專利名稱：用于能力驗(yàn)證活動(dòng)中抗酸桿菌顯微鏡檢查的痰涂片及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及衛(wèi)生檢疫、衛(wèi)生監(jiān)管、醫(yī)藥技術(shù)、公共衛(wèi)生領(lǐng)域，具體地說是涉及一種 痰涂片，尤其涉及一種用于能力驗(yàn)證活動(dòng)中抗酸桿菌顯微鏡檢查的痰涂片；此外，本發(fā)明還 涉及該痰涂片的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
作為WT0的成員國，2002年4月我國建立了與國際慣例接軌的合格評(píng)定體系，其中 包括實(shí)驗(yàn)室國家認(rèn)可體系。建立質(zhì)量管理體系的基本作用是幫助實(shí)驗(yàn)室提供持續(xù)滿足要求的數(shù)據(jù)和報(bào)告、提 高競爭力、增強(qiáng)顧客滿意。(1)實(shí)驗(yàn)室為顧客持續(xù)提供滿意的服務(wù)需要質(zhì)量管理體系。質(zhì)量 管理體系方法鼓勵(lì)實(shí)驗(yàn)室分析顧客要求，規(guī)定滿足顧客要求的檢測/校準(zhǔn)實(shí)現(xiàn)過程及相關(guān) 的支持過程，并使其持續(xù)受控。質(zhì)量管理體系能提供持續(xù)改進(jìn)的框架，以增加顧客和其它相 關(guān)方滿意的機(jī)會(huì)。(2)質(zhì)量管理體系也是顧客的需要。顧客可通過質(zhì)量管理體系評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 室的能力，選擇滿意的供方。一、能力驗(yàn)證能力驗(yàn)證(Proficiency Testing)是利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)來判定實(shí)驗(yàn)室和檢查機(jī)構(gòu) 能力的活動(dòng)，也是認(rèn)可機(jī)構(gòu)加入和維持國際相互承認(rèn)協(xié)議(MRA)的必要條件之一。室間質(zhì)量評(píng)估是根據(jù)與其他網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室比較批量測試和盲法復(fù)檢結(jié)果評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 室能力及操作質(zhì)量的過程。室內(nèi)質(zhì)量控制是指實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的各操作過程的內(nèi)部檢查與監(jiān)測。認(rèn)證是指由認(rèn)證機(jī)構(gòu)證明產(chǎn)品、服務(wù)、管理體系符合相關(guān)技術(shù)規(guī)范、相關(guān)技術(shù)規(guī)范 的強(qiáng)制性要求或者標(biāo)準(zhǔn)的合格評(píng)定活動(dòng)。認(rèn)可是由權(quán)威機(jī)構(gòu)對(duì)檢測/校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室及其人員有能力進(jìn)行特定類型的檢測/校 準(zhǔn)做出正式承認(rèn)的程序。所謂權(quán)威機(jī)構(gòu)，是指具有法律或行政授權(quán)的職責(zé)和權(quán)力的政府或 民間機(jī)構(gòu)。這種承認(rèn)，意味著承認(rèn)檢測/校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室有管理能力和技術(shù)能力從事特定領(lǐng)域 的工作。因而，實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的實(shí)質(zhì)是對(duì)實(shí)驗(yàn)室開展的特定的檢測/校準(zhǔn)項(xiàng)目的認(rèn)可，并非實(shí) 驗(yàn)室的所有業(yè)務(wù)活動(dòng)。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可可以提高實(shí)驗(yàn)室自身的管理水平和技術(shù)能力，確保 出具數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性，增加顧客對(duì)實(shí)驗(yàn)室的信任。具體而言，可以歸納為以下幾個(gè)方(1)表明實(shí)驗(yàn)室具備了按有關(guān)國際準(zhǔn)則開展校準(zhǔn)/檢測的技術(shù)能力。(2)增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室在校準(zhǔn)/檢測市場的競爭能力，贏得政府部門和社會(huì)各界的信任。(3)參與國際間實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可雙邊、多邊合作，得到更廣泛的承認(rèn)。(4)列入《國家實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可名錄》，提高實(shí)驗(yàn)室的知名度。(5)可在認(rèn)可項(xiàng)目范圍內(nèi)使用認(rèn)可標(biāo)志。根據(jù)中國實(shí)驗(yàn)室國家認(rèn)可委員會(huì)(CNAL)的要求，申請(qǐng)認(rèn)可的檢測/校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室必
4須滿足的條件包括具有明確的法律地位，即實(shí)驗(yàn)室或所在母體應(yīng)是一個(gè)能夠獨(dú)立承擔(dān)法 律責(zé)任的實(shí)體；按認(rèn)可準(zhǔn)則及其應(yīng)用說明建立質(zhì)量管理體系，且各要素(過程)都已運(yùn)行并 有相應(yīng)記錄，包括完整的內(nèi)部審核和管理評(píng)審；質(zhì)量管理體系運(yùn)行至少六個(gè)月；在申請(qǐng)后 三個(gè)月內(nèi)可接受CNAL的現(xiàn)場評(píng)審；具有申請(qǐng)認(rèn)可范圍內(nèi)的檢測/校準(zhǔn)能力，并在可能時(shí)至 少參加過一次CNAL或其承認(rèn)的能力驗(yàn)證活動(dòng)；具有支配所需資源的權(quán)力；遵守CNAL認(rèn)可 規(guī)則、認(rèn)可政策等有關(guān)規(guī)定，包括支付認(rèn)可費(fèi)用，履行相關(guān)義務(wù)。CNAL能夠向?qū)嶒?yàn)室提供全面的認(rèn)可，包括對(duì)產(chǎn)品或材料進(jìn)行監(jiān)測、測試或評(píng)價(jià)的 實(shí)驗(yàn)室，以及對(duì)檢測儀器或測量裝置進(jìn)行校準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可機(jī)構(gòu)許諾不對(duì)申請(qǐng)認(rèn) 可的實(shí)驗(yàn)室有任何的歧視行為，即不論其屬性，為私有的，股份制的、行業(yè)的或政府的，也不 論其人員數(shù)量的多少，規(guī)模的大小或檢測/校準(zhǔn)活動(dòng)范圍的大小，都一視同仁地提供認(rèn)可 服務(wù)。國際上實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可采用的四項(xiàng)原則是自愿申請(qǐng)、非歧視性、專家評(píng)審和國家認(rèn)可。自愿申請(qǐng)?jiān)瓌t是指實(shí)驗(yàn)室是否申請(qǐng)認(rèn)可，是根據(jù)其需求自主決定的，即認(rèn)可機(jī)構(gòu) 不會(huì)強(qiáng)制任何一個(gè)實(shí)驗(yàn)室申請(qǐng)。但對(duì)于實(shí)驗(yàn)室而言，這一自愿性原則實(shí)際上會(huì)受到顧客需 求的制約，即當(dāng)顧客提出實(shí)驗(yàn)室必須通過認(rèn)可方可承擔(dān)起檢測/校準(zhǔn)業(yè)務(wù)，而實(shí)驗(yàn)室又希 望承接這項(xiàng)業(yè)務(wù)時(shí)，申請(qǐng)認(rèn)可便可成為一種強(qiáng)制行為；另外，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室的母體機(jī)構(gòu)或其管理 機(jī)構(gòu)由要求時(shí)，申請(qǐng)認(rèn)可也會(huì)成為一種強(qiáng)制要求。無論基于上述哪一種情況，強(qiáng)制的要求都 不會(huì)來自認(rèn)可機(jī)構(gòu)。對(duì)于檢測/校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室而言，應(yīng)選擇IS0/IEC 17025實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可。