本發(fā)明涉及香蕉組織培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其涉及一種促進(jìn)香蕉組培苗生根和壯根的方法。

背景技術(shù)：

香蕉是世界第二大水果，同時(shí)也是第四大糧食作物。我國(guó)是香蕉的重要原產(chǎn)地，種植面積達(dá)620萬(wàn)畝，年產(chǎn)1000多萬(wàn)噸，是世界上第二大香蕉生產(chǎn)國(guó)。香蕉產(chǎn)業(yè)已成為我國(guó)華南地區(qū)重要的農(nóng)業(yè)支柱產(chǎn)業(yè)。與傳統(tǒng)吸芽分株繁殖的方式相比，組培苗具有遺傳性狀穩(wěn)定、長(zhǎng)勢(shì)均勻一致、繁殖快速、抗病能力強(qiáng)等特點(diǎn)，因此香蕉生產(chǎn)中多選用組培苗。組培苗根系數(shù)目的多少及須根豐盈度是衡量組培苗質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)壯苗生根也是決定移栽成活率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

香蕉組培苗工廠化生產(chǎn)中常面臨生根數(shù)少和根系較弱的問(wèn)題。印度梨形孢最早是在印度塔爾沙漠中的兩株灌木的根際土壤中分離獲得，是一種能進(jìn)行純培養(yǎng)的類菌根真菌，其典型特征是其厚垣孢子呈梨形，因此得名印度梨形孢。研究發(fā)現(xiàn)印度梨形孢對(duì)多種植物根系的形成、生長(zhǎng)與生根數(shù)具有明顯的促進(jìn)作用，遺憾的是至今仍未見(jiàn)其在香蕉尤其是香蕉組培苗生產(chǎn)中應(yīng)用的報(bào)道。如能利用該菌促進(jìn)香蕉組培苗的生根和壯根，提高根系活力，無(wú)疑會(huì)對(duì)香蕉組培苗工廠化生產(chǎn)和香蕉產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展大有裨益。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種促進(jìn)香蕉組培苗生根和壯根的方法，可以通過(guò)在培養(yǎng)基中添加印度梨形孢菌塊促進(jìn)組培苗生根、增加組培苗生根數(shù)和粗度。

為實(shí)現(xiàn)上述內(nèi)容，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種促進(jìn)香蕉組培苗生根和壯根的方法，其中包括印度梨形孢的培養(yǎng)、香蕉生根培養(yǎng)基的配制、印度梨形孢與香蕉組培苗共培養(yǎng)的接種等步驟。通過(guò)利用印度梨形孢的定殖促進(jìn)香蕉組培苗生根，該方法操作簡(jiǎn)單，縮短了組培苗生根周期，可以顯著促進(jìn)香蕉組培苗生根并有一定的壯根效果。本發(fā)明可操作性強(qiáng)、效果顯著。

具體包括如下步驟：

（1）印度梨形孢的培養(yǎng)

將馬鈴薯洗凈去皮稱重200g，切成細(xì)小的塊狀或條狀，加800ml蒸餾水入鍋煮沸至馬鈴薯熟透，4層紗布過(guò)濾，稱取20g葡萄糖和20g瓊脂分別加入濾液中，蒸餾水定容至1l并煮沸溶解，分裝到三角瓶中高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），稍涼后倒入培養(yǎng)皿板中封口待用，配制成pda固體培養(yǎng)基；

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入pda固體培養(yǎng)基平板中間，28℃倒置黑暗培養(yǎng)7天后備用；

（2）香蕉組培苗生根培養(yǎng)基的配制

生根培養(yǎng)基的配方為ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l瓊脂，ph5.8，煮沸分裝至組培瓶中，每瓶30ml，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）待用；

（3）印度梨形孢與香蕉組培苗共培養(yǎng)

將正常繼代保存培養(yǎng)的香蕉組培苗切取單株小苗，保留頂部葉片切除須根后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培養(yǎng)7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入香蕉組培苗的培養(yǎng)基中心位置，距離植株1cm左右，每個(gè)組培瓶接種一個(gè)印度梨形孢菌塊，培養(yǎng)溫度25±2℃，2000lx，光照時(shí)間12h/d。

