一種繁殖碧云茶樹試管苗的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高效快速繁殖碧云茶樹試管苗的方法：將碧云茶樹當(dāng)年生半木質(zhì)化枝條經(jīng)過(guò)消毒，漂洗；剪成帶1-2個(gè)腋芽的小段接種于固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；待腋芽萌發(fā)后將其接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，每過(guò)45天轉(zhuǎn)接一次，直到達(dá)到需要的種苗量，再將其接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，50天后，當(dāng)碧云茶樹小苗生長(zhǎng)出2-3條根，即可進(jìn)行馴化移栽。本發(fā)明可直接用于工廠化規(guī)?；姆N苗生產(chǎn)，具有污染少，增殖速度快，變異率低，種苗整齊健壯，生產(chǎn)成本低，運(yùn)輸方便，移栽成活率高等優(yōu)勢(shì)。
【專利說(shuō)明】一種繁殖碧云茶樹試管苗的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本方發(fā)明屬于植物栽培【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種繁殖碧云茶樹試管苗的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 碧云茶樹，無(wú)性系茶樹品種，具有產(chǎn)量高，抗逆性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。其制作的茶葉外形細(xì) 緊，色澤翠綠，香氣高爽純正，滋味鮮醇，且富含氨基酸、茶多酚、兒茶素、咖啡堿等物質(zhì)，是 一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的茶葉品種。隨著綠茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，碧云茶樹種植規(guī)模不斷擴(kuò)大，對(duì) 優(yōu)良茶樹種苗的需求也不斷攀升，傳統(tǒng)的扦插繁殖法已經(jīng)不能滿足市場(chǎng)的的需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題，是提供一種繁殖碧云茶樹試管苗的方法。
[0004] -種繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
[0005] (1)剪取碧云茶樹的枝條，去除葉片后將其剪成10cm長(zhǎng)的小段，用洗衣粉清洗 lOmin,再用流水沖洗lOmin,用乙醇水溶液浸泡，再放置于氯化萊水溶液中浸泡7min ;
[0006] (2)將步驟（1)得到的碧云茶樹的無(wú)菌技條剪成帶1-2個(gè)腋芽的小段，接種于固體 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待腋芽萌發(fā)后，取腋芽備用；其中，所述的固體培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0.5? lmg/L、蔗糖 25 ?30g/L、MS 培養(yǎng)基、瓊脂 4. 5 ?6g/L、pH 5. 6 ?5. 8 ;
[0007] (3)將步驟（2)得到的腋芽置于增殖繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到叢生的碧云茶樹小 苗；其中，繼代增殖培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0.4?1.2mg/L、6-芐氨基嘌呤2-3mg/L、蔗糖 25 ?30g/L、MS 培養(yǎng)基、瓊脂 4. 5 ?6g/L、pH 5. 6 ?5. 8 ;
[0008] (4)將步驟（3)中得到的叢生的碧云茶樹小苗在超凈工作臺(tái)上切割分離成單株， 轉(zhuǎn)移到壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，碧云茶樹苗長(zhǎng)成4-5cm高、有2-3條根的成苗；其中，壯苗生 根培養(yǎng)基組成為：萘乙酸〇· 2?0· 5mg/L、蔗糖25?30g/L、l/3MS培養(yǎng)基、瓊脂4. 5?6g/ L、pH 5. 6 ?5. 8 ;
[0009] (5)將步驟（4)得到的成苗從瓶?jī)?nèi)取出用清水沖洗去除培養(yǎng)基后，移置鋪有營(yíng)養(yǎng) 土的苗床上，并遮陰保濕，待小苗長(zhǎng)到l〇cm高時(shí)，進(jìn)行大田移栽。
[0010] 其中，步驟（1)所述的枝條為當(dāng)年生半木質(zhì)化枝條。
[0011] 其中，步驟（1)所述乙醇水溶，乙醇的體積百分含量為75%，乙醇水溶液浸泡時(shí)間 為45?60s。
[0012] 其中，步驟⑴所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的質(zhì)量百分含量為0.1 %? 0. 15%，氯化汞水溶液浸泡時(shí)間為7min。
[0013] 其中，步驟⑵的培養(yǎng)條件為：溫度22?25°C，光照度300?1000勒克斯，光照 時(shí)間11?13h/d條件下，培養(yǎng)40?50d。
