專利名稱：一種豬舍發(fā)酵床復(fù)合微生物菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生物菌劑，特別涉及一種用于豬舍發(fā)酵床的復(fù)合微生物菌劑。本
發(fā)明還涉及這種復(fù)合微生物菌劑的制備方法。背景技術(shù)：
我國養(yǎng)殖規(guī)模和產(chǎn)值每年的遞增速度超過10%，但與此同時(shí)，由養(yǎng)殖業(yè)帶來的環(huán)境污染越來越嚴(yán)重?，F(xiàn)階段農(nóng)村、農(nóng)業(yè)以存在著以家庭分散式為主的經(jīng)濟(jì)組織與經(jīng)營方式，雖然規(guī)?；B(yǎng)殖是養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展方向，但在相當(dāng)長時(shí)間內(nèi)，家庭或小型分散式養(yǎng)殖的方式不會(huì)根本改變，同時(shí)，由于小型或分散養(yǎng)殖方式，其污染防治的管理面廣量大，由此造成的糞便污染問題比規(guī)模養(yǎng)殆場更為嚴(yán)重與突出。國家環(huán)?？偩衷谌珖?3個(gè)省市進(jìn)行的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，全國的90%規(guī)模化畜禽養(yǎng)殖場未經(jīng)過環(huán)境影響評價(jià)，60%的養(yǎng)殖場缺乏必要的污染防治措施。未經(jīng)處理的畜禽糞便任意堆積，污水糞便隨意排放，從而帶來一系列的環(huán)境問題如占用和污染農(nóng)ffl、水體，產(chǎn)生惡臭和造成生物污染。因此，如何合理處置與利用畜禽糞便，是全社會(huì)必需面對的一個(gè)重大問題。
發(fā)酵床養(yǎng)豬法的原理是利用發(fā)酵床中各種微生物進(jìn)行自然生物發(fā)酵；通過微生物耗氧發(fā)酵分解豬的糞尿，避免臭味、異味的產(chǎn)生；再通過微生物厭氧發(fā)酵產(chǎn)生豬可食用的菌體蛋白飼料和益生菌活菌體，既給豬提供了大量的高營養(yǎng)飼料，促進(jìn)了豬對飼料的消化吸收，又增強(qiáng)了豬的抗病能力。目前國內(nèi)發(fā)酵床養(yǎng)豬使用的菌劑大多是手工作方式采集的，并通過自然培養(yǎng)的方式進(jìn)行增值，缺乏科學(xué)有效的調(diào)控手段，產(chǎn)品的質(zhì)量無法保證。
我國目前已有一些單位相繼推出不同組合的發(fā)酵床養(yǎng)豬用復(fù)合微生物制劑，但普遍的問
題是在復(fù)合微生物篩選培養(yǎng)過程中，缺乏基本的理論指導(dǎo)以及成熟的生產(chǎn)工藝，對復(fù)合培養(yǎng)
的發(fā)酵過程及其個(gè)菌群之間的互相作用及其機(jī)理較為生疏，導(dǎo)致產(chǎn)品活菌總數(shù)不能保持一定
水平，產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定，影響了其在使用過程中的效果。本發(fā)明的復(fù)合菌劑能夠較好地解決
不同微生物之間的協(xié)同、共生關(guān)系，從而保證穩(wěn)定的作用效果。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種能夠快速分解豬的糞尿，避免臭味、異味的產(chǎn)生并能產(chǎn)生大量益生菌菌體蛋白的復(fù)合菌劑。本發(fā)明的目的還在于提供一種豬舍發(fā)酵床復(fù)合微生物菌劑的制備方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明中所涉及的百分比除另有注明之外為質(zhì)量比，本發(fā)明的產(chǎn)品采用這樣的方法來制備的
1.發(fā)酵菌株的選擇及培養(yǎng)基的制備
3A菌——枯草芽孢桿菌(CICC 10088)，培養(yǎng)基為牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化鈉—5克，PH 7. 2 7. 4。
B菌——植物乳桿菌(CICC 6026)，培養(yǎng)基為5。 B6麥芽汁中加入酵母膏0. 5，無菌碳酸鈣O. 6。
C菌——產(chǎn)朊假絲酵母(CICC 31170)，培養(yǎng)基為5。 B6麥芽汁。D菌——白地霉 (CICC 1315)，培養(yǎng)基為5° B6麥芽汁。E菌——米曲霉(CICC 2011)，.培養(yǎng)基為5。 B6米曲汁。2.復(fù)合菌劑的制備過程2. 1凍干菌粉末的活化
