一種銳藥竹的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種銳藥竹的快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]銳藥竹{Oxytenanthera,我國不產(chǎn)，是非洲竹區(qū)最優(yōu)良的叢生竹種，中型，分布于熱帶非洲的坦桑尼亞。竹材可做建筑材料、制漿造紙，紙漿得率高，其新竹砍梢的傷流液可用于釀酒。竹液經(jīng)發(fā)酵后制成美味飲料。
[0003]目前，國內(nèi)外鮮有對(duì)銳藥竹快速繁殖方法的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種銳藥竹的快速繁殖方法的技術(shù)方案。
[0005]所述的一種銳藥竹的快速繁殖方法，其特征在于包括以下步驟:
1)獲取無菌材料
將包裹于竹節(jié)上的葉仔細(xì)剝除，優(yōu)選完整、剛要萌發(fā)新芽的竹節(jié)或頂芽作為培養(yǎng)材料，用洗衣粉或洗衣液清洗材料后，在自來水下流動(dòng)沖洗30min后于超凈工作臺(tái)上，用75%的乙醇浸泡20-30s，再用0.1%的升汞溶液浸泡8-15min后，用無菌水沖洗6-8次，并吸干表面水分；
2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
將步驟I)得到的培養(yǎng)材料，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2500LUX、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)7天，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有NAA 0.02-0.lmg/L、6-BA 0.05-0.2 mg/L、中藥多糖l_5mg/L，所述的中藥多糖由柴胡、大黃、茯苓、枸杞和丹參構(gòu)成的中藥組合物中提取得到；
3)增殖培養(yǎng)
將步驟2)得到的外植體轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，先進(jìn)行暗處理I周，再在光照強(qiáng)度2500Lux、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)12-15天，所述的增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有占MS培養(yǎng)基總重量0.1-0.5%的竹醋液和0.2-0.6%的黃秋葵汁；
4)生根培養(yǎng)
將步驟3)得到的外植體轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2500LUX、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)15-20天，所述的生根培養(yǎng)基是以以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有6-BA 0.02-0.1 mg/L、IBA0.02-0.I mg/L和中藥多糖l_5mg/L，所述的中藥多糖由熟地黃、葛根、銀杏葉、黃芩、枳殼、薄荷、甘草構(gòu)成的中藥組合物中提取得到；
5)移栽
將已生根的植株去除，移栽至由黃心土、珍珠巖和泥炭土構(gòu)成的混合基質(zhì)上。
[0006]所述的一種銳藥竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步驟2)中中藥多糖按以下步驟制得:
a、按柴胡20?40份、大黃10?30份、茯苓10?30份、枸杞5?20份和丹參5?20份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量10倍的純化水，水浴至900C，并保持在90°C，熬制2小時(shí)，熬制過程中每10分鐘攪拌一次；
b、棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)1000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
C、將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀得到粗制中藥多糖；
d、用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后1000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
e、將d中上清液進(jìn)行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液；
f、將e中中藥多糖濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)合中藥多糖凍干粉。
[0007]所述的一種銳藥竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步驟2)中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有NAA 0.04-0.0.08mg/L、6-BA0.08-0.12 mg/L、中藥多糖 2_3mg/L。
[0008]所述的一種銳藥竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步驟3)中增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有占MS培養(yǎng)基總重量0.2-0.3%的竹醋液和
0.4-0.5%的黃秋葵汁。
[0009]所述的一種銳藥竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步驟4)中中藥多糖按以下步驟制得:
a、按熟地黃20?40份、葛根20?40份、銀杏葉10?30份、黃芩10?30份、枳殼5?10份、薄荷5?10份、甘草5?10份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量10倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小時(shí)，熬制過程中每10分鐘攪拌一次；
b、棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)1000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
C、將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀得到粗制中藥多糖；
d、用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后1000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
e、將d中上清液進(jìn)行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液；
f、將e中中藥多糖濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)合中藥多糖凍干粉。
[0010]所述的一種銳藥竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步驟4)中生根培養(yǎng)基是以以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有6-BA 0.04-0.0.06 mg/L、ΙΒΑ0.04-0.06 mg/L和中藥多糖2-3mg/L。
[0011]所述的一種銳藥竹的快速繁殖方法，其特征在于所述的步驟5)中黃心土、珍珠巖和泥炭土按重量比1:2:3混合。
