專利名稱：竹筍粗多糖在保健食品制備中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及竹筍粗多糖的用途，尤其是在保健食品中的用途。
背景技術(shù)：
竹筍多糖是從廢棄筍衣、筍頭中提取的可溶性多糖。多糖是由10個以上單糖組成的聚合物，作為可溶性的膳食纖維，它具備了膳食纖維的一般生理功能，現(xiàn)代科學(xué)業(yè)已證明，膳食纖維具有防治高血壓、冠心病等以及清除外源有害物質(zhì)等功能，。許多現(xiàn)代文明病如高血壓、高血脂、肥胖等的發(fā)病都與膳食纖維的缺乏相關(guān)。同時，多糖往往還具有更重要的生理活性，多糖與免疫功能的調(diào)節(jié)、細(xì)胞與細(xì)胞的識別。細(xì)胞間物質(zhì)的運(yùn)輸、癌癥的診斷與治療等有著密切的關(guān)系。多糖在醫(yī)藥上還是一種很好的佐劑。此外它還能控制細(xì)胞的分裂和分化，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和衰老等多種多樣的生物活性。目前，對多糖的化學(xué)研究以及生物功能的研究方興未艾，不同來源多糖的潛在功能確定尚須進(jìn)一步研究。
目前發(fā)現(xiàn)的功能性多糖的生理功能主要在以下兩個方面一、抗腫瘤人們已從不同的生物材料中得到多種具有抗腫瘤活性的多糖，如從香菇中得到的香菇多糖具有強(qiáng)的抗腫瘤活性，其抑制癌癥和抗腫瘤效果不是直接作用于移植性癌細(xì)胞，而是通過宿主調(diào)節(jié)而發(fā)生作用。
二、增強(qiáng)免疫作用已證實不同的多糖具有不同的免疫促進(jìn)作用。香菇多糖是理想的免疫促進(jìn)劑，它作為T細(xì)胞定位的佐劑和輔助T細(xì)胞刺激參與機(jī)體免疫反應(yīng)。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，其具有高度特異性免疫增強(qiáng)作用。銀耳多糖能促進(jìn)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，明顯促進(jìn)肝臟蛋白質(zhì)核酸的合成以及促進(jìn)骨髓造血功能，提高體液免疫力。黑木耳多糖可有效地提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)和百分率。藥理實驗證明，茶多糖具有增強(qiáng)免疫功能，促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬功能的作用。研究表明茶多糖是一種免疫促進(jìn)劑，能明顯促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，使免疫器官脾臟重量增加，其他多糖如大蒜、蘿卜等提取的多糖對T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分別具有不同的增強(qiáng)作用，可增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能。
雖然多糖的研究文獻(xiàn)較多，但竹筍多糖的研究較為罕見，文獻(xiàn)檢索后，僅見零散功能報道，報道的已有功能為抗腫瘤(動物實驗)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供竹筍粗多糖的新用途，即在保健食品功能定位中的用途。
本發(fā)明特點是，竹筍粗多糖在保健食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明具體竹筍粗多糖在制備具有免疫調(diào)節(jié)功能的保健食品中的新應(yīng)用。
本發(fā)明以竹筍或其干制品筍干為原料，提取其中的粗多糖，將其作為活性成分與食品工藝上可接受的其他原料及輔料開發(fā)成相宜的具有免疫調(diào)節(jié)功能的保健食品制劑，如膠囊劑(軟膠囊、硬膠囊)、滴丸劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液等。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面用竹筍粗多糖的免疫調(diào)節(jié)功能研究和急性毒性實驗的結(jié)果來說明其在制備具有免疫調(diào)節(jié)功能的保健食品中的用途。
一竹筍粗多糖的免疫調(diào)節(jié)試驗ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(MTT法)I試驗原理一.原理當(dāng)T淋巴細(xì)胞受ConA致分裂原刺激后發(fā)生母細(xì)胞轉(zhuǎn)化，活細(xì)胞特別是增殖細(xì)胞通過線粒體水解酶將MTT(一種淡黃色的唑鹽)分解為蘭紫色的甲月贊(formazan)結(jié)晶而顯色，其光密度值能夠反映細(xì)胞的增殖情況。
