一種軟體部高黑色素含量長(zhǎng)牡蠣的選育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種軟體部高黑色素含量長(zhǎng)牡蠣（“烏”牡蠣）的選育方法，以及方法有效性的證明方案，它包括以下步驟：觀察普通牡蠣的顏色，選擇黑色殼的面積占總殼面積的比例為90%以上并且明度值V<0.20的牡蠣、牡蠣殼黑色素的提取、牡蠣軟體部黑色素的提取、黑色素含量與軟體部黑色素含量之間的相關(guān)性分析， 申請(qǐng)人:在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)牡蠣貝殼殼色與外套膜中黑色素沉積量有顯著正相關(guān)的現(xiàn)象，貝殼越黑則其軟體部黑色素含量也就越多。本發(fā)明能準(zhǔn)確快速的選育出軟體部黑色素含量高的牡蠣，可提高牡蠣育種的效率，由于黑色素的保健價(jià)值已得到市場(chǎng)認(rèn)可，故本方法得到的牡蠣新品種可增加養(yǎng)殖的附加值。
【專利說(shuō)明】一種軟體部高黑色素含量長(zhǎng)牡蠣的選育方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】： 本發(fā)明涉及一種選育方法，尤其涉及一種軟體部高黑色素含量長(zhǎng)牡蠣("烏"牡蠣）的選 育方法。
[0002]

【背景技術(shù)】： 黑色素是一種生物多聚體，廣泛分布于動(dòng)植物體中。隨著對(duì)天然黑色素的不斷深入研 究，人們發(fā)現(xiàn)，黑色素有廣泛的生物活性，包括延緩衰老、調(diào)節(jié)免疫力、保護(hù)光照損傷、抗氧 化，清除自由基、保護(hù)心血管功能等，高黑色素含量的天然食品已得到消費(fèi)者的充分認(rèn)可， 市場(chǎng)前景廣闊。
[0003] 目前，有學(xué)者報(bào)道過(guò)不同外套膜色長(zhǎng)牡蠣的選育，而對(duì)于左右殼都是黑色的牡蠣 的選育沒(méi)有報(bào)道，并且對(duì)于不同外套膜色長(zhǎng)牡蠣的選育是通過(guò)肉眼觀察外套膜顏色而進(jìn)行 的，沒(méi)有報(bào)道貝殼顏色與外套膜顏色之間內(nèi)在的相關(guān)性，這種方法需要撬開(kāi)貝殼，受主觀因 素影響較大，費(fèi)事費(fèi)力、選育成本高、準(zhǔn)確性較差。
[0004]


【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術(shù)的不足而提供一種加速牡蠣的育種進(jìn)程、提高牡 蠣育種精確性、提高牡蠣的利用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)利益的準(zhǔn)確快速的軟體部高黑色素含量長(zhǎng)牡蠣 的選育方法。
[0005] 本發(fā)明的目的可以通過(guò)如下措施來(lái)達(dá)到：一種軟體部高黑色素含量長(zhǎng)牡蠣的選育 方法，其特征在于其包括以下步驟： (1) 觀察挑選左右殼均為黑色的長(zhǎng)牡蠣，測(cè)量牡蠣左右殼的表面積以及黑色殼部分的 表面積，選出黑色殼的面積占總殼面積的比例為90%以上的長(zhǎng)牡蠣； (2) 然后采用ND-2 NCS明度尺測(cè)量上述牡蠣殼色的明度值，選取明度值V〈0. 20的長(zhǎng) 牡蠣； (3) 將黑色表面積比例為90%以上和殼色明度V〈0. 20的長(zhǎng)牡蠣留作種貝，進(jìn)行正常的 育苗操作。
