血小板濃縮物保存方法
【專利說明】血小板濃縮物保存方法
[0001] 本發(fā)明要求2012年12月19日提交的美國專利申請系列第61/739, 327號的優(yōu)先 權(quán)，其通過引用納入本文。
[0002] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域（具體而言涉及血液成分分離領(lǐng)域）并可用于以血小板濃縮 物的形式保存血小板。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] -種保存細胞和細胞培養(yǎng)物（參見PCT專利申請公開號W0/2012/109107,其通過 引用納入本文）是已知的。研發(fā)該方法是為了減少有核細胞中的凋亡。本方法包括將有核 細胞保持在容器中并向該容器中充入含有氙氣的氣體，以至該容器中的壓力達到高于環(huán)境 氣壓0. 5-4. 0個大氣壓；將該容器在高于環(huán)境氣壓0. 5-4. 0個大氣壓下保持一段時間，該 期間容器內(nèi)溫度為22°C -37°C ;壓力維持在高于環(huán)境氣壓0. 5-4. 0個大氣壓時將容器內(nèi)溫 度降至0. 1°C -KTC并將容器保持一段時間；以及將容器中的壓力降至環(huán)境壓力并升溫至 22°C _37°C。通過實施這些步驟，該專利申請公開細胞發(fā)生的凋亡要低于不進行這類處理的 細胞。該方法的實施涉及將細胞置于能夠承受高于環(huán)境氣壓4.0個大氣壓的容器。已知標 準血小板儲存方法涉及在袋中儲存血小板。這類標準袋的接縫不允許使用這種袋實施上述 儲存方法。制造能夠耐受上述高壓的袋會提高成本，這是非常不可取的，因為這些袋是一次 性廣品。此外，該方法主要旨在保存有核細胞，而血小板是無核細胞。
[0005] 已知美國專利公開號2010/0009334(其通過引用納入本文）描述了一種儲存血 小板的方法。該方法涉及從全捐獻血液中制備血小板血漿；將該血小板血漿在約3. 5至5 巴的壓力下保持在含有65%至100%氙氣的氣體介質(zhì)中；隨后將該血小板血漿冷卻至約 3°C至6°C的溫度；以及將該血小板血漿儲存于上述溫度和氣體介質(zhì)的壓力的條件下。US 2010/0009334公開了通過將血小板濃縮物置于不透氣容器中來實施該方法，該不透氣容器 中在壓力下充有含氙氣的氣體介質(zhì)。US2010/0009334還公開了使用旨在儲存生物流體（具 體而言是血液或血液組分）的透氣袋并將該透氣袋置于不透氣容器中，該不透氣容器中在 壓力下充有含氙氣的氣體介質(zhì)。該方法提供了在至少一周的時間期間儲存血小板，這對于 一些應用而言可能不夠長。其次，該方法最好對小體積血小板濃縮物進行一一約毫升的單 位（即例如置于小瓶中）。認為在被這類體積的血小板血漿所部分填充的小瓶中存在足量 的氧氣（維持血漿中代謝過程所需）。然而，在實踐中，需要將血小板儲存在具有至少200ml 體積的標準袋而非小瓶中。在將血小板儲存于袋中時，血小板可獲得的氧氣可能不足以用 于有氧呼吸，這會限制血小板血漿儲存的持續(xù)時間。
[0006] 已知另一種在氣體混合物中保存血小板的方法（PCT申請?zhí)朠CT/ US2012/057211[W0 2013/049118]，其通過參考納入本文）。根據(jù)該方法，在18°C至23°C的 溫度下將血小板濃縮物（預先獲自人全血）保持在3. 5至5巴的壓力下氙氣含量為79 %至 95%且氧氣含量為5%至21 %的氣體混合物中，之后其冷卻至3°C至6°C的溫度并在上述氣 體混合物的組成和壓力以及上述溫度下放置儲存。在該方法中，氧氣用作氣體混合物的組 分，其中保存有含有血小板濃縮物的透氣袋。未描述用于該方法的儲存裝置的設(shè)計。
