一種篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法
【專利摘要】一種篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法，它涉及一種篩選哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法。他解決了目前無法確定精子質(zhì)量，導致實際生產(chǎn)過程中受精率和孵化率低下、畸形率較高的問題。篩選方法：一、測量太門哲羅鮭的血清中睪酮和精液中Se和Ze的含量；二、選出雄魚血清中4.9175μg/mg<睪酮<12.4951μg/mg，并且精液滿足Se＞0.1024μg/mg和Ze＞11.8725μg/mg的太門哲羅鮭的精液，獲得優(yōu)質(zhì)太門哲羅鮭精子。本發(fā)明篩選出的優(yōu)質(zhì)太門哲羅鮭精子受精率高，孵化率高，畸形率低，極大地提高了人工飼養(yǎng)太門哲羅鮭的養(yǎng)殖效率，節(jié)省飼養(yǎng)成本。
【專利說明】一種篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種篩選哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 太門哲羅鮭屬鮭科（Salmonisdae)、哲羅鮭屬（Hucho)。太門哲羅鮭主要分布在俄 羅斯、中國、蒙古和日本。歷史上哲羅鮭在我國廣泛分布，2003年考古工作者從淹埋在沙漠 中的樓蘭古城的壁畫中發(fā)現(xiàn)當時人們捕獲哲羅鮭的畫面。目前野生哲羅鮭在我國已屬于瀕 危物種，僅在烏蘇里江、黑龍江和新疆的哈納斯湖有少量的繁殖群體存在。太門哲羅鮭作為 我國土著冷水性魚類的典型代表，無論從種質(zhì)資源保護，還是從養(yǎng)殖效益考慮，都具有極其 重要的科研意義和社會價值。同時太門哲羅鮭也是具有國際品牌的旅游垂釣品種，深受日 本、歐美魚類垂釣協(xié)會的重視。日本魚類垂釣愛好者將哲羅鮭當作圖騰崇拜，垂釣到它是終 生吉祥平安的象征。太門哲羅鮭是兇猛肉食性魚類，人們稱老虎為山中之王，太門哲羅鮭就 是名符其實的水中之王。新疆哈納斯湖發(fā)現(xiàn)的"湖怪"，其中一種猜測認為"湖怪"很可能是 重達數(shù)百斤的太門哲羅鮭（當?shù)厮追Q大紅魚）。
[0003] 作為我國少數(shù)幾種土著鮭科魚類中唯一的大型魚類，中國水產(chǎn)科學研宄院黑龍江 水產(chǎn)研宄所對太門哲羅鮭的研宄一直非常重視。2001年人工馴養(yǎng)的野生幼魚在池塘養(yǎng)殖環(huán) 境中達到性成熟，人工繁殖出魚苗，并養(yǎng)成商品魚。這是國際上首次在人工養(yǎng)殖環(huán)境中太門 哲羅鮭性成熟，人工繁殖成功。太門哲羅鮭是肉食性魚類，仔魚在自然環(huán)境中以其它魚類的 幼苗為食，2005年研宄取得進一步突破，在深入研宄太門哲羅鮭仔魚消化系統(tǒng)發(fā)育、組織胚 胎學、生理生化規(guī)律的基礎(chǔ)上，成功實現(xiàn)仔魚攝食人工飼料的規(guī)?；Z化，為哲羅鮭的規(guī)模 化養(yǎng)殖奠定了基礎(chǔ)。
[0004] 太門哲羅鮭經(jīng)過10多年的努力，目前已在云南、四川、黑龍江、遼寧、吉林和山東 等全國20多個省市自治區(qū)進行了推廣養(yǎng)殖和增殖放流，深受養(yǎng)殖戶和社會的歡迎。近年隨 著哲羅鮭人工養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的擴大，苗種的需求量也在成倍的增長，伴隨著出現(xiàn)了新問題一一 雄性親魚精子質(zhì)量參差不齊。
[0005] 太門哲羅鮭規(guī)模化人工開發(fā)時間較短，因此太門哲羅鮭精子質(zhì)量的鑒別目前仍采 用傳統(tǒng)方法，即在人工繁殖過程中由操作人員在顯微鏡下憑經(jīng)驗直觀的觀察精子激活后的 游動時間和激活的數(shù)量。由于操作人員技術(shù)水平不同和激活后同時運動的精子數(shù)量十分龐 大，很難準確的觀察出精子的實際情況，且顯微鏡觀察的方法僅僅能粗略的觀察精子的活 力，僅能粗略的推測精子的受精能力，無法獲知精子質(zhì)量的真實情況，導致實際生產(chǎn)過程中 受精率和孵化率低下、畸形率較高。由于精子優(yōu)劣混雜，難以區(qū)分，所以目前太門哲羅鮭的 整體孵化率不足60%，畸形率更是高達3%以上，嚴重制約了哲羅魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明是為了解決目前無法確定精子質(zhì)量，導致實際生產(chǎn)過程中受精率和孵化率 低下、畸形率較高的問題，而提供的一種篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法。
[0007] 本發(fā)明按以下步驟篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子：
[0008] -、測量太門哲羅鮭血清中睪酮和精液中Se和Ze的含量；
[0009] 二、選出雄魚血清中4. 9175 y g/mg〈睪酮〈12. 4951 y g/mg，并且精液滿足Se > 0. 1024 y g/mg和Ze > 11. 8725 y g/mg的太門哲羅鮭的精液，即完成太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的 篩選，獲得優(yōu)質(zhì)太門哲羅鮭精子。
[0010] 本發(fā)明篩選出的優(yōu)質(zhì)太門哲羅鮭精子受精率高于90%，孵化率高于80%，畸形率 低于2. 32%，極大地提高了人工飼養(yǎng)太門哲羅鮭的養(yǎng)殖效率，節(jié)省飼養(yǎng)成本。
[0011] 本發(fā)明篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法具有早期、快速和準確的特性，而且方法 簡單，容易操作；能夠在太門哲羅鮭精子尚未受精前，對精子質(zhì)量的優(yōu)劣實現(xiàn)早期鑒別，提 前和快速的淘汰劣質(zhì)精子。對太門哲羅鮭種質(zhì)資源復(fù)壯和養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重大意義。