與常規(guī)的香蕉組培苗生根方法相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

（1）本發(fā)明所采用的印度梨形孢，可人工純培養(yǎng)，培養(yǎng)方式簡(jiǎn)單，易于規(guī)?；苽?。

（2）在培養(yǎng)基中接種印度梨形孢菌塊，與香蕉共培養(yǎng)的方式操作簡(jiǎn)單，效果顯著。

（3）本發(fā)明可以縮短香蕉組培苗生根周期，工廠化香蕉組培苗生產(chǎn)一般生根培養(yǎng)周期為4-5周左右，通過(guò)添加印度梨形孢可將其生根周期縮短至3周。

（4）利用本發(fā)明顯著提高了香蕉生根數(shù)和根系粗度，有效增強(qiáng)根系活力。

（5）本發(fā)明適用于多種香蕉種質(zhì)，簡(jiǎn)單采用一種通用培養(yǎng)基就能很好的促進(jìn)生根，有效節(jié)約專用培養(yǎng)基配置的生產(chǎn)環(huán)節(jié)。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1生根培養(yǎng)30天的三明野生蕉根系生長(zhǎng)情況圖；

圖2為實(shí)施例2生根培養(yǎng)30天的‘天寶蕉’根系生長(zhǎng)情況圖；

圖3為實(shí)施例3生根培養(yǎng)30天的福州粉蕉1號(hào)根系生長(zhǎng)情況圖；

圖4為實(shí)施例4生根培養(yǎng)30天的福州芭蕉根系生長(zhǎng)情況圖；

注：-p.indica為無(wú)印度梨形孢對(duì)照；+p.indica為接種印度梨形孢菌塊。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體的實(shí)施例，以福建地區(qū)特色種質(zhì)野生蕉（三明野生蕉）和栽培蕉（‘天寶蕉’、福州粉蕉1號(hào)、福州芭蕉）為材料，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不僅限于此。

實(shí)施例1：

1、印度梨形孢的培養(yǎng)

將馬鈴薯洗凈去皮稱重200g，切成細(xì)小的塊狀或條狀，加800ml蒸餾水入鍋煮沸20-30min至馬鈴薯熟透，4層紗布過(guò)濾，稱取20g葡萄糖和20g瓊脂分別加入濾液中，蒸餾水定容至1l并煮沸溶解，分裝到三角瓶中高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），稍涼后倒入培養(yǎng)皿板中封口待用，配制成pda固體培養(yǎng)基。

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入pda固體培養(yǎng)基平板中間，28℃倒置黑暗培養(yǎng)7天后備用。

2、香蕉組培苗生根培養(yǎng)基的配制

生根培養(yǎng)基的配方為ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l瓊脂，ph5.8，煮沸分裝至組培瓶中，每瓶30ml左右，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）待用。

3、印度梨形孢與香蕉組培苗共培養(yǎng)

將正常繼代保存培養(yǎng)的三明野生蕉組培苗切取單株小苗，保留頂部葉片切除須根后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培養(yǎng)7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入香蕉組培苗的培養(yǎng)基中心位置，距離植株1cm左右，每個(gè)組培瓶接種一個(gè)印度梨形孢菌塊。培養(yǎng)溫度25±2℃，2000lx，光照時(shí)間12h/d。

接種印度梨形孢后每隔10天測(cè)量一次三明野生蕉組培苗株高、葉片數(shù)及生根數(shù)，30天后拍照記錄見(jiàn)圖1，數(shù)據(jù)具體結(jié)果見(jiàn)表1、表2。由表1、表2可以看出，接種印度梨形孢的三明野生蕉組培苗株高及葉片數(shù)與對(duì)照組差異不明顯；而平均生根數(shù)卻明顯高于對(duì)照組，尤其是在接種印度梨形孢后10天和20天差異極顯著，在接種30天時(shí)平均生根數(shù)仍顯著高于對(duì)照組，有效解決了三明野生蕉生根弱且困難的問(wèn)題。