分別量取0. 9%的生理鹽水10ml于5只試管內(nèi)，經(jīng)12rC滅菌20分鐘冷卻至30°C ，將5株菌安瓶內(nèi)的凍干菌粉末在無菌狀態(tài)下分別倒入0.9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30。C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。
2. 2擴(kuò)大培養(yǎng)
2.2. l母發(fā)酵劑的制備
分別量取5株菌培養(yǎng)基各200ml于5只500ml三角瓶內(nèi)，121。C滅菌20分鐘冷卻至30°C ，,按培養(yǎng)基體積的10%接種2. l步驟中已經(jīng)活化的菌種，在28-30'C搖床培養(yǎng)24小時(shí)，作為母發(fā)酵劑。
2. 2. 2生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備
首先配置10%的脫脂奶乳濁液，向脫脂乳中加入2%的液態(tài)甘油、2%低聚木糖、2%葡萄糖，121"C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發(fā)酵劑，30。C搖床培養(yǎng)30——36小時(shí)，檢測5株菌生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)，各生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)》109cfu/rnl，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數(shù)〈10、fu/ral，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達(dá)到1(fcfu/ml。
2.3粉末凍干菌種的制備
將成熟的生產(chǎn)發(fā)酵劑在無菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-3(TC冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。2.4復(fù)合菌劑的制備
按凍干菌粉末重量，取A菌粉末2-4份，B菌粉末3-5份，C菌粉末3-5份，D菌粉末2_4份，E菌粉末3-5份，充分混勻后真空包裝即可得到復(fù)合菌劑。
3. 使用方法
將本發(fā)明產(chǎn)品按發(fā)酵床的面積5-20g/nr'的比例，少許溫水溶解后添加到發(fā)酵床中，自然條件下成熟。4.應(yīng)用效果
下面通過具體實(shí)驗(yàn)來證明本發(fā)明專利的應(yīng)用效果
選擇斷乳的仔豬50頭，分成5組，每組10頭，分別飼養(yǎng)在不同的圈舍中。將復(fù)合菌劑按5g/nr'、 10g/m2、 15g/ni2、 20g/ra2分別應(yīng)用于四個(gè)試驗(yàn)組，另外一組作為對照，同時(shí)保持5組圈舍的其它條件相同，各組豬出欄時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)如下表
生長情況記錄表
復(fù)合園用更 (g/m"圏舍狀況生病次 數(shù)生長情況出欄平均重量 (斤)
實(shí)驗(yàn)1組5無較大臭味，無蚊 蟲場滋生3毛色較光亮，清 潔干凈205
實(shí)驗(yàn)2組10無較大明顯臭味， 無蚊蠅滋生2毛色較光亮，清 潔干凈208
實(shí)驗(yàn)3組15無明顯臭味，無蚊 蠅滋生1毛色光亮，清潔 干凈220
實(shí)驗(yàn)4組20無明顯臭味，無蚊 蠅滋生0毛色光亮，清潔 干凈235
對照組0惡臭、滋生蚊蠅6毛色暗淡，軀體 較臟185
由上表可以看出，使用復(fù)合菌劑的4組試驗(yàn)，豬的生病率明顯降低，并且圈舍干凈整》
毛色光亮，平均體重超過對照組20斤以上；試驗(yàn)組隨復(fù)合菌用量的增大，生病次數(shù)逐漸減少，
出欄體重逐漸增加。具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作更詳細(xì)的描述本發(fā)明采用的5株菌名稱及菌種來源如下
枯草芽孢桿菌(CICC 10088)、植物乳桿菌(CICC6026)、產(chǎn)朊假絲酵母(CICC 31170)白地霉 (CICC 1315)、米曲霉(CICC2011)五株菌種均購于中國工業(yè)微生物菌種保藏中心；本發(fā)明中將上述菌株簡稱為A菌、B菌、C菌、D菌、E菌。
實(shí)施例一
