本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種臍帶保存液。
背景技術(shù)：
：組織在采集過程中需要保存在無菌的環(huán)境中，并且使用的培養(yǎng)液能夠充足的保證組織在運(yùn)輸過程中能夠獲取充足的營養(yǎng)，在到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后其樣本組織的活性保持剛采集的狀態(tài)，運(yùn)輸液的配制極大影響著組織在無菌實(shí)驗(yàn)室分離、培養(yǎng)后其獲得原代細(xì)胞的爬出率以及活性和純度。目前使用的最多的組織保存液為250ml的采集瓶中加入50ml的生理鹽水，采集組織直接放入運(yùn)輸瓶中運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理，但組織在生理鹽水中浸泡超過2h后，到達(dá)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離培養(yǎng)，其原代細(xì)胞的爬出率僅為30％左右，在第一代細(xì)胞傳代后活性僅保持在90％左右，細(xì)胞數(shù)約為1×106，不利于接下來細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇使用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：基于
背景技術(shù)：
存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提出了一種臍帶保存液，可以保存臍帶內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞的活性，使臍帶在2～10℃時(shí)能有效保存至少72小時(shí)，大大減少了臍帶從采集到制備的時(shí)間限制，并能有效降低臍帶被污染的概率。本發(fā)明提出的一種臍帶保存液，其原料按體積百分比包括：DMEM培養(yǎng)基74.7～77.6％，葡萄糖5.2～6.1％，人血清白蛋白1.8～2.3％，氯化鉀0.6～1.1％，維生素E0.4～1.2％，谷氨酰胺2.4～3.3％，抗生素12～16％。具體實(shí)施方式中，DMEM培養(yǎng)基的體積百分比可以為74.7％、74.8％、74.9％、75.0％、75.1％、75.2％、75.3％、75.4％、75.5％、75.6％、75.7％、75.8％、75.9％、 76.0％、76.0％、76.1％、76.2％、76.3％、76.4％、76.5％、76.6％、76.7％、76.8％、76.9％、77.0％、77.1％、77.2％、77.3％、77.4％、77.5％、77.6％，葡萄糖的體積百分比可以為5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％，人血清白蛋白的體積百分比可以為1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％，氯化鉀的體積百分比可以為0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％，維生素E的體積百分比可以為0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％，谷氨酰胺的體積百分比可以為2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％，抗生素的體積百分比可以為12％、12.5％、13％、13.5％、14％、14.5％、15％、15.5％、16％。優(yōu)選地，抗生素為兩性霉素B、慶大霉素、青霉素、鏈霉素中的一種或兩種以上組合物。優(yōu)選地，抗生素按體積份數(shù)包括：兩性霉素B4.5～5.5份，慶大霉素4.5～5.5份，青霉素1.5～2.5份，鏈霉素1.5～2.5份。優(yōu)選地，抗生素中，兩性霉素B、慶大霉素、青霉素、鏈霉素的體積比為4.8～5.2：4.8～5.2：1.8～2.2：1.8～2.2。優(yōu)選地，葡萄糖、人血清白蛋白、氯化鉀、維生素E、谷氨酰胺的體積比為5.4～5.8：2.0～2.2：0.6～0.8：0.6～0.8：2.4～2.6。