī)的紫扇貝產(chǎn)卵誘導(dǎo)方法刺激產(chǎn)卵，分別用其父 本紫扇貝的精子受精，收集正常受精、發(fā)育的受精卵建立回交家系，收集正常受精、發(fā)育的 受精卵建立回交家系，同時將提供精子的紫扇貝自繁建立自交家系，建立至少20個回交家 系和相應(yīng)的紫扇貝自交家系并按照常規(guī)的紫扇貝育苗方法進(jìn)行幼蟲培育、保苗、養(yǎng)成；第三 年春季，將回交家系和紫扇貝自交家系促熟后，選擇50個性狀優(yōu)良的回交家系中的雄性不 育個體，用其父本紫扇貝的自交后代精子回交，收集正常受精、發(fā)育的受精卵繼續(xù)建立回交 家系，同時繼續(xù)繁育紫扇貝的自交家系，選擇建立20個以上性狀優(yōu)良的回交家系及其相應(yīng) 的紫扇貝自交家系；以后每年按照同樣的方法選擇性狀優(yōu)良的雄性不育扇貝與其父本紫扇 貝的自交家系回交，直到回交后代的所有個體均表現(xiàn)為性狀優(yōu)良、雄性不育且卵子可育，即 獲得墨紫雜交扇貝雄性不育系。
[0026] 3)墨紫雜交扇貝雄性不育系種貝的擴(kuò)繁方法：每年用墨紫雜交扇貝雄性不育系 和保持系種貝雜交擴(kuò)繁墨紫雜交扇貝雄性不育系扇貝，同時按常規(guī)紫扇貝育苗方法自交擴(kuò) 繁恢復(fù)系。
[0027] 4)墨紫雜交扇貝商品苗種的生產(chǎn)方法：春季育苗時按照5:1的比例選擇墨紫雜 交扇貝雄性不育系和恢復(fù)系種貝促熟后，在產(chǎn)卵池中刺激墨紫雜交扇貝雄性不育系種貝產(chǎn) 卵，在水桶中刺激恢復(fù)系種貝排精，并用500目篩絹過濾獲得不含卵子的恢復(fù)系紫扇貝精 液；將恢復(fù)系的精液均勻潑灑到產(chǎn)卵池中并立即攪拌，隨時取樣在顯微鏡下觀察受精情況， 精液加入量以每個卵子周圍有5-6個精子為宜；受精卵按照常規(guī)方法孵化，發(fā)育后即獲得 墨紫雜交扇貝商業(yè)苗種。
[0028] 實施例2
[0029] 2011年利用引進(jìn)的紫扇貝和取自廣東湛江的墨西哥灣扇貝，共培育種間雜交子一 代正交和反交家系各1個。經(jīng)實測，墨紫雜交扇貝（墨西哥灣扇貝卵子與紫扇貝精子受精） 子一代的平均殼高為52. 22毫米，體重為25. 49克，柱重2. 19克，而同期養(yǎng)殖的墨西哥灣扇 貝平均殼高為42. 02毫米，體重為14. 80克，柱重為1. 13克，墨紫雜交子一代比同期的墨西 哥灣扇貝殼高提高24. 3%，體重提高約72. 2%，柱重提高93. 8%。2012年春天，將上述雜 交子一代扇貝促熟后從中選擇個體大且僅雌區(qū)發(fā)育的扇貝，陰干30分鐘后將扇貝置于盛 有23度海水的容器中刺激產(chǎn)卵，用單個紫扇貝的精子授精，培育出子一代墨紫雜交扇貝與 紫扇貝的回交家系3個。2013年春季促熟后發(fā)現(xiàn)2個家系表現(xiàn)為雌雄同體，另一個家系中 大部分個體表現(xiàn)為雄性不育。
[0030] 繼續(xù)將上述雄性不育的個體用其父本紫扇貝自交后代的精子回交，經(jīng)過一代至多 代選育就可獲得后代全部為雄性不育且卵子可育的雄性不育系（母本）-保持系（父本） 組合，從而分別獲得雄性不育系和保持系。性腺促熟后用常規(guī)的扇貝產(chǎn)卵誘導(dǎo)方法催產(chǎn)雄 性不育系扇貝可獲得大量未受精的卵子，將其用保持系的精子受精，就可大規(guī)模獲得用于 墨紫雜交扇貝商品苗種生產(chǎn)的雄性不育系種貝。
