專利名稱：一種皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
皮革是由動(dòng)物皮經(jīng)過一系列物理和化學(xué)的加工處理而轉(zhuǎn)變成的一種固定耐用的物質(zhì)，主要成分是交聯(lián)蛋白質(zhì)，在制革過程中使用的原輔材料中許多也包含蛋白質(zhì)、糖類、脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此皮革及其皮革制品中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)能被微生物所利用，只要外界溫度、濕度條件適合，微生物就會(huì)生長(zhǎng)繁殖，嚴(yán)重影響皮革及其制品的質(zhì)量。影響皮革最主要的微生物是霉菌，產(chǎn)生霉變，因此皮革抗菌防霉是制革行業(yè)和皮革制品使用過程中不可忽視的，而對(duì)其抗霉菌性能的檢測(cè)和評(píng)價(jià)既有利于生產(chǎn)廠家和管理部門對(duì)產(chǎn)品的監(jiān)測(cè)，也可以
為消費(fèi)者提供較好的保障。
目前，抑制霉菌效果的檢測(cè)方法有很多，主要涉及塑料、織物、涂料、陶瓷等材料及其制品，但關(guān)于皮革材料及其制品抑制霉菌效果的實(shí)用的檢測(cè)方法卻未見有系統(tǒng)詳細(xì)的報(bào)道。
美國(guó)化學(xué)家協(xié)會(huì)規(guī)定的方法包括l.樣品；2.樣品的處理；3.試驗(yàn)用沙土孢子混合物或水孢子混合懸液；4.操作和培養(yǎng)條件；5.評(píng)價(jià)與報(bào)告。其中在相對(duì)濕度85%下至少培養(yǎng)30天，檢測(cè)周期較長(zhǎng)，實(shí)用性較差。
另外，辜海彬等在"一種新型抗菌防霉劑在涂層上的應(yīng)用研究"中應(yīng)用奎因法測(cè)定鞋襯里革的抑霉菌性能包括l.霉菌孢子懸浮液的制備；2.步驟。其中在染菌皮片中央滴加涂布察氏培養(yǎng)基等步驟較煩瑣，且在該實(shí)驗(yàn)條件下極易凝固，不易涂開；培養(yǎng)15天，實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)；在樣品上滴加富集營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基與實(shí)際使用中皮革材料及其制品長(zhǎng)霉條件相差較遠(yuǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)周期較短，實(shí)用性強(qiáng)，只在樣品表面接種霉菌孢子，避免了霉菌孢子太多引起的菌絲體瘋長(zhǎng)帶來(lái)的影響，并且模擬了自然環(huán)境，可直觀的分析霉菌的生長(zhǎng)情況。
本發(fā)明的一種皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)方法，包括
3(1) 孢子懸液的制備
將8~15ml滅菌的0.85%NaCl溶液或PBS緩沖液(磷酸鹽緩沖液)加入到一支培養(yǎng)5~7天的霉菌斜面培養(yǎng)物中，用接種環(huán)慢慢地從培養(yǎng)物表面刮離孢子，輕輕地振蕩液體分散孢子而未分離菌絲體，并且慢慢地將霉菌懸液倒入裝有少量玻璃珠的燒瓶中，充分振蕩孢子懸液，然后用滅菌的單層棉布或玻璃纖維棉過濾，調(diào)整孢子濃度在lX104 10X107cfu/ml，制成孢子懸浮液，或?qū)⒏鲉畏N霉菌孢子懸浮液按等體積混合，制成混合霉菌孢子懸浮液；
(2) 試驗(yàn)樣品的制備及操作
將皮革材料及其制品剪成(2. 5±0. 5)cmX (3. 8±0. 5)cm長(zhǎng)方形或直徑為2. 5cm的圓片，經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在倒入平皿中的培養(yǎng)基上，用移液器或無(wú)菌吸管取0.2ml的孢子懸液或混合孢子懸浮液均勻地滴加在皮革樣品上，使菌液邊沿大于樣品邊沿2. 5mm的距離，待其完全吸收，將樣品在28'C土rC培養(yǎng)3 5天；
(3)評(píng)價(jià)和報(bào)告
直觀評(píng)價(jià)報(bào)告在樣品上真菌生長(zhǎng)的程度，必要時(shí)可使用顯微鏡(X50)，按照以下生長(zhǎng)情況分類
不長(zhǎng)I級(jí)