二、痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測“痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測”作為發(fā)現(xiàn)結(jié)核病的傳染源、確定診斷和制定 化療方案、考核療效、評(píng)價(jià)防治效果的重要方法，是結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查中效率_成本比最高 的檢測技術(shù)。結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢測是結(jié)核病控制目標(biāo)的重要組成部分，對(duì)于加強(qiáng)結(jié)核病控制 工作，實(shí)現(xiàn)全球結(jié)核病控制目標(biāo)具有重要意義，在現(xiàn)代結(jié)核病控制工作中起著不可或缺的 重要作用。“痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測”也是結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢查中的最重要項(xiàng)目， 開展痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測項(xiàng)目的能力驗(yàn)證活動(dòng)是為具有該檢測項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn) 室進(jìn)行該項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可提供了依據(jù)，也是幫助實(shí)驗(yàn)室提供持續(xù)滿足結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷 要求的數(shù)據(jù)和報(bào)告、提高競爭力、增強(qiáng)顧客滿意的一種重要途徑。實(shí)施該項(xiàng)目能力驗(yàn)證活動(dòng) 不僅可以了解參評(píng)實(shí)驗(yàn)室在該項(xiàng)檢測能力上的水平，促進(jìn)抗酸染色操作技術(shù)、顯微鏡檢測 技術(shù)的規(guī)范化，以持續(xù)提高實(shí)驗(yàn)室的工作效率和可靠性，并通過采取一系列措施改進(jìn)和不 斷提高實(shí)驗(yàn)室痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測的能力，加強(qiáng)對(duì)結(jié)核病檢測實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)督 管理，提高我國結(jié)核病檢測實(shí)驗(yàn)室的水平，確保結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢測中痰涂片抗酸染色查找 抗酸桿菌檢測的質(zhì)量，促進(jìn)結(jié)核病防治工作的發(fā)展。也為國內(nèi)各地區(qū)實(shí)驗(yàn)室在痰涂片檢測 抗酸桿菌項(xiàng)目的工作中提供一個(gè)技術(shù)、質(zhì)量管理的交流平臺(tái)?？顾釛U菌(acid-fast bacillus, AFB)主要指分枝桿菌由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成分 的特殊性，具有經(jīng)堿性染料染色后能夠耐受酸性介質(zhì)脫色的特性，具備相應(yīng)染色特征的細(xì) 菌習(xí)慣上被稱為抗酸菌?？顾崛旧ㄊ侵缚顾峋哂心褪芩嵝越橘|(zhì)脫色的生物性狀，此類細(xì)菌在石碳酸 (苯酚)的協(xié)同作用下，被復(fù)紅染色劑著色，能夠耐受酸性乙醇脫色，顯微鏡觀察時(shí)保持紫
5紅色，而其他脫落細(xì)胞或標(biāo)本中的非抗酸菌被酸性乙醇脫色后，可被復(fù)染劑亞甲藍(lán)染為藍(lán) 色。為紀(jì)念方法的發(fā)明人抗酸染色法也稱Ziehl-Neelson染色法，Z_N染色法，萋-尼氏染 色?？顾釛U菌主要包括分枝桿菌和少數(shù)具有抗酸染色特征的細(xì)菌。分枝桿菌包括結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群和非結(jié)核分枝桿菌。結(jié)核分枝桿菌多數(shù)為 桿狀、稍彎曲；菌體寬度0.3-0. 6 ym(微米)；菌體長度不一，在0.5-8 ym之間，多數(shù)在 1.5-3. 5pm;少數(shù)菌體較長者可呈螺旋狀；染色良好的結(jié)核分枝桿菌菌體內(nèi)，能夠發(fā)現(xiàn)著 色較深的異染顆粒。含結(jié)核分枝桿菌較多的新鮮標(biāo)本經(jīng)抗酸染色在1000倍放大的顯微鏡 下，既能發(fā)現(xiàn)單個(gè)存在的細(xì)菌，也能看到聚集成簇或分支狀排列的細(xì)菌。多數(shù)非結(jié)核分枝桿 菌的形態(tài)較結(jié)核分枝桿菌短且粗，呈棒狀、短棒狀，甚至顆粒狀。痰涂片是指用人體分泌出的痰液直接或經(jīng)過處理后，取一定量均勻涂抹于清潔的 載玻片上，干燥后而成的痰膜。合格的痰液是人體在深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物?？顾釛U菌顯微鏡檢查的目的1、傳染性肺結(jié)核病的診斷指標(biāo)，2、評(píng)價(jià)傳染性結(jié)核 病的化療效果，3、為結(jié)核病流行病學(xué)指標(biāo)服務(wù)。目前制約痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測項(xiàng)目的能力驗(yàn)證活動(dòng)開展的關(guān)鍵的 瓶頸就是樣品的制備，其難度在于1、分枝桿菌細(xì)菌懸液是顆粒物的懸濁液，在大規(guī)模樣品制備過程中如何保證每個(gè) 樣品的均勻性符合要求是難點(diǎn)。2、痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測是一項(xiàng)半定量的微生物形態(tài)學(xué)項(xiàng)目，其診斷 依據(jù)是根據(jù)顯微鏡下1000倍放大后觀察到平均視野中痰涂片里含有抗酸桿菌的數(shù)量給予 半定量的檢測結(jié)果，如0條/300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌-報(bào)告陰性；發(fā)現(xiàn)1-2條抗酸桿菌 /300個(gè)視野-報(bào)告可疑；發(fā)現(xiàn)3-9條抗酸桿菌/100個(gè)視野-報(bào)告1+ ；發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸桿 菌/10個(gè)視野_報(bào)告2+ ；發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸桿菌/個(gè)視野-報(bào)告3+ ；發(fā)現(xiàn)> 9條抗酸桿菌 /個(gè)視野-報(bào)告4+;如何保證大規(guī)模樣品中每個(gè)樣品的半定量濃度的一致是難點(diǎn)。痰涂片 抗酸染色查找抗酸桿菌檢測報(bào)告方式參見GB15987-1995傳染性肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理 原則附錄B痰結(jié)核桿菌檢查(補(bǔ)充件)。3、由于樣品的檢測結(jié)果來源于平均視野的細(xì)菌含量，因此主觀因素客觀存在，如 何克服主觀因素對(duì)能力驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)估的影響，是難點(diǎn)。由于樣品制備和結(jié)果判定的困難，所以覆蓋各種半定量濃度的痰涂片抗酸染色查 找抗酸桿菌檢測能力驗(yàn)證活動(dòng)或室間質(zhì)量評(píng)估或室內(nèi)質(zhì)量控制沒有在我國進(jìn)行過。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種用于能力驗(yàn)證活動(dòng)中抗酸桿菌顯微鏡檢 查的痰涂片。該痰涂片的均勻性和穩(wěn)定性較高，采用這種痰涂片可以應(yīng)用于結(jié)核病檢測能 力驗(yàn)證活動(dòng)或?qū)嶒?yàn)室室間質(zhì)量評(píng)估、室內(nèi)質(zhì)量控制的工作中，從而對(duì)痰涂片抗酸染色查找 抗酸桿菌檢測這個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行質(zhì)量控制和技術(shù)人員的培訓(xùn)。為此，本發(fā)明還提供了該痰涂片 的制備方法和用途。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)在本發(fā)明的一方面，提供一種用于能力驗(yàn)證活動(dòng)中抗酸桿菌顯微鏡檢查的痰涂 片，其包括陰性、1+、2+、3+、4+共五種抗酸桿菌含量的痰涂片，該陰性痰涂片的抗酸桿菌含