[0007] 已知用于壓力下在氣體介質(zhì)中保存血液或其組分的方法和裝置及其系統(tǒng)（PCT申 請?zhí)朠CT/US2012/043449 [WO 2012/177820]，其通過引用納入本文）。根據(jù)該發(fā)明，將血液 或血液組分置于由氙氣可滲透材料制成的袋中。隨后將該袋置于氣密性密封圓柱形腔體 內(nèi)，該腔體內(nèi)在壓力下充有含氙氣氣體（氙氣含量為至少65% )直至腔體中的壓力達到約 3. 5至5巴，隨后將該腔體置于3°C至6°C的溫度范圍內(nèi)儲存。經(jīng)設(shè)計以允許氙氣通過袋的 由透氣性材料制得的袋被用于實施該方法。在該方法中，含氙氣的氣體（在壓力下充入腔 體中）通過袋壁，此后使用氙氣飽和所述袋中的血液或血液組分。根據(jù)該方法，將含有血液 或血液組分的袋置于圓柱形腔體中并在儲存期間垂直放置該腔體。同樣垂直放置腔體內(nèi)的 袋并在儲存期間不攪動血液或血液組分。儲存期間不攪動并垂直放置袋可導致血小板沉積 在袋底部的小區(qū)域上，從而在儲存期末形成致密的沉淀。這類沉淀中的血小板可改變其特 性且相當大一部分血小板會被激活并粘在一起。彼此粘在一起的血小板生成微聚集體，其 可導致游離血小板數(shù)目的減少，其轉(zhuǎn)而導致血小板濃縮物有效性的降低。此外，血小板粘在 一起可導致形成相當大尺寸的聚集體，這對于接受者是有害的，因為輸注后這類聚集體能 夠堵塞血管，從而導致血液循環(huán)受到干擾。
[0008] 鑒于本領(lǐng)域的現(xiàn)有狀態(tài)，需要一種在壓力下保存血小板濃縮物而不導致形成血小 板的致密沉淀和聚集體的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明涉及研發(fā)一種保持血小板濃縮物的方法，涉及使用不會導致形成血小板的 致密沉淀和聚集體的壓力下氣體混合物（如氙氣和氧氣）。
[0010] 在本發(fā)明的一個非限制性方面中，提供了一種血小板濃縮物保存方法，其包括以 下階段：封裝血小板濃縮物，使用含有氙氣和氧氣的氣體混合物處理封裝的血小板濃縮物， 以及儲存經(jīng)處理的血小板濃縮物并準備使用。根據(jù)本發(fā)明的非限制性方法，將血小板濃縮 物置于氣密性密封袋（由可滲透氙氣和氧氣的材料制成）中。該袋可任選地具有平板容器 的一般外形。隨后可任選地將含有血小板濃縮物的袋置于其中含有氙氣和氧氣混合物的氣 密性密封腔體內(nèi)。氣體混合物中氙氣的含量大于海平面處空氣中氙氣含量。在本發(fā)明的 一個非限制性方面中，氣體混合物中氙氣的含量是至少5體積％且最多99. 99體積％ (如 5%,5. 001%,5. 002%......99. 988%、99. 989%、99. 99% )以及其間的任何數(shù)值或范圍。在 本發(fā)明的另一個非限制性方面中，氣體混合物中氙氣的含量是約50-99. 9體積％，通常約 55-99體積％，更通常約60-98體積％，更通常約70-97體積％，且更通常約79-95體積％。 在本發(fā)明的另一個非限制性方面中，氣體混合物中氧氣的含量是至少約0.01體積％。在 本發(fā)明的另一個非限制性方面中，氣體混合物中氧氣的含量是至少約〇. 01-50體積％ (例 如 0. 01%、0. 011%、0. 0112%......49. 998%、49. 999%、50% )以及其間的任何數(shù)值或范 圍。在本發(fā)明的另一個非限制性方面中，氣體混合物中氧氣的含量是約〇. 1-45體積％，通 常約2-40體積％，更通常約3-30體積％，且更通常約5-21體積％。該氣體混合物通常包含 0-5 體積％ (例如 0%、0? 0001%、0. 0002%......4. 998%、4. 999%、5% )以及其間的任何數(shù) 值或范圍的除氙氣或氧氣以外的氣體。在本發(fā)明的另一個非限制性方面中，在大于海平面 處大氣壓力（如Iatm)的壓力下充入氣體混合物。在本發(fā)明的另一個非限制性方面中，在 大于海平面處大氣壓力1-20巴（如1巴、I. 01巴、1. 02巴......19. 98巴、19. 99巴、20巴） 以及其間任何數(shù)值或范圍的壓力下充入氣體混合物。在本發(fā)明的另一個非限制性方面中， 在大于海平面處大氣壓力約1.01-20巴的壓力下充入氣體混合物，更通常在大于海平面處 大氣壓力約1. 1-15巴的壓力下，更通常在大于海平面處大氣壓力約1.5-10巴的壓力下， 更通常在大于海平面處大氣壓力約2-8巴的壓力下，且更通常在大于海平面處大氣壓力約 3. 5-5巴的壓力下。在本發(fā)明的另一個非限制性方面中，在通常至少約15°C的溫度下將氣 體混合物充入袋中。在本發(fā)明的另一個非限制性方面中，在15-35°C (例如15°C、15. 01°C、 15. 02°C……34. 98°C、34. 99°C、35°C )以及其間任何數(shù)值或范圍的溫度下將氣體混合物充 入袋中。在本發(fā)明的另一個非限制性方面中，在約18_35°C且更通常約20-24°C的溫度下 將氣體混合物充入袋中。在本發(fā)明的另一個非限制性方面中，通常將血小板濃縮物保持在 上述氣體混合物組成、氣體混合物壓力和溫度的條件下直至血小板被氙氣所部分飽和（如 50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%等）或完全飽和。此后，將含有血 小板濃縮物的袋冷卻至約15°C以下至袋中血小板濃縮物的凝固點（如約0°C)以上以及期 間任何數(shù)值或范圍的溫度（例如 〇. 01°C、0. 02°C、0. 03°C ……14. 97°C、14. 98°C、14. 99°C )， 隨后放置進行儲存。在本發(fā)明的另一個方面中，將含有血小板濃縮物的袋冷卻至〇. 〇l_15°C 的溫度，更通常約l-l〇°C的溫度，且更通常約3-6°C的溫度，隨后放置進行儲存。在本發(fā)明 的另一個非限制性方面中，儲存期間可任選地將血小板濃縮物的袋在上述組成和上述氣體 混合物、氣體壓力和溫度下置于大致水平的位置（平坦一側(cè)朝下）。出于本發(fā)明的目的，水 平位置定義為袋的縱軸與地表面（如地球表面）水平。在儲存血小板濃縮物后使用保存的 血小板濃縮物前，可任選地攪動袋中的內(nèi)容物（例如將袋置于振動器上，搖晃含有血小板 濃縮物的袋等）。在儲存血小板濃縮物后使用保存的血小板濃縮物前，通常釋放袋中的過量 氣壓。在儲存血小板濃縮物后使用保存的血小板濃縮物前，可使含有血小板濃縮物的袋在 一段時間（如0.001-20小時）或其間任何數(shù)值或范圍內(nèi)升溫（例如自然升溫等）至某一 特定溫度（如12-35°C )或其間任何數(shù)值或范圍，所述溫度下能夠允許使用該血小板濃縮 物。
[0011] 本發(fā)明方法的一個非限制性區(qū)別特征包括以下事實，即可使用該方法使含有血 小板濃縮物的袋（例如具有平坦容器的通常形狀）儲存于水平位置（即平坦一側(cè)朝下）， 且在使用該血小板濃縮物前，可首先對其攪動并隨后釋放氣體混合物的超壓（pressure excess)。通過使用這類儲存方法，確保了在儲存期間血小板沉降過程中形成最小厚度的任 何沉淀。袋中形成的任何擴散的沉淀可在攪動或振動袋內(nèi)容物的過程中容易地崩解，且袋 中氣體混合物超壓的使用使得能夠避免在攪動和/或振動袋的過程中生成大量氣泡。
[0012] 在本發(fā)明的另一個和/或替代性非限制性方面中，提供了一種保存血液產(chǎn)品的裝 置，該裝置經(jīng)設(shè)計能夠在壓力下的氣體介質(zhì)中保存血液產(chǎn)品。該用于保存血液產(chǎn)品的裝置 包括可氣密性密封的腔體和經(jīng)設(shè)計以部分或完全容納腔體的高強度外殼。在本發(fā)明的一個 非限制性實施方式中，該腔體可由一個或多個部件形成。在本發(fā)明的該實施方式的一個非 限制方面中，該腔體由兩個部件形成，其經(jīng)設(shè)計以特定方式接合在一起，使得在接合兩個部 件后這兩個部件形成空腔。該空腔可以是密閉空腔。該空腔設(shè)計為部分或完全容納含有血 液產(chǎn)品的袋。該含有血液產(chǎn)品的袋可由透氣性材料形成；但這不是必需的。該腔體（如氣密 性密封的腔體）可任選地包括將空腔與腔體外部進行流體連通的入口通道。該入口通道可 用于將氣體充入空腔和/或從空腔中釋放氣體。在本發(fā)明的另一個非限制性實施方式中， 該高強度外殼可包括一個或多個部件。在本發(fā)明的該實施方式的一個非限制性方面中，該 高強度外殼包括旨在接合在一起的兩個部件。該高強度外殼的一個或全部兩個部件可包括 口袋。該口袋通常位于一個或全部兩個部件的中央?yún)^(qū)域；但這不是必需的。該口袋設(shè)計為 部分或完全容納腔體。在一個非限制性設(shè)計中，該一個或多個口袋經(jīng)設(shè)計以完全容納腔體， 使得當高強度外殼的一個或多個部件連接在一起時，該腔體被完全包含在高強度外殼的一 個或多個部件的一個或多個口袋中?？诖倪B接形成腔體的腔體空腔。口袋的設(shè)計是非限 制性的。在一個非限制性設(shè)計中，一個或多個口袋的總深度足以完全將腔體置于一個或多 個口袋中，且一個或多個口袋的高度能夠在將腔體插入一個或多個口袋時在一個或多個口 袋的內(nèi)表面與腔體的外表面之間形成最小的間隙；但這不是必需的。
[0013] 因為用于保存血液產(chǎn)品的裝置包括至少兩個組件（即腔體和高強度外殼，這兩個 組件具有不同功能）的事實，本發(fā)明所述用于保存血液產(chǎn)品的裝置導致形成多用途、可靠、 易于制造和易于使用的裝置，其可用于保存血液和/或血液組分。該腔體設(shè)計為接觸包含 血液產(chǎn)品的袋。該腔體的一個非限制性所需設(shè)計要求是低成本設(shè)計。該非限制性要求可以 滿足，因為該腔體無需耐受巨大外力。同樣地，該腔體可由不昂貴材料形成或包括不昂貴材 料（如塑料、涂布紙或紙板等），其通過高產(chǎn)技術(shù)（例如鑄造、模塑、沖壓、壓模等）形成腔 體；但這不是必需的。使用氣體填充墻體過程中發(fā)生的主要負載施加在其中放置腔體的高 強度外殼上。
[0014] 該外殼可由多種高強度材料（金屬、木材、復合材料、陶瓷、纖維增強材料等）制 造。這些材料可通過多種技術(shù)（模塑、沖壓、焊接、擠壓等）形成。通常，在比較類似厚度的 材料時，與用于形成腔體的材料相比，用于形成外殼的高強度材料的強度是其至少約2倍 且剛性是其至少2倍（例如2-10000倍、5-1000倍、10-500倍、20-100倍等）；但這不是必 需的。通常，用于形成外殼的高強度材料不同于用于形成腔體的材料；但這不是必需的。通 常，與用于形成腔體的材料相比，用于形成外殼的高強度材料更厚和/或強度更高；但這不 是必需的。
[0015] 將高強度外殼（其中放置腔體）的一個或多個部件的口袋制造得足夠深以容納腔 體，而一個或多個口袋的高度足以將腔體置于口袋中，并在一個或多個口袋的內(nèi)表