本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域,具體是一種高脂血癥模型的造模方法。
背景技術(shù):
高脂血癥是動脈粥樣硬化、心臟病、中風(fēng)和脂肪肝等疾病的主要誘發(fā)因素之一,嚴(yán)重威脅著人們的健康。為探究高脂血癥防治方法,建立良好的高脂血癥實(shí)驗(yàn)動物模型是必不可少的。實(shí)驗(yàn)動物模型在科學(xué)實(shí)驗(yàn)和藥物研發(fā)中占有重要地位,造模成功與否直接影響整個實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和代表性。但由于實(shí)驗(yàn)指標(biāo)、實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)等因素的制約,在選擇動物模型時就要對不同動物以及不同的造模方法進(jìn)行取舍,根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼业阶詈线m的動物模型。在高脂血癥模型中,大鼠、小鼠應(yīng)用比較廣泛,但是其血漿中運(yùn)輸膽固醇的主要載體是高密度脂蛋白膽固醇,而人類血漿運(yùn)輸膽固醇的主要載體是低密度脂蛋白膽固醇;而豚鼠、金黃地鼠、長爪沙鼠雖然在實(shí)驗(yàn)應(yīng)用方面相對較少,但其脂類代謝方式與人類更為相似。
現(xiàn)有的高脂血癥造模方法主要有單純高脂乳劑灌胃法,高脂、高糖、高蛋白乳劑灌胃法,高糖飲食造模法,進(jìn)食后給予高脂高糖飼料造模法,這些方法主要集中在肝內(nèi)脂肪酸的合成、氧化與輸出的不平衡方面。此外,應(yīng)用藥物或毒物誘導(dǎo)模型等方法,對動物的刺激較大,動物處于應(yīng)激狀態(tài),影響試驗(yàn)結(jié)果,且此法不是正常高脂血癥發(fā)生的常見原因,與人類高脂血癥的病理生理特點(diǎn)相差甚遠(yuǎn)。理想的造模方法,應(yīng)該具有造模方法簡單,與人體發(fā)病機(jī)理相近,可重復(fù)率高等特點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明的一種高脂血癥模型的造模方法,應(yīng)用改良的高脂飼料飼喂法,符合自然高脂血癥發(fā)病的情況,以期達(dá)到造模效果確實(shí)、模型穩(wěn)定、可重復(fù)性強(qiáng)和研究人高脂血癥提供合適的模型的目的。
本發(fā)明的一種高脂血癥模型的造模方法,包括以下步驟:
步驟一,取體重相近、胎次一致的幼犬,公母隨機(jī),自由飲水進(jìn)食,正常飼喂1周后,飼喂高脂日糧造模,每日兩次喂食;
所述高脂日糧包括:74%基礎(chǔ)飼料、10%豬油、5%蔗糖、5%成人奶粉、5%蛋黃粉和1%膽固醇;
步驟二,在造模第7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77和84天,分別稱重,觀察犬的體重變化;
步驟三,在造模第7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77和84天,每只犬分別采集血清,測量血清tg、tc、高密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)和高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)的含量;采集全血,測量血液流變學(xué)指標(biāo);
于造模第84天,抽取每只犬抗凝血,測量血液流變學(xué)指標(biāo);并隨機(jī)選取三只犬,進(jìn)行宰殺,取肝臟組織,進(jìn)行組織病理學(xué)超微結(jié)構(gòu)觀察,測量指標(biāo)全部滿足tc≥7.8mmol/l,tg顯著高于正常組,血液流變學(xué)指標(biāo)出現(xiàn)變化,血液粘稠,肝臟中有較多的脂滴蓄積,確定為高脂血癥模型。
優(yōu)選的,飼喂高脂日糧造模,每日兩次喂食,每只犬日攝入高脂日糧的最初量為100g,每日遞增5g。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
本試驗(yàn)造模出來的實(shí)驗(yàn)犬在血液常規(guī)指標(biāo)的基礎(chǔ)上,通過電鏡等微觀指標(biāo)檢測高脂模型成功后,實(shí)驗(yàn)犬的變化,更加準(zhǔn)確。
本發(fā)明中的方法具有造模方法簡單,與人體發(fā)病機(jī)理相近,可重復(fù)率高等特點(diǎn),這些方面主要基于犬的生理與人的生理的相近性,以及病理的相似性。
具體實(shí)施例
以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明:
實(shí)施案例1
配制高脂日糧,按以下百分比配制:74%基礎(chǔ)飼料、10%豬油、5%蔗糖、5%成年奶粉、5%蛋黃粉和1%膽固醇,混勻,待用;
取體重相近、胎次一致的幼犬40只,公母隨機(jī),自由飲水進(jìn)食,飼喂于18~22℃明暗各12h的動物實(shí)驗(yàn)室內(nèi),正常飼喂1周后,隨機(jī)分為2組,其中30只飼喂高脂日糧造模,另外10只飼喂正常日糧,每日兩次喂食。
為了更好的達(dá)到造模效果,飼喂高脂日糧造模,每日兩次喂食,每只犬日攝入高脂日糧的最初量為100g,每日遞增5g。
在造模第7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77和84天,分別稱重,觀察犬的體重變化;并從每只犬的前肢靜脈采血,取血清,測量tg、tc、ldl-c和高h(yuǎn)dl-c含量;測量血液流變學(xué)指標(biāo);
于造模第84天,抽取每只犬抗凝血,測量血液流變學(xué)指標(biāo);并隨機(jī)選取三只犬,進(jìn)行宰殺,取肝臟組織,進(jìn)行組織病理學(xué)超微結(jié)構(gòu)觀察,測量指標(biāo)全部滿足tg≥1.68mmol/l、tg顯著高于正常組,血液流變學(xué)指標(biāo)出現(xiàn)變化,血液粘稠,肝臟中有較多的脂滴蓄積,確定為高脂血癥模型。
造模組和正常組飼喂的時間、次數(shù)和攝入量均相同,也根據(jù)科學(xué)飼養(yǎng)方法的數(shù)據(jù)來進(jìn)行造模實(shí)驗(yàn)。
實(shí)施案例2
具體實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1,在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上,增加利用油紅o法檢測犬肝臟中脂滴的蓄積情況。
上述兩個實(shí)施案例中選擇的犬相對于其它品種的犬,其特性、解剖學(xué)特點(diǎn)和生理學(xué)特點(diǎn)相似性,本方法對于其他品種的犬同樣具有適用性。