[0012]本發(fā)明的有益效果是:采用本發(fā)明所提供的銳藥竹的快速繁殖方法，增殖周期短，繁殖系數(shù)高，移栽成活率高，減少了組培快繁的環(huán)節(jié)，節(jié)約了生產(chǎn)成本，且植株的根系粗壯、新梢長勢好、莖桿粗壯，移栽后的成活率高達(dá)98%以上。
【具體實(shí)施方式】
[0013]以下結(jié)合實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0014]實(shí)施例1
1)獲取無菌材料
將包裹于竹節(jié)上的葉仔細(xì)剝除，優(yōu)選完整、剛要萌發(fā)新芽的竹節(jié)或頂芽作為培養(yǎng)材料，用洗衣粉或洗衣液清洗材料后，在自來水下流動(dòng)沖洗30min后于超凈工作臺(tái)上，用75%的乙醇浸泡25s，再用0.1%的升汞溶液浸泡1min后,用無菌水沖洗7次,并吸干表面水分；
2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
將步驟I)得到的培養(yǎng)材料，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2500LUX、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)7天，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有NAA 0.06mg/L、6-BA 1.2 mg/L、中藥多糖3mg/L，所述的中藥多糖由柴胡、大黃、茯苓、枸杞和丹參構(gòu)成的中藥組合物中提取得到；
3)增殖培養(yǎng)
將步驟2)得到的外植體轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，先進(jìn)行暗處理I周，再在光照強(qiáng)度2500Lux、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)14天，所述的增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有占MS培養(yǎng)基總重量0.3%的竹醋液和0.4%的黃秋葵汁，其中黃秋葵汁由新鮮黃秋葵磨碎榨汁得到；
4)生根培養(yǎng)
將步驟3)得到的外植體轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2500LUX、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)18天，所述的生根培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有6-BA0.04 mg/L、IBA0.06mg/L和中藥多糖3mg/L，所述的中藥多糖由熟地黃、葛根、銀杏葉、黃芩、枳殼、薄荷、甘草構(gòu)成的中藥組合物中提取得到；
5)移栽
將已生根的植株去除，移栽至由黃心土、珍珠巖和泥炭土按1:2:3構(gòu)成的混合基質(zhì)上，移栽后的成活率為99%。
[0015]該實(shí)施例1的步驟2)中中藥多糖按以下步驟制得:
a、按柴胡30份、大黃20份、茯苓20份、枸杞10份和丹參10份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量10倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小時(shí),熬制過程中每10分鐘攪拌一次；
b、棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)1000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
C、將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀得到粗制中藥多糖；
d、用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后1000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
e、將d中上清液進(jìn)行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液； f、將e中中藥多糖濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)合中藥多糖凍干粉。
[0016]該實(shí)施例1的步驟4)中中藥多糖按以下步驟制得:
a、按熟地黃30份、葛根30份、銀杏葉20份、黃芩20份、枳殼8份、薄荷8份、甘草8份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量10倍的純化水，水浴至900C，并保持在90°C，熬制2小時(shí)，熬制過程中每10分鐘攪拌一次；
b、棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)1000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
C、將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀得到粗制中藥多糖；
d、用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后1000rpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
e、將d中上清液進(jìn)行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液；
f、將e中中藥多糖濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)合中藥多糖凍干粉。
[0017]實(shí)施例2
1)獲取無菌材料
將包裹于竹節(jié)上的葉仔細(xì)剝除，優(yōu)選完整、剛要萌發(fā)新芽的竹節(jié)或頂芽作為培養(yǎng)材料，用洗衣粉或洗衣液清洗材料后，在自來水下流動(dòng)沖洗30min后于超凈工作臺(tái)上，用75%的乙醇浸泡20s，再用0.1%的升汞溶液浸泡8min后,用無菌水沖洗8次，并吸干表面水分；
2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
將步驟I)得到的培養(yǎng)材料，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2500LUX、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)7天，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有NAA 0.02mg/L、6-BA 0.05mg/L、中藥多糖lmg/L，所述的中藥多糖由柴胡、大黃、茯苓、枸杞和丹參構(gòu)成的中藥組合物中提取得到；
3)增殖培養(yǎng)
將步驟2)得到的外植體轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，先進(jìn)行暗處理I周，再在光照強(qiáng)度2500Lux、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)12天，所述的增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有占MS培養(yǎng)基總重量0.1%的竹醋液和0.2%的黃秋葵汁，其中黃秋葵汁由新鮮黃秋葵磨碎榨汁得到；
4)生根培養(yǎng)
將步驟3)得到的外植體轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2500LUX、溫度25±2°C、光照條件16h/d下培養(yǎng)15天，所述的生根培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后按比例添加有6-BA0.04 mg/L、IBA0.06mg/L和中藥多糖3mg/L，所述的中藥多糖由熟地黃、葛根、銀杏葉、黃芩、枳殼、薄荷、