【具體實施方式】
[0012] 本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的 任意組合。

【具體實施方式】 [0013] 一：本實施方式按以下步驟篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子：
[0014] -、測量太門哲羅鮭血清中睪酮和精液中Se和Ze的含量；
[0015] 二、選出雄魚血清中4. 9175 y g/mg〈睪酮〈12. 4951 y g/mg，并且精液滿足Se > 0. 1024 y g/mg和Ze > 11. 8725 y g/mg的太門哲羅鮭的精液，即完成太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的 篩選，獲得優(yōu)質(zhì)太門哲羅鮭精子。

【具體實施方式】 [0016] 二：本實施方式與一的不同點是：步驟一測量精液中 微量元素Se和Ze的濃度按以下步驟進行：
[0017] -、將精液樣本震蕩混勻，然后取0. 5ml加入微波消解罐，再加入2. 5ml HNOjP 2. 5ml H202進行微波消解，微波消解溫度在15min內(nèi)由室溫升高到180°C，之后180°C保溫 消解lOmin，消解結(jié)束后過濾，澄清溶液定容待測；
[0018] 二、采用標準曲線法，用1%的HN03稀釋多元素標準溶液配成濃度為0、10、20、50、 100和200 y g/L的標準系列工作液，用美國Agilent7500電感藕合等離子體質(zhì)譜儀進行測 定，每尾魚精液樣本測量3個平行。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。