6量為0條/300個(gè)視野；該1+痰涂片的抗酸桿菌含量為3-9條抗酸桿菌/100個(gè)視野；該2+ 痰涂片的抗酸桿菌含量為1-9條抗酸桿菌/10個(gè)視野；該3+痰涂片的抗酸桿菌含量為1-9 條抗酸桿菌/個(gè)視野；該4+痰涂片的抗酸桿菌含量為> 9條抗酸桿菌/個(gè)視野；所述的抗 酸桿菌來源于痰液或者培養(yǎng)細(xì)菌菌落。在本發(fā)明的另一方面，提供一種上述痰涂片的制備方法，所述痰涂片含有的抗酸 桿菌來源于痰液，該方法包括如下步驟1)取不同結(jié)核病患者的晨痰，放置于無菌痰標(biāo)本采集容器中，細(xì)菌滅活處理(可 采用80°C水浴，30分鐘-120分鐘)；2)自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，使痰液液化并用PBS稀釋后，離心，使細(xì) 菌集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入PBS混勻作為痰懸液，用痰涂片抗酸染色顯微 鏡鏡檢法檢測細(xì)菌數(shù)量作為初始等級(jí)濃度，然后根據(jù)抗酸桿菌目的等級(jí)濃度計(jì)算稀釋倍 數(shù)，并用PBS稀釋至目的等級(jí)濃度的痰稀釋液；3)取上述痰稀釋液于載玻片上涂抹成橢圓形痰膜，自然干燥，火焰固定；在載玻 片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，室溫保存。在步驟2)中，所述痰稀釋液中抗酸桿菌的目的等級(jí)濃度為0條/ml，0. 8-2. 2 X 104 條/ml，0. 3-2. 2父105條/1111，0. 3-2. 2X 106 條/ml，或者> 2. 2X106 條/ml。在步驟3)完成后，還包括如下包裝步驟痰涂片采用三層包裝，第一層將痰涂片 放置在專用的載玻片盒中，第二層在載玻片盒外用抗震隔膜包裹，第三層是外用防水紙箱 包裝。步驟3)中，所述樣品編號(hào)是計(jì)算機(jī)編程設(shè)計(jì)一組無重復(fù)數(shù)字的隨機(jī)序列號(hào)，將該 數(shù)字對(duì)應(yīng)于每個(gè)痰涂片，使每個(gè)樣品獲得唯一的數(shù)字標(biāo)識(shí)，該數(shù)字標(biāo)識(shí)中的數(shù)字表示制備 地區(qū)、制備時(shí)間及痰涂片序列號(hào)。在本發(fā)明的另一方面，提供另一種上述痰涂片的制備方法，所述痰涂片含有的抗 酸桿菌來源于培養(yǎng)細(xì)菌菌落，該方法包括如下步驟1)卡介苗菌懸液的制備取卡介苗的初生長兩周的細(xì)菌菌落放入玻璃磨菌器底 部或具有玻璃珠的離心管內(nèi)，其中加入含0.5%吐溫-80的PBS，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(可采用 80°C水浴，30分鐘-120分鐘)；自然冷卻后，充分?jǐn)嚢枵袷幨咕撼嗜槔覙?，以?. 5%吐 溫-80的生理鹽水或者PBS磨菌并稀釋，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷幔涑蒷mg/ml的菌懸液；2)取不同非結(jié)核病患者的晨痰，放置于無菌痰標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理 (可采用80°C水浴，30分鐘-120分鐘)；3)自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，使痰液液化并用PBS稀釋，離心，使痰中 固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作為痰懸液；4)用痰涂片抗酸染色顯微鏡鏡檢法檢測細(xì)菌數(shù)量作為初始等級(jí)濃度，然后根據(jù)抗 酸桿菌目的等級(jí)濃度計(jì)算稀釋倍數(shù)，用步驟3)制成的痰懸液將步驟1)制成的菌懸液稀釋 至目的等級(jí)濃度的含菌痰稀釋液；取上述含菌痰稀釋液于載玻片上涂抹成橢圓形痰膜，自 然干燥，火焰固定；在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，室溫保存。在步驟4)中，所述含菌痰稀釋液中抗酸桿菌的目的等級(jí)濃度為0條/ml， 0. 8-2. 2X104 條 /ml，0. 3-2. 2X 105 條 /ml，0. 3-2. 2X 106 條 /ml，或者> 2. 2X 106 條 /ml。步驟4)完成后，還包括如下包裝步驟痰涂片采用三層包裝，第一層將痰涂片放
7置在專用的載玻片盒中，第二層在載玻片盒外用抗震隔膜包裹，第三層是外用防水紙箱包裝。步驟4)中，所述樣品編號(hào)是計(jì)算機(jī)編程設(shè)計(jì)一組無重復(fù)數(shù)字的隨機(jī)序列號(hào)，將該 數(shù)字對(duì)應(yīng)于每個(gè)痰涂片，使每個(gè)樣品獲得唯一的數(shù)字標(biāo)識(shí)，該數(shù)字標(biāo)識(shí)中的數(shù)字表示制備 地區(qū)、制備時(shí)間及痰涂片序列號(hào)。在本發(fā)明的另一方面，提供一種上述痰涂片的均勻性檢測方法，包括如下步驟
1)從相同等級(jí)濃度的痰涂片中隨機(jī)抽取需要數(shù)量的痰涂片，用抗酸染色法對(duì)抽樣 的痰涂片進(jìn)行抗酸染色，并對(duì)抽取的各痰涂片進(jìn)行顯微鏡檢測，記數(shù)并報(bào)告1-300個(gè)視野 下觀察到的抗酸桿菌的數(shù)量；2)檢測結(jié)果為根據(jù)每個(gè)痰涂片中的抗酸桿菌量判定得到的分級(jí)值陰性、1+、2+、 3+、4+ ；將檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較；陰性痰涂片抽樣痰涂片結(jié)果均為陰性，則說明 被抽樣的總體均勻；1+痰涂片抽樣痰涂片結(jié)果均為1+或2+或1-8條/300視野，則說明 被抽樣的總體均勻；2+痰涂片抽樣痰涂片結(jié)果均為1+或2+或3+，則說明被抽樣的總體均 勻；3+痰涂片抽樣痰涂片結(jié)果均為2+或3+或4+，則說明被抽樣的總體均勻；4+痰涂片 抽樣痰涂片結(jié)果均為3+或4+，則說明被抽樣的總體均勻；“1+”以上的痰涂片出現(xiàn)陰性結(jié) 果，說明被抽樣的總體不均勻。在本發(fā)明的另一方面，提供一種上述痰涂片的穩(wěn)定性檢測方法，包括如下步驟1)隨機(jī)抽取需要數(shù)量的痰涂片，包裝后快遞到不同地區(qū)實(shí)驗(yàn)室，室溫保存至計(jì)劃 返回日期，以快遞方式返回，用抗酸染色法對(duì)返回痰涂片進(jìn)行抗酸染色后，用顯微鏡法查找 抗酸桿菌；或者隨機(jī)抽取需要數(shù)量的痰涂片，用抗酸染色法進(jìn)行痰涂片抗酸染色后快遞到 不同地區(qū)實(shí)驗(yàn)室，室溫保存至計(jì)劃返回日期，以快遞方式返回，用顯微鏡法查找抗酸桿菌；2)將檢測的結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較，陰性痰涂片檢測結(jié)果均為陰性，則說明 痰涂片穩(wěn)定性合格；1+痰涂片檢測結(jié)果為1+或2+或1-8條/300視野，則說明痰涂片穩(wěn) 定性合格；2+痰涂片檢測結(jié)果為1+或2+或3+，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；3+痰涂片檢測 結(jié)果為2+或3+或4+，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；4+痰涂片檢測結(jié)果為3+或4+，說明痰涂 片穩(wěn)定性合格；“1+”以上的痰涂片出現(xiàn)陰性結(jié)果，說明痰涂片不穩(wěn)定；若結(jié)果有差異，說明 痰涂片不穩(wěn)定，需查找痰涂片不穩(wěn)定的原因，重新制備痰涂片或改變貯藏、運(yùn)輸方式。在本發(fā)明的另一方面，提供一種上述痰涂片在能力驗(yàn)證中的應(yīng)用。在本發(fā)明的另一方面，提供一種上述痰涂片在實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)估和室內(nèi)質(zhì)量控 制中的應(yīng)用。本發(fā)明用于能力驗(yàn)證活動(dòng)中抗酸桿菌顯微鏡檢查的痰涂片，是進(jìn)行“痰涂片抗酸 染色查找抗酸桿菌檢測”項(xiàng)目的能力驗(yàn)證活動(dòng)的關(guān)鍵。用于能力驗(yàn)證活動(dòng)中抗酸桿菌顯微 鏡檢查的痰涂片與其它類型痰涂片的差別在于1、它必須是由不同抗酸桿菌含量的痰涂片 組成，2、每一種抗酸桿菌含量的痰涂片數(shù)量要具有一定規(guī)模并且各痰涂片間的抗酸桿菌數(shù) 量要均勻，能滿足能力驗(yàn)證活動(dòng)的要求，3、痰涂片的穩(wěn)定性要能滿足能力驗(yàn)證活動(dòng)的要求， 4、痰涂片的生物安全方面要能滿足能力驗(yàn)證活動(dòng)的要求。進(jìn)行能力驗(yàn)證痰涂片的制備可以 保證該項(xiàng)目能力驗(yàn)證得以實(shí)施。本發(fā)明的有益效果在于2009年4月-2010年2月，申請(qǐng)人采用上述方法制備了痰 涂片，對(duì)全國43家專業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了 “痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測”的能力驗(yàn)證活動(dòng)。結(jié)果顯示本次能力驗(yàn)證共發(fā)送440個(gè)檢測樣品，回報(bào)了 430個(gè)樣品的檢測結(jié)果，有414 個(gè)樣品檢測結(jié)果正確，占回報(bào)樣品數(shù)的96.3%。在回報(bào)結(jié)果的43家實(shí)驗(yàn)室中，有30家實(shí)驗(yàn) 室獲得100分，10家實(shí)驗(yàn)室獲得95分，1家實(shí)驗(yàn)室獲得90分，2家實(shí)驗(yàn)室獲得85分。43家 參加實(shí)驗(yàn)室評(píng)分均在80分以上，全部合格。共有16個(gè)檢測結(jié)果出現(xiàn)低假陽性(4個(gè))和量 化誤差(12個(gè))的不符合情況，涉及13家實(shí)驗(yàn)室。不符合結(jié)果中存在系統(tǒng)性偏高的情況涉 及3家實(shí)驗(yàn)室。其中9038實(shí)驗(yàn)室回報(bào)結(jié)果中4個(gè)陰性樣本中存在1個(gè)低假陽性誤判，6個(gè) 陽性樣本中存在2個(gè)量化誤差誤判。本次能力驗(yàn)證的結(jié)果說明了本發(fā)明痰涂片的制備方法 是科學(xué)的、合理的也是可實(shí)施的，且均勻性和穩(wěn)定性符合能力驗(yàn)證活動(dòng)的要求，是一種實(shí)用 性很強(qiáng)的痰涂片和痰涂片制備方法。


