專利名稱：一種培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)真菌分泌功能酶的培養(yǎng)基。
技術背景隨著工業(yè)的發(fā)展，產生了大量的難降解有機污染物，而利用現代生物技術 可以降解這些污染物。白腐真菌擁有強大的酶系，在胞外分泌產生，降解污染物主要靠酶系統來完成，其中漆酶是白腐真菌眾多酶中的一種。漆酶(Laccases) 是一種結合多個銅離子的蛋白質，屬于銅藍氧化酶，存在菇、菌及植物中。漆 酶可存活于空氣中，發(fā)生反應后唯一的產物就是水，因此漆酶是一種環(huán)保型酵 素。漆酶在木質素及其前體類似物降解中的重要作用，可降解250多種污染 物，被廣泛應用在紙漿生物漂白、廢水處理、環(huán)境污染物質去毒與降解等方面。 在最適宜的條件下用現有的培養(yǎng)基培養(yǎng)白腐真菌，培養(yǎng)的白腐真菌漆酶的產量 低(酶活僅為0.5411 U/mL)，不能滿足對漆酶大量生產的要求。發(fā)明內容本發(fā)明為了解決現有的培養(yǎng)基培養(yǎng)出的白腐真菌的漆酶產量低，不能滿足 對漆酶大量生產的要求的問題，而提供一種培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基。本發(fā)明的培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基為每1000mL的液體培養(yǎng)基含 有35 45mL的玉米粉浸出液、0.43 0.45g的酒石酸銨、0.19~0.21g的KH2P04、 0.05~0.056g的MgS04 '71120、 10.0 10.2mg的CaCl2、 0.8~1.2mL的無機溶液、 0.4~0.6mL的維生素溶液和0.2mol pH為7的HAc-NaAc的緩沖溶液。本發(fā)明的使培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基中的無機溶液中MnS04的濃 度為0.5g/L， NaCl的濃度為lg/L， FeS04 7H20的濃度為100mg/L， CoS04 的濃度為100mg/L，ZnSO4的濃度為100mg/L， CuS04 *5H20的濃度為10mg/L， A1K(S04)2的濃度為10mg/L， H3B03的濃度為10mg/L， NaMo04的濃度為 10mg/L。本發(fā)明的培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基中的維生素溶液中生物素的濃度為2mg/L，葉酸的濃度為2mg/L，維生素Bi的濃度為5mg/L，維生素B2的 濃度為5mg/L，維生素B6的濃度為10mg/L，煙酸的濃度為5mg/L。在最適宜白腐真菌分泌漆酶的條件下，本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)的白腐真菌漆 酶酶活為2.7979U/mL，是現有培養(yǎng)基的5倍。
具體實施方式
具體實施方式
一本實施方式的培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基為每 1000mL的液體培養(yǎng)基含有35 45mL的玉米粉浸出液、0.43 0.45g的酒石酸銨、 0.19 0.21g的KH2P04、 0.05~0.056g的MgS04 7H20、 10.0 10.2mg的CaCl2、 0.8 1.2mL的無機溶液、0.4 0.6mL的維生素溶液和0.2mol pH為7的HAc-NaAc的緩沖溶液。本實施方式的玉米粉浸出液的制備方法為將10g的玉米粉用60~100mL 的水煮沸30分鐘后，再濾出浸出液，控制其體積為35 45mL (浸出液體積大 于45mL進行蒸發(fā)濃縮，浸出液體積小于35mL加入蒸餾水補足)。
具體實施方式
二本實施方式的培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基為每 lOOOmL的液體培養(yǎng)基由40mL的玉米粉浸出液、0.44g的酒石酸銨、0.2g的 KH2P04、 0.053g的MgS04 '71120、 10.082mg的CaCl2、 lmL的無機溶液、0.5mL 的維生素溶液、0.2mol pH為7的HAc-NaAc的緩沖溶液和余量的水組成。本實施方式的玉米粉浸出液的制備方法為將10g的玉米粉用80~90mL 的水煮沸30分鐘后，再濾出浸出液，控制其體積為40mL。