【具體實施方式】 [0019] 三：本實施方式與一的不同點是：步驟一測量血清中 睪酮的濃度按以下步驟進行：
[0020] 每尾雄魚采集血清5ml，置于3500r/min的離心機中離心15min，取出采用貝克曼 Access II化學發(fā)光免疫分析儀和檢測試劑盒測定血清睪酮的濃度，每尾雄魚血清樣本測 量3個平行。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。
[0021] 實施例1
[0022] 一、隨機取出100尾性成熟的雄性親魚，編號后麻醉，再依次采集精液置于對應(yīng)編 號的20ml小燒杯中，待人工授精使用；分別在每個小燒杯中取出0. 5ml放置于對應(yīng)編號的 采樣管中，用于測量微量元素Se和Ze;每尾雄魚采集血清5ml，置于3500r/min的離心機中 離心15min，取出血清放置對應(yīng)編號的采樣管中用于測量睪酮。
[0023] 二、根據(jù)檢測結(jié)果將精液和血清分組；
[0024] 第1組血清滿足4. 9175 y g/mg〈睪酮〈12. 4951 y g/mg，并且精液滿足0. 1024 y g/ mg〈Se 和 11. 8725 y g/mg〈Ze ;
[0025] 第2組血清滿足睪酮〈4. 9175 y g/mg，并且精液滿足0. 1024 y g/mg〈Se和 11.8725 y g/mg<Ze ；
[0026] 第3組血清滿足12. 4951yg/mg〈睪酮，并且精液滿足0.1024yg/mg〈Se和 11.8725 y g/mg<Ze ；
[0027] 第4組血清滿足4. 9175 y g/mg〈睪酮〈12. 4951 y g/mg，并且精液滿足 Se〈0.1024 y g/mg 和 11. 8725 y g/mg〈Ze ;
[0028] 第5組血清滿足4. 9175 y g/mg〈睪酮〈12. 4951 y g/mg，并且精液滿足0. 1024 y g/ mg〈Se 和 Ze〈ll. 8725 y g/mg ;
[0029] 第6組血清滿足睪酮〈4. 9175 y g/mg，并且精液滿足Se〈0. 1024 y g/mg和 11.8725 y g/mg<Ze ；
[0030] 第7組血清滿足睪酮〈4. 9175 y g/mg，并且精液滿足0. 1024 y g/mg〈Se和 Ze<ll.8725 y g/mg ；
[0031] 第8組血清滿足12. 4951 y g/mg〈睪酮，并且精液滿足Se〈0. 1024 y g/mg和 11.8725 y g/mg<Ze ；
[0032] 第9組血清滿足12. 4951 y g/mg〈睪酮，并且精液滿足0. 1024 y g/mg〈Se和 Ze<ll.8725 y g/mg ；
[0033] 第10組血清滿足睪酮〈4. 9175 y g/mg，并且精液滿足Se〈0. 1024 y g/mg和 Ze<ll.8725 y g/mg ；
[0034] 第11組血清滿足12. 4951yg/mg〈睪酮，并且精液滿足Se〈0. 1024yg/mg和 Ze<ll.8725 y g/mg ；
[0035] 三、挑選成熟較好個體較大的雌性親魚，麻醉后采集卵子，根據(jù)發(fā)明專利申請"一 種快速物理辨別太門哲羅鮭成熟卵子優(yōu)劣的方法"（申請?zhí)?01310589776. 7)記載的方法 選出優(yōu)質(zhì)的卵子，然后放入帶有編號的100個盆子中，將對應(yīng)編號的精液倒入盛放有卵子 的盆子中進行人工授精。然后再將100組受精卵分別單獨放入流水中孵化，待孵化10天分 別測定每尾魚的受精率，待孵化22天后測定每尾魚的孵化率，待受精卵全部破膜后統(tǒng)計畸 形率。
[0036] 各組精液的統(tǒng)計數(shù)據(jù)如表1所示。
[0037]表1
[0038]

【權(quán)利要求】
1. 一種篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法，其特征在于按以下步驟篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì) 精子： 一、 測量太門哲羅鮭血清中睪酮和精液中Se和Ze的含量； 二、 選出雄魚血清中4. 9175 y g/mg〈睪酮〈12. 4951 y g/mg，并且精液滿足Se > 0. 1024 y g/mg和Ze > 11. 8725 y g/mg的太門哲羅鮭的精液，即完成太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的 篩選，獲得優(yōu)質(zhì)太門哲羅鮭精子。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法，其特征在于步驟一測 量精液中微量元素 Se和Ze的濃度按以下步驟進行： 一、 將精液樣本震蕩混勻，然后取〇. 5ml加入微波消解罐，再加入2. 5ml HNOjP 2. 5ml H202進行微波消解，微波消解溫度在15min內(nèi)由室溫升高到180°C，之后180°C保溫消解 lOmin，消解結(jié)束后過濾，澄清溶液定容待測； 二、 采用標準曲線法，用1%的HN03稀釋多元素標準溶液配成濃度為0、10、20、50、100 和200 y g/L的標準系列工作液，用美國Agilent7500電感藕合等離子體質(zhì)譜儀進行測定， 每尾魚精液樣本測量3個平行。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種篩選太門哲羅鮭優(yōu)質(zhì)精子的方法，其特征在于步驟一測 量血清中睪酮的濃度按以下步驟進行： 每尾雄魚采集血清5ml，置于3500r/min的離心機中離心15min，取出采用貝克曼 Access II化學發(fā)光免疫分析儀和檢測試劑盒測定血清睪酮的濃度，每尾雄魚血清樣本測量 3個平行。
【文檔編號】A01K61/00GK104430087SQ201410698062
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】張永泉, 尹家勝, 張穎, 佟廣香, 王海濤 申請人:中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所