一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物的組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種芍藥2η配子誘導(dǎo)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 芍藥（Peaonia lactiflora Pali.)是芍藥科芍藥屬的多年生宿根草本植物，在中 國(guó)有3900多年的栽培歷史，為中國(guó)的傳統(tǒng)名花。我國(guó)的種質(zhì)資源極其豐富，擁有芍藥品種 300多個(gè)，但缺乏如新奇花色、花型、切花品種等的培育，歐美等國(guó)雖起步較晚，但在新品種 的培育及國(guó)際切花市場(chǎng)份額等方面，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)領(lǐng)先于我國(guó)，因此加快芍藥新品種培育勢(shì)在必 行。
[0003] 2n配子是多倍體的一種特殊存在形式，也是自然界多倍體產(chǎn)生的主要途徑之一。 多倍體植物以其花葉器官增大粗壯、抗逆性增加等特點(diǎn)，尤其適合以觀賞為主要目的的花 丼培育及品質(zhì)改良。日前，在芍藥領(lǐng)域尚未有關(guān)于2n花粉發(fā)生及2n配子誘導(dǎo)等方面的研 宄。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)芍藥領(lǐng)域尚未利用2n配子進(jìn)行品種選育的現(xiàn)狀，本發(fā)明的目的在于提供一 種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其為以秋水仙素溶液誘導(dǎo)芍藥花蕾，待花蕾開花后取成熟花粉中 粒徑巨大的為芍藥2n配子。
[0005] 其中，所述秋水仙素溶液指質(zhì)量百分含量0. 02% -0. 1%的秋水仙素水溶液，優(yōu)選 為質(zhì)量百分含量〇. 1 %的秋水仙素水溶液。
[0006] 其中，所述秋水仙素溶液誘導(dǎo)的時(shí)間為每天上午10點(diǎn)之前。
[0007] 其中，所述秋水仙素溶液誘導(dǎo)為以注射法誘導(dǎo)或以包裹法誘導(dǎo)，優(yōu)選為注射法誘 導(dǎo)。
[0008] 所述注射法誘導(dǎo)，每次注射為向花蕾中注射秋水仙素溶液至液體滲出花蕾為止，2 小時(shí)后洗凈花蕾；注射次數(shù)優(yōu)選為5次（1天1次分5天完成）。
[0009] 所述包裹法誘導(dǎo)，每次包裹為以秋水仙素溶液浸透棉花后包裹花蕾，并在其外套 塑料袋，2小時(shí)后去除塑料袋和棉花洗凈花蕾。所述棉花優(yōu)選脫脂棉。包裹次數(shù)優(yōu)選為7次 (1天1次分7天完成）。
[0010] 其中，所述花蕾為直徑I. 5-3. Ocm的花蕾，優(yōu)選直徑I. 5-1. 9cm的花蕾。
[0011] 其中，所述粒徑巨大的標(biāo)準(zhǔn)為粒徑是正?；ǚ哿５?30% (含）以上。
[0012] 其中，所述芍藥，為芍藥品種粉玉奴。
[0013] 本發(fā)明還提供所述的一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法在芍藥新品種選育中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0015] (1)本發(fā)明根據(jù)秋水仙素不同濃度及不同處理方式處理芍藥的花器官，根據(jù)花粉 粒直徑大小的變化情況，最終確定秋水仙素處理的最佳濃度以及最佳處理方式，評(píng)估芍藥 品種粉玉奴2n花粉的發(fā)生頻率，提供了一種有效的誘導(dǎo)芍藥2n配子的方法。
[0016] (2)本發(fā)明對(duì)秋水仙素濃度及處理方式等對(duì)芍藥品種粉玉奴誘導(dǎo)2η花粉作了初 步探討，結(jié)果表明秋水仙素確實(shí)可以誘導(dǎo)芍藥產(chǎn)生2η花粉，操作簡(jiǎn)單，成本廉價(jià)，可推廣于 其他芍藥品種，以期為芍藥品種的品質(zhì)改良和種質(zhì)創(chuàng)新提供理論依據(jù)。
【附圖說明】
[0017] 圖1為實(shí)施例1注射法處理芍藥花蕾誘導(dǎo)2η配子的照片。
[0018] 圖2為實(shí)施例1正?；ɡ俚恼掌?。
[0019] 圖3為實(shí)施例1注射法處理后變異花蕾的照片。
[0020] 圖4為實(shí)施例1注射法處理后花粉粒的顯微照片。
[0021] 圖5為實(shí)施例2包裹法處理芍藥花蕾誘導(dǎo)2η配子的照片。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神 和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若 未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
[0023] 實(shí)施例1注射法誘導(dǎo)芍藥2η配子
[0024] 本實(shí)施例所用芍藥品種為粉玉奴，種植于北京市小湯山國(guó)家花丼工程技術(shù)中心芍 藥種質(zhì)資源圃，植株生長(zhǎng)良好，可正常開花。選取直徑為1. 5-3. 0的花蕾作為試驗(yàn)材料。
[0025] 按照L9(34)的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，秋水仙素溶液的質(zhì)量百分濃度分別設(shè)為0. 02%、 0. 05%、0. 1% ;注射次數(shù)分別為3次、5次、7次；花蕾直徑大小級(jí)別分別為：大2. 5-3. 0cm、 中 2. 0-2. 4cm、小 1. 5-1. 9cm。