生長(zhǎng)low (生長(zhǎng)覆蓋面積)<10%II級(jí)
10%<medium (生長(zhǎng)覆蓋面積)<50%m級(jí)
50%<high (生長(zhǎng)覆蓋面積)<90%廳
宏觀生長(zhǎng)(生長(zhǎng)覆蓋面積)>90%無(wú)抑制霉菌性
所述步驟(1)中的霉菌為黑曲霉、黑根霉、產(chǎn)黃青霉、總狀毛霉或白地霉；所述步驟(1)中的孢子懸液為含有非離子潤(rùn)濕劑的NaCl溶液的斜面培養(yǎng)物，其中非
離子潤(rùn)濕劑為可分散、懸浮微生物且保持水分作用的無(wú)毒表面活性劑Tween20或Tween80，
該非離子潤(rùn)濕劑在NaCl溶液中的質(zhì)量百分含量為0.05% 0.2%;
所述步驟(2)中的培養(yǎng)基為馬鈴薯一葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或馬丁氏培養(yǎng)基。
有益效果
(1) 本發(fā)明的檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)周期較短，實(shí)用性強(qiáng)，有利于生產(chǎn)廠家和管理部門對(duì)產(chǎn)品的檢測(cè)，也可以為消費(fèi)者提供較好的保障；
(2) 該檢測(cè)方法只在樣品表面接種霉菌孢子，避免了霉菌孢子太多引起的菌絲體瘋長(zhǎng)帶
4來(lái)的影響，并且模擬了自然環(huán)境，可直觀的分析霉菌的生長(zhǎng)情況。


圖1為實(shí)施例1的霉菌生長(zhǎng)情況照片圖；圖2為實(shí)施例2的霉菌生長(zhǎng)情況照片圖；圖3為實(shí)施例3的霉菌生長(zhǎng)情況照片圖；圖4為實(shí)施例4的霉菌生長(zhǎng)情況照片圖；圖5為實(shí)施例5的霉菌生長(zhǎng)情況照片圖6為實(shí)施例6的霉菌生長(zhǎng)情況照片圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限
定的范圍。
實(shí)施例1
(1) 孢子懸液的制備
將10ml滅菌的含有0.1%Tween80的0.85%NaCl溶液加入到一支培養(yǎng)5天的產(chǎn)黃青霉斜面中，用接種環(huán)慢慢地從培養(yǎng)物表面刮離孢子。輕輕地振蕩液體分散孢子而未分離菌絲體，并且慢慢地將霉菌懸液倒入裝有少量玻璃珠的燒瓶中，充分振蕩孢子懸液，然后用滅菌的單層棉布或玻璃纖維棉過濾，將孢子濃度調(diào)整到lX106 10X106cfu/ml。
(2) 試驗(yàn)樣品的制備及操作
樣品剪成(2. 5±0. 5) cmX (3. 8±0. 5) cm;
試驗(yàn)樣品經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在倒入平皿中的培養(yǎng)基上。用移液器或無(wú)菌吸管取0.2ml的孢子懸液或混合孢子懸浮液均勻地滴加在樣品上，使菌液邊沿與樣品邊沿的距離大于2.5mm，待其完全吸收，將樣品在28°C 土1。C培養(yǎng)5天。 、
(3) 結(jié)果如下圖
結(jié)果表明經(jīng)過防霉處理的皮革，無(wú)霉菌生成，而對(duì)照樣顯示宏觀生長(zhǎng)覆蓋面積>90%，說明無(wú)抑制產(chǎn)黃青霉效果。
實(shí)施例2
(1)孢子懸液的制備
將10ml滅菌的含有0.1%Tween80的0.85%NaCl溶液加入到一支培養(yǎng)5天的黑根霉斜面中，用接種環(huán)慢慢地從培養(yǎng)物表面刮離孢子。輕輕地振蕩液體分散孢子而未分離菌絲體，并且慢慢地將霉菌懸液倒入裝有少量玻璃珠的燒瓶中，充分振蕩孢子懸液，然后用滅菌的單層棉布或玻璃纖維棉過濾，將孢子濃度調(diào)整到lXl06 10Xl06cfu/ml。
(2) 試驗(yàn)樣品的制備及操作樣品剪成(2. 5±0. 5) cmX (3. 8±0. 5) cm;
試驗(yàn)樣品經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在倒入平皿中的培養(yǎng)基上。用移液器或無(wú)菌吸管取0.2ml的孢子懸液或混合孢子懸浮液均勻地滴加在樣品上，使菌液邊沿與樣品邊沿的距離大于2.5mm，待其完全吸收，將樣品在28。C土rC培養(yǎng)5天。
(3) 結(jié)果如下圖
結(jié)果表明經(jīng)過防霉處理的皮革，無(wú)霉菌生成，而對(duì)照樣顯示宏觀生長(zhǎng)覆蓋面積〉90%，說明無(wú)抑制黑根霉效果。
