新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及新會大紅柑育苗繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法。所述微嫁接方法主要包括如下步驟：取目標(biāo)植株的1?2mm莖尖，采用改良MT培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)，投入液氮脫毒，恢復(fù)接種到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)；砧木種子消毒，滅菌，萌發(fā)；將新會大紅柑腋芽發(fā)育好的叢生芽嫁接到砧木上，再進(jìn)行試管內(nèi)液體培育苗。本培養(yǎng)法采用改良MT培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)，改良之后繼代增值系數(shù)大于4，基本沒有出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，變異也大大減少；本培養(yǎng)法使得植物根系更加發(fā)達(dá)，抗惡劣環(huán)境性強(qiáng)，更容易適應(yīng)南方潮濕多雨的氣候環(huán)境，成活率也大大提高。
【專利說明】
新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及柑橘育苗繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]新會陳皮是新會大紅柑的干果皮，因其品質(zhì)獨特，早在明清以前就已蠻聲遐邇，并被列為“貢品”，行銷國內(nèi)外。
[0003]柑皮以貯藏的時間越久越好，故稱“陳皮”。陳皮以廣東所產(chǎn)為佳。歷史貿(mào)易中特稱 “廣陳皮”，以別于其他省所產(chǎn)。
[0004]新會大紅柑的果皮就是新會的著名特產(chǎn)一陳皮。由于它具有很高的藥用價值，又是傳統(tǒng)的香料和調(diào)味佳品，所以向來享有盛譽。早在宋代就已成為南北貿(mào)易的“廣貨”之一， 行銷全國和南洋、美洲等地區(qū)。而“廣陳皮”又以新會陳皮為上品，故清代大醫(yī)師葉天士所開的中藥“二陳湯”，特別寫明“新會皮”。因不是新會所產(chǎn)的其藥效遠(yuǎn)遜，且乏香味而痹口(即苦辣味)，所以新會陳皮價格較高，皮比肉貴。
[0005]柑橘遺傳轉(zhuǎn)化是建立在受體系統(tǒng)發(fā)展的基礎(chǔ)上，具有良好的組織培養(yǎng)再生系統(tǒng)往往是獲得成功的關(guān)鍵，受體系統(tǒng)的品種特異性及再生效率低使新會大紅柑遺傳轉(zhuǎn)化受到極大的限制。傳統(tǒng)的柑橘嫁接多是用熱處理脫毒，然后在田間莖尖嫁接，切開暴露在空氣中， 細(xì)菌或者病毒容易通過切開感染或者潛伏，成活率較低，在南方潮濕多雨的氣候環(huán)境中更容易出現(xiàn)上述問題。新會大紅柑的根系不發(fā)達(dá)，怕干旱，又怕洪潰，如何使得新會大紅柑的果皮發(fā)育更好，且提高其色澤和品質(zhì)，具有重要的研究意義。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種抗惡劣環(huán)境性強(qiáng)、成活率高、 利于提高果皮發(fā)育和品質(zhì)的新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法。
[0007]為實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案:
[0008]新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，主要包括如下步驟:
[0009]步驟一、脫毒新會大紅柑叢生芽的獲得:
[0010]將消毒、滅菌處理的新會大紅柑母枝在超凈工作臺上切取莖尖l-2mm，轉(zhuǎn)移到改良 MT培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，在4°C黑暗條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)3-5天后，將莖尖組織轉(zhuǎn)移到保護(hù)培養(yǎng)基中冰凍適應(yīng)lh，后將其轉(zhuǎn)移到冷凍管并迅速投入液氮中，使莖尖組織快速降溫到_196°C并持續(xù)lh，然后再快速轉(zhuǎn)移到45 °C水中解凍恢復(fù)，然后接種到繼代培養(yǎng)基中，25 °C暗培養(yǎng)一周后進(jìn)行常規(guī)光照培養(yǎng)，獲得脫毒新會大紅柑叢生芽；
