專利名稱：一種從發(fā)酵液中分離、收集細菌細胞的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種生化生產(chǎn)過程中細菌細胞分離及收集工藝過程中鹽析法的改良，尤其涉及ZL89100684.2發(fā)明專利技術(shù)中，含轉(zhuǎn)化酶的細菌活細胞的分離、收集工藝方法。
目前從發(fā)酵液中對菌體細胞的分離、收集除采用高速離心法外(該法需要昂貴的離心機)，采用的傳統(tǒng)絮凝法，包括有機溶劑沉淀法、化學(xué)沉淀法、鹽析法，有機溶劑沉淀法需在低溫下進行，容易造成酶蛋白分子的變性失活；鹽析法需加入大量的無機鹽，蛋白質(zhì)易變性，回收率不高，對環(huán)境影響較大；化學(xué)沉淀法通用性差，需分解沉淀回收目的產(chǎn)物。
針對上述方法所存在缺點，本發(fā)明其目的是提供一種能在常溫、常壓下進行，分離收集快速、分離簡單、回收率高、無污染的從發(fā)酵液分離、收集細菌細胞的方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明擬采用以下技術(shù)方案一種從發(fā)酵液中分離、收集細菌細胞的方法，其具體包括以下步驟(w/v為質(zhì)量體積比)a、在固定化a-葡糖基轉(zhuǎn)移酶(a-glucosyltransferase)制備帕拉金糖工藝中，取一定體積的發(fā)酵液，加入0.5％-2.5％的吸附劑(w/v)，充分攪拌，放置5-25分鐘，加入0.01％-0.1％(w/v)的絮凝劑，充分攪拌，待出現(xiàn)絮凝物后加入40-100ppm(w/v)的助沉劑，再用傾瀉法或吊濾法除去發(fā)酵液；b、取上述所得絮凝物，用去離子水充分洗滌。
所述的吸附劑可以為活性碳、高嶺土或硅藻土；所述的絮凝劑可以為硫酸鋁鉀、鋁酸鹽或三價鐵的鹽類；
所述的助沉劑可以為聚丙烯酰胺(Polyacrylamide)、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)。
本方法通過吸附-絮凝法，即用吸附劑將發(fā)酵液中細菌細胞進行預(yù)先吸附，然后加入絮凝劑、助沉劑，處理時間大幅縮短，絮凝劑用量低，對所收集細菌細胞酶活力影響小，含菌體絮凝物酶回收率高。
下面詳述本發(fā)明的五個實施例實施例一取100升發(fā)酵液，加入活性碳1公斤，充分攪拌，放置15分鐘，加入明礬(硫酸鋁鉀)50克(預(yù)先配成5％水溶液)，充分攪拌，待絮凝物出現(xiàn)后，加入聚丙烯酰胺7克(預(yù)先配成0.1％水溶液)，充分攪拌后靜置1-2分鐘，此時絮凝物快速沉降，用吊濾法除去發(fā)酵液，用去離子水洗滌絮凝物三次(每次10升)后備用。
實施例二取100升發(fā)酵液(含細胞濕重6％)，加入高嶺土1.5公斤，充分攪拌后放置10分鐘，加入明礬50克(預(yù)先配成5％溶液)，充分攪拌，待絮凝物出現(xiàn)后，加入聚乙烯吡咯烷酮5克(預(yù)先配成0.1％水溶液)，充分攪拌，靜置1-2分鐘，用吊濾法除去發(fā)酵液，收集到的含菌絮凝物用去離子水洗滌3次(每次10升)后備用。
實施例三取100升發(fā)酵液(含細胞濕重6％)，加入硅藻土2公斤，充分攪拌后放置15分鐘，加入鋁酸鈉80克(預(yù)先配成5％水溶液)，充分攪拌，待絮凝物出現(xiàn)后，加入聚丙烯酰胺5克(預(yù)先配成0.1％水溶液)，充分攪拌，靜置1-2分鐘，用吊濾法除去發(fā)酵液，收集到的含菌絮凝物用去離子水洗滌3次(每次10升)后備用。
實施例四取100升發(fā)酵液(含細胞濕重6％)，加入高嶺土2公斤，充分攪拌后放置20分鐘，加入三氯化鐵30克(預(yù)先配成5％水溶液)，充分攪拌，待絮凝物出現(xiàn)后，加入聚丙烯酰胺10克(預(yù)先配成0.1％水溶液)，充分攪拌，靜置1-2分鐘，用吊濾法除去發(fā)酵液，收集到的含菌絮凝物用去離子水洗滌3次(每次10升)后備用。
實施例五取100升發(fā)酵液(含細胞濕重6％)，加入活性碳1公斤，充分攪拌后放置10分鐘，加入三氯化鐵30克(預(yù)先配成5％水溶液)，充分攪拌，待絮凝物出現(xiàn)后，加入聚乙烯吡咯烷酮6克(預(yù)先配成0.1％水溶液)，充分攪拌，靜置1-2分鐘，用吊濾法除去發(fā)酵液，收集到的含菌絮凝物用去離子水洗滌3次(每次10升)后備用。
權(quán)利要求
1.一種從發(fā)酵液中分離、收集細菌細胞的方法，其特征在于該方法具體包括以下步驟(w/v為質(zhì)量體積比)a、在固定化a-葡糖基轉(zhuǎn)移酶制備帕拉金糖工藝中，取一定體積的發(fā)酵液，加入0.5％-2.5％的吸附劑，充分攪拌，放置5-25分鐘，加入0.01％-0.1％的絮凝劑，充分攪拌，待出現(xiàn)絮凝物后加入40-100ppm的助沉劑，再用傾瀉法或吊濾法除去發(fā)酵液；b、取上述取得的絮凝物用去離子水充分洗滌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于吸附劑為活性碳、高嶺土或硅藻土。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于絮凝劑為硫酸鋁鉀、鋁酸鹽或三價鐵的鹽類。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于助沉劑為聚丙烯酰胺(Polyacrylamide)、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種生化生產(chǎn)過程中細菌細胞分離及收集工藝過程中鹽析法的改良,具體包括以下步驟:(w/v為質(zhì)量體積比)a．在固定化a－葡糖基轉(zhuǎn)移酶制備帕拉金糖工藝中,取一定體積的發(fā)酵液,加入0.5%－2.5%的吸附劑(w/v),充分攪拌,放置5－25分鐘,加入0.01%－0.1%(w/v)的絮凝劑,充分攪拌,待出現(xiàn)絮凝物后加入40－100ppm(w/v)的助沉劑,再用傾瀉法或吊濾法除去發(fā)酵液;b．取上述所得絮凝物用去離子水充分洗滌。本方法通過吸附－絮凝法,處理時間大幅縮短,絮凝劑用量低,對所收集菌體細胞酶活力影響小,含菌體絮凝物酶回收率高。
文檔編號C12N1/02GK1388242SQ0111473
公開日2003年1月1日 申請日期2001年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月25日
發(fā)明者莫樹平, 臧向瑩, 賀鷹摶, 鄭婉玲, 柏建玲 申請人:廣東省微生物研究所