[0006] 本發(fā)明同已有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果：本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，長(zhǎng)牡蠣殼中 黑色素的含量與其軟體部中黑色素的含量有很大的相關(guān)性，殼色是評(píng)估牡蠣軟體黑色素含 量的間接指標(biāo)。采用以殼色來(lái)判斷軟體部黑色素含量的方法，不但可以高效地選擇出符合 育種要求的"烏"牡蠣個(gè)體，加速了牡蠣的育種進(jìn)程，也可以提高牡蠣的利用價(jià)值和養(yǎng)殖經(jīng) 濟(jì)效益。這種新的指標(biāo)不僅可以用在長(zhǎng)牡蠣選育上，也可以嘗試用在其他的海洋經(jīng)濟(jì)貝類 動(dòng)物育種上，將加快特種貝類的育種進(jìn)展。本選育方法無(wú)需開(kāi)殼從而可避免親本浪費(fèi)且省 時(shí)省力，另外，使用黑色殼的面積占總殼面積的比例為90%以上和貝殼顏色明度值V〈0. 20 的指標(biāo)，可使得選育過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化，從而提高選育的準(zhǔn)確性。
[0007]

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】： 圖1為ND-2 NCS國(guó)際通用明度尺掃描件示意圖；黑色方框內(nèi)是牡蠣殼色選擇的明度 臨界值； 圖2為長(zhǎng)牡蠣殼與軟體部中黑色素含量的相關(guān)性分析示意圖，其中，黑色方塊表示30 組牡蠣殼與軟體部中黑色素含量的配對(duì)數(shù)據(jù)，R2指相關(guān)系數(shù)。
[0008]

【具體實(shí)施方式】：下面對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說(shuō)明： 實(shí)施例：一種通過(guò)外殼顏色選擇軟體部含有大量黑色素長(zhǎng)牡蠣的選育方法，以及方法 有效性的證明方案，它包括以下步驟： 1. 1選育方法： (1)觀察挑選左右殼均為黑色的牡蠣，測(cè)量牡蠣左右殼的表面積以及黑色殼部分的表 面積，選出黑色殼的面積占總殼面積的比例為90%以上的牡蠣。
[0009] (2)采用ND-2 NCS明度尺（lightness meter)測(cè)量牡蠣殼色的明度值，選取明度 值V〈0. 20的牡蠣。（注：ND-2 NCS明度尺是由瑞典出版的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)色卡，清楚表現(xiàn)由白色到 黑色共18個(gè)標(biāo)準(zhǔn)明度級(jí)，即物體顏色越黑明度越低，越白明度越高，能有效的表現(xiàn)出物體 黑色的程度，請(qǐng)見(jiàn)圖1)。
[0010] (3)將黑色表面積比例和殼色明度均符合要求的長(zhǎng)牡蠣留作種貝，進(jìn)行正常的育 苗操作。
[0011] 1.2方法有效性的證明： (1)將選取的牡蠣進(jìn)行殼中黑色素的提取。
[0012] (2)將選取的牡蠣進(jìn)行軟體部中黑色素的提取。
[0013] (3)將殼中黑色素含量與軟體部中黑色素含量進(jìn)行相關(guān)性分析。
[0014] 具體方法有效性的證明實(shí)驗(yàn)例如下： 1.實(shí)驗(yàn)材料： 長(zhǎng)牡蠣：本實(shí)驗(yàn)所用活的長(zhǎng)牡蠣，購(gòu)買于煙臺(tái)市環(huán)海路農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，平均體重l〇〇g，總數(shù) 30只。