[0031] 最后將上述獲得的墨紫雜交扇貝的雄性不育系種貝性腺促熟后，用常規(guī)的墨西哥 灣扇貝催產(chǎn)方法獲得大量未受精的卵子，將其用恢復(fù)系的精子受精，就可大規(guī)模生產(chǎn)墨紫 雜交扇貝商品苗種。
[0032] 實施例3
[0033] 2014年，利用墨西哥灣扇貝與紫扇貝共建立了墨西哥灣扇貝卵子與紫扇貝精子的 雜交子一代家系16個，并建立了供精的紫扇貝的自交家系，按照實施例1的方法，可在1-3 年內(nèi)選育出墨紫雜交扇貝的雄性不育家系及其相應(yīng)的保持系和恢復(fù)系，實現(xiàn)墨紫雜交扇貝 苗種的商業(yè)化生產(chǎn)。
[0034] 實施例4
[0035] 本發(fā)明用于紫墨雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建及應(yīng)用
[0036] 本發(fā)明建立的雄性不育系的構(gòu)建方法也應(yīng)用于紫墨雜交扇貝（紫扇貝卵子與墨 西哥灣扇貝精子的雜交后代）的育種，并且應(yīng)用于建立紫墨雜交扇貝商品苗種的規(guī)模化生 產(chǎn)方法。
[0037] 首先選擇紫扇貝和墨西哥灣扇貝同步促熟并刺激同時產(chǎn)卵、排精，分別收集紫扇 貝的卵子以及墨西哥灣扇貝的精子和卵子，將紫扇貝的卵子與墨西哥灣扇貝的精子受精建 立紫海雜交子一代家系，用于選擇雄性不育個體，同時將墨西哥灣扇貝的精子和卵子混合 受精，建立墨西哥灣扇貝自交家系；第二年從紫墨雜交子一代家系中選擇雄性不育的個體， 用墨西哥灣扇貝的精子與其受精，若受精卵正常發(fā)育則建立回交家系，用于繼續(xù)選育雄性 不育系，同時將父本墨西哥灣扇貝自體受精建立自交家系；這樣經(jīng)過一代至多代選擇，當(dāng)回 交后代全部表現(xiàn)為雄性不育時，就獲得了紫墨雜交扇貝的雄性不育系及相應(yīng)的保持系。
[0038] 用上述紫墨雜交扇貝的雄性不育系卵子與保持系的精子雜交，即可實現(xiàn)高效、方 便、規(guī)?；a(chǎn)紫墨雜交扇貝雄性不育系種貝；用紫墨雜交扇貝雄性不育系種貝與恢復(fù)系 的精子雜交，即可實現(xiàn)高效、方便、規(guī)?；a(chǎn)紫墨雜交扇貝苗種。
[0039] 實施例5
[0040] 本發(fā)明用于紫海雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建及應(yīng)用
[0041] 本發(fā)明建立的雄性不育系的構(gòu)建方法也應(yīng)用于紫海雜交扇貝（紫扇貝卵子與海 灣扇貝精子的雜交后代）育種，并且應(yīng)用于建立紫海雜交扇貝商品苗種的規(guī)?；a(chǎn)方 法。
[0042] 首先選擇紫扇貝和海灣扇貝同步促熟并刺激同時產(chǎn)卵、排精，分別收集紫扇貝的 卵子以及海灣扇貝的精子和卵子，將紫扇貝的卵子與海灣扇貝的精子受精建立紫海雜交子 一代家系，用于選擇雄性不育個體，同時將海灣扇貝的精子和卵子混合受精，建立海灣扇貝 自交家系；第二年從紫海雜交子一代家系中選擇雄性不育的個體，用海灣扇貝的精子與其 受精，若受精卵正常發(fā)育則建立回交家系，用于繼續(xù)選育雄性不育家系，同時將父本海灣扇 貝自體受精建立自交家系；這樣經(jīng)過一代至多代選擇，當(dāng)回交后代全部表現(xiàn)為雄性不育時， 就獲得了紫海雜交扇貝的雄性不育系及相應(yīng)的保持系。