實(shí)施例3
(1) 孢子懸液的制備
分別將10ml滅菌的含有0.1%Tween80的0.85%NaCl溶液加入到一支培養(yǎng)5天的產(chǎn)黃青霉、黑曲霉斜面中，用接種環(huán)慢慢地從培養(yǎng)物表面刮離孢子。輕輕地振蕩液體分散孢子而未分離菌絲體，并且慢慢地將霉菌懸液倒入裝有少量玻璃珠的燒瓶中，充分振蕩孢子懸液，然后用滅菌的單層棉布或玻璃纖維棉過濾，將各單種霉菌孢子懸浮液按等體積混合，制成混合霉菌孢子懸浮液，將混合孢子液濃度調(diào)整到lX106 10X106CfU/mI。
(2) 試驗(yàn)樣品的制備及操作樣品剪成(2. 5±0. 5)cmX (3.8±0. 5) cm;
試驗(yàn)樣品經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在倒入平皿中的培養(yǎng)基上。用移液器或無(wú)菌吸管取0.2ml的孢子懸液或混合孢子懸浮液均勻地滴加在樣品上，使菌液邊沿與樣品邊沿的距離大于2.5mra，待其完全吸收，將樣品在28°C 士rC培養(yǎng)3天。
(3) 結(jié)果如下圖-
結(jié)果表明經(jīng)過防霉處理的皮革，無(wú)霉菌生成，而對(duì)照樣顯示宏觀生長(zhǎng)覆蓋面積約18%,說明3天時(shí)抑制產(chǎn)黃青霉、黑曲霉等級(jí)為in級(jí)。
實(shí)施例4
(1)孢子懸液的制備
分別將10ml滅菌的含有0.1%TWeen80的0.85%NaCl溶液加入到一支培養(yǎng)5天的產(chǎn)黃青霉、黑曲霉斜面中，用接種環(huán)慢慢地從培養(yǎng)物表面刮離孢子。輕輕地振蕩液體分散孢子而未分離菌絲體，并且慢慢地將霉菌懸液倒入裝有少量玻璃珠的燒瓶中，充分振蕩孢子懸液，然后用滅菌的單層棉布或玻璃纖維棉過濾，將各單種霉菌孢子懸浮液按等體積混合，制成混合霉菌孢子懸浮液，將混合孢子液濃度調(diào)整到lX106 10X10ecfu/ml。
(2) 試驗(yàn)樣品的制備及操作樣品剪成(2.5土0. 5)cmX (3.8±0. 5) cm;
試驗(yàn)樣品經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在倒入平皿中的培養(yǎng)基上。用移液器或無(wú)菌吸管取0.2ml的孢子懸液或混合孢子懸浮液均勻地滴加在樣品上，使菌液邊沿與樣品邊沿的距離大于2.5mm，待其完全吸收，將樣品在28°C ± 1。C培養(yǎng)4天。
(3) 結(jié)果如下圖
結(jié)果表明經(jīng)過防霉處理的皮革，無(wú)霉菌生成，而對(duì)照樣顯示宏觀生長(zhǎng)覆蓋面積約為75%，說明4天時(shí)無(wú)抑制產(chǎn)黃青霉、黑曲霉等級(jí)為IV級(jí)。
實(shí)施例5
(1) 孢子懸液的制備
分別將10ml滅菌的含有0.1%Tween80的0.85%NaCl溶液加入到一支培養(yǎng)5天的產(chǎn)黃青霉、黑曲霉斜面中，用接種環(huán)慢慢地從培養(yǎng)物表面刮離孢子。輕輕地振蕩液體分散孢子而未分離菌絲體，并且慢慢地將霉菌懸液倒入裝有少量玻璃珠的燒瓶中，充分振蕩孢子懸液，然后用滅菌的單層棉布或玻璃纖維棉過濾，將各單種霉菌孢子懸浮液按等體積混合，制成混合霉菌孢子懸浮液，將混合孢子液濃度調(diào)整到lX106 10X106cfu/ml。
(2) 試驗(yàn)樣品的制備及操作樣品剪成(2. 5±0. 5)craX (3. 8±0. 5)cm;
試驗(yàn)樣品經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在倒入平皿中的培養(yǎng)基上。用移液器或無(wú)菌吸管取0.2ml的孢子懸液或混合孢子懸浮液均勻地滴加在樣品上，使菌液邊沿與樣品邊沿的距離大于2.5咖，待其完全吸收，將樣品在28。C土rC培養(yǎng)5天。
(3) 結(jié)果如下圖
結(jié)果表明經(jīng)過防霉處理的皮革，無(wú)霉菌生成，而對(duì)照樣顯示宏觀生長(zhǎng)覆蓋面積>90%,說明無(wú)抑制產(chǎn)黃青霉和黑曲霉效果。
實(shí)施例6
(1)孢子懸液的制備
將10ml滅菌的含有0.P/。Tween80的PBS緩沖液溶液加入到一支培養(yǎng)5天的產(chǎn)黃青霉斜面中，用接種環(huán)慢慢地從培養(yǎng)物表面刮離孢子。輕輕地振蕩液體分散孢子而未分離菌絲體，并且慢慢地將霉菌懸液倒入裝有少量玻璃珠的燒瓶中，充分振蕩孢子懸液，然后用滅菌的單層棉布或玻璃纖維棉過濾，將孢子濃度調(diào)整到lX106 10X].06CfU/ml。
