一種高精度aa(含碳源和固定介質(zhì))培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)模化制作方法
【專利說(shuō)明】 —種高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；?br> 作方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明公開了一種高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地說(shuō)是一種包括有準(zhǔn)確計(jì)算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨(dú)母液制備、啟封使用等六個(gè)步驟，以期獲得不同批次和批次之間誤差極小的培養(yǎng)基質(zhì)、減少試驗(yàn)誤差的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物組織培養(yǎng)技術(shù)或無(wú)土栽培技術(shù)通常需要配制培養(yǎng)基母液，即配制擴(kuò)大一定倍數(shù)、含有各種類型試劑的液體。然而，由于母液含有不同類型試劑，常常分為大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)元素四大類，而四大類所擴(kuò)大的倍數(shù)不同，導(dǎo)致藥品使用質(zhì)量不一致，一則容易出現(xiàn)計(jì)算誤差；二則藥品的廠家、質(zhì)量不一致，即使計(jì)算、稱量一致，也會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果；三則由于母液為液體狀態(tài)，在春夏之交季節(jié)，由于氣溫上升以及濕度增大，極其容易導(dǎo)致母液感染細(xì)菌、霉菌，導(dǎo)致母液中呈現(xiàn)不同顏色或出現(xiàn)沉淀的現(xiàn)象，浪費(fèi)了原料；四則會(huì)因稱量者對(duì)容器刻度的認(rèn)知(尤其是微量元素)、儀器精密度的不同而出現(xiàn)較大誤差。
[0003]鑒于母液配制的上述缺點(diǎn)，用常規(guī)的母液配制培養(yǎng)基，常常會(huì)出現(xiàn)因稱量者、藥品、季節(jié)等因素而導(dǎo)致的試驗(yàn)結(jié)果失敗或無(wú)法重復(fù)的現(xiàn)象，極大的影響了運(yùn)用植物組織培養(yǎng)或無(wú)土栽培技術(shù)開展試驗(yàn)的進(jìn)程，打擊了試驗(yàn)者的信心。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]一種高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))固體培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，其特征在于，所述的方法中包括有準(zhǔn)確計(jì)算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨(dú)母液制備、啟封使用等六個(gè)步驟。
[0005]根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六個(gè)步驟具體操作如下:
①準(zhǔn)確計(jì)算:將高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))基本培養(yǎng)基所含的18種元素?cái)U(kuò)大1000倍，即二水氯化鈣440g，磷酸二氫鉀170g，七水硫酸鎂370g，氯化鉀2940g，碘化鉀0.83g，硼酸6.2g，二水鑰酸鈉0.25g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g，肌醇100g，鹽酸硫胺素0.5g，甘氨酸75g，L-谷氨酰胺877g，L-天冬氨酸266g，L-精氨酸228g，瓊脂粉5000g，綿白糖30000g，2種元素六水氯化鈷和五水硫酸銅擴(kuò)大10000倍，即各0.25g ；
②精確稱量:按照①中計(jì)算的結(jié)果準(zhǔn)確稱量，尤其是要用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱量各0.25g的六水氯化鈷和五水硫酸銅；
③先少后多地混合:按照量的少多進(jìn)行先后混合，即按照二水鑰酸鈉、鹽酸硫胺素、碘化鉀、硼酸、七水硫酸鋅、四水硫酸錳、乙二胺四乙酸鈉鐵、甘氨酸、肌醇、磷酸二氫鉀、L-精氨酸、L-天冬氨酸、七水硫酸鎂、二水氯化鈣、L-谷氨酰胺、氯化鉀、瓊脂粉、綿白糖的順序混合均勻，共計(jì)40540.73g ； ④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進(jìn)行密封；
⑤單獨(dú)母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液；