表1印度梨形孢對(duì)三明野生蕉組培苗株高、葉片數(shù)的影響

表2印度梨形孢對(duì)三明野生蕉組培苗生根數(shù)的影響

實(shí)施例2：

1、印度梨形孢的培養(yǎng)

將馬鈴薯洗凈去皮稱重200g，切成細(xì)小的塊狀或條狀，加800ml蒸餾水入鍋煮沸20-30min至馬鈴薯熟透，4層紗布過(guò)濾，稱取20g葡萄糖和20g瓊脂分別加入濾液中，蒸餾水定容至1l并煮沸溶解，分裝到三角瓶中高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），稍涼后倒入培養(yǎng)皿板中封口待用，配制成pda固體培養(yǎng)基。

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入pda固體培養(yǎng)基平板中間，28℃倒置黑暗培養(yǎng)7天后備用。

2、香蕉組培苗生根培養(yǎng)基的配制

生根培養(yǎng)基的配方為ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l瓊脂，ph5.8，煮沸分裝至組培瓶中，每瓶30ml左右，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）待用。

3、印度梨形孢與香蕉組培苗共培養(yǎng)

將正常繼代保存培養(yǎng)的‘天寶蕉’組培苗切取單株小苗，保留頂部葉片切除須根后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培養(yǎng)7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入香蕉組培苗的培養(yǎng)基中心位置，距離植株1cm左右，每個(gè)組培瓶接種一個(gè)印度梨形孢菌塊。培養(yǎng)溫度25±2℃，2000lx，光照時(shí)間12h/d。

接種印度梨形孢后每隔10天測(cè)量一次‘天寶蕉’組培苗株高、葉片數(shù)、生根數(shù)及根長(zhǎng)，30天后拍照記錄見(jiàn)圖2，數(shù)據(jù)具體結(jié)果見(jiàn)表3、表4。從表3、表4中可以看出，接種印度梨形孢的天寶蕉組培苗株高平均值略高于對(duì)照組；在接種后20天和30天，葉片數(shù)平均值顯著高于對(duì)照組，平均根長(zhǎng)在20天時(shí)顯著優(yōu)于對(duì)照；在接種后10天，接種了印度梨形孢的天寶蕉組培苗平均數(shù)生根極顯著高于對(duì)照組，根系更旺盛，須根數(shù)和根長(zhǎng)顯著優(yōu)于對(duì)照，根系活力更強(qiáng)。

表3印度梨形孢對(duì)‘天寶蕉’組培苗株高、葉片數(shù)的影響

表4印度梨形孢對(duì)‘天寶蕉’組培苗生根數(shù)、根長(zhǎng)的影響

實(shí)施例3：

1、印度梨形孢的培養(yǎng)

將馬鈴薯洗凈去皮稱重200g，切成細(xì)小的塊狀或條狀，加800ml蒸餾水入鍋煮沸20-30min至馬鈴薯熟透，4層紗布過(guò)濾，稱取20g葡萄糖和20g瓊脂分別加入濾液中，蒸餾水定容至1l并煮沸溶解，分裝到三角瓶中高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），稍涼后倒入培養(yǎng)皿板中封口待用，配制成pda固體培養(yǎng)基。

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入pda固體培養(yǎng)基平板中間，28℃倒置黑暗培養(yǎng)7天后備用。

2、香蕉組培苗生根培養(yǎng)基的配制

生根培養(yǎng)基的配方為ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l瓊脂，ph5.8，煮沸分裝至組培瓶中，每瓶30ml左右，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）待用。

3、印度梨形孢與香蕉組培苗共培養(yǎng)

將正常繼代保存培養(yǎng)的福州粉蕉1號(hào)組培苗切取單株小苗，保留頂部葉片切除須根后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培養(yǎng)7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入香蕉組培苗的培養(yǎng)基中心位置，距離植株1cm左右，每個(gè)組培瓶接種一個(gè)印度梨形孢菌塊。培養(yǎng)溫度25±2℃，2000lx，光照時(shí)間12h/d。