圖1是實(shí)施例中4+痰涂片經(jīng)抗酸桿菌染色后在顯微鏡下放大1000倍的示意圖；圖2是實(shí)施例中3+痰涂片經(jīng)抗酸桿菌染色后在顯微鏡下放大1000倍的示意圖；圖3是實(shí)施例中2+痰涂片經(jīng)抗酸桿菌染色后在顯微鏡下放大1000倍的示意圖；圖4是實(shí)施例中1+痰涂片經(jīng)抗酸桿菌染色后在顯微鏡下放大1000倍的示意圖；圖5是實(shí)施例中陰性痰涂片經(jīng)抗酸桿菌染色后在顯微鏡下放大1000倍的示意圖。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體 條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。1.目的開展本次實(shí)驗(yàn)室檢測能力驗(yàn)證工作的目的是了解該檢測領(lǐng)域的整體水平，本次能 力驗(yàn)證的結(jié)果是實(shí)驗(yàn)室痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測能力的客觀反映。通過此次能力 驗(yàn)證項(xiàng)目的實(shí)施，可加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行結(jié)核病病原體檢測工作的監(jiān)督管理，促進(jìn)結(jié)核病防 治工作的發(fā)展。2.實(shí)驗(yàn)方案本次能力驗(yàn)證計(jì)劃方案的設(shè)計(jì)遵循IS0/IEC導(dǎo)則43-1 1997《利用實(shí)驗(yàn)室間對(duì)比 的能力驗(yàn)證》與GB/T15483. 1-1999《利用實(shí)驗(yàn)室間對(duì)比的能力驗(yàn)證》。對(duì)每個(gè)參加實(shí)驗(yàn)室 進(jìn)行唯一性編碼。在報(bào)告中只出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室代碼，從而對(duì)參加實(shí)驗(yàn)室的有關(guān)信息進(jìn)行保密。2.1樣品的設(shè)計(jì)本次能力驗(yàn)證方案制備不同濃度的10組樣品，其中陰性抗酸桿菌濃度3組、1+抗 酸桿菌濃度3組、2+抗酸桿菌濃度2組、3+抗酸桿菌濃度1組、4+抗酸桿菌濃度1組，每組 中有150張含菌量相同的樣品，賦予每張樣品唯一性編號(hào)。從10組樣品中各隨機(jī)抽取一個(gè) 檢測樣品，組成檢測樣品組，分發(fā)到參加實(shí)驗(yàn)室。各參加實(shí)驗(yàn)室收到的檢測樣品編號(hào)不同， 確保樣品的保密性，如實(shí)反映各實(shí)驗(yàn)室的檢測水平，保證了能力驗(yàn)證的嚴(yán)肅性。2. 2樣品的制備2.2. 1、載玻片的準(zhǔn)備將新載玻片浸泡于95 %的乙醇中，過夜，取出自然干燥，備用。2. 2. 2、陰性痰涂片的制備方法
陰性樣品制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提 供)，放置于無菌痰標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘-120分鐘)；自然 冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC (氫氧化鈉-N乙酰半胱氨 酸)混勻20分鐘后，用PH6. 8 PBS (磷酸緩沖液)稀釋至50ml，離心3000g(離心力)，30分 鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清取沉淀物加入與痰標(biāo)本等體積的PBS混勻，取上 述濃度的痰處理懸液混勻，后取30 yl于載玻片上涂抹成IX 2cm左右的橢圓形痰膜，自然 干燥，火焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，制備成陰性痰 涂片，放置于樣品盒中，室溫保存。2. 2. 3、陽性痰涂片的制備方法實(shí)施例1抗酸桿菌來源于痰液的制備方法a) 1+痰涂片的制備方法取不同結(jié)核病患者的晨痰(上海疾病預(yù)防控制中心提供)，放置于無菌痰標(biāo)本采 集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，加 入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g，30分 鐘，使結(jié)核菌集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入lml PBS混勻作為痰懸液，用抗酸染 色顯微鏡鏡檢法檢測其中細(xì)菌數(shù)量，用PBS稀釋至終濃度為2. 2X104條/ml的痰稀釋液， 取上述痰稀釋液30 yl于載玻片上涂抹成lX2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥，火焰固定。 在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室溫保存。b) 2+痰涂片的制備方法取不同結(jié)核病患者的晨痰(上海疾病預(yù)防控制中心提供)，放置于無菌痰標(biāo)本采 集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，120分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，加 入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g，30分 鐘，使結(jié)核菌集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入lml PBS混勻作為痰懸液，用抗酸染 色顯微鏡鏡檢法檢測其中細(xì)菌數(shù)量，用PBS稀釋至終濃度為2. 2X 105條/ml的痰稀釋液， 取上述痰稀釋液30 yl于載玻片上涂抹成lX2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥，火焰固定。 在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室溫保存。c) 3+痰涂片的制備方法取不同結(jié)核病患者的晨痰(上海疾病預(yù)防控制中心提供)，放置于無菌痰標(biāo)本采 集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，80分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，加 入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g，30分 鐘，使結(jié)核菌集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入lml PBS混勻作為痰懸液，用抗酸染 色顯微鏡鏡檢法檢測其中細(xì)菌數(shù)量，用PBS稀釋至終濃度為2. 2X 106條/ml的痰稀釋液， 取上述痰稀釋液30 yl于載玻片上涂抹成lX2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥，火焰固定。 在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室溫保存。d) 4+痰涂片的制備方法取不同結(jié)核病患者的晨痰(上海疾病預(yù)防控制中心提供)，放置于無菌痰標(biāo)本采 集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，加 入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8 PBS稀釋至50ml，離心3000g，30分 鐘，使結(jié)核菌集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入lml PBS混勻作為痰懸液，用抗酸染色顯微鏡鏡檢法檢測其中細(xì)菌數(shù)量，用PBS稀釋至終濃度為2. 