[0014] 其中，步驟⑵所述的固體培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0. 5mg/L、蔗糖30g/L、MS培養(yǎng) 基、瓊脂 6g/L、pH 5. 8。
[0015] 其中，步驟（3)的培養(yǎng)條件為：溫度25?28°C，光照度1000?2000勒克斯，光照 時(shí)間11?13h/d，培養(yǎng)45天。
[0016] 其中，步驟（3)所述的繼代增殖培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0.8mg/L、6_芐氨基嘌呤 2. 5mg/L、蔗糖 30g/L、MS 培養(yǎng)基、瓊脂 6g/L、pH 5. 8。
[0017] 其中，步驟（4)的培養(yǎng)條件為：溫度25?28°C，光照度1000?2000勒克斯，光照 時(shí)間11?13h/d，培養(yǎng)50天。
[0018] 其中，其特征在于，步驟（4)中，所述的壯苗生根培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0.2mg/L、 蔗糖 30g/L、l/3MS 培養(yǎng)基、瓊脂 6g/L、pH 5. 8。
[0019] 有益效果：本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0020] 1、碧云茶樹的枝條消毒后，剪成帶1-2個(gè)腋芽的小段接種到步驟（2)中的固體培 養(yǎng)基中，采用MS并配以適當(dāng)?shù)募に?，與現(xiàn)有的茶樹腋芽萌發(fā)培養(yǎng)基相比，該方法腋芽萌發(fā) 并長(zhǎng)到l-2cm的時(shí)間縮短10?15d，并且萌芽率高達(dá)80%以上，變異率小于1 %，出芽整齊。
[0021] 2、繼代增殖培養(yǎng)基采用MS并配以適當(dāng)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，與傳統(tǒng)的繼代增殖 培養(yǎng)基相比，該方法能更好更快的促進(jìn)小苗的分枝，增殖系數(shù)可達(dá)到2-3。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的內(nèi)容僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本 發(fā)明。
[0023] 實(shí)施例1 :
[0024] -種高效快速繁殖碧云茶樹試管苗的方法，該方法包括以下步驟：
[0025] (1)剪取碧云茶樹的枝條，去除葉片，剪成10cm長(zhǎng)的小段，用洗衣粉清洗lOmin，再 用流水沖洗lOmin，將清洗干凈的枝條帶入超凈工作臺(tái)，用75%酒精浸泡45?60s，再放置 于氯化萊水溶液中浸泡8-10min ;
[0026] (2)將步驟（1)得到的碧云茶樹的無(wú)菌技條剪成帶1-2個(gè)腋芽的小段接種于固體 培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照度1000?2000勒克斯、光照時(shí)間11?13h/d的條件下，培 養(yǎng)40?50d，腋芽萌發(fā)，當(dāng)芽長(zhǎng)至l-2cm時(shí)，取腋芽備用；其中，所述的固體培養(yǎng)基組成為 ： 萘乙酸0· 5mg/L，鹿糖30g/L，MS培養(yǎng)基，瓊脂6g/L，pH 5. 8 ;
[0027] (3)將步驟（2)得到的腋芽置于增殖繼代培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照度1000? 2000勒克斯、光照時(shí)間11?13h/d的條件下培養(yǎng)45天，碧云茶樹分枝增殖，增殖系數(shù)達(dá) 2-3 ;其中，所述的繼代增殖培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0. 8mg/L，6-芐氨基嘌呤2. 5mg/L，蔗糖 30g/L，MS 培養(yǎng)基，瓊脂 6g/L，pH 5. 8 ;
[0028] (4)將步驟（3)中得到的叢生的碧云茶樹小苗在超凈工作臺(tái)上切割分離成單株， 轉(zhuǎn)移到壯苗生根培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照度1000?2000勒克斯、光照時(shí)間11?13h/ d的條件下培養(yǎng)50天，碧云茶樹苗長(zhǎng)成4-5cm高，有2-3條根的成苗，其中，所述的壯苗生根 培養(yǎng)基組成為：萘乙酸〇· 2mg/L，蔗糖30g/L，1/3MS培養(yǎng)基，瓊脂6g/L，pH 5. 8 ;
[0029] (5)將步驟（4)得到的成苗從瓶?jī)?nèi)取出用清水沖洗去除培養(yǎng)基后，移置鋪有營(yíng)養(yǎng) 土的苗床上，并遮陰保濕，待小苗長(zhǎng)到l〇cm高時(shí)，即可進(jìn)行大田移栽。