將本實施方式的培養(yǎng)基與現有液體培養(yǎng)基(每lOOOmL的現有液體培養(yǎng)基 含有20g的葡萄糖、3g的KH2P04、 1.5g的MgS04 7H20和200mL的土豆 浸出液)都用于培養(yǎng)偏腫擬栓菌(尸化^fo/ra,^g/6Z^"，白腐真菌的一種)， 并進行對比實驗，實驗按如下步驟進行在無菌操作臺上用無菌打孔器將長滿 偏腫擬栓菌的固體瓊脂培養(yǎng)基打成10mm的菌片，分別接種到含50mL本實施 方式的培養(yǎng)基與現有液體培養(yǎng)基的150mL三角瓶中，接種量為三片，在培養(yǎng) 箱25°C、 130r/min的條件下培養(yǎng)，先每兩天測定一次漆酶酶活，培養(yǎng)到第6 天后，每天測定漆酶酶活，直到測定到第12天，然后測出兩種液體培養(yǎng)基的 最高漆酶活性，結果表明本實施方式的培養(yǎng)基培養(yǎng)的偏腫擬栓菌分泌的漆酶 酶活為2.7979U/mL，現有液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的偏腫擬栓菌分泌的漆酶酶活為0.5411U/mL ，本實施方式的培養(yǎng)基培養(yǎng)的偏腫擬栓菌分泌的漆酶酶活是現有 液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的偏腫擬栓菌分泌的漆酶酶活的5倍多。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二的不同點為無機溶 液中MnS04的濃度為0.5g/L， NaCl的濃度為lg/L， FeS04 7H20的濃度為 100mg/L， CoS04的濃度為100mg/L， ZnS04的濃度為100mg/L， CuS04 '5&0 的濃度為10mg/L， A1K(S04)2的濃度為10mg/L， H3B03的濃度為10mg/L， NaMo04的濃度為10mg/L。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一或二的不同點為維生素 溶液中生物素的濃度為2mg/L，葉酸的濃度為2mg/L，維生素的濃度為 5mg/L，維生素B2的濃度為5mg/L，維生素B6的濃度為10mg/L，煙酸的濃度 為5mg/L。其它與具體實施方式
一或二相同。
權利要求
1、一種培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基為每1000mL的液體培養(yǎng)基含有35～45mL的玉米粉浸出液、0.43～0.45g的酒石酸銨、0.19～0.21g的KH2PO4、0.05～0.056g的MgSO4·7H2O、10.0～10.2mg的CaCl2、0.8～1.2mL的無機溶液、0.4～0.6mL的維生素溶液和0.2mol pH為7的HAc-NaAc的緩沖溶液。
2、 根據權利要求1所述的一種培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基，其特征 在于培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基為每lOOOmL的液體培養(yǎng)基由40mL的玉 米粉浸出液、0.44g的酒石酸銨、0.2gWKH2PO4、 0.053g的MgS04 7H20、 10.082mg的CaCl2、 lmL的無機溶液、0.5mL的維生素溶液、0.2mol pH為7 的HAc-NaAc的緩沖溶液和余量的水組成。
3、 根據權利要求1或2所述的一種培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基，其 特征在于無機溶液中MnSO4的濃度為0.5g/L，NaCl的濃度為lg/L，FeS04 '71120 的濃度為100mg/L， CoS04的濃度為100mg/L， ZnS04的濃度為100mg/L， CuS04 5H20的濃度為10mg/L， A1K(S04)2的濃度為lOmg/L, H3B03的濃度 為10mg/L， NaMo04的濃度為10mg/L。
4、 根據權利要求1或2所述的一種培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基，其 特征在于維生素溶液中生物素的濃度為2mg/L，葉酸的濃度為2mg/L，維生素 B!的濃度為5mg/L，維生素B2的濃度為5mg/L，維生素B6的濃度為10mg/L， 煙酸的濃度為5mg/L。
全文摘要
一種培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基，它涉及一種培養(yǎng)真菌分泌功能酶的培養(yǎng)基。本發(fā)明解決了現有培養(yǎng)基培養(yǎng)出的白腐真菌的漆酶產量低，不能滿足對漆酶大量生產的要求的問題。本發(fā)明的培養(yǎng)白腐真菌分泌漆酶的培養(yǎng)基為每1000mL的液體培養(yǎng)基含有35～45mL的玉米粉浸出液、0.43～0.45g的酒石酸銨、0.19～0.21g的KH₂PO₄、0.05～0.056g的MgSO₄·7H₂O、10.0～10.2mg的CaCl₂、0.8～1.2mL的無機溶液、0.4～0.6mL的維生素溶液和0.2mol pH為7的HAc-NaAc的緩沖溶液。本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)的白腐真菌分泌的漆酶酶活是現有培養(yǎng)基的5倍多。
文檔編號C12R1/645GK101235354SQ20081006405
公開日2008年8月6日 申請日期2008年3月3日 優(yōu)先權日2008年3月3日
發(fā)明者紅 梁, 軍 陳, 高大文 申請人:東北林業(yè)大學