3X 106條/ml的痰稀釋液， 取上述痰稀釋液30 yl于載玻片上涂抹成lX2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥，火焰固定。 在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室溫保存。實(shí)施例2抗酸桿菌來源于培養(yǎng)細(xì)菌菌落的制備方法1、卡介苗菌懸液的制備取上海生物制品研究所提供的卡介苗的初生長兩周的細(xì)菌菌落放入玻璃磨菌器 底部，其中加入100 ill含0.5%吐溫-80的PBS，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘)；自 然冷卻后，插入磨菌棒捻動(dòng)使呈乳酪樣，以含0. 5%吐溫-80的生理鹽水磨菌稀釋，與標(biāo)準(zhǔn) 麥?zhǔn)媳葷峁?MacFarland No. 1)比濁，配成lmg/ml的菌懸液。2、陽性痰涂片的制備a) 1+痰涂片的制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提供)，放置于無菌痰 標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，70分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管 內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g， 30分鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作 為痰懸液；用上述痰懸液將lmg/ml的菌懸液稀釋至終濃度為0. 8X 104條/ml的含菌痰稀 釋液，取上述含菌痰稀釋液30 u 1于載玻片上涂抹成1 X 2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥， 火焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室 溫保存。b) 2+痰涂片的制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提供)，放置于無菌痰 標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管 內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g， 30分鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作 為痰懸液；用上述痰懸液將lmg/ml的菌懸液稀釋至終濃度為0. 3X 105條/ml的含菌痰稀 釋液，取上述含菌痰稀釋液30 u 1于載玻片上涂抹成1 X 2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥， 火焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室 溫保存。c) 3+痰涂片的制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提供)，放置于無菌痰 標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管 內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g， 30分鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作 為痰懸液；用上述痰懸液將lmg/ml的菌懸液稀釋至終濃度為0. 3X 106條/ml的含菌痰稀 釋液，取上述含菌痰稀釋液30 u 1于載玻片上涂抹成1 X 2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥， 火焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室 溫保存。d) 4+痰涂片的制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提供)，放置于無菌痰標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管 內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g， 30分鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作 為痰懸液；用上述痰懸液將lmg/ml的菌懸液稀釋至終濃度為2. 25X 106條/ml的含菌痰稀 釋液，取上述含菌痰稀釋液30 u 1于載玻片上涂抹成1 X 2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥， 火焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室 溫保存。實(shí)施例3抗酸桿菌來源于培養(yǎng)細(xì)菌菌落的制備方法1、卡介苗菌懸液的制備取卡介苗的初生長兩周的細(xì)菌菌落(上海生物制品研究所提供)放入2ml離心管 內(nèi)，其中加入4-5顆玻璃珠和lOOiil含0. 5%吐溫-80的PBS，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴， 120分鐘)；自然冷卻后，振蕩研磨細(xì)菌，使菌液呈乳酪樣，以含0. 5%吐溫-80的PBS稀釋 后，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁?MacFarland No. 1)比濁，配成lmg/ml的菌懸液。2、陽性痰涂片的制備a) 1+痰涂片的制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提供)，放置于無菌痰 標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，70分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管 內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g， 30分鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作 為痰懸液；用上述痰懸液將lmg/ml的菌懸液稀釋至終濃度為2X 104條/ml的含菌痰稀釋 液，取上述含菌痰稀釋液30 u 1于載玻片上涂抹成1 X 2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥，火 焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室溫 保存。b) 2+痰涂片的制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提供)，放置于無菌痰 標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管 內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g， 30分鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作 為痰懸液；用上述痰懸液將lmg/ml的菌懸液稀釋至終濃度為2X 105條/ml的含菌痰稀釋 液，取上述含菌痰稀釋液30 u 1于載玻片上涂抹成1 X 2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥，火 焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室溫 保存。c) 3+痰涂片的制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提供)，放置于無菌痰 標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°C水浴，30分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管 內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g， 30分鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作 為痰懸液；用上述痰懸液將lmg/ml的菌懸液稀釋至終濃度為2X 106條/ml的含菌痰稀釋 液，取上述含菌痰稀釋液30 u 1于載玻片上涂抹成1 X 2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥，火焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室溫 保存。d) 4+痰涂片的制備方法取不同非結(jié)核病患者的晨痰(上海國際旅行衛(wèi)生保健中心提供)，放置于無菌痰 標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理(80°c水浴，30分鐘)；自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管 內(nèi)，加入2倍痰液體積的NaOH-NALC混勻20分鐘后，用PH6. 