⑥啟封使用:根據(jù)需要，每IL蒸餾水中加入準(zhǔn)確稱量的上述固體基質(zhì)40.54g，加熱待其完全溶解后加入ιοομ?六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨(dú)母液,進(jìn)而加入其它所需試劑即可。
[0006]本發(fā)明的有益效果:該高精密度培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)模化制作方法具有以下特點(diǎn)，即不同批次的基質(zhì)之間無(wú)計(jì)算誤差；由于18種試劑都擴(kuò)大了 1000倍，2種試劑擴(kuò)大了 10000倍，不同批次的基質(zhì)之間的稱量誤差極小，精密度高；理論上，由于固體基質(zhì)每次為1000倍的使用量(以每次IL計(jì)算)，即可以配制1000L的上述配方，液體母液每次僅需要ΙΟΟμ?，批次內(nèi)部不會(huì)出現(xiàn)因?yàn)槭褂貌煌瑥S家、不同時(shí)期的試劑而導(dǎo)致的人為誤差；擴(kuò)大后的固體基質(zhì)為每250g密封于一個(gè)塑料容器中，可避免因天氣、溫度、水分等外界因素影響導(dǎo)致出現(xiàn)液體母液常見的沉淀、發(fā)霉等現(xiàn)象，而液體基質(zhì)僅為兩種元素的混合。擴(kuò)大10000倍后精密度高；上述的諸多優(yōu)點(diǎn)都為以該培養(yǎng)基為基質(zhì)開展的后續(xù)試驗(yàn)，獲得準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果奠定基石出O O
[0007]【具體實(shí)施方式】:
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述。
[0008]本實(shí)施例中一種高精度M(含碳源和固定介質(zhì))固體培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，包括有準(zhǔn)確計(jì)算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨(dú)母液制備、啟封使用等六個(gè)步驟。
[0009]上述六個(gè)步驟具體操作如下:
①準(zhǔn)確計(jì)算:將高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))固體基本基所含的40種元素?cái)U(kuò)大1000倍，即二水氯化鈣440g，磷酸二氫鉀170g，七水硫酸鎂370g，氯化鉀2940g，碘化鉀0.83g，硼酸6.2g，二水鑰酸鈉0.25g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，六水氯化鈷和五水硫酸銅各0.025g,乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g,肌醇10g,鹽酸硫胺素0.5g,甘氨酸75g, L-谷氨酰胺877g，L-天冬氨酸266g，L-精氨酸228g，瓊脂粉5000g，綿白糖30000g ；
②精確稱量:按照①中計(jì)算的結(jié)果準(zhǔn)確稱量，尤其是要用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱量各0.025g的六水氯化鈷和五水硫酸銅；
③先少后多地混合:按照量的少多進(jìn)行先后混合，即按照六水氯化鈷、五水硫酸銅、二水鑰酸鈉、鹽酸硫胺素、碘化鉀、硼酸、七水硫酸鋅、四水硫酸錳、乙二胺四乙酸鈉鐵、甘氨酸、肌醇、磷酸二氫鉀、L-精氨酸、L-天冬氨酸、七水硫酸鎂、二水氯化鈣、L-谷氨酰胺、氯化鉀、瓊脂粉、綿白糖的順序混合均勻，共計(jì)40540.73g ；
④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進(jìn)行密封；
⑤單獨(dú)母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液；
⑥啟封使用:根據(jù)需要，每IL蒸餾水中加入準(zhǔn)確稱量的上述基質(zhì)40.54g，加熱待其完全溶解后加入100ML六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨(dú)母液。