1.發(fā)酵菌株的選擇及培養(yǎng)基的制備
A菌——枯草芽孢桿菌(CICC 10088)，培養(yǎng)基為牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化鈉5克，PH 7. 2 7. 4。B菌——植物乳桿菌(CICC 6026)，培養(yǎng)基為5。 B6麥芽汁中加入酵母膏0. 5，無菌碳酸鈣0. 6。
C菌——產(chǎn)朊假絲酵母(CICC 31170)，培養(yǎng)基為5。 B6麥芽汁。D菌——白地霉 (CICC 1315)，培養(yǎng)基為5。 B6麥芽汁。E菌——米曲霉(CICC 2011),培養(yǎng)基為5。 B6米曲汁。2.復(fù)合菌劑的制備過程2. 1凍干菌粉末的活化
分別量取0. 9%的生理鹽水10ml于5只試管內(nèi)，經(jīng)12rC滅菌20分鐘冷卻至30°C，將5株菌安瓶內(nèi)的凍干菌粉末在無菌狀態(tài)下全部倒入0.9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30'C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。
2. 2發(fā)酵菌擴(kuò)大培養(yǎng)
2.2. l母發(fā)酵劑的制備
分別量取5株菌培養(yǎng)基各200ml于5只500ml三角瓶內(nèi)，121'C滅菌20分鐘冷卻至3(TC,按培養(yǎng)基體積的10%接種2. 1歩驟中已經(jīng)活化的菌種，在3(TC搖床培養(yǎng)24小時(shí)，作為母發(fā)酵劑。
2.2.2生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備
首先配置10%的脫脂奶乳濁液，向脫脂乳中加入2%的液態(tài)甘油、2%低聚木糖、2%葡萄糖，121。C滅菌20分鐘冷卻至3CTC，分別按2%體積比例接種母發(fā)酵劑，30。C搖床培養(yǎng)30——36小時(shí)，檢測5株菌生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)，各生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)》109cfu/ml，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數(shù)〈10^fu/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達(dá)到109cfu/ml。
2.3粉末凍干菌種的制備
將成熟的生產(chǎn)發(fā)酵劑在無菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-3(TC冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。
2. 4發(fā)酵菌復(fù)配
按凍干菌粉末重量，取A菌粉末20克，B菌粉末30克，C菌粉末30克，D菌粉末20克，E菌粉末30克，充分混勻后真空包裝即可得到復(fù)合菌劑。
3. 使用方法
將本發(fā)明產(chǎn)品按發(fā)酵床的面積5-20g/m2的比例，少許溫水溶解后添加到發(fā)酵床中，自然條件下成熟。實(shí)施例二
1.發(fā)酵菌株的選擇及培養(yǎng)基的制備A菌——枯草芽孢桿菌(CICC 10088)，培養(yǎng)基為牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化鈉5克，PH 7. 2 7. 4。
B菌——植物乳桿菌(CICC 6026)，培養(yǎng)基為5° B6麥芽汁中加入酵母膏0. 5，無菌碳酸鈣。.6。
C菌——產(chǎn)朊假絲酵母(CICC 31170)，培養(yǎng)基為5。 B6麥芽汁。D菌——白地霉 (CICC 1315)，培養(yǎng)基為5。 B6麥芽汁。E菌——米曲霉(CICC 2011)，培養(yǎng)基為5° B6米曲汁。2.復(fù)合菌劑的制備過程2. 1凍干菌粉末的活化
分別量取0. 9%的生理鹽水10ml于5只試管內(nèi)，經(jīng)121'C滅菌20分鐘冷卻至30°C ，將5株菌安瓶內(nèi)的凍干菌粉末在無菌狀態(tài)下全部倒入0.9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30"C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。
2. 2發(fā)酵菌擴(kuò)大培養(yǎng)