[0011]步驟二、砧木選擇:
[0012]將檸檬或香橙種子在超凈工作臺經(jīng)酒精、升汞消毒后接種到1/2MS培養(yǎng)基，待種子萌發(fā)后挑選出粗壯、生長狀態(tài)好的幼苗，待幼苗生長到第二片真葉形成后，作為接種砧木待微嫁接；[〇〇13]步驟三、微嫁接:
[0014]在超凈工作臺上放置接種槽，然后在接種槽內(nèi)放置滅菌的糯米紙并將糯米紙固定在接種槽內(nèi)，將步驟二的接種砧木在距離根部4-5cm處截斷，放置在糯米紙上;再將步驟一繼代增殖得到的脫毒新會大紅柑叢生芽的形成層對齊砧木并插入砧木切口內(nèi)，壓實砧木和脫毒新會大紅柑叢生芽后，將糯米紙對折固定，獲得微嫁接苗；
[0015]步驟四、培養(yǎng)移栽:[〇〇16]向試管內(nèi)注入1/4體積的液體培養(yǎng)液，并環(huán)形放入2cm濾紙作為固定，經(jīng)滅菌后，將步驟三獲得的微嫁接苗，轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)液中，置于溫度25°C、光照強(qiáng)度為2500-30001UX的恒溫環(huán)境下培養(yǎng)30天，待砧木根部開始生長，叢生芽葉片正常舒展生長后，置于自然光中煉苗30天后，即可洗苗移栽，移栽成活率接近100 %。
[0017] 其中，步驟一中，所述改良MT培養(yǎng)基包括如下含量的組分:NH4N〇3 1700-1800mg/L; KN〇3 1800-2000mg/L；CaCl2 ? 2H20 830〇-8500mg/L；MgS〇4? 7H20 730〇-7500mg/L；KH2P〇4 3150-3200mg/L；KI 0.8〇-〇.90mg/L；H3B〇3 6.0-6.5mg/L；MnS04 ? 4H20 22.0-23.0mg/L； Na2Mo〇4 ? 2H20 0.2-0.3mg/L；CuS〇4 ? 5H20 0.02-0.03mg/L；CoCl2 ? 6H2O 0.02-0.03mg/L； FeS〇4.7H20 27.0-28.0mg/L;Na2_EDTA 37.0-38.0mg/L;煙酸4-6mg/L;鹽酸吡哆醇 19-21mg/L;鹽酸硫胺素 0 ? 3-0 ? 5mg/L;甘氨酸 1 ? 5-2 ? 5mg/L。[〇〇18]作為優(yōu)選，步驟一中，所述改良MT培養(yǎng)基包括如下含量的組分:NH4N〇3 1750mg/L;KN〇3 1900mg/L；CaCl2 ? 2H20 8400mg/L；MgS〇4 ? 7H20 7400mg/L；KH2P〇4 3180mg/L；KI 0.83mg/L；H3B〇3 6.3mg/L；MnS〇4 ? 4H20 22.6mg/L；Na2Mo〇4 ? 2H20 0.25mg/L；CuS04 ? 5H20 0.025mg/L;CoCl2*6H2〇 0.025mg/L;FeS〇4.7H2〇 27.8mg/L;Na2-EDTA 37.3mg/L;煙酸5mg/ L;鹽酸卩比咳醇20mg/L;鹽酸硫胺素0 ? 4mg/L;甘氨酸2mg/L。[〇〇19]作為優(yōu)選，步驟一中，所述保護(hù)培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+30(wt)%甘油+15 (wt) %乙二醇+15(wt) %二甲基亞砜+鹿糖50g/L。
[0020]作為優(yōu)選，步驟一中，所述繼代培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+BA 2mg/L+NAA 0 ? 05mg/L+瓊脂 6 ? 5g/L+鹿糖 50g/L。[〇〇21]作為優(yōu)選，步驟四中，所述液體培養(yǎng)液的配方為:改良MT培養(yǎng)基+IBA 0.5mg/L。 [〇〇22]本發(fā)明具有至少以下有益效果:
[0023](1)本培養(yǎng)法將新會大紅柑母枝通過改良MT培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)，經(jīng)過液氮脫毒、解凍恢復(fù)，利用檸檬/香橙作為砧木，大大提高了抗惡劣環(huán)境性，提高了結(jié)果時期果皮發(fā)育和品質(zhì)， 避免了“傳統(tǒng)的新會大紅柑嫁接多是用熱處理脫毒，然后在田間莖尖嫁接，切開暴露在空氣中，細(xì)菌或者病毒容易通過切開感染或者潛伏”的問題；