[0030] 碧云茶樹頂端嫩梢經(jīng)消毒后，接種到步驟（2)中的固體培養(yǎng)基中，采用MS并配以 適當(dāng)?shù)募に?，與現(xiàn)有的腋芽萌發(fā)培養(yǎng)基相比，該方法腋芽萌發(fā)時(shí)間縮短7?10d，并且萌發(fā) 率高達(dá)80%以上，出芽整齊且較為健壯，繼續(xù)培養(yǎng)到40-50天時(shí)，腋芽可以長(zhǎng)到l-2cm，比以 前的配方高約0.5cm。步驟（3)的繼代增殖培養(yǎng)基中，采用MS并配以適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)素和細(xì)胞 分裂素，與傳統(tǒng)的繼代增殖培養(yǎng)基相比，雖然該方法沒(méi)能提高增殖系數(shù)，但可以使縮短分蘗 增殖的時(shí)間，使增殖小苗更加整齊，培養(yǎng)45天的，增殖小苗達(dá)到2-3cm。步驟（4)將小苗接 種于壯苗生根培養(yǎng)基中，采用1/3MS并配合適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)素，與現(xiàn)有的壯苗生根培養(yǎng)基相比， 該方法可同時(shí)使幼苗生根和長(zhǎng)1?，培養(yǎng)50天，幼苗長(zhǎng)出2-3條根，且根系健壯，同時(shí)幼苗長(zhǎng) 到4-5cm高，并長(zhǎng)有4-5片葉片。
[0031] 實(shí)施例2:
[0032] -種高效快速繁殖碧云茶樹試管苗的方法，該方法包括以下步驟：
[0033] (1)剪取碧云茶樹的枝條，去除葉片，剪成10cm長(zhǎng)的小段，用去污劑清洗lOmin，再 用流水沖洗lOmin，將清洗干凈的枝條帶入超凈工作臺(tái)，用75%酒精浸泡45?60s，再放置 于氯化萊水溶液中浸泡8-10min ;
[0034] (2)將步驟⑴得到的碧云茶樹的無(wú)菌技條剪成帶1-2個(gè)腋芽的小段接種于固體 培養(yǎng)基中，在22?25°C、光照度300?1000勒克斯、光照時(shí)間11?13h/d的條件下，培養(yǎng) 40?50d，腋芽萌發(fā)，當(dāng)芽長(zhǎng)至l-2cm時(shí)，取腋芽備用；其中，所述的固體培養(yǎng)基組成為：萘 乙酸0· 2?0· 5mg/L，蔗糖25?30g/L，MS培養(yǎng)基，瓊脂4. 5?6g/L，pH 5. 6?5. 8 ;
[0035] (3)將步驟（2)得到的腋芽置于增殖繼代培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照度1000? 2000勒克斯、光照時(shí)間11?13h/d的條件下培養(yǎng)45天，碧云茶樹分枝增殖，增殖系數(shù)達(dá) 2-3 ;其中，所述的繼代增殖培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0. 5?1. 0mg/L，6-芐氨基嘌呤2-3mg/L， 蔗糖25?30g/L，MS培養(yǎng)基，瓊脂4. 5?6g/L，pH 5. 6?5. 8 ;
[0036] (4)將步驟（3)中得到的叢生的碧云茶樹小苗在超凈工作臺(tái)上切割分離成單株， 轉(zhuǎn)移到壯苗生根培養(yǎng)基中，在25?28°C、光照度1000?2000勒克斯、光照時(shí)間11?13h/ d的條件下培養(yǎng)50天，碧云茶樹苗長(zhǎng)成4-5cm高，有2-3條根的成苗，其中，所述的壯苗生根 培養(yǎng)基組成為：萘乙酸〇· 2?0· 5mg/L，蔗糖25?30g/L，1/3MS培養(yǎng)基，瓊脂4. 5?6g/L， pH 5. 6 ?5. 8 ;
[0037] (5)將步驟（4)得到的成苗從瓶?jī)?nèi)取出用清水沖洗去除培養(yǎng)基后，移置鋪有營(yíng)養(yǎng) 土的苗床上，并遮陰保濕，待小苗長(zhǎng)到l〇cm高時(shí)，即可進(jìn)行大田移栽。
[0038] 實(shí)施例3 :
[0039] 與實(shí)施例2基本相同，步驟（2)、步驟（3)、步驟（4)中腋芽萌發(fā)、繼代增殖培養(yǎng)、壯 苗培養(yǎng)三個(gè)階段分別以表1所列培養(yǎng)基組合進(jìn)行篩選，以優(yōu)選最適培養(yǎng)基組合配方。表1 說(shuō)明如下：
[0040] A、培養(yǎng)基配方優(yōu)化主要是設(shè)計(jì)不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、激素濃度等對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu) 化設(shè)計(jì)，本實(shí)例中均設(shè)計(jì)成固體培養(yǎng)基，每種配方中瓊脂濃度均為6g/L，蔗糖為30g/L，培 養(yǎng)環(huán)境為溫度25°C、光照度1000?2000勒克斯、光照時(shí)間12h/d培養(yǎng)室內(nèi)。
[0041] B、針對(duì)生產(chǎn)，不同的培養(yǎng)階段設(shè)計(jì)了三組培養(yǎng)基配方，種子播種階段主要觀察種 子萌發(fā)的快慢、長(zhǎng)勢(shì)、顏色（翠綠為佳）等指標(biāo)判斷配方是否合理；繼代增殖階段主要觀察 小苗分蘗增殖（越多越好）、玻璃化程度等指標(biāo)判斷配方是否合理；壯苗培養(yǎng)階段，主要通 關(guān)觀察苗的生長(zhǎng)勢(shì)、玻璃化程度（越低越好）、顏色等指標(biāo)來(lái)判斷配方的好壞。通過(guò)觀察和 各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定，并用"★"和"☆"的多少代表配方的好壞，★越多表示越好，☆比★要低 一個(gè)等次。