[0015] 1.1儀器設(shè)備： 循環(huán)水真空泵、電子密度天平、電熱恒溫水浴鍋、電熱恒溫水浴鍋、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥 箱、索氏提取器一套、研缽、燒杯、三角燒瓶、玻璃棒； 1. 2實(shí)驗(yàn)試劑： 包括鹽酸、乙醚、蒸餾水。鹽酸溶液的配制：購(gòu)買的鹽酸為標(biāo)準(zhǔn)濃度12mol/l，本實(shí)驗(yàn) 所需要的鹽酸濃度為6mol/l。每次實(shí)驗(yàn)所需要的鹽酸體積為600ml，用量筒量取300ml 12mol/L的鹽酸倒入裝有300ml蒸饋水的燒杯中配制成6mol/l的鹽酸。
[0016] 2.實(shí)驗(yàn)方法： 2. 1牡蠣殼中黑色素的提?。?2. I. 1前期準(zhǔn)備：將30只牡蠣全部清洗干凈； 2. 1. 2工藝流程； 原料準(zhǔn)備一粉碎一水解一水浴一抽濾一去脂一洗滌、過(guò)濾一干燥一稱量； 2. 1. 3操作要點(diǎn)： (1)原料：選擇殼上有黑色斑點(diǎn)的牡蠣作為原料； 〈2)粉末的制備：將牡蠣殼上的雜質(zhì)洗去，將牡蠣殼粉碎研磨備用； (3〉水解：稱量牡蠣殼粉末30g置于IOOOml的三角燒瓶中，先用6 mol/1鹽酸溶液200 ml浸泡12 h ; i:T)水浴：將浸泡過(guò)殼粉200ml鹽酸溶液棄去，將殘?jiān)湃?00 ml圓底燒瓶中再加6 mol/1 HCl溶液400 ml，裝上冷凝管于100 °C的水浴中加熱I h ; ?5?抽濾：加熱完畢后，將圓底燒瓶?jī)?nèi)的牡蠣殼用布氏漏斗抽濾，棄去濾液，保留濾渣； ?5?去脂：將濾渣用濾紙包好，置于索氏脂肪提取器中，用乙醚在42 °C左右的水浴中 脫脂，待索氏管中乙醚呈現(xiàn)出澄清狀態(tài)后，脫脂結(jié)束，再將濾紙包取出，在抽濾裝置上用蒸 餾水反復(fù)洗滌多次； 干燥稱重：最后在80°C恒溫干燥箱中烘干，取出黑色素，稱重； (S1計(jì)算：黑色素的含量=黑色素重量（g)/樣本重量（g) X 100%。
[0017] 2. L 4具體實(shí)驗(yàn)步驟： ?Τ?原料的處理： 用牡蠣刀將鮮活的牡蠣撬開(kāi)，把牡蠣肉剝離下來(lái)，作為其他實(shí)驗(yàn)備用。將牡蠣殼上的雜 質(zhì)以及牡蠣肉清理干凈，清洗干凈后曬干，以方便研磨和提取。
[0018] ·:'2)粉碎： 先用錘子將牡蠣殼敲成為碎片，再用研缽研磨成精細(xì)的粉狀，減小與鹽酸混合時(shí)的損 失和方便提取。
[0019] ⑶水解： 稱量牡蠣殼粉末30g置于IOOOml的三角燒瓶中，將200ml 6mol/l的鹽酸緩慢倒入燒 瓶中，邊倒邊用玻璃棒攪拌，以防鹽酸與碳酸鈣發(fā)生反應(yīng)后溶液溢出，減小損失。牡蠣殼中 含有大量的碳酸鈣和少量的殼質(zhì)素，與鹽酸發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生大量氣體二氧化碳，化學(xué) 方程式如下： 2HCl+CaC03=CaCl2+H20+C02, 天然黑色素在體內(nèi)與蛋白質(zhì)、多糖結(jié)合緊密，不易分離，但是黑色素不溶于酸性溶 液，酸性溶液的水解作用可以去除與黑色素結(jié)合的蛋白質(zhì)、碳水化合物以及脂類物質(zhì)，試驗(yàn) 結(jié)果表明，使用濃鹽酸水解效果優(yōu)于其他酸，所以本試驗(yàn)用鹽酸進(jìn)行水解將黑色素分離 出來(lái)。