[0024](2)本培養(yǎng)法采用改良MT培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)，改良之后繼代增值系數(shù)大于4，基本沒有出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，變異也大大減少，而且讓新會大紅柑的果皮發(fā)育更好，色澤和品質(zhì)更優(yōu)秀;解決了現(xiàn)有技術(shù)中“用一般的MS培養(yǎng)基培養(yǎng)，腋芽葉片容易脫落，玻璃化或者變異;用傳統(tǒng)MT培養(yǎng)基培養(yǎng)雖然玻璃化程度都有所降低，但和生長調(diào)節(jié)劑搭配后容易出現(xiàn)徒長，變異概率減少不明顯”的問題。
[0025](3)本操作整個過程都在無菌環(huán)境進(jìn)行，保證苗木嫁接過程不受病原體的入侵，沒有了潛在危險。通過水培讓植物根系發(fā)達(dá)，更容易適應(yīng)南方潮濕多雨的氣候環(huán)境，成活率大大提尚?！揪唧w實施方式】
[0026]在下面的詳細(xì)描述中，只通過說明的方式描述了本發(fā)明的某些示范性實施例。描述在本質(zhì)上是說明性的，而不是用于限制權(quán)利要求的保護(hù)范圍。[〇〇27] 實施例1
[0028]新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，主要包括如下步驟:
[0029]步驟一、脫毒新會大紅柑叢生芽的獲得:
[0030]將消毒、滅菌處理的新會大紅柑母枝在超凈工作臺上切取莖尖2mm，轉(zhuǎn)移到改良MT 培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，在4 °C黑暗條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)3天后，將莖尖組織轉(zhuǎn)移到保護(hù)培養(yǎng)基中冰凍適應(yīng)lh，后將其轉(zhuǎn)移到冷凍管并迅速投入液氮中，使莖尖組織快速降溫到-196°C并持續(xù) lh，然后再快速轉(zhuǎn)移到45°C水中解凍恢復(fù)，然后接種到繼代培養(yǎng)基中，25°C暗培養(yǎng)一周后進(jìn)行常規(guī)光照培養(yǎng)，獲得脫毒新會大紅柑叢生芽;嚴(yán)格控制上述培養(yǎng)條件，利于提高了后期苗的抗惡劣環(huán)境性及結(jié)果時期坐果率和品質(zhì)；[〇〇31]所述改良MT培養(yǎng)基包括如下含量的組分:NH4N〇3 1700mg/L;KN03 1800mg/L;CaCl2 ? 2H20 8300mg/L；MgS〇4 ? 7H20 7300mg/L；KH2PO4 3150mg/L；KI 0.80mg/L；H3B〇3 6.0mg/L；MnS〇4 ? 4H20 22.0mg/L；Na2Mo〇4 ? 2H20 0.2mg/L；CuS04 ? 5H20 0.02mg/L；CoCl2 ? 6H2O 0.02mg/L;FeS〇4.7H20 27.0mg/L;Na2-EDTA 37.0mg/L;煙酸4mg/L;鹽酸吡哆醇 19mg/ L;鹽酸硫胺素0.3mg/L;甘氨酸1.5mg/L;[〇〇32]所述保護(hù)培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+30(wt)%甘油+ 15(wt)%乙二醇+15 (wt) %二甲基亞砜+鹿糖50g/L;[〇〇33]所述繼代培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+瓊脂6.5g/L+鹿糖50g/L;[〇〇34]步驟二、砧木選擇:
[0035]將檸檬或香橙種子在超凈工作臺經(jīng)酒精、升汞消毒后接種到1/2MS培養(yǎng)基，待種子萌發(fā)后挑選出粗壯、生長狀態(tài)好的幼苗，待幼苗生長到第二片真葉形成后，作為接種砧木待微嫁接；[〇〇36]步驟三、微嫁接:
[0037]在超凈工作臺上放置接種槽，然后在接種槽內(nèi)放置滅菌的糯米紙并將糯米紙固定在接種槽內(nèi)，將步驟二的接種砧木在距離根部4-5cm處截斷，放置在糯米紙上;再將步驟一繼代增殖得到的脫毒新會大紅柑叢生芽的形成層對齊砧木并插入砧木切口內(nèi)，壓實砧木和脫毒新會大紅柑叢生芽后，將糯米紙對折固定，獲得微嫁接苗；[〇〇38]步驟四、培養(yǎng)移栽:[〇〇39]向試管內(nèi)注入1/4體積的液體培養(yǎng)液，并環(huán)形放入2cm濾紙作為固定，經(jīng)滅菌后，將步驟三獲得的微嫁接苗，轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)液中，置于溫度25°C、光照強(qiáng)度為2500-30001UX的恒溫環(huán)境下培養(yǎng)30天，待砧木根部開始生長，叢生芽葉片正常舒展生長后，置于自然光中煉苗30天后，即可洗苗移栽，移栽成活率99 %。