II試驗器材及試劑

III試驗步驟1.試劑配制1.1配制RPMI1640完全培養(yǎng)液根據(jù)RPMI1640的說明配制好RPMI1640培養(yǎng)液，過濾除菌，用前加入10％小牛血清，1％谷氨酰胺(200mmol/L)，青霉素(100U/ml)，鏈霉素(100ug/L)及5×10-5mol/L 2-巰基乙醇，用無菌的1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH調(diào)pH7.0-7.2，即完全培養(yǎng)液。
1.2ConA液用雙蒸水配制成100ug/mL的溶液，過濾除菌，在低溫冰箱(-20℃)保存。用前配制成5μl/ml
1.3PBS液0.02M pH7.2 1L1.4 0.155M NH4Cl 0.83g定容到100ml1.5無菌Hanks液用前以3.5％的無菌NaHCO3調(diào)pH7.2-7.4。
1.6 MTT液5mgMTT溶于1mLpH7.2的PBS中，現(xiàn)配使用。
1.7酸性異丙醇溶液96mL異丙醇中加入4ml 1mol/L的HCL，臨用前配制。
1.8竹筍粗多糖原液(100mg/ml)制備竹筍粗多糖粉40g→PBS400ml→冰塊中，攪拌混勻30min→超聲處理(冰浴)→4℃ 15000rpm 10min離心→取上清，10層紗布過濾→0.45μm濾膜抽濾→無菌0.22μm濾膜抽濾→4℃保存→用前分別配制成33.33mg/ml、11.11mg/ml2.脾細(xì)胞懸液制備處死小鼠，75％Alc浸泡，剪開，無菌取脾，置于盛有適量無菌Hanks液的小平皿中，用鑷子輕輕將脾撕碎，制成單個細(xì)胞懸液。經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，用Hanks液洗，離心10min(1500r/min)，加1mlNH4Cl3.5min，加Hanks液，離心10min(1500r/min)，再用Hanks液離心10min(1500r/min)洗一次。然后將細(xì)胞懸浮于2mL的完全培養(yǎng)液中，用臺酚蘭染色計數(shù)活細(xì)胞數(shù)(應(yīng)在95％以上)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106個/Ml。
3.淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)將細(xì)胞懸液分孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1Ml。再加入相應(yīng)試劑。

置5％CO2，37℃培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時加入MTT(5mg/mL)50ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后分裝到96孔培養(yǎng)板中，每個孔分裝3孔作為平行樣，用酶聯(lián)免疫檢測儀。以570nm波長測定光密度值。
IV實驗結(jié)果及判定1.實驗結(jié)果

2.判定從實驗結(jié)果可以看出真空干燥竹筍粗多糖粉試液的OD570值明顯高于其他項的值。從此項實驗結(jié)果看，真空干燥竹筍粗多糖粉試液具有促進(jìn)細(xì)胞免疫的功能。
二竹筍粗多糖的急性毒性試驗1.實驗材料與方法1.1實驗動物 昆明種小白鼠18～22g，雌雄各半，檢疫后備用。
1.2實驗方法 小鼠按體重均衡分為6個劑量組，每組20只。實驗前禁食不禁水12小時，根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，分為六個劑量組11.03g/Kg、13.00g/Kg、14.25g/Kg、16.00g/Kg、18.40g/Kg、20.75g/Kg，相鄰劑量比值為0.88，稀釋給小鼠灌胃，給樣后連續(xù)觀察4h、24h、48h、72h、7天各觀察一次。7天后記錄小白鼠毒性反應(yīng)及死亡數(shù)。
2.試驗結(jié)果

連續(xù)七天觀察后，未再死亡。死亡動物尸解肉眼觀察未見明顯病變。由此實驗得出，此樣品LD50＝14.25g/Kg(90％可信限)。按急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)判定，該樣品屬實際無毒類。
綜上所述，竹筍粗多糖在體外促進(jìn)細(xì)胞免疫的功能方面有良好效果，且毒副作用小，有著良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