[0010]將上述基質(zhì)配制后的IL溶液加入Iml的IN的Κ0Η，分裝于30個(gè)200ml的玻璃瓶中，121°C滅菌20min后。于超凈工作臺(tái)上接種紅葉石楠愈傷組織，25°C黑暗條件下培養(yǎng)30d后，愈傷組織分散且生長(zhǎng)良好，呈乳黃色。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒ǎ涮卣髟谟?，所述的方法中包括有準(zhǔn)確計(jì)算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨(dú)母液制備、啟封使用等六個(gè)步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六個(gè)步驟具體操作如下: ①準(zhǔn)確計(jì)算:將高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))基本培養(yǎng)基所含的18種元素?cái)U(kuò)大1000倍，即二水氯化鈣440g，磷酸二氫鉀170g，七水硫酸鎂370g，氯化鉀2940g，碘化鉀0.83g，硼酸6.2g，二水鑰酸鈉0.25g，七水硫酸鋅8.6g，四水硫酸錳22.3g，乙二胺四乙酸鈉鐵36.5g，肌醇100g，鹽酸硫胺素0.5g，甘氨酸75g，L-谷氨酰胺877g，L-天冬氨酸266g，L-精氨酸228g，瓊脂粉5000g，綿白糖30000g，2種元素六水氯化鈷和五水硫酸銅擴(kuò)大10000倍，即各0.25g ； ②精確稱量:按照①中計(jì)算的結(jié)果準(zhǔn)確稱量，尤其是要用萬(wàn)分之一天平準(zhǔn)確稱量各0.25g的六水氯化鈷和五水硫酸銅； ③先少后多地混合:按照量的少多進(jìn)行先后混合，即按照二水鑰酸鈉、鹽酸硫胺素、碘化鉀、硼酸、七水硫酸鋅、四水硫酸錳、乙二胺四乙酸鈉鐵、甘氨酸、肌醇、磷酸二氫鉀、L-精氨酸、L-天冬氨酸、七水硫酸鎂、二水氯化鈣、L-谷氨酰胺、氯化鉀、瓊脂粉、綿白糖的順序混合均勻，共計(jì)40540.73g ； ④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照250g每瓶的要求分裝于塑料容器中，并進(jìn)行密封； ⑤單獨(dú)母液制備:六水氯化鈷和五水硫酸銅各稱量0.25g，溶于IL蒸餾水中，配制成10000倍母液； ⑥啟封使用:根據(jù)需要，每IL蒸餾水中加入準(zhǔn)確稱量的上述固體基質(zhì)40.54g，加熱待其完全溶解后加入ιοομ?六水氯化鈷和五水硫酸銅的單獨(dú)母液,進(jìn)而加入其它所需試劑即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該高精密度培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒ň哂幸韵绿攸c(diǎn)，即不同批次的基質(zhì)之間無(wú)計(jì)算誤差；由于18種試劑都擴(kuò)大了 1000倍，2種試劑擴(kuò)大了 10000倍，不同批次的基質(zhì)之間的稱量誤差極小，精密度高；理論上，由于固體基質(zhì)每次為1000倍的使用量(以每次IL計(jì)算)，即可以配制1000L的上述配方，液體母液每次僅需要ΙΟΟμ?，批次內(nèi)部不會(huì)出現(xiàn)因?yàn)槭褂貌煌瑥S家、不同時(shí)期的試劑而導(dǎo)致的人為誤差；擴(kuò)大后的固體基質(zhì)為每250g密封于一個(gè)塑料容器中，可避免因天氣、溫度、水分等外界因素影響導(dǎo)致出現(xiàn)液體母液常見的沉淀、發(fā)霉等現(xiàn)象，而液體基質(zhì)僅為兩種元素的混合；擴(kuò)大10000倍后精密度高；上述的諸多優(yōu)點(diǎn)都為以該培養(yǎng)基為基質(zhì)開展的后續(xù)試驗(yàn)，獲得準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果奠定基礎(chǔ)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?；谱鞣椒?，屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。首先計(jì)算基質(zhì)所含的18種元素?cái)U(kuò)大1000倍后的需求量以及CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O擴(kuò)大10000倍后的需求量；準(zhǔn)確稱量上述藥品；將18種元素按照需求量的少多進(jìn)行先后混合、密封；將CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O用1L蒸餾水溶解后備用；根據(jù)需要分別啟封。該方法制備的高精度AA(含碳源和固定介質(zhì))培養(yǎng)基質(zhì)，操作方便、快速、應(yīng)用簡(jiǎn)單、不同批次以及批次內(nèi)誤差小，且避免了人為操作以及外界因素影響導(dǎo)致出現(xiàn)誤差大、沉淀、發(fā)霉等現(xiàn)象，可運(yùn)用于植物組織培養(yǎng)等生物技術(shù)用途。
【IPC分類】A01H4-00, A01G31-00
【公開號(hào)】CN104604728
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510082862
【發(fā)明人】錢家靜
【申請(qǐng)人】錢家靜
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2015年2月16日