[0040]其中，所述液體培養(yǎng)液的配方為:改良MT培養(yǎng)基+IBA 0.5mg/L。[〇〇41 ] 實施例2
[0042]新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，主要包括如下步驟:
[0043]步驟一、脫毒新會大紅柑叢生芽的獲得:[〇〇44]將消毒、滅菌處理的新會大紅柑母枝在超凈工作臺上切取莖尖1mm，轉(zhuǎn)移到改良MT 培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，在4 °C黑暗條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)5天后，將莖尖組織轉(zhuǎn)移到保護(hù)培養(yǎng)基中冰凍適應(yīng)lh，后將其轉(zhuǎn)移到冷凍管并迅速投入液氮中，使莖尖組織快速降溫到-196°C并持續(xù) lh，然后再快速轉(zhuǎn)移到45°C水中解凍恢復(fù)，然后接種到繼代培養(yǎng)基中，25°C暗培養(yǎng)一周后進(jìn)行常規(guī)光照培養(yǎng)，獲得脫毒新會大紅柑叢生芽；[〇〇45]所述改良MT培養(yǎng)基包括如下含量的組分:NH4N〇3 1800mg/L;KN03 2000mg/L;CaCl2 ? 2H20 8500mg/L；MgS〇4 ? 7H20 7500mg/L；KH2PO4 3200mg/L；KI 0.90mg/L；H3B〇3 6.5mg/L；MnS〇4 ? 4H20 23.0mg/L；Na2Mo〇4 ? 2H20 0.3mg/L；CuS04 ? 5H20 0.03mg/L；CoCl2 ? 6H2O 0.03mg/L;FeS〇4.7H20 28.0mg/L;Na2-EDTA 38.0mg/L;煙酸6mg/L;鹽酸吡哆醇21mg/ L;鹽酸硫胺素0 ? 5mg/L;甘氨酸2 ? 5mg/L;[〇〇46]所述保護(hù)培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+30(wt)%甘油+ 15(wt)%乙二醇+15 (wt) %二甲基亞砜+鹿糖50g/L;
[0047]所述繼代培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+瓊脂6.5g/L+鹿糖50g/L;[〇〇48]步驟二、砧木選擇:
[0049]將檸檬或香橙種子在超凈工作臺經(jīng)酒精、升汞消毒后接種到1/2MS培養(yǎng)基，待種子萌發(fā)后挑選出粗壯、生長狀態(tài)好的幼苗，待幼苗生長到第二片真葉形成后，作為接種砧木待微嫁接；
[0050]步驟三、微嫁接:
[0051]在超凈工作臺上放置接種槽，然后在接種槽內(nèi)放置滅菌的糯米紙并將糯米紙固定在接種槽內(nèi)，將步驟二的接種砧木在距離根部4-5cm處截斷，放置在糯米紙上;再將步驟一繼代增殖得到的脫毒新會大紅柑叢生芽的形成層對齊砧木并插入砧木切口內(nèi)，壓實砧木和脫毒新會大紅柑叢生芽后，將糯米紙對折固定，獲得微嫁接苗；[〇〇52]步驟四、培養(yǎng)移栽:
[0053]向試管內(nèi)注入1/4體積的液體培養(yǎng)液，并環(huán)形放入2cm濾紙作為固定，經(jīng)滅菌后，將步驟三獲得的微嫁接苗，轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)液中，置于溫度25°C、光照強(qiáng)度為2500-30001UX的恒溫環(huán)境下培養(yǎng)30天，待砧木根部開始生長，叢生芽葉片正常舒展生長后，置于自然光中煉苗30天后，即可洗苗移栽，移栽成活率98 %。[〇〇54]其中，所述液體培養(yǎng)液的配方為:改良MT培養(yǎng)基+IBA 0.5mg/L。
[0055]實施例3
[0056]新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，主要包括如下步驟:[〇〇57]步驟一、脫毒新會大紅柑叢生芽的獲得:[〇〇58]將消毒、滅菌處理的新會大紅柑母枝在超凈工作臺上切取莖尖2mm，轉(zhuǎn)移到改良MT 培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，在4 °C黑暗條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)5天后，將莖尖組織轉(zhuǎn)移到保護(hù)培養(yǎng)基中冰凍適應(yīng)lh，后將其轉(zhuǎn)移到冷凍管并迅速投入液氮中，使莖尖組織快速降溫到-196°C并持續(xù) lh，然后再快速轉(zhuǎn)移到45°C水中解凍恢復(fù)，然后接種到繼代培養(yǎng)基中，25°C暗培養(yǎng)一周后進(jìn)行常規(guī)光照培養(yǎng)，獲得脫毒新會大紅柑叢生芽；[〇〇59]所述改良MT培養(yǎng)基包括如下含量的組分:NH4N〇3 1750mg/L;KN03 1900mg/L;CaCl2 ? 