優(yōu)選地，其原料按體積百分比包括：DMEM培養(yǎng)基75％，葡萄糖5.6％，人血清白蛋白2％，氯化鉀0.6％，維生素E0.6％，谷氨酰胺2.4％，兩性霉素B4.8％，慶大霉素5％，青霉素2％，鏈霉素2％。本發(fā)明用于短期保存采集后到分離前的臍帶，DMEM培養(yǎng)基、葡萄糖、人血清白蛋白、氯化鉀、維生素E和谷氨酰胺相互配合，維持臍帶組織內(nèi)細(xì)胞的滲透平衡、保持臍帶的濕潤狀態(tài)和短時(shí)間提供營養(yǎng)成分，而抗生素可以對可能 發(fā)生的污染進(jìn)行預(yù)防或者提示已經(jīng)發(fā)生的污染。本發(fā)明可以保存臍帶內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞的活性，使臍帶在2～10℃時(shí)能有效保存至少72小時(shí)，分離出的間充質(zhì)干細(xì)胞活性受時(shí)間的影響很小，大大減少了臍帶從采集到制備的時(shí)間限制，所用的所有成分均符合臨床使用標(biāo)準(zhǔn)，并能有效降低臍帶被污染的概率。附圖說明圖1為采用本發(fā)明實(shí)施例5所得臍帶保存液和空白對照對比培養(yǎng)臍帶72h，其各自細(xì)胞生長狀態(tài)的對比圖。圖2為采用本發(fā)明實(shí)施例5所得臍帶保存液和空白對照對比培養(yǎng)臍帶72h，其各自細(xì)胞活率的對比圖。圖3為采用本發(fā)明實(shí)施例5所得臍帶保存液和空白對照對比培養(yǎng)臍帶72h，其各自細(xì)胞總數(shù)的對比圖。具體實(shí)施方式下面，通過具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1本發(fā)明提出的一種臍帶保存液，其原料按體積百分比包括：DMEM培養(yǎng)基74.7％，葡萄糖5.2％，人血清白蛋白2.3％，氯化鉀0.6％，維生素E1.2％，谷氨酰胺2.4％，抗生素13.6％。實(shí)施例2本發(fā)明提出的一種臍帶保存液，其原料按體積百分比包括：DMEM培養(yǎng)基75.3％，葡萄糖6.1％，人血清白蛋白1.8％，氯化鉀1.1％，維生素E0.4％，谷氨酰胺3.3％，抗生素12％?？股匕大w積份數(shù)包括：兩性霉素B5份，慶大霉素4份，青霉素1.5份，鏈霉素1.5份。實(shí)施例3本發(fā)明提出的一種臍帶保存液，其原料按體積百分比包括：DMEM培養(yǎng)基74.6％，葡萄糖5.4％，人血清白蛋白2.2％，氯化鉀0.6％，維生素E0.8％，谷氨酰胺2.4％，抗生素14％?？股匕大w積份數(shù)包括：兩性霉素B4.8份，慶大霉素5.2份，青霉素1.8份，鏈霉素2.2份。實(shí)施例4本發(fā)明提出的一種臍帶保存液，其原料按體積百分比包括：DMEM培養(yǎng)基75.2％，葡萄糖5.8％，人血清白蛋白2.0％，氯化鉀0.8％，維生素E0.6％，谷氨酰胺2.6％，抗生素13％。抗生素按體積份數(shù)包括：兩性霉素B5.2份，慶大霉素4.8份，青霉素2.2份，鏈霉素1.8份。實(shí)施例5本發(fā)明提出的一種臍帶保存液，其原料按體積百分比包括：DMEM培養(yǎng)基75％，葡萄糖5.6％，人血清白蛋白2％，氯化鉀0.6％，維生素E0.6％，谷氨酰胺2.4％，兩性霉素B4.8％，慶大霉素5％，青霉素2％，鏈霉素2％。將本發(fā)明實(shí)施例5所得臍帶保存液與空白對照進(jìn)行對比培養(yǎng)臍帶72h，每2h取樣進(jìn)行細(xì)胞活率和細(xì)胞總數(shù)檢測，其結(jié)果如圖1-3所示。由圖1、圖2和圖3可知：本發(fā)明可以保存臍帶內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞的活性，使臍帶在2～10℃時(shí)能有效保存至少72小時(shí)，分離出的間充質(zhì)干細(xì)胞活性受時(shí)間的影響很小，大大減少了臍帶從采集到制備的時(shí)間限制。將本發(fā)明實(shí)施例5所得臍帶保存液與空白對照進(jìn)行對比培養(yǎng)臍帶，取樣時(shí)間為7～14天，其中“+”為陽性；“－”為陰性；其結(jié)果如下：菌種名稱本發(fā)明實(shí)施例5空白對照大腸桿菌－+金黃色葡萄桿菌－－銅綠假單胞菌－－枯草芽孢桿菌－－生胞梭菌－－白色念珠菌－－黑曲霉菌－+由上表可知：本發(fā)明能有效降低臍帶被污染的概率。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3