[0020] (4,水?。?將浸泡過(guò)殼粉200ml鹽酸溶液棄去，將殘?jiān)湃?00 ml圓底燒瓶中再加6 mol/1 HCl 溶液400 ml,裝上冷凝管于100 °C的水浴中加熱I h。水浴是為了反應(yīng)受熱均勻，防止溶 液沸騰，因?yàn)辂}酸屬于易揮發(fā)的液體，所以使用冷凝管是避免反應(yīng)物損耗和充分利用原料。
[0021] 抽濾： 加熱完畢后，待冷卻后，將圓底燒瓶?jī)?nèi)的牡蠣殼用布氏漏斗抽濾，棄去濾液，保留濾渣。 得到的是黑色素的粗制品。
[0022] (S)脫脂： 將濾渣用濾紙包好，置于索氏脂肪提取器中，用乙醚在42 °C左右的水浴中脫脂，待索 氏管中乙醚呈現(xiàn)出澄清狀態(tài)后，脫脂結(jié)束，再將濾紙包取出，在抽濾裝置上用蒸餾水反復(fù)洗 滌多次。
[0023] ?:7·干燥稱重： 最后在80 °C恒溫干燥箱中烘干，取出黑色素，稱重。
[0024] (B)計(jì)算： 黑色素的含量=黑色素重量（g) /樣本重量（g) X100%。
[0025] 2. 2牡蠣軟體部黑色素的提?。?2. 2. 1原料： 采集2. I. 1中的牡蠣軟體部作為提取色素的原料。
[0026] 2. 2. 2組織勻漿的制備：用專用器材在外套膜處將牡蠣撬開(kāi)，用剪刀剪取軟體部 邊緣顏色較深的部分，然后放在碾缽中搗碎； 2. 2. 3水解：稱量牡蠣軟體部大約IOg置于的、三角燒瓶中，先用6 mol/1鹽酸溶液200 ml浸泡12 h ; 2. 2. 4水?。簩⒔葸^(guò)牡蠣軟體部的200ml鹽酸溶液棄去，將殘?jiān)湃?00 ml圓底燒 瓶中再加6 mol/1 HCl溶液400ml，裝上冷凝管于KKTC的水浴中加熱Ih ; 2. 2. 5抽濾：加熱完畢后，將圓底燒瓶?jī)?nèi)的牡蠣軟體部用布氏漏斗抽濾，棄去濾液，保 留濾渣； 2.2.6去脂：將濾渣用濾紙包好，置于索氏脂肪提取器中，用乙醚在42 °C左右的水浴 中脫脂，待索氏管中乙醚呈現(xiàn)出澄清狀態(tài)后，脫脂結(jié)束，再將濾紙包取出，在抽濾裝置上用 蒸餾水反復(fù)洗滌多次； 2. 2. 7干燥稱重：最后在80 °C恒溫干燥箱中烘干，取出黑色素，稱重。
[0027] 2. 2. 8計(jì)算：黑色素的含量=黑色素重量（g)/樣本重量（g) X 100%。
[0028] 2. 3數(shù)據(jù)計(jì)算整理： 將牡蠣殼黑色素含量和牡蠣軟體部黑色素含量做相關(guān)性分析。
[0029] 3.結(jié)果與分析： 3. 1每只牡蠣外殼和軟體部黑色素含量數(shù)據(jù)： 表1牡蠣外殼與軟體部中黑色素的含量

【權(quán)利要求】
1. 一種軟體部高黑色素含量長(zhǎng)牡蠣的選育方法，其特征在于其包括以下步驟： (1) 觀察挑選左右殼均為黑色的長(zhǎng)牡蠣，測(cè)量牡蠣左右殼的表面積以及黑色殼部分的 表面積，選出黑色殼的面積占總殼面積的比例為90%以上的長(zhǎng)牡蠣； (2) 然后采用ND-2 NCS明度尺測(cè)量上述牡蠣殼色的明度值，選取明度值V〈0. 20的長(zhǎng) 牡蠣； (3) 將黑色表面積比例為90%以上和殼色明度V〈0. 20的長(zhǎng)牡蠣留作種貝，進(jìn)行正常的 育苗操作。
【文檔編號(hào)】A01K61/00GK104365515SQ201410680301
【公開(kāi)日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
【發(fā)明者】王曉通, 于文超, 趙南南, 張子豪, 王嬌, 武長(zhǎng)路 申請(qǐng)人:魯東大學(xué)