2H20 8400mg/L；MgS〇4 ? 7H20 7400mg/L；KH2PO4 3180mg/L；KI 0.83mg/L；H3B〇3 6.3mg/L；MnS〇4? 4H20 22.6mg/L；Na2Mo04 ? 2H20 0.25mg/L；CuS04? 5H20 0.025mg/L； C〇C12.6H2〇 0.025mg/L;FeS〇4.7H2〇 27.8mg/L;Na2-EDTA 37.3mg/L;煙酸5mg/L;鹽酸吡哆醇20mg/L;鹽酸硫胺素0 ? 4mg/L;甘氨酸2mg/L;
[0060]所述保護(hù)培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+30(wt)%甘油+ 15(wt)%乙二醇+15 (wt) %二甲基亞砜+鹿糖50g/L;[0061 ] 所述繼代培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+瓊脂6.5g/L+ 鹿糖50g/L;[0〇62] 步驟二、站木選擇:
[0063]將檸檬或香橙種子在超凈工作臺經(jīng)酒精、升汞消毒后接種到1/2MS培養(yǎng)基，待種子萌發(fā)后挑選出粗壯、生長狀態(tài)好的幼苗，待幼苗生長到第二片真葉形成后，作為接種砧木待微嫁接；[〇〇64]步驟三、微嫁接:
[0065]在超凈工作臺上放置接種槽，然后在接種槽內(nèi)放置滅菌的糯米紙并將糯米紙固定在接種槽內(nèi)，將步驟二的接種砧木在距離根部4-5cm處截斷，放置在糯米紙上;再將步驟一繼代增殖得到的脫毒新會大紅柑叢生芽的形成層對齊砧木并插入砧木切口內(nèi)，壓實砧木和脫毒新會大紅柑叢生芽后，將糯米紙對折固定，獲得微嫁接苗；[〇〇66]步驟四、培養(yǎng)移栽:
[0067]向試管內(nèi)注入1/4體積的液體培養(yǎng)液，并環(huán)形放入2cm濾紙作為固定，經(jīng)滅菌后，將步驟三獲得的微嫁接苗，轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)液中，置于溫度25°C、光照強(qiáng)度為2500-30001UX的恒溫環(huán)境下培養(yǎng)30天，待砧木根部開始生長，叢生芽葉片正常舒展生長后，置于自然光中煉苗30天后，即可洗苗移栽，移栽成活率98 %。[〇〇68]其中，所述液體培養(yǎng)液的配方為:改良MT培養(yǎng)基+IBA 0.5mg/L。[〇〇69]實驗證明，本培養(yǎng)法采用改良MT培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)，改良之后繼代增值系數(shù)大于4,基本沒有出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，變異也大大減少;本培養(yǎng)法使得新會大紅柑的果皮發(fā)育更好，色澤和品質(zhì)更優(yōu)秀，更容易適應(yīng)南方潮濕多雨的氣候環(huán)境，成活率也大大提高。
[0070]以上所述僅為本發(fā)明示意性的【具體實施方式】，并非用以限定本發(fā)明的范圍。任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的構(gòu)思和原則的前提下所作出的等同變化與修改，均應(yīng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
【主權(quán)項】
1.新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，其特征在于，主要包括如下步驟:步驟一、脫毒新會大紅柑叢生芽的獲得:將消毒、滅菌處理的新會大紅柑母枝在超凈工作臺上切取莖尖轉(zhuǎn)移到改良MT培 養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，在4 °C黑暗條件下進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)3-5天后，將莖尖組織轉(zhuǎn)移到保護(hù)培養(yǎng)基中冰 凍適應(yīng)lh，后將其轉(zhuǎn)移到冷凍管并迅速投入液氮中，使莖尖組織快速降溫到-196°C并持續(xù) lh，然后再快速轉(zhuǎn)移到45°C水中解凍恢復(fù)，然后接種到繼代培養(yǎng)基中，25°C暗培養(yǎng)一周后進(jìn) 