[0043] 用上述紫海雜交扇貝的雄性不育系卵子與保持系的精子雜交，即可實現(xiàn)高效、方 便、規(guī)?；a(chǎn)紫海雜交扇貝雄性不育種貝；用紫海雜交扇貝雄性不育種貝與恢復(fù)系的精 子雜交，即可實現(xiàn)高效、方便、規(guī)模化生產(chǎn)紫海雜交扇貝苗種。
[0044] 實施例6
[0045] 本發(fā)明用于海紫雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建及應(yīng)用
[0046] 本發(fā)明建立的雄性不育系的構(gòu)建方法也應(yīng)用于海紫雜交扇貝（海灣扇貝卵子與 紫扇貝精子的雜交后代）育種實踐，并且應(yīng)用于建立海紫雜交扇貝商品苗種的規(guī)?；a(chǎn) 方法。
[0047] 首先選擇海灣扇貝和紫扇貝同步促熟并刺激同時產(chǎn)卵、排精，分別收集海灣扇貝 的卵子以及紫扇貝的精子和卵子，將海灣扇貝的卵子與紫扇貝的精子受精建立海紫雜交子 一代家系，用于選擇雄性不育個體，同時將紫扇貝的精子和卵子混合受精，建立紫扇貝自交 家系；第二年從海紫雜交子一代家系中選擇雄性不育的個體，用紫扇貝的精子與其受精，若 受精卵正常發(fā)育則建立回交家系，用于繼續(xù)選育雄性不育家系，同時將父本紫扇貝自體受 精建立自交家系；這樣經(jīng)過一代至多代選擇，當(dāng)回交后代全部表現(xiàn)為雄性不育時，就獲得了 海紫雜交扇貝的雄性不育系及其相應(yīng)的保持系。
[0048] 用上述海紫雜交扇貝的雄性不育系卵子與保持系的精子雜交，即可實現(xiàn)高效、方 便、規(guī)?；a(chǎn)海紫雜交扇貝雄性不育種貝；用海紫雜交扇貝雄性不育種貝與恢復(fù)系的精 子雜交，即可實現(xiàn)高效、方便、規(guī)?；a(chǎn)海紫雜交扇貝苗種。
【權(quán)利要求】
1. 一種墨紫雜交扇貝雄性不育系，其特征在于，該雄性不育系是不能產(chǎn)生有功能的精 子，但其卵子能正常受精、發(fā)育，并能將其雄性不育特性遺傳給后代的雜交扇貝品系，其中 墨紫雜交扇貝是墨西哥灣扇貝卵子與紫扇貝精子的雜交后代。
2. 權(quán)利要求1的墨紫雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建方法，其特征在于： 1) 墨紫雜交扇貝雄性不育個體的篩選及其父本的繁育：首先構(gòu)建20個以上墨紫雜交 扇貝子一代家系，同時建立供精的父本紫扇貝自交家系，用于下述雄性不育系的選育； 2) 墨紫雜交扇貝雄性不育系的選育：第二年從上述墨紫雜交扇貝子一代家系中選擇 50個雄性不育個體，促熟后刺激其排卵，用該雄性不育個體的父本紫扇貝自交家系中優(yōu)良 個體的精子受精，收集正常發(fā)育的受精卵建立回交家系20個以上，同時將供精的紫扇貝自 體受精建立自交家系；翌年選擇回交家系中仍為雄性不育的個體50個促熟并刺激產(chǎn)卵后， 用該雄性不育個體的父本紫扇貝自交后代的精子繼續(xù)回交，建立20個以上回交家系，同時 仍將供精的紫扇貝繼續(xù)自交建立自交家系；以后每年按照同樣的方法連續(xù)回交選育，直到 回交后代全部為雄性不育且卵子可育的個體，即獲得墨紫雜交扇貝雄性不育系；同時，將上 述能使雄性不育系后代繼續(xù)保持雄性不育特性的紫扇貝自交家系用常規(guī)的扇貝育苗方法 自交擴(kuò)繁，即獲得該雄性不育系的保持系。 