2.2.1母發(fā)酵劑的制備
分別量取5株菌培養(yǎng)基各200ml于5只500ml三角瓶內(nèi)，121。C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養(yǎng)基體積的10%接種2. 1歩驟中已經(jīng)活化的菌種，在3(TC搖床培養(yǎng)24小時(shí)，作為母發(fā)酵劑。
2. 2.2生產(chǎn)發(fā)酵劑的制備
首先配置10%的脫脂奶乳濁液，向脫脂乳中加入2%的液態(tài)甘油、2%低聚木糖、2%葡萄糖，121。C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發(fā)酵劑，30。C搖床培養(yǎng)30——36小時(shí)，檢測5株菌生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)，各生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)^109cfu/ml，視同為發(fā)酵成熟，如果活菌數(shù)〈l(fcfu/ml，繼續(xù)培養(yǎng)，直至達(dá)到109cfu/ml。
2.3粉末凍干菌種的制備
將成熟的生產(chǎn)發(fā)酵劑在無菌條件下導(dǎo)入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-3(TC冰柜速凍，凍結(jié)后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。
2. 4發(fā)酵菌復(fù)配
按凍干菌粉末重量，取A菌粉末40克，B菌粉末50克，C菌粉末50克，D菌粉末40克，E菌粉末50克，充分混勻后真空包裝即可得到復(fù)合菌劑。
3. 使用方法
將本發(fā)明產(chǎn)品按發(fā)酵床的面積5-20g/m2的比例，少許溫水溶解后添加到發(fā)酵床中，自然條件下成熟。
權(quán)利要求
1、一種豬舍發(fā)酵床復(fù)合微生物菌劑及其制備方法，其特征是枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，產(chǎn)朊假絲酵母，白地霉，米曲霉，5株菌生產(chǎn)發(fā)酵劑，各生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)≥109cfu/ml，然后對5株菌生產(chǎn)發(fā)酵劑酌量添加保護(hù)劑進(jìn)行凍干，按凍干菌粉末重量，取枯草芽孢桿菌粉末2-4份，植物乳桿菌粉末3-5份，產(chǎn)朊假絲酵母粉末3-5份，白地霉粉末2-4份，米曲霉菌粉末3-5份，充分混勻后真空包裝即可得到微生物復(fù)合菌劑。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述一種豬舍發(fā)酵床復(fù)合微生物菌劑及其制備方法，其特征是復(fù)合菌 劑按發(fā)酵床面積5-20g/W的比例，少許溫水溶解后添加到發(fā)酵床中，自然條件下成熟。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種豬舍發(fā)酵床復(fù)合微生物菌劑及其制備方法。首先制備枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，產(chǎn)朊假絲酵母，白地霉，米曲霉，5株菌生產(chǎn)發(fā)酵劑，各生產(chǎn)發(fā)酵劑活菌數(shù)≥10⁹cfu/ml，然后對5株菌生產(chǎn)發(fā)酵劑酌量添加保護(hù)劑進(jìn)行凍干，按凍干菌粉末重量，取枯草芽孢桿菌粉末2-4份，植物乳桿菌粉末3-5份，產(chǎn)朊假絲酵母粉末3-5份，白地霉粉末2-4份，米曲霉菌粉末3-5份，充分混勻后真空包裝即可得到復(fù)合菌劑。在豬舍發(fā)酵床中使用本發(fā)明產(chǎn)品5-20g/m²可以明顯降低豬圈舍的臭味，減少蚊蠅滋生機(jī)會(huì)，降低豬的生病次數(shù)，使豬能夠健康成長，保護(hù)環(huán)境的同時(shí)為人類提供綠色豬肉。
文檔編號C12N1/20GK101463335SQ200910071279
公開日2009年6月24日 申請日期2009年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月16日
發(fā)明者超 張, 娜 李, 李澤奇, 趙云財(cái), 鄒東恢 申請人:黑龍江澤農(nóng)寒地生物工程有限公司