行常規(guī)光照培養(yǎng)，獲得脫毒新會大紅柑叢生芽；步驟二、站木選擇:將檸檬或香橙種子在超凈工作臺經(jīng)酒精、升汞消毒后接種到1/2MS培養(yǎng)基，待種子萌發(fā) 后挑選出粗壯、生長狀態(tài)好的幼苗，待幼苗生長到第二片真葉形成后，作為接種砧木待微嫁 接；步驟三、微嫁接:在超凈工作臺上放置接種槽，然后在接種槽內(nèi)放置滅菌的糯米紙并將糯米紙固定在接 種槽內(nèi)，將步驟二的接種砧木在距離根部4-5cm處截斷，放置在糯米紙上;再將步驟一繼代 增殖得到的脫毒新會大紅柑叢生芽的形成層對齊砧木并插入砧木切口內(nèi)，壓實砧木和脫毒 新會大紅柑叢生芽后，將糯米紙對折固定，獲得微嫁接苗；步驟四、培養(yǎng)移栽:向試管內(nèi)注入1/4體積的液體培養(yǎng)液，并環(huán)形放入2cm濾紙作為固定，經(jīng)滅菌后，將步驟 三獲得的微嫁接苗，轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)液中，置于溫度25°C、光照強(qiáng)度為2500-30001UX的恒溫 環(huán)境下培養(yǎng)30天，待砧木根部開始生長，叢生芽葉片正常舒展生長后，置于自然光中煉苗30 天后，即可洗苗移栽。2.如權(quán)利要求1所述的新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，其特征在于:步驟一中，所述改良MT培養(yǎng)基包括如下含量的組分:順4如31700-180011^/1;謂03 1800-2000mg/L;CaCl2 ? 2H20 8300-8500mg/L;MgS04? 7H2〇7300_7500mg/L;KH2P〇4 3150-3200mg/ L；KI 0.80-0.90mg/L；H3B03 6.0-6.5mg/L；MnS〇4 ? 4H20 22.0-23.0mg/L；Na2Mo〇4 ? 2H20 0?2-0?3mg/L;CuS〇4? 5H200.02-0.03mg/L;CoCl2 ? 6H2O 0.02-0.03mg/L;FeS〇4? 7H20 27 ? 0-28 ? Omg/L;Na2-EDTA 37 ? 0-38 ? Omg/L;煙酸4-6mg/L;鹽酸吡哆醇 19-21mg/L;鹽酸硫胺 素0.3-0.511^凡;甘氨酸1.5-2.511^/匕3.如權(quán)利要求2所述的新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，其特征在于，步驟一中，所述改良MT培養(yǎng)基包括如下含量的組分:NH4N〇3 1750mg/L;KN03 1900mg/L; CaCl2 ? 2H20 8400mg/L；MgS〇4 ? 7H20 7400mg/L；KH2PO4 3180mg/L；KI 0.83mg/L；H3B〇3 6.3mg/L；MnS〇4? 4H20 22.6mg/L；Na2Mo04 ? 2H20 0.25mg/L；CuS04? 5H20 0.025mg/L； C〇C12.6H2〇 0.025mg/L;FeS〇4.7H2〇 27.8mg/L;Na2-EDTA 37.3mg/L;煙酸5mg/L;鹽酸吡哆 醇20mg/L;鹽酸硫胺素0 ? 4mg/L;甘氨酸2mg/L。4.如權(quán)利要求3所述的新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，其特征在于，步驟一中，所述保護(hù)培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+30 (wt) %甘油+15 (wt) %乙二醇+ 15(wt) %二甲基亞砜+鹿糖50g/L。5.如權(quán)利要求3所述的新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，其特征在于，步驟一中，所述繼代培養(yǎng)基的配方為:改良MT培養(yǎng)基+BA 2mg/L+NAA0.05mg/L+瓊脂6.5g/L+鹿糖 50g/L。6.如權(quán)利要求3所述的新會大紅柑脫毒試管苗微嫁接方法，其特征在于， 步驟四中，所述液體培養(yǎng)液的配方為:改良MT培養(yǎng)基+IBA 0.5mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK105993633SQ201610579304
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月21日
【發(fā)明人】王立, 黃宏健, 譚沛濤, 胡楊, 陳小玲
【申請人】江門市新會區(qū)林業(yè)科學(xué)研究所