8PBS稀釋至50ml，離心3000g， 30分鐘，使痰中固體物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作 為痰懸液；用上述痰懸液將lmg/ml的菌懸液稀釋至終濃度為2. 3X 106條/ml的含菌痰稀 釋液，取上述含菌痰稀釋液30 u 1于載玻片上涂抹成1 X 2cm左右的橢圓形痰膜，自然干燥， 火焰固定。在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，放置于樣品盒中，室 溫保存。2. 3檢測結(jié)果評(píng)價(jià)方法目前，實(shí)驗(yàn)室檢測痰液中抗酸桿菌都采用抗酸染色法，鏡檢時(shí)發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌的數(shù) 量是非常重要的參考依據(jù)。痰涂片鏡檢結(jié)果，不僅是對(duì)疾病的定性，也是對(duì)疾病嚴(yán)重程度的 半定量。首先判斷樣品中抗酸桿菌存在與否，如果存在，報(bào)告顯微鏡下平均每個(gè)視野中的抗 酸桿菌量，結(jié)果用“陰性”、“具體細(xì)菌數(shù)/300視野”、“1+”、“2+”、“3+”和“4+”表示(結(jié)果 報(bào)告依據(jù)參見GB 15987-1995傳染性肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則)。檢測樣品的預(yù)期結(jié)果在樣品制備時(shí)予以確定，各實(shí)驗(yàn)室返回檢測結(jié)果后，確定實(shí) 驗(yàn)室每個(gè)樣品的檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果的符合情況。如果檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果符合，則該樣 品檢測結(jié)果為10分；如果檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果不符合，我們會(huì)對(duì)檢測樣品進(jìn)行復(fù)核以確定 檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，并給予評(píng)分；每個(gè)樣品最高得分為10分，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室總計(jì)得80分及以 上為合格，表示該實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目能力評(píng)價(jià)為合格；實(shí)驗(yàn)室總計(jì)不到80分為不合格，表示 該實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目能力評(píng)價(jià)為不合格；“1+”以上的陽性痰涂片出現(xiàn)假陰性結(jié)果，判定為不 合格。檢測結(jié)果評(píng)價(jià)依據(jù)參見(1)GB 15987-1995《傳染性肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》; (2)《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊(cè)》2004，中國疾病預(yù)防控制中心編制。2. 4樣品的均勻性檢驗(yàn)為了保證每組中的樣品間無顯著性差異，確保能力驗(yàn)證活動(dòng)中出現(xiàn)的不滿意結(jié)果 不歸咎于樣品之間的變異，保證能力驗(yàn)證計(jì)劃的公平和科學(xué)，對(duì)制備好的樣品進(jìn)行均勻性 檢驗(yàn)。從每組150個(gè)檢測樣品中隨機(jī)抽取10個(gè)樣品，用抗酸染色法對(duì)樣品進(jìn)行抗酸染色， 由兩個(gè)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)各樣品進(jìn)行顯微鏡檢測，記數(shù)并報(bào)告1-300個(gè)視野下觀察到的抗 酸桿菌的數(shù)量。檢測結(jié)果為根據(jù)每個(gè)樣品抗酸桿菌量判定得到的分級(jí)值(陰性、1+、2+、3+、 4+)。將檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較。陰性樣品組(見圖5) :10個(gè)抽樣樣品結(jié)果均為陰 性，則說明本組樣本均勻；1+樣品組(見圖4) :10個(gè)抽樣樣品結(jié)果均為1+或2+或1-8條 /300視野，則說明本組樣本均勻；2+樣品組(見圖3) :10個(gè)抽樣樣品結(jié)果均為1+或2+或 3+，則說明本組樣本均勻；3+樣品組(見圖2) :10個(gè)抽樣樣品結(jié)果均為2+或3+或4+，則說 明本組樣本均勻；4+樣品組(見圖1) :10個(gè)抽樣樣品結(jié)果均為3+或4+，則說明本組樣本均 勻?！?+”以上的痰涂片出現(xiàn)陰性結(jié)果，說明被抽樣的總體不均勻。本次能力驗(yàn)證活動(dòng)設(shè)計(jì)了 1-10組樣品，每組150張?zhí)低科?。從各組中隨機(jī)抽取10
13張涂片進(jìn)行檢測，結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相符合。故本次制備的樣品均勻性符合要求。2. 5樣品的穩(wěn)定性檢驗(yàn)為了檢驗(yàn)樣品在運(yùn)輸、貯藏過程中的穩(wěn)定性及包裝、運(yùn)輸方式的可靠性，保證樣品 從制備到檢測整個(gè)過程中的穩(wěn)定性符合要求，對(duì)所制備的樣品進(jìn)行能力驗(yàn)證樣品發(fā)放前的 穩(wěn)定性檢驗(yàn)和能力驗(yàn)證實(shí)施全過程中的穩(wěn)定性檢驗(yàn)。2. 5. 1未染色痰涂片的穩(wěn)定性檢驗(yàn)隨機(jī)抽取需要數(shù)量的痰涂片，按照上述包裝 方式包裝后快遞到不同地區(qū)實(shí)驗(yàn)室(國內(nèi)或國外)，室溫保存至計(jì)劃返回日期，以快遞方式 返回。用抗酸染色法對(duì)返回痰涂片進(jìn)行抗酸桿菌檢測。將檢測的結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較， 陰性痰涂片檢測結(jié)果均為陰性，則說明痰涂片穩(wěn)定性合格；1+痰涂片檢測結(jié)果為1+或 2+或1-8條/300視野，則說明痰涂片穩(wěn)定性合格；2+痰涂片檢測結(jié)果為1+或2+或3+， 說明痰涂片穩(wěn)定性合格；3+痰涂片檢測結(jié)果為2+或3+或4+，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；4+ 痰涂片檢測結(jié)果為3+或4+，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；“1+”以上的痰涂片出現(xiàn)陰性結(jié)果， 說明痰涂片不穩(wěn)定；若結(jié)果有差異，說明痰涂片不穩(wěn)定，需查找痰涂片不穩(wěn)定的原因，重新 制備痰涂片或改變貯藏、運(yùn)輸方式。2. 5. 2染色痰涂片的穩(wěn)定性檢驗(yàn)隨機(jī)抽取需要數(shù)量的痰涂片，用抗酸染色法進(jìn) 行痰涂片抗酸染色后快遞到不同地區(qū)實(shí)驗(yàn)室(國內(nèi)或國外)，室溫保存至計(jì)劃返回日期， 以快遞方式返回。用顯微鏡法查找抗酸桿菌，將檢測的結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較，陰性痰 涂片檢測結(jié)果為陰性，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；1+痰涂片檢測結(jié)果為1+或2+或1-8條 /300視野，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；2+痰涂片檢測結(jié)果為1+或2+或3+，說明痰涂片穩(wěn)定 性合格；3+痰涂片檢測結(jié)果為2+或3+或4+，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；4+痰涂片檢測結(jié) 果為3+或4+，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；“1+”以上的痰涂片出現(xiàn)陰性結(jié)果，說明痰涂片不穩(wěn) 定；若結(jié)果有差異，說明痰涂片不穩(wěn)定，需查找痰涂片不穩(wěn)定的原因，重新制備痰涂片或改 變貯藏、運(yùn)輸方式。本次能力驗(yàn)證活動(dòng)選取的兩地區(qū)往返的未染色樣品及染色樣品的檢測結(jié)果與預(yù) 期結(jié)果相符合，可以認(rèn)為樣品是穩(wěn)定的，符合本次能力驗(yàn)證計(jì)劃的要求。2. 6樣品的標(biāo)識(shí)計(jì)算機(jī)編程設(shè)計(jì)一組含1-2000數(shù)字且無重復(fù)數(shù)字的隨機(jī)序列號(hào)。