3) 墨紫雜交扇貝雄性不育系種貝的擴(kuò)繁：通過上述雄性不育系與保持系的雜交繁育 下一代墨紫雜交扇貝雄性不育系扇貝，從而實現(xiàn)墨紫雜交扇貝雄性不育系的擴(kuò)繁。
3. 上述權(quán)利要求1和權(quán)利要求2的墨紫雜交扇貝雄性不育系應(yīng)用于規(guī)?；a(chǎn)墨紫雜 交扇貝雄性不育系種貝，即用墨紫雜交扇貝雄性不育系與相應(yīng)的保持系雜交，以規(guī)?；?育雄性不育且卵子可育的下一代墨紫雜交扇貝雄性不育系種貝。
4. 上述權(quán)利要求1和權(quán)利要求2的墨紫雜交扇貝雄性不育系應(yīng)用于生產(chǎn)墨紫雜交扇貝 商品苗種，即用墨紫雜交扇貝雄性不育系的卵子與相應(yīng)的恢復(fù)系的精子雜交，獲得墨紫雜 交扇貝商品苗種。
5. 權(quán)利要求2建立的墨紫雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建方法也應(yīng)用于以下的各雜交扇 貝的育種： (1) 用紫扇貝卵子與墨西哥灣扇貝精子受精培育的紫墨雜交扇貝； (2) 用紫扇貝卵子與海灣扇貝精子受精培育的紫海雜交扇貝； (3) 用海灣扇貝卵子與紫扇貝精子受精培育的海紫雜交扇貝。
6. 權(quán)利要求3和權(quán)利要求4建立的墨紫雜交扇貝雄性不育系的應(yīng)用方法也應(yīng)用于以下 的各雜交扇貝的育種： (1) 用紫扇貝卵子與墨西哥灣扇貝精子受精培育的紫墨雜交扇貝； (2) 用紫扇貝卵子與海灣扇貝精子受精培育的紫海雜交扇貝； (3) 用海灣扇貝卵子與紫扇貝精子受精培育的海紫雜交扇貝。
7. 權(quán)利要求2建立的墨紫雜交扇貝雄性不育系的構(gòu)建方法也應(yīng)用于其他雌雄同體型 扇貝，例如Argopecten屬和Pecten屬扇貝的種間雜交育種。
8. 權(quán)利要求3和權(quán)利要求4建立的墨紫雜交扇貝雄性不育系應(yīng)用方法也應(yīng)用于其他雌 雄同體型扇貝，例如Argopecten屬和Pecten屬扇貝的種間雜交育種。
9. 權(quán)利要求2建立的墨紫雜交扇貝雄性不育系的基本構(gòu)建方法也應(yīng)用于其他雌雄同 體型無脊椎動物的種間雜交育種。
10.權(quán)利要求3和權(quán)利要求4建立的墨紫雜交扇貝雄性不育系的應(yīng)用方法也應(yīng)用于其 他雌雄同體型無脊椎動物的種間雜交育種。
【文檔編號】A01K61/00GK104186385SQ201410428819
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月27日
【發(fā)明者】王春德, 馬斌, 孫奎府, 趙玉明, 劉博 , 周順, 王文琪, 趙俠, 苗國英 申請人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)