(2) 試驗(yàn)樣品的制備及操作樣品剪成(2.5士0.5)cmX (3.8土0.5)cm;
試驗(yàn)樣品經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在倒入平皿中的培養(yǎng)基上。用移液器或無(wú)菌吸管取0.2ml的孢子懸液或混合孢子懸浮液均勻地滴加在樣品上，使菌液邊沿與樣品邊沿的距離大于2.5mm，待其完全吸收，將樣品在28。C土rC培養(yǎng)5天。
(3) 結(jié)果如下圖
結(jié)果表明經(jīng)過防霉處理的皮革，無(wú)霉菌生成，而對(duì)照樣顯示宏觀生長(zhǎng)覆蓋面積約為75%，說明5天時(shí)抑制產(chǎn)黃青霉等級(jí)為IV級(jí)。
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權(quán)利要求
1. 一種皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)方法，包括(1)孢子懸液的制備將8～15ml滅菌的0.85％NaCl溶液或磷酸鹽緩沖液加入到一支培養(yǎng)5～7天的霉菌斜面培養(yǎng)物中，用接種環(huán)慢慢地從培養(yǎng)物表面刮離孢子，輕輕地振蕩液體分散孢子而未分離菌絲體，并且慢慢地將霉菌懸液倒入裝有少量玻璃珠的燒瓶中，充分振蕩孢子懸液，然后用滅菌的單層棉布或玻璃纖維棉過濾，調(diào)整孢子濃度在1×104～10×107cfu/ml，制成孢子懸浮液，或?qū)⒏鲉畏N霉菌孢子懸浮液按等體積混合，制成混合霉菌孢子懸浮液；(2)試驗(yàn)樣品的制備及操作將皮革材料及其制品剪成2.5±0.5cm×3.8±0.5cm長(zhǎng)方形或直徑為2.5cm的圓片，經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在倒入平皿中的培養(yǎng)基上，用移液器或無(wú)菌吸管取0.2ml的孢子懸液或混合孢子懸浮液均勻地滴加在皮革樣品上，使菌液邊沿大于樣品邊沿2.5mm的距離，待其完全吸收，將樣品在28℃±1℃培養(yǎng)3～5天；(3)評(píng)價(jià)和報(bào)告直觀評(píng)價(jià)報(bào)告在樣品上真菌生長(zhǎng)的程度，必要時(shí)可使用顯微鏡×50進(jìn)行鏡檢。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)方法，其特征在 于所述步驟(1)中的霉菌為黑曲霉、黑根霉、產(chǎn)黃青霉、總狀毛霉或白地霉。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟(2)中的培養(yǎng)基為馬鈴薯一葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或馬丁氏培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的檢測(cè)方法，包括(1)將NaCl溶液或PBS緩沖液加入到霉菌斜面培養(yǎng)物中，調(diào)整孢子懸液濃度在1×10⁴～10×10⁷cfu/ml，制成霉菌孢子懸液，或?qū)⒏鲉畏N霉菌孢子懸浮液按等體積混合，制成混合霉菌孢子懸浮液；(2)將皮革材料及其制品經(jīng)紫外線照射滅菌后，放在培養(yǎng)基上，將孢子懸液滴加在皮革樣品上，于28℃±1℃培養(yǎng)3～5天；(3)直觀評(píng)價(jià)在樣品上真菌生長(zhǎng)的程度，必要時(shí)可使用顯微鏡×50進(jìn)行鏡檢。該檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)周期較短，實(shí)用性強(qiáng)，只在樣品表面接種霉菌孢子，避免了霉菌孢子太多引起的菌絲體瘋長(zhǎng)帶來(lái)的影響，并模擬自然環(huán)境，分析霉菌的生長(zhǎng)情況。
文檔編號(hào)C12R1/82GK101497916SQ20091004580
公開日2009年8月5日 申請(qǐng)日期2009年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月23日
發(fā)明者鵑 杜, 汪姣寧, 艷 羅, 鄧云霞, 毅 鐘 申請(qǐng)人:東華大學(xué)