按照150個(gè)數(shù) 字為一組，共選了 10組數(shù)字，將每組中的數(shù)字對(duì)應(yīng)于每組樣品，使每個(gè)樣品獲得唯一的數(shù) 字標(biāo)識(shí)。本次能力驗(yàn)證樣品的數(shù)字標(biāo)識(shí)中第1到4為表示上海地區(qū)、第5、6位表示制備時(shí) 間、從第七位數(shù)字開始為樣品序列號(hào)。2. 7樣品的包裝與發(fā)送考慮到運(yùn)輸安全和樣品的穩(wěn)定性，檢測樣品均采用三層包裝第一層將樣品(痰 涂片)放置在專用的載玻片盒中，第二層在載玻片盒外用抗震隔膜包裹，第三層是外用防 水紙箱包裝。隨樣品一同發(fā)送的還有能力驗(yàn)證活動(dòng)說明、樣品接收狀態(tài)確認(rèn)表和檢測結(jié)果 報(bào)告表。樣品發(fā)送前，由專人審核樣品狀態(tài)是否完好，記錄實(shí)驗(yàn)室代碼和對(duì)應(yīng)的樣品號(hào)。參 加實(shí)驗(yàn)室收到樣品后，填寫樣品接收狀態(tài)確認(rèn)表，簽字后傳真或郵寄回本次能力驗(yàn)證聯(lián)系 人，以確認(rèn)檢測樣品的狀態(tài)完好。如果出現(xiàn)樣品破損等影響檢測的情況，要求盡快聯(lián)系本次能力驗(yàn)證聯(lián)系人，以便補(bǔ)發(fā)檢測樣品。2. 8樣品的回收為了準(zhǔn)確、公正地評(píng)價(jià)每個(gè)參加實(shí)驗(yàn)室的檢測能力，保證能力驗(yàn)證結(jié)果的可靠性， 要求將檢測樣品在檢測完畢后隨結(jié)果報(bào)告單一同寄回。參加實(shí)驗(yàn)室返回的檢測樣品通過與預(yù)期結(jié)果比對(duì)和專家審核方式進(jìn)行結(jié)果評(píng)估， 一方面可以確保結(jié)果的準(zhǔn)確和公正，另一方面可以發(fā)現(xiàn)各參加實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果存在的問題 和部分操作的規(guī)范程度。2. 9檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)方法痰涂片抗酸染色法查找抗酸桿菌的檢測結(jié)果的判定采取定性結(jié)合半定量的方式。 檢測痰涂片的預(yù)期結(jié)果在其制備時(shí)予以確定，受測實(shí)驗(yàn)室或個(gè)人報(bào)告檢測結(jié)果后，確定實(shí) 驗(yàn)室每個(gè)痰涂片的檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果的符合情況。陰性痰涂片檢測結(jié)果為陰性，說明檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果符合；1+痰涂片檢測結(jié) 果為1+或2+或1-8條/300視野，說明檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果符合；2+痰涂片檢測結(jié)果為1+ 或2+或3+，說明檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果符合；3+痰涂片檢測結(jié)果為2+或3+或4+，說明檢 測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果符合；4+痰涂片檢測結(jié)果為3+或4+，說明檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果符合； “1+”以上的痰涂片出現(xiàn)陰性結(jié)果，說明檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果不符合。檢測結(jié)果評(píng)價(jià)依據(jù)參見(1)GB 15987-1995《傳染性肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》; (2)《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊(cè)》2004，中國疾病預(yù)防控制中心編制。3實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果及其評(píng)價(jià)3.1檢測結(jié)果匯總本次能力驗(yàn)證對(duì)檢測結(jié)果的判定采取定性結(jié)合半定量的方式。每個(gè)參加實(shí)驗(yàn)室共 收到10個(gè)檢測樣品。參加實(shí)驗(yàn)室對(duì)10個(gè)樣品的判定結(jié)果應(yīng)該與預(yù)期結(jié)果或?qū)嶋H復(fù)核的結(jié) 果相符，并且綜合得分80分及以上時(shí)，該項(xiàng)目的檢測能力判定為合格，否則判定為不合格； “1+”以上的陽性痰涂片出現(xiàn)假陰性，判定為不合格。本次能力驗(yàn)證共有43家實(shí)驗(yàn)室報(bào)告了 樣品的檢測結(jié)果。3. 2結(jié)果評(píng)價(jià)在回報(bào)結(jié)果的43家實(shí)驗(yàn)室中，有30家實(shí)驗(yàn)室獲得100分，10家實(shí)驗(yàn)室獲得95分， 1家實(shí)驗(yàn)室獲得90分，2家實(shí)驗(yàn)室獲得85分。43家參加實(shí)驗(yàn)室評(píng)分均在80分以上，全部合 格。共有16個(gè)檢測結(jié)果出現(xiàn)低假陽性(4個(gè))和量化誤差(12個(gè))的不符合情況，涉及13
家實(shí)驗(yàn)室。本次能力驗(yàn)證共發(fā)送440個(gè)檢測樣品，回報(bào)了 430個(gè)樣品的檢測結(jié)果，有414個(gè)樣 品檢測結(jié)果正確，占回報(bào)樣品數(shù)的96. 3%。4技術(shù)分析和建議4. 1檢測過程的質(zhì)量控制涂片染色法檢測痰液中抗酸桿菌能力驗(yàn)證對(duì)檢測過程的質(zhì)量控制要求高。環(huán)境， 尤其是水質(zhì)和空氣中灰塵會(huì)引起樣品的污染，檢測中如使用的顯微鏡維護(hù)不當(dāng)會(huì)影響檢測 結(jié)果。所以，實(shí)驗(yàn)室一定要注意檢測用水和環(huán)境清潔，嚴(yán)格防止操作污染，這是保證檢測結(jié) 果正確的基礎(chǔ)。4. 2檢測方法與試劑
本次能力驗(yàn)證項(xiàng)目的檢測方法涉及痰涂片抗酸染色法和顯微鏡檢測技術(shù)，抗酸染 色法與使用的抗酸染色試劑的質(zhì)量密切相關(guān)。在參加的43家實(shí)驗(yàn)室中，有38家實(shí)驗(yàn)室使 用了同一品牌的抗酸染色試劑，有2家使用不同品牌的抗酸染色試劑，有3家實(shí)驗(yàn)室未報(bào)所 用檢測試劑的品牌。此次能力驗(yàn)證活動(dòng)中沒有發(fā)現(xiàn)試劑對(duì)檢測結(jié)果的顯著影響。5 總結(jié)本次能力驗(yàn)證項(xiàng)目中有多個(gè)創(chuàng)新點(diǎn)。首先，痰涂片抗酸染色查找抗酸桿菌檢測項(xiàng) 目是結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目中最基礎(chǔ)、應(yīng)用最廣泛的一個(gè)項(xiàng)目，但類似本項(xiàng)目這樣由多個(gè) 不同細(xì)菌含量、相同細(xì)菌含量樣品重復(fù)多次的檢測樣品組合而進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證項(xiàng)目 在國內(nèi)還是首次，而且醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的微生物專業(yè)形態(tài)學(xué)檢測項(xiàng)目的能力驗(yàn)證實(shí)施在國內(nèi)也 是首次開展。其次，在能力驗(yàn)證實(shí)施中，我們采用了將檢測樣品回收的結(jié)果處理方式，以排除樣 品原因造成的結(jié)果不符合，盡最大可能保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性和計(jì)劃實(shí)施的公平性，而且可 操作性強(qiáng)。另外，本能力驗(yàn)證中樣品均勻性檢驗(yàn)和穩(wěn)定性檢驗(yàn)的方法也是首次在醫(yī)學(xué)形態(tài) 學(xué)的能力驗(yàn)證項(xiàng)目上使用，從統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看，均滿足了對(duì)檢測樣品進(jìn)行均勻性和穩(wěn)定性評(píng) 估的作用。
1權(quán)利要求
一種用于能力驗(yàn)證活動(dòng)中抗酸桿菌顯微鏡檢查的痰涂片，其特征在于，其包括陰性、1+、2+、3+、4+共五種抗酸桿菌含量的痰涂片，該陰性痰涂片的抗酸桿菌含量為0條/300個(gè)視野；該1+痰涂片的抗酸桿菌含量為3-9條抗酸桿菌/100個(gè)視野；該2+痰涂片的抗酸桿菌含量為1-9條抗酸桿菌/10個(gè)視野；該3+痰涂片的抗酸桿菌含量為1-9條抗酸桿菌/個(gè)視野；該4+痰涂片的抗酸桿菌含量為＞9條抗酸桿菌/個(gè)視野；所述的抗酸桿菌來源于痰液或者培養(yǎng)細(xì)菌菌落。
2.一種如權(quán)利要求1所述的痰涂片的制備方法，其特征在于，所述痰涂片含有的抗酸 桿菌來源于痰液，該方法包括如下步驟1)取不同結(jié)核病患者的晨痰，放置于無菌痰標(biāo)本采集容器中，細(xì)菌滅活處理；2)自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，使痰液液化并用PBS稀釋后，離心，使細(xì)菌集 中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入PBS混勻作為痰懸液，用痰涂片抗酸染色顯微鏡鏡 檢法檢測細(xì)菌數(shù)量作為初始等級(jí)濃度，然后根據(jù)抗酸桿菌目的等級(jí)濃度計(jì)算稀釋倍數(shù)，并 用PBS稀釋至目的等級(jí)濃度的痰稀釋液；3)取上述痰稀釋液于載玻片上涂抹成橢圓形痰膜，自然干燥，火焰固定；在載玻片一 端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，室溫保存。
3.如權(quán)利要求2所述的痰涂片的制備方法，其特征在于，在步驟2)中，所述痰稀釋 液中抗酸桿菌的目的等級(jí)濃度為0條/ml，0. 8-2. 2 X IO4條/ml，0. 3-2. 2 X IO5條/ml， 0. 3-2. 2X106 條/ml，或者> 2. 2X IO6 條/ml。
4.如權(quán)利要求2所述的痰涂片的制備方法，其特征在于，在步驟3)完成后，還包括如下 包裝步驟痰涂片采用三層包裝，第一層將痰涂片放置在專用的載玻片盒中，第二層在載玻 片盒外用抗震隔膜包裹，第三層是外用防水紙箱包裝。
5.如權(quán)利要求2所述的痰涂片的制備方法，其特征在于，步驟3)中，所述樣品編號(hào)是計(jì) 算機(jī)編程設(shè)計(jì)一組無重復(fù)數(shù)字的隨機(jī)序列號(hào)，將該數(shù)字對(duì)應(yīng)于每個(gè)痰涂片，使每個(gè)樣品獲 得唯一的數(shù)字標(biāo)識(shí)，該數(shù)字標(biāo)識(shí)中的數(shù)字表示制備地區(qū)、制備時(shí)間及痰涂片序列號(hào)。
6.一種如權(quán)利要求1所述的痰涂片的制備方法，其特征在于，所述痰涂片含有的抗酸 桿菌來源于培養(yǎng)細(xì)菌菌落，該方法包括如下步驟1)卡介苗菌懸液的制備取卡介苗的初生長兩周的細(xì)菌菌落放入玻璃磨菌器底部或 具有玻璃珠的離心管內(nèi)，其中加入含0. 5%吐溫-80的PBS，經(jīng)細(xì)菌滅活處理；自然冷卻后， 充分?jǐn)嚢枵袷幨咕撼嗜槔覙?，以?. 5%吐溫-80的生理鹽水或者PBS磨菌并稀釋，與標(biāo) 準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷?，配成lmg/ml的菌懸液；2)取不同非結(jié)核病患者的晨痰，放置于無菌痰標(biāo)本采集容器中，經(jīng)細(xì)菌滅活處理；3)自然冷卻后，盛于無菌痰液處理管內(nèi)，使痰液液化并用PBS稀釋，離心，使痰中固體 物集中于試管底部，棄上清液，沉淀物中加入等痰液體積的PBS混勻作為痰懸液；4)用痰涂片抗酸染色顯微鏡鏡檢法檢測細(xì)菌數(shù)量作為初始等級(jí)濃度，然后根據(jù)抗酸桿 菌目的等級(jí)濃度計(jì)算稀釋倍數(shù)，用步驟3)制成的痰懸液將步驟1)制成的菌懸液稀釋至目 的等級(jí)濃度的含菌痰稀釋液；取上述含菌痰稀釋液于載玻片上涂抹成橢圓形痰膜，自然干 燥，火焰固定；在載玻片一端1/3處粘貼防腐防脫落標(biāo)簽并注明樣品編號(hào)，室溫保存。
7.如權(quán)利要求6所述的痰涂片的制備方法，其特征在于，在步驟4)中，所述含菌痰稀 釋液中抗酸桿菌的目的等級(jí)濃度為0條/ml，0. 8-2. 2X IO4條/ml，0. 3-2. 2X IO5條/ml，；0.3-2. 2X106 條/ml，或者> 2. 2X IO6 條/ml。
8.如權(quán)利要求6所述的痰涂片的制備方法，其特征在于，步驟4)完成后，還包括如下包 裝步驟痰涂片采用三層包裝，第一層將痰涂片放置在專用的載玻片盒中，第二層在載玻片 盒外用抗震隔膜包裹，第三層是外用防水紙箱包裝。
9.如權(quán)利要求6所述的痰涂片的制備方法，其特征在于，步驟4)中，所述樣品編號(hào)是計(jì) 算機(jī)編程設(shè)計(jì)一組無重復(fù)數(shù)字的隨機(jī)序列號(hào)，將該數(shù)字對(duì)應(yīng)于每個(gè)痰涂片，使每個(gè)樣品獲 得唯一的數(shù)字標(biāo)識(shí)，該數(shù)字標(biāo)識(shí)中的數(shù)字表示制備地區(qū)、制備時(shí)間及痰涂片序列號(hào)。
10.一種如權(quán)利要求1所述的痰涂片的均勻性檢測方法，其特征在于，包括如下步驟1)從相同等級(jí)濃度的痰涂片中隨機(jī)抽取需要數(shù)量的痰涂片，用抗酸染色法對(duì)抽樣的痰 涂片進(jìn)行抗酸染色，并對(duì)抽取的各痰涂片進(jìn)行顯微鏡檢測，記數(shù)并報(bào)告1-300個(gè)視野下觀 察到的抗酸桿菌的數(shù)量；2)檢測結(jié)果為根據(jù)每個(gè)痰涂片中的抗酸桿菌量判定得到的分級(jí)值陰性、1+、2+、3+、 4+ ；將檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較；陰性痰涂片抽樣痰涂片結(jié)果均為陰性，則說明被抽 樣的總體均勻；1+痰涂片抽樣痰涂片結(jié)果均為1+或2+或1-8條/300視野，則說明被抽 樣的總體均勻；2+痰涂片抽樣痰涂片結(jié)果均為1+或2+或3+，則說明被抽樣的總體均勻； 3+痰涂片抽樣痰涂片結(jié)果均為2+或3+或4+，則說明被抽樣的總體均勻；4+痰涂片抽樣 痰涂片結(jié)果均為3+或4+，則說明被抽樣的總體均勻；“1+”以上的痰涂片出現(xiàn)陰性結(jié)果，說 明被抽樣的總體不均勻。
11.一種如權(quán)利要求1所述的痰涂片的穩(wěn)定性檢測方法，其特征在于，包括如下步驟1)隨機(jī)抽取需要數(shù)量的痰涂片，包裝后快遞到不同地區(qū)實(shí)驗(yàn)室，室溫保存至計(jì)劃返回 日期，以快遞方式返回，用抗酸染色法對(duì)返回痰涂片進(jìn)行抗酸染色后，用顯微鏡法查找抗酸 桿菌；或者隨機(jī)抽取需要數(shù)量的痰涂片，用抗酸染色法進(jìn)行痰涂片抗酸染色后快遞到不同 地區(qū)實(shí)驗(yàn)室，室溫保存至計(jì)劃返回日期，以快遞方式返回，用顯微鏡法查找抗酸桿菌；2)將檢測的結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行比較，陰性痰涂片檢測結(jié)果均為陰性，則說明痰涂 片穩(wěn)定性合格；1+痰涂片檢測結(jié)果為1+或2+或1-8條/300視野，則說明痰涂片穩(wěn)定性 合格；2+痰涂片檢測結(jié)果為1+或2+或3+，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；3+痰涂片檢測結(jié)果 為2+或3+或4+，說明痰涂片穩(wěn)定性合格；4+痰涂片檢測結(jié)果為3+或4+，說明痰涂片穩(wěn) 定性合格；“1+”以上的痰涂片出現(xiàn)陰性結(jié)果，說明痰涂片不穩(wěn)定；若結(jié)果有差異，說明痰涂 片不穩(wěn)定，需查找痰涂片不穩(wěn)定的原因，重新制備痰涂片或改變貯藏、運(yùn)輸方式。
12.—種如權(quán)利要求1所述的痰涂片在能力驗(yàn)證中的應(yīng)用。
13.—種如權(quán)利要求1所述的痰涂片在實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)估和室內(nèi)質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于能力驗(yàn)證活動(dòng)中抗酸桿菌顯微鏡檢查的痰涂片，其包括陰性、1+、2+、3+、4+共五種抗酸桿菌含量的痰涂片，該陰性痰涂片的抗酸桿菌含量為0條/300個(gè)視野；該1+痰涂片的抗酸桿菌含量為3-9條抗酸桿菌/100個(gè)視野；該2+痰涂片的抗酸桿菌含量為1-9條抗酸桿菌/10個(gè)視野；該3+痰涂片的抗酸桿菌含量為1-9條抗酸桿菌/個(gè)視野；該4+痰涂片的抗酸桿菌含量為＞9條抗酸桿菌/個(gè)視野；所述抗酸桿菌來源于痰液或者培養(yǎng)細(xì)菌菌落。此外，本發(fā)明還公開了上述痰涂片的制備方法和用途。經(jīng)驗(yàn)證，本發(fā)明痰涂片的均勻性和穩(wěn)定性較高，采用這種痰涂片可以應(yīng)用于結(jié)核病檢測能力驗(yàn)證活動(dòng)或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)部和外部質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101852694SQ201010142820
公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2010年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月9日
發(fā)明者葉魏, 張曉航, 方筠, 王健, 章琪, 閻俊, 韓曉輝 申請(qǐng)人:上海國際旅行衛(wèi)生保健中心