接種印度梨形孢后每隔10天測(cè)量一次福州粉蕉1號(hào)組培苗株高、葉片數(shù)、生根數(shù)，30天后拍照記錄見(jiàn)圖3，數(shù)據(jù)具體結(jié)果見(jiàn)表5、表6。從表5、表6中可以看出，接種印度梨形孢的福州粉蕉1號(hào)組培苗株高在接種后20天顯著高于對(duì)照，葉片數(shù)和生根數(shù)平均值上均高于對(duì)照組，根系更旺盛豐盈且更粗壯。

表5印度梨形孢對(duì)福州粉蕉1號(hào)組培苗株高、葉片數(shù)的影響

表6印度梨形孢對(duì)福州粉蕉1號(hào)組培苗生根數(shù)的影響

實(shí)施例4：

1、印度梨形孢的培養(yǎng)

將馬鈴薯洗凈去皮稱重200g，切成細(xì)小的塊狀或條狀，加800ml蒸餾水入鍋煮沸20-30min至馬鈴薯熟透，4層紗布過(guò)濾，稱取20g葡萄糖和20g瓊脂分別加入濾液中，蒸餾水定容至1l并煮沸溶解，分裝到三角瓶中高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），稍涼后倒入培養(yǎng)皿板中封口待用，配制成pda固體培養(yǎng)基。

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入pda固體培養(yǎng)基平板中間，28℃倒置黑暗培養(yǎng)7天，獲得印度梨形孢。

2、香蕉組培苗生根培養(yǎng)基的配制

生根培養(yǎng)基的配方為ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l瓊脂，ph5.8，煮沸分裝至組培瓶中，每瓶30ml左右，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）待用。

3、印度梨形孢與香蕉組培苗共培養(yǎng)

將正常繼代保存培養(yǎng)的福州芭蕉組培苗切取單株小苗，保留頂部葉片切除須根后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培養(yǎng)7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落邊緣直徑為5mm的菌塊，接入香蕉組培苗的培養(yǎng)基中心位置，距離植株1cm左右，每個(gè)組培瓶接種一個(gè)印度梨形孢菌塊。培養(yǎng)溫度25±2℃，2000lx，光照時(shí)間12h/d。

接種印度梨形孢后每隔10天測(cè)量一次福州粉蕉1號(hào)組培苗株高、葉片數(shù)、生根數(shù)，30天后拍照記錄見(jiàn)圖4，數(shù)據(jù)具體結(jié)果見(jiàn)表7、表8。由表7、表8可以看出，接種印度梨形孢的福州芭蕉組培苗株高、葉片上均與對(duì)照組差異不大，而生根數(shù)上與對(duì)照組的差異極顯著，約為對(duì)照的2倍，根系更旺盛且更粗壯，促生效果明顯。

表7印度梨形孢對(duì)福州芭蕉組培苗株高、葉片數(shù)的影響

表8印度梨形孢對(duì)福州芭蕉組培苗生根數(shù)的影響

由以上實(shí)施例可以看出：利用印度梨形孢促進(jìn)植物生根的作用，將其接種至生根培養(yǎng)基中與香蕉組培苗共培養(yǎng)，接種后30天可以顯著促進(jìn)香蕉苗的生根數(shù)和根系粗度，且由實(shí)驗(yàn)得出，在接種印度梨形孢3周左右即可達(dá)到常規(guī)組培苗移栽要求，縮短了香蕉組培苗生根周期，具有較大的生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值。在本實(shí)驗(yàn)中，采用同一種生根培養(yǎng)基，在接入印度梨形孢后均能促進(jìn)以上4種香蕉種質(zhì)組培苗根系的生長(zhǎng)。此外，利用本發(fā)明獲得的香蕉苗有印度梨形孢定殖，可以促進(jìn)香蕉苗對(duì)土壤介質(zhì)的吸收，提高香蕉苗的生長(zhǎng)和抗逆能力，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明，對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明所提交的權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍。