一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]星油藤(Plukenetia volubilis L.)又名南美油藤、印加果、印加花生等，是大戟科一種多年生木質(zhì)藤本油料植物，原產(chǎn)于南美洲安第斯山脈地區(qū)熱帶雨林。從星油藤種子中榨取的植物油，由于其富含多元不飽和脂肪酸且以Omega脂肪酸為主，ω-3，ω-6，ω-9三種不飽和脂肪酸高達92%以上，因此被認為是世界上最好的植物油，可用于食品、保健、制藥、化妝品等方面，對調(diào)整血脂、預防心血管疾病、保養(yǎng)肌膚等也有顯著的作用。星油藤被引進中國科學院西雙版納熱帶植物園，由于應用前景廣泛，云南、貴州等省市大力發(fā)展星油藤產(chǎn)業(yè)。但是，星油藤為新引進作物，資源較少，價格昂貴，不利于其大面積推廣種植。
[0003]目前，星油藤種苗主要通過種子和扦插方式繁育，種子播種雖然可在短時間內(nèi)獲得大量幼苗，但因星油藤為雌雄同株異花授粉植物，后代易發(fā)生性狀分離，遺傳性狀不穩(wěn)定，易丟失親本的優(yōu)良性狀。而扦插方式繁育需要大量的枝條，且從扦插到移栽大田需2個月，耗時較長。因此，釆用植物組織培養(yǎng)技術(shù)來緩解其種苗緊張壓力、進行可持續(xù)開發(fā)利用是十分必要的。因此，本發(fā)明以星油藤帶節(jié)莖段為外植體，通過不定芽誘導、增殖、生根、煉苗移栽等過程成功獲得了星油藤離體再植株，建立星油藤組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，對于進行星油藤優(yōu)良品種的快速繁殖和大面積推廣、促進星油藤的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法，通過誘導不定芽、叢生芽增殖、試管苗生根、煉苗移栽等階段成功獲得了星油藤離體再植株，建立星油藤組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法，包括以下的工藝步驟:
(I)誘導不定芽:選取星油藤當年生帶節(jié)藤莖為外植體，經(jīng)75%酒精消毒5?20秒種后，用無菌水沖洗2?5次后置于0.1%的升汞溶液中消毒10?30分鐘，然后用無菌水沖洗3?6次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后剪切成2?4cm左右的帶節(jié)藤莖，并接種到誘導培養(yǎng)基上，于25?28°C條件下全暗培養(yǎng)，直至誘導形成不定芽。
[0006](2)繼代培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽從基部切下，接種到增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，接種后置于每天光照12?15小時，光照強度為1500?20001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，20?30天轉(zhuǎn)接一次。
[0007](3)生根培養(yǎng):將步驟(2)繼代培養(yǎng)長至2?4cm的不定芽分切并接種到生根培養(yǎng)基上進行誘導生根，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)3?5天，然后置于每天光照12?15小時，光照強度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根。
[0008](4)煉苗移栽:將長至6?8cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土:農(nóng)家肥:河沙(8:1:1)混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。
[0009]上述步驟(I)所述的誘導培養(yǎng)基為:MS+0.1?0.5mg/LTDZ+l.0?2.0mg/L
6-BA+0.1 ?0.5mg/LNAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8;
上述步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.0?2.0mg/L 6-BA+0.1?0.5mg/LNAA+15?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8 ;
上述步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.1?0.5mg/LIBA+l.0?2.0mg/L GGR(注:雙吉爾-GGR，購自北京艾比蒂研宄開發(fā)中心)+15?30g/L蔗糖+3.5?6.0g/L瓊脂，pH為5.4 ?5.8ο
[0010]本發(fā)明的優(yōu)點是:星油藤(Plukenetia volubilis L.)又名南美油藤、印加果、印加花生等，是大戟科一種多年生木質(zhì)藤本油料植物，原產(chǎn)于南美洲安第斯山脈地區(qū)熱帶雨林。從星油藤種子中榨取的植物油被認為是世界上最好的植物油，可用于食品、保健、制藥、化妝品等方面。目前，星油藤種苗主要通過種子和扦插方式繁育，存在周期長、成本高、效率低下等問題。因此，本發(fā)明以星油藤帶節(jié)莖段為外植體，通過不定芽誘導、增殖、生根、煉苗移栽等過程成功獲得了星油藤離體再植株，建立星油藤組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，對于進行星油藤優(yōu)良品種的快速繁殖和大面積推廣、促進星油藤的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。本發(fā)明組織培養(yǎng)快繁方法，具有簡單、易行、經(jīng)濟的特點。通過本發(fā)明育成的星本發(fā)明利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進行星油藤種苗規(guī)?；a(chǎn)，建立了星油藤油藤組培苗移栽成活率達到98%以上，可以為星油藤規(guī)模化種植提供優(yōu)質(zhì)種苗保障。
【具體實施方式】
[0011]以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0012]實施例1
(I)誘導不定芽:選取星油藤當年生帶節(jié)藤莖為外植體，經(jīng)75%酒精消毒12秒種后，用無菌水沖洗3次后置于0.1%的升汞溶液中消毒15分鐘，然后用無菌水沖洗5次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后剪切成2?4cm左右的帶節(jié)藤莖，并接種到誘導培養(yǎng)基上，于25°C條件下全暗培養(yǎng)18天即可誘導形成不定芽，污染率低至5%以下，不定芽誘導率可達92.7%。所述的誘導培養(yǎng)基為:MS+0.2mg/LTDZ+l.2mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L 蔗糖+4.5g/L 瓊脂，pH為 5.5;
(2)繼代培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽從基部切下，接種到增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，接種后置于每天光照13小時，光照強度為15001x，培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)，20天轉(zhuǎn)接一次，增殖系數(shù)為?.84。所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.5mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+25g/L蔗糖+5.0g/L瓊脂，pH為5.5 ;
(3)生根培養(yǎng):將步驟(2)繼代培養(yǎng)長至2?4cm的不定芽分切并接種到生根培養(yǎng)基上進行誘導生根，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)3天，然后置于每天光照14小時，光照強度為25001x，培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)10天即開始生根，生根率可達96.2%。所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.3mg/LIBA+l.0mg/L GGR (注:雙吉爾-GGR，購自北京艾比蒂研宄開發(fā)中心)+15g/L鹿糖+3.5g/L瓊脂，pH為5.5。
[0013](4)煉苗移栽:將長至6?8cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土:農(nóng)家肥:河沙(8:1:1)混合成的基質(zhì)中并定植于大田中，移栽成活率為100%。
[0014]實施例2
(I)誘導不定芽: