一種瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物繁殖方法，具體為一種瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]瓊花(Viburnummacrocephalum f.keteleeri)，為五福花科(原忍冬科)莢蓮屬半常綠灌木，花型奇特，果實鮮紅，樹形優(yōu)美，有極高的觀賞價值，是揚州市市花和我國特有的木本植物。瓊花適應(yīng)性強、生長健壯，管理較粗放，花果繁盛。因其耐蔭可作為喬、灌、草結(jié)合的林下灌木；其果實成熟后色彩紅艷，營養(yǎng)成分極為豐富，可作為誘鳥樹種；奇異的花型、潔白的花色、濃郁的芳香，可作為優(yōu)良的觀賞樹種。既適宜庭園綠化、美化、香化，也可作切花材料，各具特色。因此，瓊花是滿足城市植物群落和城市生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性、景觀多樣性等多種需求的理想植物材料之一。
[0003]然而，瓊花在自然條件下，存在生殖障礙，種子休眠嚴(yán)重，不易萌發(fā)，人工大田扦插成活率極低，自然和人工繁殖都極其困難，導(dǎo)致目前綠化苗木市場瓊花種源稀缺，價格昂貴，限制了瓊花在各地的普及。
[0004]瓊花傳統(tǒng)繁殖方法可分為分株、扦插、播種繁殖，但分株只有在成年大苗基部萌蘗時才能進行，且3?4年分一次，繁殖系數(shù)很低；扦插繁殖時生根較困難，成活率低，須借助全光霧苗床和激素處理；播種繁殖因其種子萌發(fā)具有雙重休眠現(xiàn)象，即需1?2年層積沙藏才能發(fā)芽，發(fā)芽周期長，且播種的實生苗童期較長，6?8年才開花，不利于大規(guī)?？旆睉?yīng)用?？焖俜敝吵蔀橹萍s瓊花應(yīng)用的瓶頸問題，為此，建立高效的瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)有重要的實用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種操作簡單、實用的瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法。
[0006]實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0007](1)繁殖材料的選擇
[0008]選取瓊花成年植株上腋芽作為繁殖材料。
[0009](2)繁殖材料的消毒
[0010]取剪好的材料，自來水流水沖洗2h后，用毛刷、洗衣粉將表面清洗干凈，用70%(體積濃度)的酒精表面消毒30s，0.1% (質(zhì)量濃度)吐溫浸泡振蕩沖洗20?30min，0.3%(質(zhì)量濃度)次氯酸鈉消毒液消毒15min，最后用無菌水沖洗5?7遍。
[0011](3)培養(yǎng)基配制、滅菌
[0012]培養(yǎng)基配制:
[0013]瓊花莖尖啟動培養(yǎng)最佳初始培養(yǎng)基為:MS+BA1.0+ZT8.0+ΝΑΑ0.2 ；
[0014](配置一升的莖尖啟動培養(yǎng)基——MS(培養(yǎng)基):I 50ml，II 5ml，III 5ml，IV 5ml ；BA(6-芐氨基嘌呤):10ml ;ZT(玉米素):80ml ;NAA(萘乙酸):2ml ;定容至1L)瓊花叢生芽分化培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基是:MS+BA1.0+ZT15 ；
[0015](配置一升的叢生芽分化培養(yǎng)基--MS (培養(yǎng)基):I 50ml，II 5ml，III 5ml，IV 5ml ；
BA (6-芐氨基嘌呤):10ml ;ZT (玉米素):150ml ;定容至1L)
[0016]瓊花葉片愈傷組織最佳培養(yǎng)基為:MS+BA0.5+NAA2.0+2, 4-D0.5?1.0 ;
[0017](配置一升的葉片愈傷組織培養(yǎng)基——MS(培養(yǎng)基):I50ml，II 5ml，III 5ml，IV 5ml ;BA(6-芐氨基嘌呤):5ml ;NAA(萘乙酸):20ml ;2，4_D (2，4-二氯苯氧乙酸):5?10ml ;定容至1L)
[0018]瓊花試管苗生根誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為:MS+NAA8.0 ；
[0019](配置一升的根誘導(dǎo)培養(yǎng)基--MS(培養(yǎng)基):I 50ml，II 5ml，III 5ml，IV 5ml ；
NAA(萘乙酸):80ml ;定容至IL)
[0020]每種培養(yǎng)基加20g/L蔗糖，瓊脂粉6.8g/L，pH6.0?6.2，121 °C高溫高壓滅菌18min，培養(yǎng)基溫度25°C ±2°C，光照12h/d，光照度約20001x。
[0021](4)接種、培養(yǎng)，包括瓊花試管苗的培育、試管苗葉片愈傷組織培養(yǎng)和生根培養(yǎng)；
[0022]將腋芽種到啟動培養(yǎng)基MS上，在接種過程中，瓊花外植體的切口處一般都會迅速褐變，從而污染培養(yǎng)基，通過將外植體浸入無菌水進行切取，在啟動培養(yǎng)基中增加0.5%Vc，增加轉(zhuǎn)接培養(yǎng)基的次數(shù)可以大大減少褐變污染。
[0023]經(jīng)過40d生長后，將叢生芽苗剪成帶節(jié)小苗，轉(zhuǎn)接入?yún)采糠只囵B(yǎng)的培養(yǎng)基進行繼代增殖培養(yǎng)。
[0024]在瓊花芽繼代培養(yǎng)過程中，將多余的葉片剪成lcmX0.5cm左右長方塊，接種于瓊花葉片愈傷組織培養(yǎng)基。
[0025]待愈傷組織分化成芽，移入生根培養(yǎng)基進行生根誘導(dǎo)。
[0026](5)馴化移栽
[0027]將達(dá)到移栽標(biāo)準(zhǔn)的生根試管苗移入溫室，打開瓶口煉苗2?3d，取出洗凈培養(yǎng)基，移栽在裝有腐殖質(zhì)土 +硅石(體積比2:1)的基質(zhì)中，前2?3周每天噴水3?4次，之后適量饒水，培養(yǎng)50?60d即可移栽入大田。
[0028]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點是:
[0029]1、本發(fā)明使用瓊花的腋芽作為材料，取材方便，數(shù)量充足，運用組織培養(yǎng)的技術(shù)，腋芽經(jīng)過消毒后接種于培養(yǎng)基，較短時間形成愈傷組織直至生根形成幼苗植株；
[0030]2、本發(fā)明主要篩選了適合瓊花莖尖啟動、叢生芽分化、愈傷組織誘導(dǎo)和試管苗生根誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基，對瓊花離體培養(yǎng)條件作了改進，有效提高瓊花離體繁育的成活率，提高了瓊花種苗的繁殖系數(shù)；
[0031]3、該方法為瓊花的離體繁殖育苗提供了技術(shù)支持，為瓊花保留較好的種質(zhì)和快速繁殖提供實用可行方案。
【具體實施方式】
[0032]為了更好地理解本發(fā)明，下面通過具體的實施例來具體說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0033]實施例1
[0034]1.繁殖材料的選擇
[0035]試材取自揚州大學(xué)農(nóng)學(xué)院瓊花成年植株上腋芽。
[0036]2.繁殖材料的消毒
[0037]自來水流水沖洗2h后，用毛刷、洗衣粉將表面清洗干凈，用70%的酒精表面消毒30s,0.1%吐溫浸泡振蕩沖洗20?30min，0.3%次氯酸鈉消毒15min，最后用無菌水沖洗5?7遍。
[0038]3.培養(yǎng)基配制、滅菌
[0039]瓊花莖尖啟動培養(yǎng)初始培養(yǎng)基為:MS+BA1.0+ZT8.0+ΝΑΑ0.2 ；
[0040]瓊花叢生芽分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基是:MS+BA1.0+ZT15 ；
[0041]瓊花葉片愈傷組織培養(yǎng)基為:MS+BA0.5+NAA2.0+2, 4-D0.5?1.0 ;
[0042]瓊花試管苗生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+NAA8.0。
[0043]不同培養(yǎng)基加20g/L蔗糖，瓊脂粉6.8g/L，ρΗ6.0?6.2，121 °C高溫高壓滅菌18min，培養(yǎng)基溫度25°C ±2°C，光照12h/d，光照度約20001x。
[0044]4.接種、培養(yǎng)
[0045]將腋芽接種到啟動培養(yǎng)基上，在接種過程中，瓊花外植體的切口處一般都會迅速褐變，從而污染培養(yǎng)基，通過將外植體浸入無菌水進行切取，在培養(yǎng)基中增加0.5% Vc，增加轉(zhuǎn)接培養(yǎng)基的次數(shù)可以大大減少褐變污染。
[0046]經(jīng)過40d生長后，將叢生芽苗剪成帶節(jié)小苗，轉(zhuǎn)接入?yún)采糠只囵B(yǎng)的培養(yǎng)基進行繼代增殖培養(yǎng)。
[0047]在瓊花芽繼代培養(yǎng)過程中，將多余的葉片剪成lcmX0.5cm左右長方塊，接種于瓊花葉片愈傷組織培養(yǎng)基。
[0048]待愈傷組織分化成芽，移入生根培養(yǎng)基進行生根誘導(dǎo)。
[0049]5.馴化移栽
[0050]將達(dá)到移栽標(biāo)準(zhǔn)的生根試管苗移入溫室，打開瓶口煉苗2?3d，取出洗凈培養(yǎng)基，移栽在裝有腐殖質(zhì)土 +硅石(體積比2:1)的基質(zhì)中，前2?3周每天噴水3?4次，之后適量饒水，培養(yǎng)50?60d即可移栽入大田。
[0051]效果說明:
[0052]瓊花腋芽接種于啟動培養(yǎng)基上，經(jīng)過40d生長，芽萌發(fā)率為86.7%，長勢優(yōu)秀，葉色為綠色；繼代培養(yǎng)中，芽分化效果好，生長迅速，叢生芽數(shù)量多，誘導(dǎo)率高，叢芽增殖倍數(shù)達(dá)到10.57。取葉片在愈傷組織培養(yǎng)基培養(yǎng)10d后，葉片與培養(yǎng)基接觸的邊緣愈傷組織生長迅速，30d后葉片消失，形成團狀帶白色和淡綠色的眾多微小突起，愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到94.3%。接種到生根培養(yǎng)基，30d后幼苗開始陸續(xù)生根，生根率達(dá)到83.3%。馴化后，移栽成活率可達(dá)70%以上。
[0053]本發(fā)明優(yōu)先解決大量快速繁殖瓊花的難題，并且通過實例作了詳細(xì)介紹，但應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到上述的描述不應(yīng)該被認(rèn)為是本發(fā)明的限制。在本領(lǐng)域技術(shù)人員閱讀了上述內(nèi)容后，對于本發(fā)明的多種修改和替代都將是顯而易見的。因此，本發(fā)明的保護范圍應(yīng)由所附的權(quán)利要求來限定。
【主權(quán)項】
1.一種瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步驟: 步驟一，選擇瓊花的腋芽作為繁殖材料； 步驟二，繁殖材料的消毒； 步驟三，培養(yǎng)基配制、滅菌； 所述培養(yǎng)基具體配置經(jīng)過對比試驗確定，在多種方案下尋找最佳的培養(yǎng)基； 瓊花莖尖啟動培養(yǎng)最佳初始培養(yǎng)基為:MS+BA1.0+ZT8.0+ΝΑΑ0.2 ; 瓊花叢生芽分化培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基是:MS+BA1.0+ZT15 ； 瓊花葉片愈傷組織最佳培養(yǎng)基為:MS+BA0.5+NAA2.0+2, 4-D0.5?1.0 ; 瓊花試管苗生根誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為:MS+NAA8.0 ； 步驟四，接種、培養(yǎng)，包括瓊花試管苗的培育、試管苗葉片愈傷組織培養(yǎng)和生根培養(yǎng)； 步驟五，馴化移栽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于，步驟二中所述繁殖材料的消毒方法經(jīng)過多種試劑處理，包括自來水、酒精、吐溫、次氯酸鈉和無菌水。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于，步驟三中每個培養(yǎng)基加20g/L蔗糖，瓊脂粉6.8g/L，pH6.0?6.2，121 °C高溫高壓滅菌18min，培養(yǎng)基溫度 25°C ±2°C，光照 12h/d，光照度約 20001x。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于，步驟四中所述接種、培養(yǎng)具體是將外植體浸入無菌水進行切取，在啟動培養(yǎng)基中增加0.5% Vc,防止褐化，先用腋芽培育成試管苗，再利用試管苗的葉片進行組織培養(yǎng)。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于，步驟五中所述馴化移栽是將達(dá)到移栽標(biāo)準(zhǔn)的生根試管苗移入溫室，打開瓶口煉苗2?3d，移栽在裝有腐殖質(zhì)土 +硅石(體積比2:1)的基質(zhì)中培養(yǎng)50?60d即可移栽入大田。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法，其特征在于，移栽成活率可達(dá)70%以上。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種瓊花離體培養(yǎng)和快速繁殖的方法。主要包括以下步驟：步驟一，繁殖材料的選擇；步驟二，繁殖材料的消毒；步驟三，培養(yǎng)基配制、滅菌；步驟四，接種、培養(yǎng)，包括瓊花試管苗的培育、試管苗葉片愈傷組織培養(yǎng)和生根培養(yǎng)；步驟五，馴化移栽。該方法可以提高瓊花的繁殖系數(shù)和成活率，減少發(fā)芽周期，避開實生苗童期，不僅可以排除外界條件的影響，四季可行，節(jié)約育苗占地，降低生產(chǎn)成本；而且可以在短期內(nèi)得到大量健壯幼苗，進行規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)，增加瓊花種苗的供應(yīng)量，滿足園林綠化市場對瓊花苗木的需求，有利于優(yōu)良種質(zhì)離體保存，為瓊花種苗的快速繁殖和廣泛應(yīng)用提供實用技術(shù)支撐。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105340756
【申請?zhí)枴緾N201510930226
【發(fā)明人】金飚, 張莉, 李良俊, 王莉
【申請人】揚州大學(xué)
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年12月15日