[0042] 表1培養(yǎng)基配方篩選
[0043]
[0044]

【權(quán)利要求】
1. 一種繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟： (1) 剪取碧云茶樹的枝條，去除葉片后將其剪成l〇cm長(zhǎng)的小段，用洗衣粉清洗lOmin， 再用流水沖洗l〇min，用乙醇水溶液浸泡，再放置于氯化汞水溶液中浸泡； (2) 將步驟（1)得到的碧云茶樹的無(wú)菌技條剪成帶1-2個(gè)腋芽的小段，接種于固體培養(yǎng) 基中培養(yǎng)，待腋芽萌發(fā)后，取腋芽備用；其中，所述的固體培養(yǎng)基組成為：萘乙酸〇. 5?lmg/ L、蔗糖25?30g/L、MS培養(yǎng)基、瓊脂4. 5?6g/L、pH 5. 6?5. 8 ; (3) 將步驟（2)得到的腋芽置于增殖繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到叢生的碧云茶樹小苗；其 中，繼代增殖培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0. 4?1. 2mg/L、6-芐氨基嘌呤1. 5?3mg/L、蔗糖25? 30g/L、MS 培養(yǎng)基、瓊脂 4. 5 ?6g/L、pH 5. 6 ?5. 8 ; (4) 將步驟（3)中得到的叢生的碧云茶樹小苗在超凈工作臺(tái)上切割分離成單株，轉(zhuǎn)移 到壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，碧云茶樹苗長(zhǎng)成4-5cm高、有2-3條根的成苗；其中，壯苗生根培 養(yǎng)基組成為：萘乙酸〇· 2?0· 5mg/L、蔗糖25?30g/L、l/3MS培養(yǎng)基、瓊脂4. 5?6g/L、pH 5. 6 ?5. 8 ; (5) 將步驟（4)得到的成苗從瓶?jī)?nèi)取出用清水沖洗去除培養(yǎng)基后，移置鋪有營(yíng)養(yǎng)土的 苗床上，并遮陰保濕，待小苗長(zhǎng)到l〇cm高時(shí)，進(jìn)行大田移栽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟（1)所述的枝 條為當(dāng)年生半木質(zhì)化枝條。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟（1)所述乙醇 水溶，乙醇的體積百分含量為75%，乙醇水溶液浸泡時(shí)間為45?60s。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟（1)所述的氯 化汞水溶液中，氯化汞的質(zhì)量百分含量為〇. 1 %?〇. 15%,氯化汞水溶液浸泡時(shí)間為7min。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟（2)的培養(yǎng)條 件為：溫度22?25°C，光照度300?1000勒克斯，光照時(shí)間11?13h/d條件下，培養(yǎng)40? 50d。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效快速繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟（2) 所述的固體培養(yǎng)基組成為：萘乙酸〇. 5mg/L、蔗糖30g/L、MS培養(yǎng)基、瓊脂6g/L、pH 5. 8。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟（3)的培養(yǎng)條 件為：溫度25?28°C，光照度1000?2000勒克斯，光照時(shí)間11?13h/d，培養(yǎng)45天。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效快速繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟（3) 所述的繼代增殖培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0. 8mg/L、6-芐氨基嘌呤2. 5mg/L、蔗糖30g/L、MS培 養(yǎng)基、瓊脂6g/L、pH 5.8。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟（4)的培養(yǎng)條 件為：溫度25?28°C，光照度1000?2000勒克斯，光照時(shí)間11?13h/d，培養(yǎng)50天。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效快速繁殖碧云茶樹試管苗的方法，其特征在于，步驟 (4)中，所述的壯苗生根培養(yǎng)基組成為：萘乙酸0. 2mg/L、蔗糖30g/L、l/3MS培養(yǎng)基、瓊脂 6g/L、pH 5. 8。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104186350SQ201410476545
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月17日
【發(fā)明者】史俊, 徐曉燕, 徐超, 席剛俊, 楊鶴同 申請(qǐng)人:江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院