本發(fā)明的竹筍粗多糖所用的原料為竹筍及其干制品的老根部或筍衣，而非有較高商品價值的筍干嫩尖，這將一定程度上提高了竹筍的有效利用率。本發(fā)明所述的方法工藝簡單，符合中國藥典的要求，無須特殊設(shè)備。本發(fā)明中的竹筍粗多糖采用通常的水提、膜濃縮或低壓薄膜濃縮、酒精沉淀提取法等適合于工業(yè)化生產(chǎn)的方法進(jìn)行制備。得到的竹筍粗多糖為淡灰黃色粉末。
上述的竹筍粗多糖提取法其步驟為按重量份計算，稱取干制竹筍0.1～20份，加水0.5～200份，加熱回流提取3～5小時，溫度控制在60～105℃(加熱前期溫度可設(shè)置得高些，后期只要保持溫度即可)，將提取液真空濃縮(真空度-0.4--0.01Mpa，溫度55-70℃)，濃縮到濃度為25-55度(以折光計)，冷卻。在攪拌下，將濃縮液緩緩加入3-15倍體積的乙醇中或?qū)?-15倍體積的乙醇緩緩加入攪拌(攪拌轉(zhuǎn)速為30-400轉(zhuǎn)/分)的濃縮液中，沉淀0.2-10小時，將沉淀物進(jìn)行真空干燥或冷凍干燥，得到竹筍粗多糖。
竹筍粗多糖具有較明顯的免疫調(diào)節(jié)功能，并且無味無臭，可以很方便地與其他食品原料配伍，或單獨(dú)作為主料開發(fā)產(chǎn)品，使得竹筍地有效成分得以充分利用，從而填補(bǔ)了我國竹筍利用的一項空白，具有實用價值。
具體實施例方式
下述實例用以進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不由此限制本發(fā)明范圍。
實施例1按重量份計算，稱取干制竹筍500克，放入回流提取罐中，加入2500毫升水，開啟加熱器加熱，并在回流冷凝器中接通冷凝水，當(dāng)料液沸騰后，關(guān)小加熱器，使料液微沸，提取4小時，冷卻后得到深棕色提取液；將提取液放入真空薄膜蒸發(fā)器，控制真空度在-0.08，溫度為65℃，將料液蒸發(fā)到40度(以折光計)，得到約200毫升濃縮液；將1000毫升95％的食用乙醇放入2000毫升燒杯，插入攪拌器，開啟攪拌，調(diào)整轉(zhuǎn)速在100轉(zhuǎn)/分，將濃縮液以20毫升/分鐘的速度加入到95％的食用乙醇中，加完料后繼續(xù)攪拌30分鐘以上，使多糖充分沉淀；停攪拌，沉淀4小時，吸出上層清液，將沉淀用濾紙濾出，將沉淀用50毫升無水乙醇洗滌兩次，真空干燥(溫度55℃，真空度-0.08Mpa)，得到5克左右的灰白色竹筍粗多糖粉末。
實施例2按重量份計算，稱取干制竹筍50公斤，放入多功能提取罐中，加入300公斤凈化水，開啟夾套蒸汽閥加熱，并在回流冷凝器中接通冷凝水，當(dāng)料液沸騰后，關(guān)小蒸汽閥，使料保持在70℃以上，提取6小時，將渣再用200公斤凈化水同樣提取一次，合并提取液，冷卻后得到深棕色提取液；將提取液放入真空濃縮罐，控制真空度在-0.08，溫度為70℃，將料液蒸發(fā)到38度(以折光計)，得到約60升濃縮液；將400升95％的食用乙醇放入500升回收罐中，開啟攪拌，調(diào)整轉(zhuǎn)速在50轉(zhuǎn)/分，將濃縮液以1升/分鐘的速度加入到95％的食用乙醇中，加完料后繼續(xù)攪拌60分鐘，使多糖充分沉淀；停攪拌，沉淀4小時，吸出上層清液，將下層料液打入三足離心機(jī)，以工業(yè)濾布為過濾介質(zhì)，將沉淀濾出，收集沉淀，將沉淀用10升無水乙醇洗滌兩次，離心后將沉淀真空干燥(溫度45℃，真空度—0.09Mpa)，得到650克左右的灰白色竹筍粗多糖粉末。
權(quán)利要求
1.竹筍粗多糖在制備具有免疫調(diào)節(jié)功能的保健食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及竹筍粗多糖在制備具有免疫調(diào)節(jié)功能的保健食品中的新用途。本發(fā)明以竹筍或其干制品筍干為原料，提取其中的粗多糖，將其作為活性成分與食品工藝上可接受的其他原料及輔料開發(fā)成相宜的具有免疫調(diào)節(jié)功能的保健食品制劑，如膠囊劑(軟膠囊、硬膠囊)、滴丸劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液等。實驗證明竹筍粗多糖在體外促進(jìn)細(xì)胞免疫的功能方面有良好效果，且毒副作用小，有著良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
文檔編號A23L1/09GK1969682SQ20061015447
公開日2007年5月30日 申請日期2006年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月2日
發(fā)明者楊志堅 申請人:浙江大學(xué)