一種白花酸藤果組織培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種白花酸藤果組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括莖段的消毒、腋芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根誘導(dǎo)及煉苗移栽等步驟。本發(fā)明的目的在于利用組織培養(yǎng)技術(shù)探索出建立白花酸藤果高效離體再生體系的途徑，實現(xiàn)白花酸藤果的快速繁殖，解決種苗短缺等問題，為白花酸藤果的工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支持，為白花酸藤果價值的實現(xiàn)、種質(zhì)的保存、轉(zhuǎn)基因的研究等奠定技術(shù)基礎(chǔ)。
【專利說明】一種白花酸藤果組織培養(yǎng)的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及白花酸藤果的組織培養(yǎng)，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]白花酸藤果，Embelia ribes,紫金?？疲置?信筒子、擬茶薦子、羊公板仔，小灌木，高90-120厘米，分枝，無毛，有時成蔓狀，葉卵形至長橢圓形，長5-7.5厘米，寬2-2.5厘米，先端漸尖，基部圓形，全緣，無毛，下面常綠帶白色；葉柄長5-7毫米，有狹邊緣。圓錐花序頂生兼上部腋生，密被短柔毛；苞??；花極小，雜性，花梗長3毫米；萼小，5深裂，銳頭；花瓣5，白色，長約2毫米，有緣毛；雄蕊5，花絲著生于花瓣，藥卵狀長橢圓形；子房上位，在雌花中呈卵形，在雄花中退化為圓錐形，花柱圓柱形，柱頭頭狀，漿果球形，種子球形，基部有孔，花期I月，分布廣東、廣西等地，果實含2.45%蒽貝素，又含維生素，其干燥果實有殺絳蟲作用，有效成分是蒽貝素，在印度用作避孕藥，能抑制子宮內(nèi)膜的堿性磷酸酶活性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是白花酸藤果組織培養(yǎng)的繁殖方法，本發(fā)明方法利用組織培養(yǎng)技術(shù)探索出建立白花酸藤果高效離體再生體系的途徑，實現(xiàn)白花酸藤果的快速繁殖，解決種苗短缺等問題，為白花酸藤果的工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支持，為白花酸藤果價值的實現(xiàn)、種質(zhì)的保存、轉(zhuǎn)基因的研究等奠定技術(shù)基礎(chǔ)。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案:
選擇生長健壯的植株，切取5cm左右的外植體莖段，每3個芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min,流水沖洗20min，浸泡于lg/L多菌靈+ lg/L百菌清+ lg/L殺毒釩溶液中，置于130r/min搖床上振蕩2.5h,沖洗干凈,超凈工作臺上70%酒精處理25s, lg/L升萊處理6min,無菌水沖洗干凈，消毒處理過的無菌莖段接種到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強度18001x，光照10h，誘導(dǎo)出來的芽苗長到3cm左右接入Ne+2，4-Dl.5-2.0mg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照45001x，光期12h/d，溫度25°C，培養(yǎng)出來的叢生芽接入MS+IBA0.5-0.6mg/L+IAA0.5-0.6mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，光期 16h/d，溫度 25。。。
[0005]采用本發(fā)明制備的白花酸藤果生根率高，利用率大，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
選擇生長健壯的植株，切取5cm左右的外植體莖段，每3個芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min，流水沖洗20min，浸泡于lg/L多菌靈+ lg/L百菌清+ lg/L殺毒釩溶液中，置于130r/min搖床上振蕩2.5h,沖洗干凈,超凈工作臺上70%酒精處理25s, lg/L升萊處理6min,無菌水沖洗干凈，消毒處理過的無菌莖段接種到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強度18001x，光照10h，誘導(dǎo)出來的芽苗長到3cm左右接入Ne+2，4-D1.5mg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照45001x，光期12h/d，溫度25°C，培養(yǎng)出來的叢生芽接入MS+IBA0.5mg/L+IAA0.5mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照65001x，光期16h/d，溫度25°C，生根率92%。
[0008]實施例2
選擇生長健壯的植株，切取5cm左右的外植體莖段，每3個芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min，流水沖洗20min，浸泡于lg/L多菌靈+ lg/L百菌清+ lg/L殺毒釩溶液中，置于130r/min搖床上振蕩2.5h,沖洗干凈,超凈工作臺上70%酒精處理25s, lg/L升萊處理6min,無菌水沖洗干凈，消毒處理過的無菌莖段接種到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強度18001x，光照10h，誘導(dǎo)出來的芽苗長到3cm左右接入Ne+2，4-D2.0mg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照45001x，光期12h/d，溫度25°C，培養(yǎng)出來的叢生芽接入MS+IBA0.6mg/L+IAA0.6mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照65001x，光期16h/d，溫度25°C，生根率93%。
[0009]實施例3
選擇生長健壯的植株，切取5cm左右的外植體莖段，每3個芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min,流水沖洗20min，浸泡于lg/L多菌靈+ lg/L百菌清+ lg/L殺毒釩溶液中，置于130r/min搖床上振蕩2.5h,沖洗干凈,超凈工作臺上70%酒精處理25s, lg/L升萊處理6min,無菌水沖洗干凈，消毒處理過的無菌莖段接種到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強度18001x，光照10h，誘導(dǎo)出來的芽苗長到3cm左右接入Ne+2，4-D2.0mg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照45001x，光期12h/d，溫度25°C，培養(yǎng)出來的叢生芽接入MS+IBA0.5mg/L+IAA0.5mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照65001x，光期16h/d，溫度25°C，生根率94%。
【權(quán)利要求】
1.一種白花酸藤果組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括莖段的消毒、腋芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根誘導(dǎo)及煉苗移栽等，其主要步驟如下: (1)取白花酸藤果的莖段，進行消毒處理； (2)將步驟(I)消毒處理過的無菌莖段接種到Ne+6-BA5.0mg/L+GA30.5mg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養(yǎng)溫度25°C，光照強度18001x，光照1h ； (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的芽苗長到3cm左右接入Ne+2，4-Dl.5-2.0mg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照45001χ，光期12h/d，溫度25°C ； (4)將步驟(3)培養(yǎng)出來的叢生芽接入MS+IBA0.5-0.6mg/L+IAA0.5-0.6mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照65001x，光期16h/d，溫度25°C。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種白花酸藤果組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中所述白花酸藤果無菌莖段的獲得為選擇生長健壯的植株，切取5cm左右的外植體莖段，每3個芽剪成一段，用肥皂水浸泡8min，流水沖洗20min，浸泡于lg/L多菌靈+ Ig/L百菌清+ lg/L殺毒釩溶液中，置于130r/min搖床上振蕩2.5h，沖洗干凈，超凈工作臺上70%酒精處理25s，lg/L升汞處理6min，無菌水沖洗干凈。
【文檔編號】A01H4/00GK104247663SQ201410540390
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司