[0026] 于每天上午十點(diǎn)之前對(duì)花蕾進(jìn)行注射法誘導(dǎo)，每次注射為向花蕾內(nèi)注射秋水仙素 溶液（見圖1)，注射量為溶液滲出花蕾為止，2h后用清水洗凈花蕾以去除藥液殘留。每個(gè) 處理30個(gè)花蕾，對(duì)照組用清水處理，3次重復(fù)。正?；ɡ俚恼掌妶D2,注射法處理后變異 花蕾的照片見圖3。
[0027] 處理后，待植株成熟取花粉粒制片，觀察測(cè)量花粉粒直徑，以花粉粒直徑顯著增大 作為誘導(dǎo)成功的鑒定指標(biāo)，并對(duì)2n花粉誘導(dǎo)頻率進(jìn)行估測(cè)。具體方法是將每個(gè)處理所得 花粉混合均勻，制成3-5個(gè)臨時(shí)涂片，每片觀察5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)花粉中2n花粉的百分率，于 Motic顯微鏡下進(jìn)行顯微照相，采用DPS軟件處理數(shù)據(jù)。根據(jù)前人的研宄結(jié)論，花粉倍性與 其直徑大小呈正相關(guān)性，因此可通過花粉直徑大小來判斷是否為2n花粉。本研宄也采用該 方法作為2n花粉誘導(dǎo)成功的標(biāo)志。2n花粉為花粉粒巨大者，粒徑巨大的標(biāo)準(zhǔn)為粒徑是正常 花粉粒的130% (含）以上。圖4為注射法處理后花粉粒的顯微照片，其中箭頭所指為2n 花粉。
[0028] 秋水仙素處理粉玉奴花蕾后，花粉粒直徑明顯增大外，花蕾形態(tài)也發(fā)生了變異，與 對(duì)照組相比，處理植株花蕾大多成橢圓形，花蕊外露，子房膨大嚴(yán)重，很多花蕾不能正常開 放，花藥多成黑色，有些花蕾甚至萎蔫死亡，對(duì)照組花藥無此現(xiàn)象。本實(shí)施例取對(duì)照組花粉 鏡檢后并未發(fā)現(xiàn)2n花粉，說明自然條件下2n花粉的發(fā)生率極低。
[0029] 秋水仙素注射法處理花蕾誘導(dǎo)2n花粉的結(jié)果見表1。
[0030] 表1秋水仙素注射法處理花蕾誘導(dǎo)2n花粉的正交極差分析
[0031]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，其為以秋水仙素溶液誘導(dǎo)芍藥花蕾，待花 蕾開花后取成熟花粉中粒徑巨大的為芍藥2n配子。
2. 如權(quán)利要求1所述一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述秋水仙素溶液指質(zhì) 量百分含量〇. 02% -0. 1 %的秋水仙素水溶液。
3. 如權(quán)利要求2所述一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述秋水仙素溶液指質(zhì) 量百分含量〇. 1 %的秋水仙素水溶液。
4. 如權(quán)利要求1所述一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述秋水仙素溶液誘導(dǎo) 的時(shí)間為每天上午10點(diǎn)之如。
5. 如權(quán)利要求1所述一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述秋水仙素溶液誘導(dǎo) 為以注射法誘導(dǎo)或以包裹法誘導(dǎo)； 所述注射法誘導(dǎo)，每次注射為向花蕾中注射秋水仙素溶液至液體滲出花蕾為止，2小時(shí) 后洗凈花蕾； 所述包裹法誘導(dǎo)，每次包裹為以秋水仙素溶液浸透棉花后包裹花蕾，并在其外套塑料 袋，2小時(shí)后去除塑料袋和棉花洗凈花蕾。
6. 如權(quán)利要求5所述一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述注射法誘導(dǎo)的注射 次數(shù)為5次。
7. 如權(quán)利要求5所述一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述包裹法誘導(dǎo)的包裹 次數(shù)為7次。
8. 如權(quán)利要求1所述一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述花蕾為直徑 1. 5-3. Ocm 的花蕾。
9. 如權(quán)利要求1所述一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述芍藥，為芍藥品種粉 玉奴。
10. 權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法在芍藥新品種選育中的應(yīng) 用。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種芍藥2n配子誘導(dǎo)方法，其為以秋水仙素溶液誘導(dǎo)芍藥花蕾，待花蕾開花后取成熟花粉中粒徑巨大的為芍藥2n配子。本發(fā)明的方法證實(shí)秋水仙素確實(shí)可以誘導(dǎo)芍藥產(chǎn)生2n花粉，操作簡(jiǎn)單，成本廉價(jià)，可推廣于其他芍藥品種，以期為芍藥品種的品質(zhì)改良和種質(zhì)創(chuàng)新提供理論依據(jù)。
【IPC分類】A01H1-06
【公開號(hào)】CN104855280
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510229538
【發(fā)明人】于曉南, 湯正嬌, 張啟翔, 楊華
【申請(qǐng)人】北京林業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2015年5月7日